專利名稱：檢測(cè)休眠隱生微生物的存在的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及表面上、空氣中和液體中孢子的存在的檢測(cè)方法和設(shè)備。
背景技術(shù)：
本領(lǐng)域技術(shù)人員已經(jīng)將通過檢測(cè)存在的吡啶-2，6-二羧酸(吡啶二羧酸)確定細(xì)菌內(nèi)生孢子存在的方法使用了一定時(shí)間。該化合物含有存活孢子的有效部分，否則在自然界非常罕有(R.Lundin和L.Sacks，“細(xì)菌孢子的高分辨率固態(tài)13C核磁共振吡啶二羧酸的α-碳信號(hào)的鑒定”-Appl.Environ.Microbiol.，vol.54，no.4，pp.923-928，1988)。將各種分析方法用于檢測(cè)吡啶二羧酸以便顯示存在孢子，包括導(dǎo)數(shù)光譜(A.Warth，“用導(dǎo)數(shù)光譜法測(cè)定細(xì)菌孢子中的吡啶二羧酸”-Anal.Biochem.，vol.130，no.，pp.502-505，1983)；內(nèi)在熒光(A.Alimova，A.Katz，H.E.Savage，M.Shah，G.Minko，D.V.Will，R.B.Rosen，S.A.McCormick和R.R.Alfano，“發(fā)生饑餓情況的枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌的天然熒光和激發(fā)光譜改變”-Appl.Opt.，vol.42，no.19，pp.4080-4087，2003)；添加鑭系元素鹽后的發(fā)光(D.L.Rosen，C.Sharpless和L.B.McGown，“通過使用吡啶二羧酸 光致敏發(fā)光進(jìn)行細(xì)菌孢子檢測(cè)和測(cè)定”-Anal.Chem.，vol.69，pp.1082-1085，1997)；質(zhì)譜法(M.B.Beverly，K.J.Voorhees和T.L.Hadfield，“芽孢桿菌屬孢子的直接質(zhì)譜分析”-Rapid Commun.Mass Spectrom.，vol.13，no.23，pp.2320-2326，1999)；傅里葉變換紅外光譜(H.Y.Cheung，J.Cui和S.Sun，“萌發(fā)過程中通過減弱的總反射傅里葉紅外光譜實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)枯草芽孢桿菌內(nèi)生孢子成分”-Microbiology，vol.145，pp.1043-1048，1999)；拉曼光譜(美國(guó)專利US 6,040,191)和H.Shibata，S.Yamashita，M.Ohe和I.Tani，“凍干細(xì)菌孢子的激光拉曼光譜”-Microbiol.Immunol.，vol.30，no.4，pp.307-313，1986)；和與氣相色譜法連接的的等離子體色譜法(美國(guó)專利US 6,672,133B1)。
美國(guó)專利中已經(jīng)經(jīng)由檢測(cè)吡啶二羧酸鈣和/或吡啶二羧酸，通過存在的吡啶二羧酸鈣檢測(cè)內(nèi)生孢子的方法。美國(guó)專利US 6,498,041B1中描述了基于芽孢外被成分的分子識(shí)別來俘獲孢子、隨后通過添加由可見光譜中的光激發(fā)的熒光鈣結(jié)合染料檢測(cè)Ca2+的方法。美國(guó)專利US6,599,715和美國(guó)專利申請(qǐng)10,355,462中教導(dǎo)了當(dāng)用紫外光激發(fā)時(shí)通過來自吡啶二羧酸 的發(fā)光檢測(cè)吡啶二羧酸的方法。
