專利名稱：利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，特別涉及一種采用納豆桿菌為菌種，以大豆豆粉、大豆豆餅、大豆豆粕或大豆豆?jié){為培養(yǎng)基，發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的制作方法。
背景技術(shù)：
大豆肽液體食品及納豆桿菌益菌片是新興的優(yōu)質(zhì)保健食品。大豆肽的蛋白質(zhì)含量為85％左右，其氨基酸組成幾乎完全與大豆蛋白質(zhì)相同。但與大豆蛋白相比，大豆肽具有更好的理化性質(zhì)如易消化吸收、低抗原性、增強(qiáng)人體免疫能力等，且含有某些生理活性物質(zhì)在機(jī)體內(nèi)有多種生理功能。大豆蛋白活性肽等于將部分人體完成困難的消化過程拿到體外進(jìn)行，是新興的營(yíng)養(yǎng)保健源，國(guó)際上對(duì)大豆肽的研究始于70年代，其中美國(guó)和日本都處在發(fā)展大豆肽生產(chǎn)和利用的前列。我國(guó)近幾年研究逐步活躍起來，大豆肽生產(chǎn)得到迅猛發(fā)展。目前，大豆肽常用酶解的方法來制備。但酶解選擇性較強(qiáng)，水解率偏低，水解物存在苦味，不易被人接受，且不具有纖溶活性。
益生菌片是應(yīng)用有益菌，將其培養(yǎng)增殖、濃縮干燥制成菌劑。合格的益生菌應(yīng)具有以下兩個(gè)特點(diǎn)，即含有活的微生物以及能通過口腔、胃腸道內(nèi)發(fā)揮作用而改善宿主健康。對(duì)菌種基本要求是高安全性，無毒，無致殘，無致病，無耐藥性、無藥殘等副作用；必須是活的有益菌，在培養(yǎng)中及生物體內(nèi)易增殖，加工處理后尚有高存活率；對(duì)酸、堿、膽汁有耐受性，可避免防霉劑、抗氧化劑和飼料加工過程以及動(dòng)物腸道內(nèi)胃酸、膽汁的影響；在腸道中定植能力好，生長(zhǎng)速度快；能產(chǎn)生乳酸或其它抗菌活性物質(zhì)。目前益菌片往往存在著生產(chǎn)菌種未經(jīng)過嚴(yán)格的病理和毒理試驗(yàn)，長(zhǎng)期使用有耐藥性、“三致”等毒副作用；有些有益菌在培養(yǎng)中及生物體內(nèi)不易增殖，加工處理后存活率低，質(zhì)量得不到保證。
目前，大豆肽的生產(chǎn)方法主要有微生物發(fā)酵法、酶解法、化學(xué)方法三種，其中以微生物發(fā)酵法最為先進(jìn)，它可以在生產(chǎn)肽的同時(shí)修飾肽的苦味因子，同時(shí)，微生物將原料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子(如KTI和BBI)降解，有效消除這兩種影響消化和口味的成分。但也存在一些問題，如所采用的菌種產(chǎn)酶種類少且酶活力低，發(fā)酵能力差，生產(chǎn)力水平低，只能采用較精細(xì)原料進(jìn)行發(fā)酵，而且發(fā)酵產(chǎn)物未得到綜合利用，只利用發(fā)酵液中一部分，造成產(chǎn)品價(jià)格高。綜上所述，發(fā)酵能力低及生產(chǎn)成本高是影響發(fā)酵法生產(chǎn)大豆肽及推廣應(yīng)用關(guān)鍵。為此，研究和開發(fā)一種經(jīng)濟(jì)實(shí)用的生產(chǎn)方法是當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述問題，本發(fā)明解決了菌種安全差、發(fā)酵能力低及所用原料造價(jià)成本高問題，提供了利用納豆桿菌為菌種，以大豆制品為培養(yǎng)基生產(chǎn)大豆肽液體食品和納豆桿菌益菌片，并使所得到的益菌片安全性好、活菌數(shù)高，肽液體食品具有纖溶活性。
技術(shù)方案發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，其特征是采用納豆桿菌(Bacillus natto，中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏中心AS 1.107)為生產(chǎn)菌株，發(fā)酵培養(yǎng)基主要以大豆豆粉、大豆豆粕、大豆餅粉或大豆豆?jié){為原料，經(jīng)過種子培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)，離心或過濾，干燥工藝，得到具有大豆肽液體食品和固體納豆桿菌益菌片，具體步驟如下(一)制備發(fā)酵液·菌種的制備納豆桿菌在瓊脂斜面上35-37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)后，4℃冰箱保存待用。斜面培養(yǎng)基滅菌條件110-125℃，15-20分鐘；其中斜面培養(yǎng)基為牛肉膏5.0-10.0g蛋白胨10.0-20.0g氯化鈉5.0-10.0g瓊脂 18.0-20.0g水1000mlpH7.0-7.2·種子培養(yǎng)將在斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)好的菌種接一環(huán)加入到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基滅菌條件110-125℃，15-20分鐘；在搖床上200rpm轉(zhuǎn)速下，35-37℃振蕩培養(yǎng)20-28小時(shí)后，即可得到適合接種的種子培養(yǎng)物。
