專利名稱：巨噬細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
巨唾細(xì)胞是機(jī)體重要免疫細(xì)胞之一，巨唾細(xì)胞不僅是病原微生物、壞死組織的主要清理細(xì)胞，巨噬細(xì)胞還具有抗原遞呈和分泌多種細(xì)胞因子的功能，在特異性免疫反應(yīng)的誘發(fā)和免疫調(diào)節(jié)過程中起關(guān)健作用，巨噬細(xì)胞具有較高的研究價(jià)值和良好的應(yīng)用前景，尤其在腫瘤或病毒疫苗的制備、及某些天然細(xì)胞因子的分離純化方面有極大的應(yīng)用前景。目前巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)主要采用直接培養(yǎng)法或誘導(dǎo)培養(yǎng)法。直接培養(yǎng)法即直接分離巨噬細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，此方法操作比較繁瑣，巨噬細(xì)胞回收率不高，且分離到的細(xì)胞大多是成熟的巨噬細(xì)胞，在體外不再分裂增殖。誘導(dǎo)培養(yǎng)法騍利用外源性細(xì)胞因子將干細(xì)胞、單核細(xì)胞等前體細(xì)胞誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)方法，前體細(xì)胞在誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中可以分裂增殖，此培養(yǎng)方法雖可獲得大量的巨噬細(xì)胞，但存在前體細(xì)胞分離困難、培養(yǎng)費(fèi)用較高的弊端。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種在外周血、新鮮組織和腹腔積液中的細(xì)胞直接誘導(dǎo)、激活巨唾細(xì)胞的巨噬細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個(gè)核細(xì)胞用PRMI1640培養(yǎng)基調(diào)成2×106個(gè)細(xì)胞/ml后，置于37℃、5％CO2孵箱中，當(dāng)培養(yǎng)基的PH值降至4或以下，所有培養(yǎng)細(xì)胞體積縮小、胞漿內(nèi)顆粒增多、折光形變?nèi)鹾?，繼續(xù)培養(yǎng)至有少量細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞體積逐漸變大、胞漿內(nèi)顆粒減少、折光形變強(qiáng)，此時(shí)開始每天少量換液，待這些細(xì)胞進(jìn)入快速分裂增殖時(shí)，再按常規(guī)方法換液、傳代即可。本發(fā)明方法將血液、組織或腹腔積液中分離到的單個(gè)核細(xì)胞直接培養(yǎng)，在細(xì)胞代謝所造成的酸性條件下，死亡細(xì)胞或其釋放的內(nèi)容物可將巨噬細(xì)胞或前體細(xì)胞直接誘導(dǎo)激活為成熟的巨噬細(xì)胞，不需要特殊分離巨噬細(xì)胞或其前體細(xì)胞，同時(shí)也不需要加入任何外源性細(xì)胞因子，因此它具有如下優(yōu)點(diǎn)1.本方法不需特殊分離巨噬細(xì)胞或其前體細(xì)胞，因而操作簡(jiǎn)便，易于實(shí)施；2.本方法細(xì)胞分裂增殖活躍，細(xì)胞增殖倍數(shù)高，易于獲得足量的巨噬細(xì)胞；3.本方法不需加入外源性細(xì)胞因子，細(xì)胞培養(yǎng)成本低，利于實(shí)際推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式本實(shí)施方式是利用從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個(gè)核細(xì)胞直接進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)的方法，在培養(yǎng)過程中其他細(xì)胞全部死亡，而巨噬細(xì)胞前體細(xì)胞可活化增殖并成為成熟的巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法為，將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個(gè)核細(xì)胞用PRMI1640培養(yǎng)基調(diào)成2×106個(gè)細(xì)胞/ml后，置于37℃、5％CO2孵箱中，此時(shí)不需換液、不傳代培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)基極度變酸，即它的PH值降至4或以下，待所有培養(yǎng)細(xì)胞體積縮小、胞漿內(nèi)顆粒增多、折光性變?nèi)鹾?，這說明其他培養(yǎng)細(xì)胞幾乎全部死亡，然后繼續(xù)培養(yǎng)，直至有少量細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞體積逐漸變大、胞漿內(nèi)顆粒減少、折光性變強(qiáng)，此時(shí)開始每天少量換液，這些細(xì)胞可進(jìn)入快速分裂增殖狀態(tài)，并開始吞噬死亡細(xì)胞，隨著死亡細(xì)胞的減少，巨大吞噬細(xì)胞出現(xiàn)，再按常規(guī)方法換液、傳代即可。
權(quán)利要求
1.一種巨噬細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，其特征在于將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個(gè)核細(xì)胞用PRMI1640培養(yǎng)基調(diào)成2×106個(gè)細(xì)胞/ml后，置于37℃、5％CO2孵箱中，當(dāng)培養(yǎng)基的PH值降至4或以下，所有培養(yǎng)細(xì)胞體積縮小、胞漿內(nèi)顆粒增多、折光形變?nèi)鹾?，繼續(xù)培養(yǎng)至有少量細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞體積逐漸變大、胞漿內(nèi)顆粒減少、折光形變強(qiáng)，此時(shí)開始每天少量換液，待這些細(xì)胞進(jìn)入快速分裂增殖時(shí)，再按常規(guī)方法換液、傳代即可。
全文摘要
巨噬細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法，它涉及一種細(xì)胞的培養(yǎng)方法?，F(xiàn)有的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)方法存在細(xì)胞回收率低、前體細(xì)胞分離困難、培養(yǎng)費(fèi)用較高的弊端。本發(fā)明巨噬細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)方法為，將從血液、組織或腹腔積液中分離到的單個(gè)核細(xì)胞用PRMI1640培養(yǎng)基調(diào)成2×10
文檔編號(hào)C12N5/0786GK1609199SQ20041004406
公開日2005年4月27日 申請(qǐng)日期2004年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月17日
發(fā)明者袁小林, 李殿俊 申請(qǐng)人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)