此外，已經(jīng)報(bào)道了其它隱生微生物存在吡啶二羧酸(或具有極其相關(guān)的化學(xué)結(jié)構(gòu)的其它吡啶二羧酸類似物)。(隱生描述的是能夠?qū)崿F(xiàn)休眠狀態(tài)的微生物)。特別將吡啶二羧酸用于檢測(cè)梭狀芽孢桿菌屬孢子(M.W.Tabor，J.MacGee和J.W.Holland，“通過氣相色譜法對(duì)梭狀芽孢桿菌屬種類的孢子中的吡啶二羧酸的快速測(cè)定”-Appl.Environ.Microbiol.，vol.31，no.1，pp.25-28，1976)；芽孢八疊球菌屬(Sporosarchina)孢子(C.A.Loshon和P.Setlow，“芽孢八疊球菌屬種類休眠孢子中的小分子水平與芽孢桿菌屬和梭狀芽孢桿菌屬種類的孢子水平比較”-Can.J.Microbiol.，vol.39，no.，pp.259-262，1993)；八疊球菌屬孢子(R.S.Thompson和E.R.Leadbetter，“對(duì)來自尿素八疊球菌的內(nèi)生孢子的吡啶二羧酸的分離”-Arch.Mikrobi1.，vol.45，pp.27-32，1963)；和Metabacterium孢子(S.Stunkel，J.Alves和I.Kunstyr，“來自嚙齒動(dòng)物腸的兩種‘錐柱桿菌屬’的特征。多孢錐柱桿菌中吡啶二羧酸的異主寄生培養(yǎng)和驗(yàn)證”-Folia Microbiol.(Praha)，vol.38，no.3，pp.171-175，1993)。在這些和其它隱生(形成孢子)微生物中發(fā)現(xiàn)了吡啶二羧酸化合物。
2002年1月22日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)10/054,419(且引入本文作為參考)中公開了用于檢測(cè)非生命表面和樣品上的微生物的方法和設(shè)備，其中使樣品接觸能夠激發(fā)來自各種代謝物、輔因子以及細(xì)胞和孢子成分的熒光的許多特定能量的電磁射線。因此，其中含有的待取樣的微生物細(xì)胞和孢子(且更具體的說是激發(fā)的代謝物、輔因子和其它細(xì)胞、病毒和/或孢子成分)發(fā)射可以測(cè)定的熒光。用能夠(1)除去任何背景和/或反射和散射激發(fā)信號(hào)和(2)將代謝物、輔因子和孢子成分的相對(duì)熒光信號(hào)與已知的生理范圍值比較的方法分析采集的熒光信號(hào)(涉及發(fā)射自細(xì)胞/病毒/孢子成分的信號(hào))。美國(guó)專利申請(qǐng)10/054,419中特別教導(dǎo)了通過分別使用270nm-290nm和310nm-330nm范圍紫外電磁射線(光)激發(fā)吡啶二羧酸鈣(單獨(dú)或同時(shí))檢測(cè)孢子并分別檢測(cè)460nm-480nm和400nm-430nm內(nèi)的熒光能量的方法。上述申請(qǐng)中還教導(dǎo)了使用610nm-670nm范圍的電磁射線(光)激發(fā)與檢測(cè)730nm-800nm區(qū)內(nèi)的光能結(jié)合檢測(cè)孢子的方法。在來自含水的細(xì)菌孢子樣品的發(fā)射光譜中和如上述申請(qǐng)附圖3F中說明的非存活的蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞樣品中觀察到了這種新發(fā)射。使用這些新的低能激發(fā)和對(duì)檢測(cè)孢子而言的發(fā)射范圍是有益的，因?yàn)?1)幾乎不存在來自其它微生物熒光團(tuán)的干擾和/或重疊；(2)來自生物衍生的有機(jī)表面的背景干擾得到顯著減少；和(3)預(yù)計(jì)可有更大的激發(fā)穿透樣品深度。本說明書證實(shí)有益的低能激發(fā)和發(fā)射信號(hào)來源于吡啶二羧酸鈣且教導(dǎo)了使用這些激發(fā)光源檢測(cè)孢子的有益性。
