專利名稱：由林蛙肌肉制備氨基酸多肽復(fù)合液的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在特定酶解條件下生物酶水解林蛙肌肉蛋白的生物化學(xué)方法。
背景技術(shù)：
林蛙是集食、藥、補(bǔ)為一體的珍品，林蛙油具有明顯的潤(rùn)肺滋陰、補(bǔ)腎益精、補(bǔ)腦益智等功能，是男女皆宜的保健品，在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)一直走俏。但由于技術(shù)條件等原因，除了林蛙油以外的林蛙部分一直沒有被利用，特別是占林蛙體重60％的軀干及四肢肌肉和骨骼是非常有價(jià)值的深加工的原料。干林蛙肌肉種含蛋白質(zhì)43％左右，極具有開發(fā)前景。目前生產(chǎn)中多采用酸、堿水解動(dòng)物蛋白，反應(yīng)中需加入強(qiáng)酸(硫酸、鹽酸)和強(qiáng)堿(氫氧化鈉)，又采用陽(yáng)離子交換樹脂及活性炭脫色等工藝，不僅生產(chǎn)過(guò)程復(fù)雜，而且設(shè)備必須耐酸、堿的腐蝕。同時(shí)在與酸、堿的反應(yīng)過(guò)程中，部分有效成分(如色氨酸)被破壞。由于采用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿，必須進(jìn)行三廢處理，這不僅給工藝上也給經(jīng)濟(jì)上帶來(lái)不利的因素。
本發(fā)明的目的在于提供一種由林蛙肌肉獲得氨基酸多肽復(fù)合液的方法。它采用東北林蛙肌肉(含骨)為材料，經(jīng)過(guò)特定條件下的生物酶酶解而成。其生產(chǎn)方法簡(jiǎn)單，工藝穩(wěn)定，生產(chǎn)周期短，成本低、沒有三廢產(chǎn)生，適合于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)。制得的產(chǎn)品既含有豐富的氨基酸多肽成分和鈣，極易于人體吸收，并可促進(jìn)人體生長(zhǎng)發(fā)育。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是以酶解林蛙肌肉蛋白制取氨基酸多肽復(fù)合液的方法，其特征在于采用動(dòng)物蛋白水解酶在下述條件下酶解a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100～400(重量比)(酶的活力以60萬(wàn)單位/克計(jì))b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶2.0～6.0(重量比)c.酶解溫度40～80℃d.酶解時(shí)間1～5小時(shí)e.酶解時(shí)反應(yīng)液pH＝5～9其酶解的最佳條件是a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100(重量比)(酶的活力以60萬(wàn)單位/克計(jì))b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶3.00(重量比)c.酶解溫度60℃d.酶解時(shí)間3小時(shí)e.酶解時(shí)反應(yīng)液pH＝5.0在反應(yīng)過(guò)程中，動(dòng)物蛋白水解酶酶解林蛙肌肉蛋白是主要反應(yīng)部分，所以必須注意控制酶解反應(yīng)的條件1.酶的用量加入的酶的數(shù)量直接影響酶解的效果，在林蛙肌肉量一定時(shí)，動(dòng)物蛋白水解酶用量增加，產(chǎn)物中氨基酸和多肽的含量也隨之增加，但不成正比關(guān)系。如圖1所示，當(dāng)酶的用量達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，即使增加酶的用量，產(chǎn)物中氨基酸的含量增加的幅度也不大。那么從經(jīng)濟(jì)角度考慮選擇適當(dāng)?shù)拿傅挠昧考疵噶俊昧滞芗∪饬浚?∶100～400(重量比)較為適宜，而其中又以酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100(重量比)為佳。