專利名稱：體細(xì)胞快速染色技術(shù)的制作方法
一.技術(shù)領(lǐng)域體細(xì)胞快速染色技術(shù)應(yīng)用于細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域。
二.
背景技術(shù)：
在細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域中，Giemsa、巴氏及H&E染色技術(shù)等，為組織病理學(xué)、細(xì)胞病理學(xué)的發(fā)展作出了巨大貢獻(xiàn)并沿用至今。但這些染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞顯示的結(jié)果，與現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)的研究結(jié)果在以下幾個(gè)方面不相吻合(一)正常細(xì)胞核中核仁的數(shù)目和形態(tài) 在細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察中，細(xì)胞核的特征歷來(lái)是細(xì)胞學(xué)家判斷細(xì)胞“良”與“惡”的重要標(biāo)準(zhǔn)，而核仁則是判斷細(xì)胞“良”與“惡”的窗口。
在細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域中，國(guó)外大多偏愛(ài)巴氏染色技術(shù)，而國(guó)內(nèi)在染色技術(shù)的選擇上則多樣化。在核仁數(shù)目和形態(tài)觀察結(jié)果上，國(guó)內(nèi)外至今不統(tǒng)一。有的學(xué)者認(rèn)為核仁見(jiàn)于某些間期細(xì)胞的核內(nèi)，呈球形，多為1～2個(gè)，也有3～5個(gè)的。有的學(xué)者認(rèn)為核仁圓形或卵圓形結(jié)構(gòu)，有1～8個(gè)核仁。還有的學(xué)者認(rèn)為核仁的數(shù)目和大小依細(xì)胞種類及生理狀態(tài)不同而有很大變化，一般為1～2個(gè)，也有多個(gè)的。在我國(guó)2000出版的具有權(quán)威性的《病理學(xué)技術(shù)》一書中，也認(rèn)為正常細(xì)胞核內(nèi)含有1～2個(gè)核仁，可見(jiàn)核仁數(shù)目范圍觀察結(jié)果的不一致性。
現(xiàn)代生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)研究結(jié)果表明，人類正常細(xì)胞有46條染色體，其中有10條染色體上含有核仁組織區(qū)(hucleolus organizerregion，NOR)。人類rRNA基因定位于5對(duì)近端著絲粒染色體上(13、14、15、21和22號(hào)染色體)。當(dāng)10條含有NOR的染色體解螺旋進(jìn)入間期后，NOR隨機(jī)分配在球形細(xì)胞核內(nèi)。普通光學(xué)顯微鏡下，僅看到了細(xì)胞的一半。在概率上，如果染色技術(shù)能清晰顯示細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的話，人類應(yīng)該觀察到的能夠分裂的正常細(xì)胞核仁的數(shù)目應(yīng)該是5個(gè)。在考慮到人類進(jìn)化過(guò)程中端著絲粒染色體隨機(jī)聯(lián)合的生物學(xué)特征，以及人體細(xì)胞類型(包括靜止期細(xì)胞在內(nèi))的差異性，正常細(xì)胞核仁的數(shù)目的范圍應(yīng)該是0～5個(gè)。這樣看來(lái)，有關(guān)核仁的數(shù)目和形態(tài)，用Giemsa、巴氏、H&E染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞顯示的結(jié)果與現(xiàn)代科學(xué)研究結(jié)果是不完全吻合的。
電鏡研究的結(jié)果證明，核仁沒(méi)有膜包圍，是由轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的前體rRNA(precursor rRNA，pre RNA)相互纏繞的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。NOR從中期進(jìn)入間期，隨染色質(zhì)的隨機(jī)分布而分布，其分布的方向性決定了間期核仁的形態(tài)不是千篇一律的圓形或卵圓型，而應(yīng)該具備多態(tài)性。