正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，熒光是發(fā)光的一種形式。[將熒光和磷光定為光致發(fā)光光譜測(cè)定法的類型(J.D.Ingle，Jr.和S.R.Crouch，Spectrochemical Analysis，pp.438，1988，Prentice-Hall，Inc.)]。熒光與磷光之間的主要差異在于發(fā)射存在期(I.Tinoco，Jr.，K.Sauer和J.C.Wang，Physical ChemistryPrinciples andApplications in Biological Sciences，pp.577，1995，Prentice-Hall)。(熒光指的是以微秒計(jì)和較短范圍的發(fā)射存在期；磷光指的是一般以微秒計(jì)的或較長(zhǎng)范圍的發(fā)射存在期。)因此，由于沒有發(fā)射存在期數(shù)據(jù)，所以使用傳統(tǒng)發(fā)射光譜在實(shí)驗(yàn)上無(wú)法區(qū)別熒光和磷光。在這種情況中，來自內(nèi)發(fā)色團(tuán)(吸收激發(fā)能量并發(fā)射低能射線的化學(xué)成分)的‘表觀熒光’可能來源于磷光或熒光之一。對(duì)來自微生物成分的表觀熒光的檢測(cè)提供了檢測(cè)休眠隱生微生物的能力，但(1)不與樣品進(jìn)行物理性接觸；(2)極快；和(3)不使用任何添加的試劑。
正如易于理解的，能夠測(cè)定醫(yī)院、食品區(qū)、供水、建筑內(nèi)和戰(zhàn)場(chǎng)上存在的休眠(隱生和/或形成孢子)微生物是極其有用的，因?yàn)橐@些微生物需要花費(fèi)最大努力。作為本發(fā)明的方法和設(shè)備應(yīng)以低廉和快速的方式操作，例如用于食品生產(chǎn)設(shè)施。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于隱生(休眠、形成孢子)微生物的檢測(cè)方法和設(shè)備，其中使樣品接觸610nm-680nm區(qū)內(nèi)的電磁射線并檢測(cè)來自730nm-860nm區(qū)內(nèi)的發(fā)射。取樣的孢子(更具體的說是其中包含的吡啶二羧酸鈣)發(fā)射可以測(cè)定的電磁能量。使用能夠除去任何背景、反射激發(fā)能量和/或散射光的方法分析采集的發(fā)射自吡啶二羧酸鹽的發(fā)射信號(hào)。因此，本發(fā)明的方法和設(shè)備提供了低廉而快速的方式，其中掃描樣品以檢測(cè)存在的微生物污染并對(duì)其定量，但不接觸樣品。能夠在不接觸的情況下評(píng)價(jià)樣品中的微生物污染，減少了引入污染的危害。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供用于檢測(cè)食品上的隱生微生物污染的方法和設(shè)備，其中當(dāng)由610nm-680nm區(qū)內(nèi)的電磁射線激發(fā)時(shí)，在730nm-860nm區(qū)內(nèi)檢測(cè)來源于吡啶二羧酸鈣化合物的發(fā)射信號(hào)，從而使食品上的休眠微生物污染在不接觸所述食品的情況下得到定量測(cè)定。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供可以用于檢測(cè)非生命表面上、液體和空氣中的隱生微生物污染的方法和設(shè)備。作為本發(fā)明的具體目的，該方法和設(shè)備可以用于以低廉而快速的方式發(fā)現(xiàn)例如保健設(shè)施、研究實(shí)驗(yàn)室、水處理和工作站、建筑物以及戰(zhàn)場(chǎng)上的隱生微生物和微生物污染。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于檢測(cè)非生命表面上和液體和空氣樣品中的微生物污染的方法和設(shè)備，其中由610nm-680nm區(qū)內(nèi)的電磁射線激發(fā)吡啶二羧酸鈣化合物的發(fā)射并在730nm-860nm區(qū)內(nèi)檢測(cè)，由此在不接觸所述樣品的情況下測(cè)定樣品中的微生物污染。