其中種子培養(yǎng)基為蛋白胨10.0-15.0g葡萄糖20.0-30.0gK2HPO41.0-1.5gMgSO40.5-0.75g水1000mlpH7.0-7.2·發(fā)酵培養(yǎng)將上述種子培養(yǎng)物以2％-5％(體積比，ml/ml)的接種量接種于經(jīng)滅菌處理的新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基，30-40℃培養(yǎng)60-72小時(shí)進(jìn)行深層液體發(fā)酵。在發(fā)酵過程中，應(yīng)控制pH值在6.0-8.0；發(fā)酵期間pH的調(diào)節(jié)，視發(fā)酵液pH的具體情況，并根據(jù)發(fā)酵需要，通過流加酸或堿溶液實(shí)現(xiàn)。溶氧通過控制通風(fēng)量調(diào)節(jié)，溶氧應(yīng)控制在20-40％。
發(fā)酵結(jié)束時(shí)檢查芽孢生成率，要求芽孢生成率達(dá)70％以上。
需要說明的是調(diào)節(jié)pH值方法是初始pH的調(diào)節(jié)可以通過添加濃度為1.0-2.5％磷酸緩沖液實(shí)現(xiàn)。發(fā)酵期間pH的調(diào)節(jié)，所用酸液如磷酸溶液，所用堿液如氨水或尿素。當(dāng)發(fā)酵至48小時(shí)可將pH調(diào)至6.0-6.3或7.7-8.0刺激芽孢產(chǎn)生。
當(dāng)發(fā)酵至48小時(shí)后，可降低溶氧，控制溶氧在20-30％以便刺激芽孢的產(chǎn)生。
當(dāng)發(fā)酵48小時(shí)后，可降低溫度刺激芽孢產(chǎn)生，將溫度控制在25-32℃，不僅可促進(jìn)芽孢產(chǎn)生，還有利于保持納豆激酶的穩(wěn)定性，使其不被降解。
當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆餅粉為原料時(shí)，其配方是大豆餅粉20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g、1000ml水pH7.0-7.2。
當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆豆粉為原料時(shí)，其配方是大豆豆粉20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g、1000ml水、pH7.0-7.2。
當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆豆粕為原料時(shí)，其配方是大豆豆粕20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g、1000ml水、pH7.0-7.2。
當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆豆?jié){為原料時(shí)，其配方是大豆豆?jié){125-250ml、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g、用水補(bǔ)足到1000ml、pH7.0-7.2。
上述大豆餅粉、大豆豆粉、大豆豆粕必須磨細(xì)，過80-120目篩待用，發(fā)酵培養(yǎng)基采取115-125℃，15-25分鐘滅菌。
(二)制備大豆肽液體食品和益菌片·固液分離發(fā)酵結(jié)束后，經(jīng)無菌試驗(yàn)確定無污染雜菌后，采用了冷凍離心法、膜過濾法或離心過濾法中一種或兩種聯(lián)合使用進(jìn)行固液分離。采用膜過濾法分離固液時(shí)，盡量減少發(fā)酵液中懸浮物透過膜。采用重力離心處理時(shí)，檢測(cè)離心上清液活菌數(shù)，選擇轉(zhuǎn)速應(yīng)大于5000r/min，使發(fā)酵液中懸浮物離心下來，離心過濾法處理時(shí)，可將離心和過濾結(jié)合起來，在離心過程中同時(shí)完成過濾。
·制備大豆肽液體食品澄清上清液，用纖維蛋白平板法測(cè)定液體中納豆激酶酶活力，要求納豆激酶含量達(dá)到100-500U/ml，大豆肽氨基酸含量為20-120g/L。檢驗(yàn)合格后，添加少量食品添加劑調(diào)配成大豆肽液體食品；注納豆激酶酶活力單位定義為在37℃1min內(nèi)分解1nmol溶解于0.1mol/L磷酸緩沖溶液(pH7.4)中的濃度5×10-4mol/L的H-D-Val-Leu-Lys-Pna的納豆激酶量為1U?；蛘咭阅蚣っ富蚶w溶酶的活性單位來表示。
