專利名稱：一種馬克斯克魯維發(fā)酵飲品及其制備方法
所屬領(lǐng)域本發(fā)明涉及發(fā)酵工業(yè)學(xué)科領(lǐng)域，具體說是一種馬克斯克魯維發(fā)酵飲品及其制備方法
背景技術(shù)：
眾所周知，在食品工業(yè)中，許多真菌發(fā)酵的產(chǎn)物，可以作為許多國家和人民的美食或特有的調(diào)味品。不同的菌種，賦予不同的發(fā)酵產(chǎn)物，以不同的營養(yǎng)價(jià)值受惠于人類。
馬克思克魯維酵母Kluyveromyces marnianus(E.G.Hansen)van der Walt是一種流行于國內(nèi)外的人類有益酵母真菌，它有很強(qiáng)的生命力和發(fā)酵功能。根據(jù)我們的研究和相關(guān)資料表明將其在人工設(shè)計(jì)良好的環(huán)境中培養(yǎng)發(fā)酵，可以產(chǎn)生和分泌多種有益于人體健康的營養(yǎng)因子和生物活性物質(zhì)。我們利用其這一特性，研制成一種新型綠色健康天然飲品，相信它對維護(hù)人體健康和提高人們生活質(zhì)量，起到積極的作用。
文獻(xiàn)資料業(yè)已證明在酵母類真菌的細(xì)胞中，含有以下多種重要的營養(yǎng)和活性物質(zhì)。(1)酵母蛋白，其分解產(chǎn)物為酵母核素，它既是生命有機(jī)體重要的營養(yǎng)素，又是臨床上用于治療震顫和麻痹的藥物；(2)酵母核酸，在酵母細(xì)胞中，它以酵母蛋白的輔基形式存在，含有磷酸、嘌呤和嘧啶，在臨床上具有擴(kuò)張末梢血管、提高血紅素濃度和紅細(xì)胞數(shù)目、減輕浮腫、抗病毒等作用。此外，研究證明它還有抗癌和溶解癌細(xì)胞的功能；(3)激糖素，又被稱為酵母胰島素或植物胰島素，它同血液胰島素、球蛋白胰島素、牛胰腺胰島素性能相似，可有效糾正胰島素缺乏癥——糖尿病的代謝障礙；(4)豐富的氨基酸，在酵母蛋白中，具有人體必須的八種氨基酸。尤其是賴氨酸的含量超過任何其它蛋白質(zhì)。(5)多種維生素，在酵母細(xì)胞及其代謝產(chǎn)物中，含有大量的B族維生素及維生素A、D、E、C。(6)生物活性物質(zhì)，最著名的有兩種，其一是酵母酵素，另一是β-葡聚糖。酵母酵素以酵母核酸酵素、內(nèi)胰蛋白酵素、內(nèi)中性蛋白酵素多種形式存在。它們既可促進(jìn)食物水解，轉(zhuǎn)化為有益于人體營養(yǎng)的消化劑，又是防治膽囊炎、胰腺炎以及其他腸道疾病的藥物成分；β-葡聚糖是酵母在其代謝過程中分泌產(chǎn)生的一種生化物質(zhì)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，它是目前世界公認(rèn)和倍受重視的一種抗癌物質(zhì)；(7)大量的有機(jī)酸，可助消化，防腐消毒，殺滅病菌，有良好清理胃腸道作用。
根據(jù)目前國內(nèi)外學(xué)者對馬克斯克魯維菌的研究。已經(jīng)證明，它可產(chǎn)生的天然成分有核苷酸、低聚糖、寡肽、凝集素、抗生素和多種酶等生物活性物質(zhì)。核苷酸是核酸的基本結(jié)構(gòu)單位，是代謝上極為重要的物質(zhì)，幾乎參與細(xì)胞的所有生化反應(yīng)。大量研究證明，核酸可調(diào)節(jié)新陳代謝、提高機(jī)體免疫力、改善肝功能、減少體能消耗、改善腸胃功能、改善睡眠、抗疲勞、抗氧化并在促進(jìn)生長發(fā)育等方面發(fā)揮著重要作用；低聚糖不僅能降低膽固醇的吸收，還能促進(jìn)腸內(nèi)雙岐桿菌、乳酸菌等益生菌的生長，從而達(dá)到預(yù)防腸炎的作用。此外，寡肽、凝集素、抗生素及各種酶都對人體生物代謝有重要的促進(jìn)作用。
縱觀目前飲料市場，不論曾經(jīng)深受消費(fèi)者喜愛的各類果蔬汁，還是碳酸型飲料，以及見諸報(bào)導(dǎo)的果醋飲料，它們或營養(yǎng)單一，或其成分均系添加人工合成物，都不能滿足當(dāng)今人們營養(yǎng)和保健相結(jié)合的完美需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種克服了目前飲料行業(yè)中營養(yǎng)單一和人工添加成分過濫問題而研究開發(fā)的一種集營養(yǎng)、保健于一體，且其成分來自天然不含任何人工添加物質(zhì)，對有機(jī)體無任何毒副作用的天然有機(jī)活性飲品——馬克斯克魯維發(fā)酵飲品及其制備方法。