按照本發(fā)明的這種形式，通常需要使用發(fā)射630nm左右的電磁射線的光源。按照本發(fā)明的這種形式，由該光源發(fā)射的光特別或經(jīng)過濾通過對(duì)特別激發(fā)吡啶二羧酸鈣的能量的電磁射線。
按照本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，能夠且有時(shí)需要使580nm左右的電磁射線定向于樣品。580nm的光激發(fā)微生物中的黃素和血紅素化合物，其發(fā)射中的某些被樣品自我吸收，從而依次激發(fā)具有610nm-680nm范圍內(nèi)發(fā)射的吡啶二羧酸鈣。如上所述采集并分析樣品的表觀熒光發(fā)射。
按照本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，能夠且有時(shí)需要使能夠激發(fā)吡啶二羧酸鈣的能量和還可以不與孢子發(fā)生相互作用的能量的電磁射線定向。因此，按照本發(fā)明的該實(shí)施方案，可以測(cè)定來源于樣品的所得熒光信號(hào)(來自微生物成分和那些單純反射和/或散射自樣品的成分)且可以通過比較來自微生物的發(fā)射信號(hào)與那些反射/散射自樣品的那些信號(hào)的比例確定微生物的存在。
為了實(shí)施本發(fā)明，將傳感器不僅用于檢測(cè)由內(nèi)在熒光團(tuán)產(chǎn)生的熒光、而且用于檢測(cè)背景、反射和/或散射的電磁射線。該部件用于校準(zhǔn)信號(hào)并補(bǔ)償還可能因使用探測(cè)器與掃描樣品之間的可變距離和不同樣品或表面之間的變化產(chǎn)生的信號(hào)改變。
還發(fā)現(xiàn)通過快速改變以不同于60赫茲的頻率定向于樣品的電磁射線，基本上可以將環(huán)境光(且特別是熒光)的作用減小到最低限度。調(diào)節(jié)激發(fā)能量還使傳感器發(fā)生運(yùn)轉(zhuǎn)以使電磁射線定向于樣品的不同部分，但基本上不會(huì)對(duì)微生物含量測(cè)定的精確度產(chǎn)生影響。
本文所述的微生物檢測(cè)方法和設(shè)備能夠測(cè)定隱生微生物的存在和生理狀態(tài)，同時(shí)不需要試劑、不接觸樣品、以低廉方式進(jìn)行并提供‘實(shí)時(shí)’結(jié)果。本發(fā)明的這些和其它目的、特征和優(yōu)點(diǎn)在對(duì)下面所公開實(shí)施方案的詳細(xì)描述和待批權(quán)利要求進(jìn)行綜述時(shí)將變得顯而易見。
附圖簡(jiǎn)述附

圖1是可以用于實(shí)施本發(fā)明最基本特征的儀器的方框圖。
附圖2表示吡啶二羧酸(吡啶-2，6-二羧酸，A)和白屈氨酸(4-羥基吡啶-2，6-二羧酸，B)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
附圖3表示當(dāng)在630nm處激發(fā)時(shí)20mM吡啶二羧酸鈣溶液(—)發(fā)射光譜和在670nm處激發(fā)時(shí)白屈氨酸鈣(-----)的發(fā)射光譜。
附圖4表示當(dāng)用630nm射線激發(fā)時(shí)吡啶二羧酸鈣固體和溶液的發(fā)射光譜。實(shí)線表示固體鹽的發(fā)射光譜，而虛線表示飽和溶液的發(fā)射光譜。
附圖5表示當(dāng)在315nm(—)和630nm(—)處激發(fā)時(shí)吡啶二羧酸鈣水溶液的發(fā)射光譜。