·制備益菌片將分離得到菌泥進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，采用冷凍真空干燥、流化床干燥、噴霧干燥或真空干燥法進(jìn)行干燥，干燥后再次進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，要求活菌損失不大于80-85％。加入賦形劑如淀粉、輕質(zhì)碳酸納等，充分?jǐn)嚢韬蠹纯傻眉{豆桿菌益菌片。
有益效果本發(fā)明利用微生物發(fā)酵技術(shù)，依靠納豆桿菌繁殖快，易培養(yǎng)，產(chǎn)芽孢，代謝能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，以低廉的原料作培養(yǎng)基，通過特定發(fā)酵工藝進(jìn)行發(fā)酵控制，發(fā)酵液經(jīng)固液分離后，離心液制成大豆肽液體食品，菌泥制成納豆桿菌益生菌片，發(fā)酵產(chǎn)品得到綜合利用。得到益菌片安全性好、活菌數(shù)高，而肽液體食品又具纖溶活性。
該生產(chǎn)方法所采用的菌種為納豆桿菌，系屬枯草芽孢桿菌一個(gè)變種，所以納豆芽孢桿菌具有芽孢，因而能耐酸，耐堿，耐高溫及耐擠壓，在制粒過程及酸性胃環(huán)境中均能保持高度的穩(wěn)定性；其具有抑制沙門氏菌、傷寒菌、痢疾菌及0157:H7大腸桿菌等致病菌作用；而且由于納豆桿菌長(zhǎng)期作為生產(chǎn)納豆菌種，其具有高度安全性。由于豆類可誘導(dǎo)納豆桿菌產(chǎn)生納豆激酶、蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、植酸酶等100種以上酶，所以納豆桿菌利用豆餅、豆粕、豆粉、豆?jié){等廉價(jià)原料進(jìn)行發(fā)酵時(shí)具有較高發(fā)酵能力，不僅解決發(fā)酵法生產(chǎn)大豆肽所存在的成本高問題，而且是大豆肽液體食品中還富含大量的納豆激酶，以致使大豆肽液體食品具有抗膽固醇、抗血栓形成，同時(shí)具有強(qiáng)烈體外和體內(nèi)纖溶活性雙重功效，使本發(fā)明提供了一種營(yíng)養(yǎng)豐富、容易吸收的保健食品，可廣泛用于醫(yī)藥、食品、飼料添加劑等諸多領(lǐng)域，有著誘人的經(jīng)濟(jì)前景；而且該制備方法工藝簡(jiǎn)單，周期短，成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。從而為蛋白肽工業(yè)發(fā)展提供有效途徑，具有較大經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(一)制備發(fā)酵液·菌種的制備生產(chǎn)菌種為納豆桿菌(Bacillus natto，AS 1.107)。將納豆桿菌在瓊脂斜面上37℃培養(yǎng)18小時(shí)后，鏡檢，菌體生長(zhǎng)良好，4℃冰箱保存待用。斜面培養(yǎng)基滅菌條件110℃，20分鐘。
其中斜面培養(yǎng)基為牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g氯化鈉5.0g瓊脂 18.0g水1000mlpH7.0-7.2·種子培養(yǎng)將在斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)好的菌種接一環(huán)加入到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基滅菌條件110℃，20分鐘；在搖床上200rpm轉(zhuǎn)速下，37℃振蕩培養(yǎng)20小時(shí)后，得到適合接種的種子培養(yǎng)物。
其中種子培養(yǎng)基為蛋白胨10.0g葡萄糖20.0gK2HPO41.0gMgSO40.5g水1000mlpH7.0-7.2·發(fā)酵培養(yǎng)將種子培養(yǎng)物以2％的接種量接種于新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基，40℃培養(yǎng)60小時(shí)進(jìn)行深層液體發(fā)酵。在發(fā)酵過程中，應(yīng)控制pH值在6.0-8.0。調(diào)節(jié)pH值辦法是初始pH的調(diào)節(jié)可以通過添加濃度為1.0％磷酸緩沖液實(shí)現(xiàn)；發(fā)酵期間pH的調(diào)節(jié)，視發(fā)酵液pH的具體情況，并根據(jù)發(fā)酵需要，通過流加酸或堿溶液實(shí)現(xiàn)。所用酸為磷酸溶液，所用堿為氨水。溶氧通過控制通風(fēng)量調(diào)節(jié)，溶氧應(yīng)控制在20-40％，芽孢生成率達(dá)70％。
其中發(fā)酵培養(yǎng)基為大豆餅粉20g葡萄糖 20gMgSO40.5gNa2HPO46.0gNaH2PO41.0gCaCl20.2g水 1000mlpH 7.0-7.2