一種馬克斯克魯維發(fā)酵飲品，其特征在于采用一株分離出的馬克斯克魯維酵母菌，Kluyveromyces marnianus(E.G.Hansen)van der Walt在經(jīng)過篩選的培養(yǎng)基和25-30℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)，然后經(jīng)過除菌過濾和后續(xù)常規(guī)處理而制成。
制備方法及過程如下A菌種的分離培養(yǎng)在無菌、室溫條件下，將來自民間的“藏靈菇”菌經(jīng)滅菌PBS洗滌三次，用鉑耳圈勾取其深層菌落，接種于分離培養(yǎng)基上，然后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，經(jīng)5-7天培養(yǎng)；選肉眼觀察菌落呈奶酪狀，乳白色或深褐色，表面平滑，有光澤，邊緣光滑，顯微鏡觀察為大量的菌絲和孢子的單獨(dú)菌落。無菌條件下做二次分離，所用培養(yǎng)基同前，后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5天，選同前的單獨(dú)菌落，無菌條件下接種于保存培養(yǎng)基上，于4℃條件下保藏；上述分離培養(yǎng)基是由下述原料及配比制備
馬鈴薯湯200份葡萄糖10-15份蛋白胨 10份酵母膏2份瓊脂 20份加水至1000份上述保存培養(yǎng)基是由下述原料及配比制備馬鈴薯湯 200份 葡萄糖 5-7份蛋白胨10份瓊脂 20份 加水至1000份B發(fā)酵菌種液的制備發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基使用下述原料及配比制備馬鈴薯湯 200-300份葡萄糖 15-20份蛋白胨10-20份麥芽糖 2-10份加水至 1000份①I級發(fā)酵菌種液將保存于4℃條件下的馬克斯克魯維酵母菌種，無菌條件下接種于發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基試管中，25-30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，得I級發(fā)酵菌種液；②II級發(fā)酵菌種液將I級發(fā)酵菌種液，無菌條件下接種于250ML瓶裝的發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基中，在25-30℃恒溫條件下培養(yǎng)2-3天；C初發(fā)酵液的制備將II級菌種液，無菌條件下接種于發(fā)酵培養(yǎng)液中，25-30℃條件下靜置發(fā)酵三天；其培養(yǎng)基所用原料及配比為馬鈴薯湯 50-70％葡萄糖 5％ 麥芽糖 0.1-0.5％ 乳糖 0.1％淀粉糖 2-5％胡蘿卜汁 3-5％ 加水至 1000D原發(fā)酵液的制備將C制得的初發(fā)酵液在20℃以下條件下，靜置發(fā)酵三天，得飲品原液；E過濾；F有效成分檢驗(yàn)；G調(diào)味，用白砂糖調(diào)至酸甜適口；H灌裝；J滅菌。
本飲品集中了當(dāng)前市場流行各類飲料的多種優(yōu)點(diǎn)，其制作、成分、色澤、口味都具有自己獨(dú)特的風(fēng)格?？偟膩碇v有以下幾方面(1)營養(yǎng)性，本飲品含有多種人體所需的營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、脂肪、糖、氨基酸、低聚糖、維生素A、D、E、B、C及各種微量元素、礦物質(zhì)、有機(jī)酸(詳見后附檢驗(yàn)報(bào)告單)，可全面補(bǔ)充人體營養(yǎng)需要；(2)保健性，如前所述，在酵母菌生長過程中，能夠產(chǎn)生多種有益于人體健康的活性因子(由于目前食品檢驗(yàn)內(nèi)容及方法所限，有些未曾列入檢驗(yàn)內(nèi)容)。此外，根據(jù)我們的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析證明，該飲品具有一定的拮抗脂肪沉著和降低血糖的作用；(3)天然性，本飲品所含有大量有益人體的活性物質(zhì)，如核苷酸、低聚糖、寡肽、各種酶、各種維生素，礦物質(zhì)，有機(jī)酸等。它們或者是馬克斯克魯維酵母菌在其生長代謝過程中產(chǎn)生和分泌的，或者是原材料天然成分所固有，并非源自人工添加。它們對補(bǔ)充人體營養(yǎng)需要和維持人體健康，具有重要意義。