附圖6表示純吡啶二羧酸鈣水溶液(—)、提取自蘇云金芽孢桿菌孢子的吡啶二羧酸鈣水溶液(—)、提取自啤酒糖酵母孢子的吡啶二羧酸鈣水溶液(------)和提取自已經(jīng)加入Tb3+的Cryptosporidium parvum卵囊的吡啶二羧酸鈣水溶液(-●●-●●-)的發(fā)射光譜(270nm激發(fā))。
附圖7表示純吡啶二羧酸鈣水溶液(—)、提取自蘇云金芽孢桿菌孢子的吡啶二羧酸鈣水溶液(—)和提取自啤酒糖酵母孢子的吡啶二羧酸鈣水溶液(------)的導(dǎo)數(shù)光密度光譜。
附圖8表示炭疽芽孢桿菌(—)、巨大芽孢桿菌(—)、枯草芽孢桿菌(------)和蘇云金芽孢桿菌(-●-●-)的細(xì)菌孢子溶液的發(fā)射光譜(630nm激發(fā))。
附圖9表示細(xì)菌(—)和酵母(------)孢子溶液的發(fā)射光譜(630nm激發(fā))。
具體實(shí)施例方式
可以用于實(shí)施本發(fā)明描述方法的一個(gè)實(shí)施方案的設(shè)備用基本元件如附圖1的方框圖中所示。該設(shè)備由光源、激發(fā)濾波器、聚焦光學(xué)部件、采集光學(xué)部件、發(fā)射濾波器和檢測(cè)器組成。使來自光源的電磁射線定向于樣品，通過激發(fā)濾波器和聚焦光學(xué)部件(如果必要)以激發(fā)樣品中的內(nèi)在發(fā)色團(tuán)。用采集光學(xué)部件采集散射和反射的激發(fā)射線與發(fā)射的射線并使它們定向于檢測(cè)器。發(fā)射濾波器確保僅測(cè)定有意義的能量。
本發(fā)明的各種實(shí)施方案、包括不同結(jié)構(gòu)和可應(yīng)用的不同部件是可行的。用于該微生物檢測(cè)方法的基本部件允許(1)在610nm-680nm區(qū)內(nèi)激發(fā)吡啶二羧酸鈣鹽；(2)采集和檢測(cè)710nm-860nm區(qū)內(nèi)發(fā)射的電磁射線、背景(環(huán)境)光、反射激發(fā)光和散射的光能；和(3)用能夠校正背景干擾的方法分析檢測(cè)的信號(hào)。在使用該方法的任何設(shè)備中所用的結(jié)構(gòu)和部件應(yīng)與應(yīng)用的要求和預(yù)計(jì)的干擾相匹配。
能夠且有時(shí)需要應(yīng)用可提供寬帶照明的光源。所用光源的種類受其產(chǎn)生激發(fā)有意義內(nèi)在微生物成分所需波長(zhǎng)的電磁射線的能力的影響。另外，有時(shí)需要應(yīng)用脈沖光源以便測(cè)定關(guān)閉回路過程中的環(huán)境背景?？梢允褂玫墓庠窗◣в懈鞣N電燈泡的燈(例如汞、鎢、氘、氙燈)、光發(fā)射二極管(LEDs)和對(duì)所需激發(fā)能量而言特定的二極管激光器。所用的光源類型取決于所需激發(fā)射線的強(qiáng)度和所需的檢測(cè)極限。
在本發(fā)明各種實(shí)施方案中所用的激發(fā)和發(fā)射濾波器包括干擾濾波器、浸漬玻璃、截止濾波器系列、凝膠濾波器、單色儀、光柵、折射(rugate)濾波器等。所用的發(fā)射濾波器的光截止特性取決于分析方法可接受多少散射和反射的激發(fā)射線信號(hào)或所需的檢測(cè)極限。如果使用僅具有有意義能量的光源，則可以不必使用激發(fā)濾波器；如果校準(zhǔn)光源(諸如激光)，則可以不必使用聚焦光學(xué)部件。(聚焦光學(xué)部件的目的是使激發(fā)射線定向于取樣的面積或體積)。重要的是應(yīng)注意如果使用多光子激發(fā)，則能夠使用具有能量低于有意義發(fā)色團(tuán)激發(fā)能量的光源。