大豆餅粉必須磨細(xì)，過100目篩待用。發(fā)酵培養(yǎng)基采取115℃，25分鐘滅菌。
(二)大豆肽液體食品和益菌片·固液分離發(fā)酵結(jié)束后，經(jīng)無菌試驗(yàn)確定無污染雜菌后，采用了冷凍離心法進(jìn)行固液分離，4℃下5000r/min離心15分鐘。
·制備大豆肽液體食品澄清上清液，用纖維蛋白平板法測(cè)定液體中納豆激酶酶活力。用氨基酸測(cè)定儀測(cè)定溶液中大豆肽氨基酸含量。納豆激酶含量為250U/ml，大豆肽氨基酸含量為6g/L。檢驗(yàn)合格后，添加少量蛋白糖和檸檬酸調(diào)配成大豆肽液體食品。
·制備益菌片將分離得到菌泥進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，采用冷凍真空干燥后再次進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，活菌損失不大于80％。其加入賦形劑淀粉，充分?jǐn)嚢韬蠹纯傻眉{豆桿菌益菌片。該益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.1億個(gè)/g。
實(shí)施例2菌種的制備時(shí)，將納豆桿菌在瓊脂斜面上36℃培養(yǎng)2Q小時(shí)，斜面培養(yǎng)基滅菌條件為125℃，15分鐘。
其中斜面培養(yǎng)基為牛肉膏10.0g蛋白胨20.0g氯化鈉10.0g瓊脂 20.0g水1000mlpH7.0-7.2種子培養(yǎng)時(shí)，種子培養(yǎng)基滅菌條件125℃，15分鐘；36℃培養(yǎng)24小時(shí)。
其中種子培養(yǎng)基為蛋白胨15.0g葡萄糖30.0gK2HPO41.5gMgSO40.75g水1000mlpH7.0-7.2將種子培養(yǎng)物以4％的接種量接種于經(jīng)120℃，20分鐘滅菌處理的新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)66小時(shí)進(jìn)行深層液體發(fā)酵。
初始pH的調(diào)節(jié)可以通過添加濃度為1.8％磷酸緩沖液實(shí)現(xiàn)。發(fā)酵至48小時(shí)將pH升高到7.7-8.0。
其中發(fā)酵培養(yǎng)基大豆餅粉50g
葡萄糖 30gMgSO40.7gNa2HPO49.0gNaH2PO41.5gCaCl20.3g水 1000mlpH 7.0-7.2發(fā)酵培養(yǎng)基采取120℃，20分鐘滅菌。賦形劑采用輕質(zhì)碳酸納。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為200U/ml，大豆肽氨基酸含量為7g/L重量，納豆桿菌益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.5億個(gè)/g。
實(shí)施例3菌種的制備時(shí)，將納豆桿菌在瓊脂斜面上35℃培養(yǎng)24小時(shí)。斜面培養(yǎng)基滅菌條件為115℃，18分鐘。
其中斜面培養(yǎng)基牛肉膏7.5g蛋白胨15g氯化鈉7.5g瓊脂 19.0g水1000mlpH7.0-7.2種子培養(yǎng)時(shí)，種子培養(yǎng)基滅菌條件125℃，15分鐘；35℃培養(yǎng)20小時(shí)。
其中種子培養(yǎng)基蛋白胨12.5g葡萄糖25.0gK2HPO41.3gMgSO40.6g水1000mlpH7.0-7.2將種子培養(yǎng)物以5％的接種量接種于經(jīng)滅菌處理的新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)72小時(shí)進(jìn)行深層液體發(fā)酵。初始pH的調(diào)節(jié)可以通過添加濃度為2.5％磷酸緩沖液實(shí)現(xiàn)。發(fā)酵至48小時(shí)可降低溶氧，控制溶氧在20-30％以便刺激芽孢的產(chǎn)生。
其中發(fā)酵培養(yǎng)基大豆餅粉 80g葡萄糖 40gMgSO41.0g
Na2HPO412.0gNaH2PO42.0gCaCl20.4g水 1000mlpH 7.0-7.2發(fā)酵培養(yǎng)基采取125℃，15分鐘滅菌。發(fā)酵結(jié)束后，經(jīng)無菌試驗(yàn)確定無污染雜菌后，采用了膜過濾法進(jìn)行固液分離，其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為300U/ml，大豆肽氨基酸含量為10g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.2億個(gè)/g。