此外，我們研制的新型飲品與當(dāng)前市場流行的其他飲品相比，不僅營養(yǎng)豐富，純系天然，而且口味醇正，易被消費(fèi)者接受。通過我們先后多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，證明其成分穩(wěn)定、口味不變、重復(fù)性好、且對受試動(dòng)物無毒副作用，能夠用于工業(yè)化生產(chǎn)。隨著我國建設(shè)小康步伐的推進(jìn)和社會(huì)人們健康意識(shí)的提高，該飲品將會(huì)受到社會(huì)人們的更大青睞，在經(jīng)濟(jì)、技術(shù)和社會(huì)效果上，都將產(chǎn)生積極的作用。


圖1為本發(fā)明飲品原汁對正常大鼠血紅蛋白的影響圖2為飲品原汁對正常大鼠紅細(xì)胞總數(shù)的影響圖3為飲品原汁對正常大鼠白細(xì)胞總數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明1減脂作用的研究——預(yù)防肥胖模型法將昆明種小鼠隨機(jī)分為空白對照組(普通飲水組)，模型對照組(培養(yǎng)基汁組)，及三個(gè)受試樣品實(shí)驗(yàn)組(飲品原汁組、高壓處理組、高壓過濾組)。自實(shí)驗(yàn)開始，培養(yǎng)基汁組、飲品原汁組、高壓處理組、高壓過濾組每組動(dòng)物給予等量的飲料，普通飲水組以相同方式給予一般自來水。連續(xù)飼養(yǎng)30天，剖腹取體脂(睪丸及腎周脂肪墊)并稱重，計(jì)算脂體比。脂體比＝脂肪重量/體重×100。比較三組減脂效果，以普通飲水組、培養(yǎng)基汁組為對照，對各試驗(yàn)組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表一減脂作用組別 劑量(ml/組)動(dòng)物數(shù)(個(gè))體脂值(g)
普通飲水組2551.58±0.34培養(yǎng)基汁組2551.66±0.54飲品原汁組2550.44±0.16**##高壓處理組2550.55±0.09**##高壓過濾組2550.89±0.28*#注與普通飲水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與培養(yǎng)基汁組比較，#P＜0.05，##P＜0.01表二脂體比組別 劑量(ml/組) 動(dòng)物數(shù)(個(gè)) 脂體比(％)普通飲水組2554.2±0.7培養(yǎng)基汁組2555.0±1.5飲品原汁組2551.4±0.6**##高壓處理組2551.7±0.2**##高壓過濾組2552.8±0.8*#注與普通飲水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與培養(yǎng)基汁組比較，#P＜0.05，##P＜0.01由表一、表二可知，在預(yù)防肥胖模型實(shí)驗(yàn)中，作為空白對照的普通飲水組，體脂為1.58g，脂/體為4.2％，作為模型對照的培養(yǎng)基汁組，體脂為1.66g，脂/體為5.0％，二對照組沒有顯著性差異。同樣條件下，飲品原汁組，體脂為0.44g，脂/體為1.4％；高壓處理組，體脂為0.55g，脂/體為1.7％；高壓過濾組，體脂為0.89g，脂/體為2.8％，與兩對照組相比，有一定的減脂作用。經(jīng)t檢驗(yàn)分析，飲品原汁組、高壓處理組與兩對照組相比，差異均達(dá)極顯著差異水平，高壓過濾組達(dá)差異顯著水平。
2降糖試驗(yàn)——降低空腹血糖實(shí)驗(yàn)昆明種小鼠禁食24小時(shí)后，給予四氧嘧啶(150mg/Kg)造型，5-7天后禁食3-5小時(shí)，檢測其血糖值10-25mmol/L者為高血糖模型成功動(dòng)物。選高血糖模型動(dòng)物按禁食3-5小時(shí)的血糖水平分組，隨機(jī)分為4組，均常規(guī)飼養(yǎng)，自然光照。(1)普通飲水組每日給以自來水100ml/組；(2)10倍飲品濃縮組每日給以10倍飲品濃縮液100ml/組；(3)飲品原汁組每日給以飲品原汁100ml/組；(4)50％稀釋原汁組每日給以50％稀釋原汁100ml/組。連續(xù)實(shí)驗(yàn)30天，斷尾取血，測空腹血糖值(禁食同實(shí)驗(yàn)前)，比較各組動(dòng)物血糖值及血糖下降百分率。