采集光學(xué)部件的目的在于將發(fā)射自激發(fā)微生物發(fā)色團(tuán)的光以及散射和反射自樣品的光輸送至檢測(cè)器。如果將干擾濾波器用于區(qū)分這些發(fā)射能量，那么需要校準(zhǔn)采集的光以便使這些濾波器以最佳狀態(tài)工作。纖維光纜也可以用于將激發(fā)射線輸送至樣品并采集發(fā)射的射線且使其定向于檢測(cè)器。當(dāng)許多光學(xué)成分在紫外線和可見光范圍內(nèi)顯示出熒光時(shí)，能夠且有時(shí)需要應(yīng)用拋光的反光金屬、藍(lán)寶石、熔凝硅石、石英、MgF2和/或CaF2光學(xué)成分。
檢測(cè)器用于將發(fā)射的電磁射線轉(zhuǎn)化成可以測(cè)定的電信號(hào)。大量具有不同靈敏度的檢測(cè)器可以用于本發(fā)明的實(shí)施方案光電倍增管(PMTs)、雪崩光二極管(APDs)、針型二極管、CCDs等。所選擇的檢測(cè)器取決于所檢測(cè)的射線的能量、發(fā)射信號(hào)的強(qiáng)度和設(shè)備所需的檢測(cè)極限。用能夠除去產(chǎn)生的任何背景發(fā)射、反射激發(fā)光和/或散射激發(fā)信號(hào)的方法分析采集的已經(jīng)轉(zhuǎn)化成放大的電信號(hào)的發(fā)射能量。
附圖2表示吡啶二羧酸(吡啶-2，6-二羧酸，A)和白屈氨酸(4-羥基吡啶-2，6-二羧酸，B)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。附圖3表示吡啶二羧酸鈣溶液的發(fā)射光譜(630nm處激發(fā))和白屈氨酸鈣的發(fā)射光譜(670nm處激發(fā))。當(dāng)使用610nm-680nm區(qū)內(nèi)的電磁能量激發(fā)時(shí)，710nm-860nm區(qū)內(nèi)的能量發(fā)射是堿土金屬吡啶二羧酸鹽的特性，從而證明可以應(yīng)用來自吡啶二羧酸鈣(或因可選生物合成途徑或隨后的吡啶二羧酸鹽的天賦反應(yīng)產(chǎn)生的具有極其相近化學(xué)結(jié)構(gòu)的其它內(nèi)在吡啶二羧酸類似物)檢測(cè)休眠隱生微生物。
附圖4表示當(dāng)使用630nm射線激發(fā)時(shí)吡啶二羧酸鈣固體樣品和溶液的發(fā)射光譜。實(shí)線表示固體鹽的發(fā)射光譜，而虛線表示飽和溶液的發(fā)射光譜。吡啶二羧酸鈣固體和水溶液的光譜表示在780nm左右的發(fā)射，不過，與溶液相比固體樣品的光譜下降。(固體吡啶二羧酸鈣光譜的發(fā)射可以因濃度而終止)。附圖5表示當(dāng)在315nm(—)和630nm(—)處激發(fā)時(shí)吡啶二羧酸鈣水溶液的發(fā)射光譜，說明與已知吡啶二羧酸鈣熒光發(fā)射相比新的低能發(fā)射信號(hào)的相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度(R.Nudelman，N.Feay，M.Hirsch，S.Efrima和B.Bronk，“作為觀察到的細(xì)菌孢子UV發(fā)射光譜的可能成分的吡啶二羧酸熒光”-SPIE vol.3533，pp.190-195，1998)。
附圖6表示純吡啶二羧酸鈣溶液(—)、提取自蘇云金芽孢桿菌孢子的水溶液(—)、提取自啤酒糖酵母孢子的水溶液(------)和提取自已經(jīng)加入Tb3+的Cryptosporidium parvum卵囊的水溶液的發(fā)射光譜(270nm激發(fā))(按照Anal.Chem.，vol 69，pp.1082-1085，1997中所述的方法)。附圖7表示純吡啶二羧酸鈣溶液(—)的導(dǎo)數(shù)光密度光譜；該附圖還表示提取自蘇云金芽孢桿菌孢子(—)和已經(jīng)加入Ca2+的啤酒糖酵母孢子的水溶液(------)(按照Anal.Chem.，vol 130，no.2，pp.502-505，1983中所述的方法)。