實(shí)施例4發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆粕20g葡萄糖 20gMgSO40.5gNa2HPO46.0gNaH2PO41.0gCaCl20.2g水 1000mlpH 7.0-7.2大豆豆粕必須磨細(xì)，過100目篩待用。
發(fā)酵至48小時(shí)后，將pH調(diào)至7.7-8.0；降低溶氧，控制溶氧在20-30％以便刺激芽孢的產(chǎn)生，降低溫度至25℃。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為430U/ml，大豆肽氨基酸含量為7g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.3億個(gè)/g。
實(shí)施例5發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆粕50g葡萄糖 30gMgSO40.7gNa2HPO49.0gNaH2PO41.5gCaCl20.3g水 1000mlpH 7.0-7.2大豆豆粕必須磨細(xì)，過100目篩待用。
發(fā)酵至48小時(shí)可將pH調(diào)至6.0-6.3刺激芽孢產(chǎn)生。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為360U/ml，大豆肽氨基酸含量為9g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.1億個(gè)/g。
實(shí)施例6發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆粕 80g葡萄糖 40gMgSO41.0gNa2HPO412.0gNaH2PO42.0gCaCl20.4g水 1000mlpH 7.0-7.2大豆豆粕必須磨細(xì)，過100目篩待用。
發(fā)酵至48小時(shí)可降低溶氧，控制溶氧在20-30％，同時(shí)將pH降低到6.0-6.3，以便刺激芽孢的產(chǎn)生。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為350U/ml，大豆肽氨基酸含量為6.5g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.3億個(gè)/g。
實(shí)施例7發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆粉 20g葡萄糖20gMgSO40.5gNa2HPO46.0gNaH2PO41.0gCaCl20.2g水1000mlpH7.0-7.2大豆豆粉必須磨細(xì)，過100目篩待用。
發(fā)酵48小時(shí)后可降低溫度刺激芽孢產(chǎn)生，將溫度控制在28℃。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為450U/ml，大豆肽氨基酸含量為7.8g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.1億個(gè)/g。
實(shí)施例8發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆粉50g葡萄糖 30gMgSO40.7g
Na2HPO49.0gNaH2PO41.5gCaCl20.3g水 1000mlpH 7.0-7.2大豆豆粉必須磨細(xì)，過100目篩待用。
發(fā)酵至48小時(shí)可將pH調(diào)至6.0-6.3，控制溶氧在20-30％左右，將溫度控制在28℃，其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為500U/ml，大豆肽氨基酸含量為12g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.5億個(gè)/g。
實(shí)施例9發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆粉 80g葡萄糖 40gMgSO41.0gNa2HPO412.0gNaH2PO42.0gCaCl20.4g水 1000mlpH 7.0-7.2大豆豆粉必須磨細(xì)，過100目篩待用。
發(fā)酵至48小時(shí)后可將pH調(diào)至7.7-8.0；降低溶氧，控制溶氧在20-30％以便刺激芽孢的產(chǎn)生，降低溫度至32℃。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為490U/ml，大豆肽氨基酸含量為8g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.3億個(gè)/g。