血糖下降百分率＝(實(shí)驗(yàn)前血糖值-實(shí)驗(yàn)后血糖值)/實(shí)驗(yàn)前血糖值×100％。比較三者降血糖效果，以普通飲水組為對照，對各試驗(yàn)組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表三降血糖效果組別 劑量(ml/組) 動(dòng)物數(shù)(個(gè)) 降糖值 血糖下降率(mmol/L)(％)普通飲水組5081.13±0.12 15.44±0.4610倍濃縮組5083.96±0.79**42.15±9.51**原汁組5093.40±0.68**35.05±9.12**50％稀釋組5082.93±0.62* 27.95±9.52*注與普通飲水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01由表三可知，成功誘導(dǎo)的糖尿病模型，平均血糖值達(dá)到12.45mmol/L。普通飲水組作為對照，其血糖值下降了1.13mmol/L，血糖下降率為15.44％。同樣條件下，10倍濃縮組，血糖值下降了3.96mmol/L，血糖下降率為42.15％；原汁組，血糖值下降了3.40mmol/L，血糖下降率為35.05％；50％稀釋組，血糖值下降了2.93mmol/L，血糖下降率為27.95％。經(jīng)t檢驗(yàn)分析，所有實(shí)驗(yàn)飲料組與對照組相比，差異均達(dá)顯著水平，說明飲品有一定的降糖作用。由降糖效果來看，三個(gè)濃度之間存在一定的劑量效應(yīng)，濃度越高，降血糖的效果越好。
3藏靈菇飲品對大鼠血液中血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)的影響將Wister大鼠常規(guī)飼養(yǎng)一段時(shí)間后給予飲品原汁，尾靜脈采血，在給予飲品前后分別測其血液中的血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)。比較血液中各項(xiàng)指標(biāo)的含量，以給予飲品前為對照，進(jìn)行t檢驗(yàn)。
表四血紅蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞的影響血紅蛋白 紅細(xì)胞 白細(xì)胞時(shí)間(g/100ml) (106/mm3)(103/mm3)給予飲品前13.86±0.968.53±0.78 14.86±0.47給予飲品后13.96±0.298.27±0.68 14.75±0.75由表四知給予飲品原汁后，大鼠血液中的血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞總數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)沒有顯著變化，說明給予飲品原汁后，大鼠保持了正常的生理狀態(tài)，從一個(gè)側(cè)面也說明該飲品作為飲料的安全性。
4血紅蛋白的測定——酸化法將Wister大鼠隨機(jī)分為空白對照組和樣品實(shí)驗(yàn)組，分別給予普通飲水和飲品原汁并給予常規(guī)飼料飼養(yǎng)。每七天尾靜脈采血一次，給血液加酸，使血紅蛋白變成棕色的酸性正鐵血紅素，稀釋后與血紅蛋白計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)玻璃色柱進(jìn)行目光比色，即得每100ml血液中所含血紅蛋白的克數(shù)。比較二者血紅蛋白含量，對以普通飲水組為對照，對試驗(yàn)組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。
由圖一知，給予飲品后，大鼠血液中的血紅蛋白含量與對照組相比沒有顯著性差異，從而說明飲品對其血紅蛋白含量沒有影響。
5紅細(xì)胞的測定將Wister大鼠隨機(jī)分為空白對照組和樣品實(shí)驗(yàn)組，分別給予普通飲水和飲品原汁并給予常規(guī)飼料飼養(yǎng)。每七天尾靜脈采血一次，進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，即得每立方毫米(mm3)血液中所含的紅細(xì)胞總數(shù)。比較二者紅細(xì)胞總數(shù)量，以普通飲水組為對照，進(jìn)行t檢驗(yàn)。
由圖二知，給予飲品后，大鼠血液中的紅細(xì)胞總數(shù)與對照組相比沒有顯著性差異，從而說明飲品對其紅細(xì)胞總數(shù)沒有影響。