(動(dòng)物蛋白水解酶的活力單位以60萬(wàn)單位/克計(jì))。酶的活力每批不一樣，即使同一批酶，隨著貯存期的延長(zhǎng)，酶的活力亦隨之下降。因此使用前必須測(cè)定酶的活力，根據(jù)測(cè)得的酶的活力按下式換算出實(shí)際所需酶的用量酶的實(shí)際用量＝酶的標(biāo)準(zhǔn)活力×酶的用量/測(cè)得的酶的活力2.反應(yīng)物的濃度當(dāng)反應(yīng)物的濃度較低，即加入的水量較多時(shí)，不僅產(chǎn)物中氨基酸的總量較低，而且降低了設(shè)備的利用率，而反應(yīng)物的濃度較高時(shí)，雖然設(shè)備利用率高，但由于體系粘稠，混合，傳熱都出現(xiàn)困難，所以產(chǎn)物中氨基酸的總量也不高。表1中林蛙肌肉量都是20克，除反應(yīng)物的濃度不同外，其他條件都相同時(shí)所得產(chǎn)物中氨基酸總量情況的對(duì)比表1 底物濃度對(duì)酶解的影響

從表中可以看出當(dāng)水量∶鮮用量＝3～6∶1時(shí)效果較好，而當(dāng)水量∶鮮用量＝4∶1時(shí)效果最佳。
3.酶解的時(shí)間動(dòng)物蛋白水解酶與林蛙肌肉蛋白之間的反應(yīng)需要一定的時(shí)間，隨著反應(yīng)時(shí)間增加，產(chǎn)物中氨基酸的含量也隨之增加。當(dāng)反應(yīng)時(shí)間在3-5小時(shí)時(shí)，產(chǎn)物中氨基酸的含量較高。當(dāng)超過(guò)5小時(shí)時(shí)，雖然增加反應(yīng)時(shí)間，但產(chǎn)物中氨基酸的含量增加的幅度也不大，故不可取。取3-5小時(shí)較為適宜，而其中酶解時(shí)間采用3小時(shí)較為佳。這樣不僅產(chǎn)物中氨基酸含量較高，而且反應(yīng)周期短能耗低。
4.酶解的溫度動(dòng)物蛋白水解酶酶解林蛙肌肉蛋白時(shí)，要在一定溫度下進(jìn)行，溫度過(guò)低酶的活性沒有充分發(fā)揮，而溫度過(guò)高部分酶會(huì)喪失活性。在其他反應(yīng)條件相同時(shí)，二者都會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)物中氨基酸的含量降低。如表2所示，同是20克林蛙肌肉在其他條件相同時(shí)，在不同溫度下產(chǎn)物中氨基酸含量情況對(duì)比表2 溫度對(duì)酶解的影響

由上表可得反應(yīng)溫度一般應(yīng)在40～70℃較為合理，而動(dòng)物蛋白水解酶在60℃是效果最佳的。
5.酶解的pH值林蛙肌肉在酶解時(shí)要在合適的pH值下進(jìn)行，當(dāng)其他反應(yīng)條件相同時(shí)，反應(yīng)液呈酸性或堿性都會(huì)影響酶的活性，使產(chǎn)物中氨基酸的含量降低，如下表所示表3 pH值對(duì)酶解的影響

從表中可以看出當(dāng)pH＝5-7時(shí)，對(duì)酶解反應(yīng)是比較有利的，尤其當(dāng)pH＝5.0時(shí)是最適宜的。林蛙肌肉的勻漿液加水后的pH值為6.5～7.0之間，這樣可用0.1N HCI溶液將反應(yīng)液的pH值調(diào)到5.0。
本發(fā)明采用動(dòng)物蛋白水解酶直接作用于林蛙肌肉蛋白液，工藝簡(jiǎn)單，酶解效率高，生產(chǎn)周期短，不產(chǎn)生三廢，對(duì)設(shè)備沒有耐腐蝕要求。動(dòng)物蛋白水解酶來(lái)源充足，價(jià)格低，制得的氨基酸復(fù)合液不僅必需的氨基酸種類齊全而且含量高，沒有異味口感好。


下面是以動(dòng)物蛋白水解酶酶解蛋白制取氨基酸多肽復(fù)合液的生產(chǎn)流程