實(shí)施例10發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆?jié){ 125ml葡萄糖 20gMgSO40.5gNa2HPO46.0gNaH2PO41.0gCaCl20.2g用水補(bǔ)足到 1000mlpH 7.0-7.2發(fā)酵至48小時(shí)后降低溶氧，控制溶氧在20-30％以便刺激芽孢的產(chǎn)生，降低溫度至25℃。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為250U/ml，大豆肽氨基酸含量為7g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.2億個(gè)/g。
實(shí)施例11發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆?jié){180ml葡萄糖 30gMgSO40.7gNa2HPO49.0gNaH2PO41.5gCaCl20.3g用水補(bǔ)足到 1000mlpH 7.0-7.2發(fā)酵至48小時(shí)后可將pH調(diào)至7.7-8.0，降低溫度至28℃。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為500U/ml，大豆肽氨基酸含量為5g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.4億個(gè)/g。
實(shí)施例12發(fā)酵培養(yǎng)基大豆豆?jié){250ml葡萄糖 40gMgSO41.0gNa2HPO412.0gNaH2PO42.0gCacL20.4g用水補(bǔ)足到 1000mlpH 7.0-7.2發(fā)酵至48小時(shí)后可將pH調(diào)至6.0-6.3，降低溫度至32℃。其他同實(shí)施例1。
測(cè)定液體中納豆激酶酶活力為480U/ml，大豆肽氨基酸含量為10g/L重量，益菌片活菌數(shù)達(dá)到1.4億個(gè)/g。
權(quán)利要求
1.利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，其特征是采用納豆桿菌(Bacillus natto，AS 1.107)為生產(chǎn)菌株，發(fā)酵培養(yǎng)基主要以大豆豆粉、大豆豆粕、大豆餅粉或大豆豆?jié){為原料，經(jīng)過種子培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)，離心或過濾，干燥工藝，得到具有大豆肽液體食品和固體益菌片，具體步驟如下(一)制備發(fā)酵液·菌種的制備將納豆桿菌在瓊脂斜面上35-37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)后，4℃冰箱保存待用，斜面培養(yǎng)基滅菌條件110-125℃，15-20分鐘；·種子培養(yǎng)將在斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)好的菌種接一環(huán)加入到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基滅菌條件110-125℃，15-20分鐘；在搖床上200rpm轉(zhuǎn)速下，35-37℃振蕩培養(yǎng)20-28小時(shí)后，即可得到適合接種的種子培養(yǎng)物；·發(fā)酵培養(yǎng)將上述種子培養(yǎng)物以2-5％(體積比，ml/ml)的接種量接種于經(jīng)滅菌處理的新鮮發(fā)酵培養(yǎng)基，30-40℃培養(yǎng)60-72小時(shí)進(jìn)行深層液體發(fā)酵；在發(fā)酵過程中，應(yīng)控制pH值在6.0-8.0；發(fā)酵期間pH的調(diào)節(jié)，視發(fā)酵液pH的具體情況，并根據(jù)發(fā)酵需要，通過流加酸或堿溶液實(shí)現(xiàn)；溶氧通過控制通風(fēng)量調(diào)節(jié)，溶氧應(yīng)控制在20-40％；發(fā)酵結(jié)束時(shí)檢查芽孢生成率，要求芽孢生成率達(dá)70％以上；(二)制備大豆肽液體食品和益菌片·固液分離發(fā)酵結(jié)束后，經(jīng)無菌試驗(yàn)確定無污染雜菌后，采用了冷凍離心法、膜過濾法或離心過濾法中一種或兩種聯(lián)合使用進(jìn)行固液分離，采用膜過濾法分離固液時(shí)，盡量減少發(fā)酵液中懸浮物透過膜，采用重力離心處理時(shí)，檢測(cè)離心上清液活菌數(shù)，選擇轉(zhuǎn)速應(yīng)大于5000r/min，使發(fā)酵液中懸浮物離心下來，離心過濾法處理時(shí)，可將離心和過濾結(jié)合起來，在離心過程中同時(shí)完成過濾；·制備大豆肽液體食品澄清上清液，用纖維蛋白平板法測(cè)定液體中納豆激酶酶活力，要求納豆激酶含量達(dá)到100-500U/ml，大豆肽氨基酸含量為20-120g/L重量，檢驗(yàn)合格后，添加少量食品添加劑調(diào)配成大豆肽液體食品；(3)制備益菌片將分離得到菌泥進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，采用冷凍真空干燥、流化床干燥、噴霧干燥或真空干燥進(jìn)行干燥，干燥后再次進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，要求活菌損失不大于80-85％，加入賦形劑，充分?jǐn)嚢韬蠹纯傻眉{豆桿菌益菌片。