6白細(xì)胞總數(shù)的測定將Wister大鼠隨機(jī)分為空白對照組和樣品實(shí)驗(yàn)組，分別給予普通飲水和飲品原汁并給予常規(guī)飼料飼養(yǎng)。每七天尾靜脈采血一次，酸化處理，進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)，即得每立方毫米(mm3)血液中所含的白細(xì)胞總數(shù)。比較二者白細(xì)胞總數(shù)，以普通飲水組為對照，對試驗(yàn)組數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。
由圖三知，給予飲品后，大鼠血液中的白細(xì)胞總數(shù)與對照組相比沒有顯著性差異，從而說明飲品對其白細(xì)胞總數(shù)沒有影響。
實(shí)施例實(shí)施例12002年10月9日，按照培養(yǎng)基各組分的常規(guī)比例配制批號(hào)為021009的飲品50000ml，(1)菌種的分離培養(yǎng)在無菌、室溫條件下，將來自民間的“藏靈菇”菌經(jīng)滅菌PBS洗滌三次，用鉑耳圈勾取其深層菌落，接種于分離培養(yǎng)基上，然后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，經(jīng)5天培養(yǎng)；選肉眼觀察菌落呈奶酪狀，乳白色或深褐色，表面平滑，有光澤，邊緣光滑，顯微鏡觀察為大量的菌絲和孢子的單獨(dú)菌落。無菌條件下做二次分離，所用培養(yǎng)基同前，后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，選同前的單獨(dú)菌落，無菌條件下接種于保存培養(yǎng)基上，于4℃條件下保藏；分離培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖10g 蛋白胨10g 酵母膏2g 瓊脂20g，加水至1000ml保存培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖5g 蛋白胨10g 瓊脂20g 加水至1000ml2)發(fā)酵菌種液的制備發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基使用下述原料及配比制備馬鈴薯湯200ml 葡萄糖15g 蛋白胨20g 麥芽糖10g 加水至1000ml①I級發(fā)酵菌種液將保存于4℃條件下的馬克斯克魯維酵母菌種，無菌條件下接種于發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基試管中，25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，得I級發(fā)酵菌種液；②II級發(fā)酵菌種液將I級發(fā)酵菌種液，無菌條件下接種于250ML瓶裝的發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基中，在25℃恒溫條件下培養(yǎng)3天；(3)初發(fā)酵液的制備將II級菌種液，無菌條件下接種于發(fā)酵液培養(yǎng)基中，25℃條件下靜置發(fā)酵3天；其培養(yǎng)基所用原料及配比為馬鈴薯湯 25000ml葡萄糖 2500g麥芽糖 250g
乳糖 50g淀粉糖250g胡蘿卜汁 1500ml水23500ml(4)原發(fā)酵液將(3)制得的初發(fā)酵液在低于20℃條件下，靜置發(fā)酵3天，得飲品原液；(5)過濾；(6)有效成分檢驗(yàn)；(7)調(diào)味，用白砂糖調(diào)至酸甜適口；(8)灌裝；(9)滅菌。
實(shí)施例22003年3月14日，按照各組分的最佳比例配制批號(hào)為030314的飲品100000ml，其配比為(1)菌種的分離培養(yǎng)在無菌、室溫條件下，將來自民間的“藏靈菇”菌經(jīng)滅菌PBS洗滌三次，用鉑耳圈勾取其深層菌落，接種于分離培養(yǎng)基上，然后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，經(jīng)7天培養(yǎng)；選肉眼觀察菌落呈奶酪狀，乳白色或深褐色，表面平滑，有光澤，邊緣光滑，顯微鏡觀察為大量的菌絲和孢子的單獨(dú)菌落。