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取20公斤鮮林蛙肌肉，用自來(lái)水沖洗三遍，控凈水分，然后加入60公斤水(林蛙肌肉量∶水重＝1∶3.0)，使之在絞肉機(jī)中絞成勻漿后打入反應(yīng)釜內(nèi)，向反應(yīng)釜的保溫夾套通入蒸汽，同時(shí)開動(dòng)攪拌器，使?jié){液升溫至60℃，并用0.1N HCI溶液將漿液的PH值調(diào)到5.0，此時(shí)加入200克動(dòng)物蛋白水解酶(測(cè)得酶活力為60萬(wàn)單位/克)，在此條件下維持反應(yīng)3小時(shí)(在這段時(shí)間內(nèi)用間歇攪拌即可)然后冷卻至室溫，用離心機(jī)(4000轉(zhuǎn)/分)過(guò)濾兩遍(濾布第一遍用滌綸布，第二遍用雙層柞蠶絲綢布)。濾液通過(guò)紫外線消毒器，即得到氨基酸復(fù)合液成品74公斤，氨基酸的含量為28.67克/升。
實(shí)施例2重復(fù)實(shí)施例1的操作和條件，其中測(cè)的動(dòng)物蛋白水解酶的活力為55萬(wàn)單位/克，則加入動(dòng)物蛋白水解酶的量即為74×60/55＝80.7克得到的氨基酸復(fù)合液成品76公斤，氨基酸的含量為34.48克/升。
實(shí)施例3取干林蛙肌肉10公斤(一公斤干林蛙肌肉相當(dāng)于2.5～2.8公斤鮮林蛙肌肉)，用自來(lái)水沖洗三遍，開水洗一遍，通蒸汽至沸騰浸泡24小時(shí)，然后加入90公斤水，使之在絞肉機(jī)中絞成勻漿后打入反應(yīng)釜內(nèi)，向反應(yīng)釜的保溫夾套通入蒸汽，同時(shí)開動(dòng)攪拌器，使?jié){液升溫至60℃，并用0.1N HCI溶液將漿液的PH值調(diào)到5.0，此時(shí)加入300克動(dòng)物蛋白水解酶(測(cè)得酶活力為60萬(wàn)單位/克)，在此條件下維持反應(yīng)3小時(shí)(在這段時(shí)間內(nèi)用間歇攪拌即可)然后冷卻至室溫，用離心機(jī)(4000轉(zhuǎn)/分)過(guò)濾兩遍(濾布第一遍用滌綸布，第二遍用雙層柞蠶絲綢布)。濾液通過(guò)紫外線消毒器，即得到氨基酸復(fù)合液成品74公斤，氨基酸的含量為28.13克/升。
權(quán)利要求
1.一種由酶解林蛙肌肉蛋白制取氨基酸多肽復(fù)合液的方法，其特征在于采用動(dòng)物蛋白水解酶在下述條件下進(jìn)行酶解a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100～400(重量比)(酶的活力以60萬(wàn)單位/克計(jì))b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶2.0～6.0(重量比)c.酶解溫度40～80℃d.酶解時(shí)間1～5小時(shí)e.酶解時(shí)反應(yīng)液pH＝5～9
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由林蛙肌肉制備氨基酸多肽復(fù)合液的方法，其特征在于，采用動(dòng)物蛋白水解酶酶解的條件是a.酶量∶林蛙肌肉量＝1∶100(重量比)(酶的活力以60萬(wàn)單位/克計(jì))b.林蛙肌肉量∶水量＝1∶3.00(重量比)c.酶解溫度60℃d.酶解時(shí)間3小時(shí)e.酶解時(shí)反應(yīng)液pH＝5.0
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由林蛙肌肉(含骨)制備氨基酸多肽復(fù)合液的方法。以林蛙肌肉(含骨)為原料，將動(dòng)物蛋白水解酶直接作用于肌肉蛋白液，在弱酸性，常壓下于60℃反應(yīng)3小時(shí)，所得之物即為氨基酸多肽復(fù)合液。本法工藝簡(jiǎn)單，設(shè)備無(wú)需耐腐蝕，生產(chǎn)中不產(chǎn)生三廢，制得的氨基酸多肽復(fù)合液中含有人體必需的氨基酸種類齊全，數(shù)量多，并含有豐富的鈣、鐵和鋅等人體必需的微量元素。林蛙氨基酸多肽復(fù)合液為淡黃色透明的略有肉香的液體，可直接飲用，也可用于制備保健食品及藥品。
文檔編號(hào)C12P21/00GK1680577SQ20041003313
公開日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2004年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月6日
發(fā)明者尚德靜, 李慶偉 申請(qǐng)人:遼寧師范大學(xué)