2.按照權(quán)利要求1所述的利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，其特征是當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆餅粉為原料時(shí)，其配方是大豆餅粉20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g，1000ml水、pH7.0-7.2；當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆豆粉為原料時(shí)，其配方是大豆豆粉20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g、1000ml水、pH7.0-7.2；當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆豆粕為原料時(shí)，其配方是大豆豆粕20-80g、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g、1000ml水、pH7.0-7.2；當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基采用大豆豆?jié){為原料時(shí)，其配方是大豆豆?jié){125-250ml、葡萄糖20-40g、MgSO40.5-1.0g、Na2HPO46.0-12.0g、NaH2PO41.0-2.0g、CaCl20.2-0.4g、用水補(bǔ)足到1000ml、pH7.0-7.2；上述大豆餅粉、大豆豆粉、大豆豆粕必須磨細(xì)，過80-120目篩待用，發(fā)酵培養(yǎng)基采取115-125℃，15-25分鐘滅菌。
3.按照權(quán)利要求1所述的利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，其特征是控制pH值，調(diào)節(jié)pH值方法是初始pH調(diào)節(jié)可以通過添加濃度為1.0-2.5％的磷酸緩沖液實(shí)現(xiàn)；發(fā)酵期間pH的調(diào)節(jié)，通過流加酸或堿溶液實(shí)現(xiàn)，所用酸液如磷酸溶液，所用堿液如氨水或尿素，當(dāng)發(fā)酵至48小時(shí)，可將pH調(diào)至6.0-6.3或7.7-8.0。
4.按照權(quán)利要求1所述的利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，其特征是溶氧通過控制通風(fēng)量調(diào)節(jié)，當(dāng)發(fā)酵至48小時(shí)后，降低溶氧，控制溶氧在20-30％。
5.按照權(quán)利要求1所述的利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，其特征是當(dāng)發(fā)酵48小時(shí)后，可降低溫度刺激芽孢產(chǎn)生，將溫度控制在25-32℃。
全文摘要
利用大豆制品發(fā)酵生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法，屬于食用納豆桿菌發(fā)酵大豆制品，生產(chǎn)大豆肽液體食品及益菌片的方法。本發(fā)明解決了菌種安全差、目前益生菌發(fā)酵能力低及培養(yǎng)基成本高等問題。它以能產(chǎn)納豆激酶的納豆桿菌為菌種，以大豆豆粉、大豆豆餅、大豆豆粕或大豆豆?jié){為培養(yǎng)基，經(jīng)發(fā)酵、分離后，加入輔料，制成含有納豆激酶的保健型大豆肽、低聚肽、短肽混合物的液體食品和富含納豆桿菌及大豆纖維蛋白的益菌片。本發(fā)明提供了一種營(yíng)養(yǎng)豐富、風(fēng)味獨(dú)特的保健食品。它可廣泛地用于醫(yī)藥、食品、飼料添加劑等諸多領(lǐng)域；并且制備工藝簡(jiǎn)單、周期短、成本低、適合工業(yè)化生產(chǎn)，為蛋白肽工業(yè)發(fā)展提供有效途徑；具有較大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)A23L1/20GK1593199SQ200410019758
公開日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2004年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月28日
發(fā)明者路福平, 杜連祥, 王敏, 王萍, 王春霞, 朱建輝 申請(qǐng)人:天津科技大學(xué)