無菌條件下做二次分離，所用培養(yǎng)基同前，后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，選同前的單獨(dú)菌落，無菌條件下接種于保存培養(yǎng)基上，于4℃條件下保藏；分離培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖15g 蛋白胨10g 酵母膏2g 瓊脂20g 加水至1000ml保存培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖7g 蛋白胨10g 瓊脂20g 加水至1000ml2)發(fā)酵菌種液的制備發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基使用下述原料及配比制備馬鈴薯湯300ml 葡萄糖20g 蛋白胨10g 麥芽糖2g 加水至1000ml①I級發(fā)酵菌種液將保存于4℃條件下的馬克斯克魯維酵母菌種，無菌條件下接種于發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基試管中，30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，得I級發(fā)酵菌種液；②II級發(fā)酵菌種液將I級發(fā)酵菌種液，無菌條件下接種于250ML瓶裝的發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基中，在30℃恒溫條件下培養(yǎng)2天；(3)初發(fā)酵液的制備將II級菌種液，無菌條件下接種于發(fā)酵液培養(yǎng)基中，30℃條件下靜置發(fā)酵3天；其培養(yǎng)基所用原料及配比為馬鈴薯湯 70000ml葡萄糖 7000g麥芽糖 300g乳糖 100g淀粉糖 500g胡蘿卜汁 5000ml水 25000ml(4)原發(fā)酵液將(3)制得的初發(fā)酵液在低于20℃條件下，靜置發(fā)酵三天，得飲品原液；(5)過濾；(6)有效成分檢驗(yàn)；(7)調(diào)味，用白砂糖調(diào)至酸甜適口；(8)灌裝；(9)滅菌。
實(shí)施例32003年6月10日，按照培養(yǎng)基各組分的優(yōu)化比例配制批號(hào)為030610的飲品200000ml，其配比為(1)菌種的分離培養(yǎng)在無菌、室溫條件下，將來自民間的“藏靈菇”菌經(jīng)滅菌PBS洗滌兩次，用鉑耳圈勾取其深層菌落，接種于分離培養(yǎng)基上，然后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，經(jīng)5天培養(yǎng)；選肉眼觀察菌落呈奶酪狀，乳白色或深褐色，表面平滑，有光澤，邊緣光滑，顯微鏡觀察為大量的菌絲和孢子的單獨(dú)菌落。無菌條件下做二次分離，所用培養(yǎng)基同前，后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，選同前的單獨(dú)菌落，無菌條件下接種于保存培養(yǎng)基上，于4℃條件下保藏；分離培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖10g 蛋白胨10g 酵母膏2g 瓊脂20g，加水至1000ml保存培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖5g 蛋白胨10g 瓊脂20g 加水至1000ml2)發(fā)酵菌種液的制備發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基使用下述原料及配比制備馬鈴薯湯200ml 葡萄糖15g 蛋白胨20g 麥芽糖10g 加水至1000ml①I級發(fā)酵菌種液將保存于4℃條件下的馬克斯克魯維酵母菌種，無菌條件下接種于發(fā)酵菌種培養(yǎng)液試管中，25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，得I級發(fā)酵菌種液；②II級發(fā)酵菌種液將I級發(fā)酵菌種液，無菌條件下接種于250ML瓶裝的發(fā)酵菌種培養(yǎng)液中，在25℃恒溫條件下培養(yǎng)3天；(3)初發(fā)酵液的制備將II級菌種液，無菌條件下接種于發(fā)酵培養(yǎng)液中，25℃條件下靜置發(fā)酵3天；其培養(yǎng)基所用原料及配比為馬鈴薯湯 25000ml葡萄糖 2500g麥芽糖 250g乳糖 50g淀粉糖 250g胡蘿卜汁 1500ml水 23500ml(4)原發(fā)酵液將(3)制得的初發(fā)酵液在低于20℃條件下，靜置發(fā)酵3天，得飲品原液；(5)過濾；(6)有效成分檢驗(yàn)；(7)調(diào)味，用白砂糖調(diào)至酸甜適口；