這些附圖清楚地表明在各種休眠隱生微生物中存在周期表II族(堿土金屬，包括Mg2+、Ca2+等)吡啶二羧酸化合物酵母孢子、細(xì)菌孢子和草履蟲卵囊。附圖8表示炭疽芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌的細(xì)菌孢子溶液的發(fā)射光譜(630nm激發(fā))。710nm-860nm之間存在吡啶二羧酸鈣發(fā)射表明在許多細(xì)菌孢子中普遍存在吡啶二羧酸鈣。附圖9表示細(xì)菌(芽孢桿菌屬的種類)和酵母(糖酵母屬的種類)孢子溶液的發(fā)射光譜(630nm激發(fā))，說明可以使用710nm-860nm的發(fā)射檢測(cè)真菌和細(xì)菌孢子。
使用新的內(nèi)在堿土金屬吡啶二羧酸鹽低能發(fā)射能夠快速檢測(cè)休眠隱生微生物，但不需要加入任何的試劑、取樣處理或接觸樣品。上述本發(fā)明的實(shí)施方案僅作為典型使用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用上述基本構(gòu)思進(jìn)行其它組合、變化和修改而不會(huì)脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。檢測(cè)休眠隱生微生物的該方法范圍包括當(dāng)使用610nm-680nm區(qū)內(nèi)的電磁能量激發(fā)時(shí)，使用來自內(nèi)在710-860nm區(qū)內(nèi)的堿土金屬吡啶二羧酸鹽的發(fā)射光。重要的實(shí)施方案包括激發(fā)這種內(nèi)在發(fā)色團(tuán)且隨后使用同時(shí)計(jì)算背景信號(hào)、散射激發(fā)信號(hào)和反射激發(fā)信號(hào)的方法分析檢測(cè)的發(fā)射。所有變化、修改和組合均屬于如待批權(quán)利要求所定義的本發(fā)明范圍。
權(quán)利要求
1.休眠隱生微生物的檢測(cè)方法，包括下列步驟a.用610nm-680nm的特定范圍的電磁射線波長(zhǎng)激發(fā)內(nèi)在休眠隱生微生物發(fā)色團(tuán)；由此激發(fā)含有內(nèi)在發(fā)色團(tuán)的所述微生物以發(fā)射電磁射線；和b.檢測(cè)由710nm-860nm范圍的激發(fā)微生物發(fā)色團(tuán)發(fā)射的電磁射線信號(hào)。
2.如權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述的微生物發(fā)色團(tuán)選自堿土金屬-吡啶二羧酸鹽。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中待檢測(cè)的休眠隱生微生物包括細(xì)菌內(nèi)生孢子、真菌孢子和原生動(dòng)物卵囊。
全文摘要
本發(fā)明涉及休眠隱生微生物的檢測(cè)方法，該方法通過當(dāng)用610nm－680nm區(qū)內(nèi)的電磁能量激發(fā)時(shí)檢測(cè)發(fā)射自710nm－860nm區(qū)內(nèi)的內(nèi)在堿土金屬吡啶二羧酸鹽的電磁射線來進(jìn)行。使用低能量發(fā)射的新內(nèi)在吡啶二羧酸鈣鹽能夠快速檢測(cè)細(xì)菌孢子、真菌孢子和卵囊而不需要加入任何試劑、樣品處理或接觸樣品。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK1677089SQ20041004929
公開日2005年10月5日 申請(qǐng)日期2004年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月2日
發(fā)明者L·S·鮑爾斯, C·R·洛伊德 申請(qǐng)人:微生物系統(tǒng)有限合伙公司