(8)灌裝；(9)滅菌。
實(shí)施例42003年10月18日，按照最優(yōu)化比例配制批號(hào)為031018的飲品300000ml(1)菌種的分離培養(yǎng)在無菌、室溫條件下，將來自民間的“藏靈菇”菌經(jīng)滅菌PBS洗滌三次，用鉑耳圈勾取其深層菌落，接種于分離培養(yǎng)基上，然后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，經(jīng)7天培養(yǎng)；選肉眼觀察菌落呈奶酪狀，乳白色或深褐色，表面平滑，有光澤，邊緣光滑，顯微鏡觀察為大量的菌絲和孢子的單獨(dú)菌落。無菌條件下做二次分離，所用培養(yǎng)基同前，后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，選同前的單獨(dú)菌落，無菌條件下接種于保存培養(yǎng)基上，于4℃條件下保藏；分離培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖15g 蛋白胨10g 酵母膏2g 瓊脂20g 加水至1000ml保存培養(yǎng)基的原料及配比為馬鈴薯湯200ml 葡萄糖7g 蛋白胨10g 瓊脂20g 加水至1000ml2)發(fā)酵菌種液的制備發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基使用下述原料及配比制備馬鈴薯湯300ml 葡萄糖20g 蛋白胨10g 麥芽糖2g 加水至1000ml①I級發(fā)酵菌種液將保存于4℃條件下的馬克斯克魯維酵母菌種，無菌條件下接種于發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基試管中，30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，得I級發(fā)酵菌種液；②II級發(fā)酵菌種液將I級發(fā)酵菌種液，無菌條件下接種于250ML瓶裝的發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基中，在30℃恒溫條件下培養(yǎng)2天；(3)初發(fā)酵液的制備將II級菌種液，無菌條件下接種于發(fā)酵液培養(yǎng)基中，30℃條件下靜置發(fā)酵3天；其培養(yǎng)基所用原料及配比為馬鈴薯湯 195000ml葡萄糖 19500g
麥芽糖400g乳糖 200g淀粉糖400g胡蘿卜汁 3000ml水102000ml(4)原發(fā)酵液將(3)制得的初發(fā)酵液在低于20℃條件下，靜置發(fā)酵三天，得飲品原液；(5)過濾；(6)有效成分檢驗(yàn)；(7)調(diào)味，用白砂糖調(diào)至酸甜適口；(8)灌裝；(9)滅菌。
權(quán)利要求
1.一種馬克斯克魯維發(fā)酵飲品，其特征在于采用一株分離出的馬克斯克魯維酵母菌--Kluyveromyces marnianu，用經(jīng)過篩選的培養(yǎng)基在25-30℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)，然后經(jīng)過除菌過濾和后續(xù)常規(guī)處理制成。
2.一種制備如權(quán)利要求1所述馬克斯克魯維發(fā)酵飲品的方法，其特征在于它是按照下述方法及過程制備A菌種的分離培養(yǎng)在無菌、室溫條件下，將來自民間的“藏靈菇”菌經(jīng)滅菌PBS洗滌三次，用鉑耳圈勾取其深層菌落，接種于分離培養(yǎng)基上，然后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中，經(jīng)5-7天培養(yǎng)；選肉眼觀察菌落呈奶酪狀，乳白色或深褐色，表面平滑，有光澤，邊緣光滑，顯微鏡觀察為大量的菌絲和孢子的單獨(dú)菌落，無菌條件下做二次分離，所用培養(yǎng)基同前，后置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-5天，選同前的單獨(dú)菌落，無菌條件下接種于保存培養(yǎng)基上，于4℃條件下保藏；上述分離培養(yǎng)基是由下述原料及配比制備馬鈴薯湯 200份 葡萄糖 10-15份蛋白胨10份酵母膏2份 瓊脂20份 加水至1000份上述保存培養(yǎng)基是由下述原料及配比制備馬鈴薯湯 200份 葡萄糖 5-7份 蛋白胨 10份瓊脂 20份 加水至 1000份B發(fā)酵菌種液的制備發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基使用下述原料及配比制備馬鈴薯湯 200-300份葡萄糖 15-20份蛋白胨 10-20份麥芽糖2-10份 加水至 1000份①I級發(fā)酵菌種液將保存于4℃條件下的馬克斯克魯維酵母菌種，無菌條件下接種于發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基試管中，25-30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，得I級發(fā)酵菌種液；②II級發(fā)酵菌種液將I級發(fā)酵菌種液，無菌條件下接種于250ML瓶裝的發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基中，在25-30℃恒溫條件下培養(yǎng)2-3天；C初發(fā)酵液的制備將II級菌種液，無菌條件下接種于發(fā)酵液培養(yǎng)基中，25-30℃條件下靜置發(fā)酵三天；其培養(yǎng)基所用原料及配比為馬鈴薯湯 50-70份葡萄糖5份 麥芽糖0.1-0.5份乳糖 0.1份淀粉糖 2-5份 胡蘿卜汁 3-5份加水至1000份D原發(fā)酵液的制備將C制得的初發(fā)酵液在低于20℃條件下，靜置發(fā)酵三天，得飲品原液；E過濾；F有效成分檢驗(yàn)；G調(diào)味，用白砂糖調(diào)至酸甜適口；H灌裝；J滅菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備如權(quán)利要求1所述馬克斯克魯維發(fā)酵飲品的方法，其特征在于所述分離、保存培養(yǎng)基的制備方法為將馬鈴薯洗凈去皮，切成小塊，按1∶4比例加水，煮沸30-50分鐘，紗布過濾，榨出所有液體，補(bǔ)水至1000ml，分別加入其他配料，充分溶解，調(diào)PH值為5.5-5.7，分裝試管，120℃30分鐘高壓滅菌，制成斜面。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種制備如權(quán)利要求1所述馬克斯克魯維發(fā)酵飲品的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基與發(fā)酵菌種液培養(yǎng)基的制備方法為將馬鈴薯洗凈去皮，切成小塊，按1∶4比例加水，煮沸30-50分鐘，紗布過濾，榨出所有液體，補(bǔ)水至1000ml，分別加入其他配料，充分溶解，調(diào)PH值為5.5-5.7，分裝，120℃30分鐘高壓滅菌備用。
全文摘要
一種馬克斯克魯維發(fā)酵飲品及其制備方法，其特征在于采用一株分離出的馬克斯克魯維酵母菌，在經(jīng)過篩選的培養(yǎng)基和25－30℃條件下，通過發(fā)酵培養(yǎng)，然后經(jīng)過除菌過濾和后續(xù)常規(guī)處理而制成。其制備方法為(1)菌種的分離培養(yǎng)；(2)發(fā)酵菌種液的制備；(3)初發(fā)酵液的制備；(4)原發(fā)酵液的制備；(5)過濾；(6)有效成分檢驗(yàn)；(7)調(diào)味，用白砂糖調(diào)至酸甜適口；(8)灌裝；(9)滅菌。本發(fā)明提供了一種能克服目前飲料行業(yè)中營養(yǎng)單一和人工添加成分過濫的問題，研究開發(fā)了一種集營養(yǎng)性、保健性于一體，且其成分來自天然不含任何人工添加物，對有機(jī)體無任何毒副作用的健康天然活性飲品——馬克斯克魯維發(fā)酵飲品及其制備方法。
文檔編號(hào)A23L2/38GK1633921SQ20031011774
公開日2005年7月6日 申請日期2003年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月30日
發(fā)明者黃振家, 段昕, 才學(xué)鵬, 殷宏, 邵英德, 羅建勛, 黃銀君, 景志忠, 牟克斌, 幺小云 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所