在國(guó)內(nèi)外判斷腫瘤細(xì)胞的若干著作中認(rèn)為“如果核仁的直徑增大達(dá)5μm，其數(shù)目超過(guò)3-4個(gè)，應(yīng)當(dāng)考慮是癌細(xì)胞”。這些觀察結(jié)果及判斷癌細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)代科學(xué)研究的結(jié)論存在一些矛盾，給細(xì)胞“炎性病變”、“癌前病變”、“惡性病變”的判斷與區(qū)別造成諸多不便。細(xì)胞病理學(xué)是前輩們心血堆集的產(chǎn)物，我們無(wú)意因申請(qǐng)專利去批駁細(xì)胞學(xué)家們的觀察結(jié)果。但基于細(xì)胞是一個(gè)整體，細(xì)胞核遺傳物質(zhì)(DNA)的復(fù)制需RNA轉(zhuǎn)錄、以及細(xì)胞質(zhì)中蛋白質(zhì)合成與運(yùn)輸?shù)目陀^規(guī)律，正常細(xì)胞核仁數(shù)目與形態(tài)是細(xì)胞形態(tài)鑒別基本參照標(biāo)準(zhǔn)。
(二)細(xì)胞質(zhì)的功能狀態(tài) 根據(jù)現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)，細(xì)胞核內(nèi)的各種蛋白質(zhì)(如組蛋白、DNA和RNA聚合酶、基因調(diào)節(jié)蛋白等)都是在胞質(zhì)溶膠內(nèi)合成，并通過(guò)核孔輸入到細(xì)胞核。核內(nèi)的蛋白質(zhì)在細(xì)胞分裂時(shí)與胞質(zhì)混合，分裂完成后再輸入細(xì)胞核。
然而，自Papanicolaou氏(1928)提出婦科宮頸陰道細(xì)胞學(xué)及有關(guān)“癌前核異質(zhì)”(1943)以來(lái)，在我國(guó)有關(guān)癌前核異質(zhì)細(xì)胞形態(tài)最明確的描述，見(jiàn)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所和腫瘤醫(yī)院細(xì)胞學(xué)室《臨床腫瘤細(xì)胞學(xué)圖譜》(1976)。該著作對(duì)宮頸鱗狀細(xì)胞“癌前核異質(zhì)”形態(tài)進(jìn)行了這樣的描述“核大，核染質(zhì)不勻，核周有空泡”。1988年美國(guó)提出Bethesda系統(tǒng)將“反應(yīng)性或癌前病變/惡性過(guò)程”定義為ASCUS(未明確意義的不典型鱗狀細(xì)胞)。即ASCUS類型的細(xì)胞改變可以反映高度的良性病變或潛在的嚴(yán)重病變，這些病變又不能明確分類，而稱之為“未明確意義”。美國(guó)細(xì)胞病理學(xué)家Kini認(rèn)為“此種分類已經(jīng)造成并繼續(xù)造成在細(xì)胞學(xué)技術(shù)學(xué)家、病理學(xué)家和臨床醫(yī)師的很大混亂”。(請(qǐng)參閱SudhaR.Kini編著，張慧英主譯《細(xì)胞病理學(xué)鑒別診斷彩色圖譜—脫落和穿刺細(xì)胞病理學(xué)》.天津科技翻譯出版公司出版，2000年第1版)。
可見(jiàn)細(xì)胞病理學(xué)經(jīng)過(guò)半個(gè)多世紀(jì)的研究和探索，尚未將癌前病變細(xì)胞形態(tài)鑒別出來(lái)。細(xì)胞病理學(xué)一直以細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)特征作為鑒別細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)，即便是近年，Kini在其著作中也強(qiáng)調(diào)“必須牢記，無(wú)論胞漿的特點(diǎn)表現(xiàn)的如何極端和怪異，都不能鑒別其良、惡性”。其原因在于目前國(guó)內(nèi)外使用的傳統(tǒng)染色技術(shù)(Giemsa、巴氏、H&E等)尚不能清晰顯示細(xì)胞質(zhì)的功能狀態(tài)，而導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)的功能狀態(tài)可能被忽略了。
根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)、病理生物學(xué)、遺傳學(xué)的研究結(jié)果，以及細(xì)胞突變形成癌的理論。細(xì)胞遺傳物質(zhì)損傷、重組前首先被破壞的是細(xì)胞質(zhì)。按照一般規(guī)律DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞質(zhì)中的細(xì)胞器(如粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng))合成蛋白質(zhì)。所以，細(xì)胞質(zhì)的功能狀態(tài)對(duì)于判斷鱗狀上皮細(xì)胞的癌前病變極為重要。
這是因?yàn)?，?xì)胞突變(遺傳物質(zhì)損傷與重組)→選擇優(yōu)勢(shì)→形成克隆→肉眼可見(jiàn)的腫瘤過(guò)程中，在形成克隆前將出現(xiàn)以下幾種情況①如果突變細(xì)胞核周圍的細(xì)胞質(zhì)完全壞死，突變細(xì)胞不可能生長(zhǎng)繁殖；②突變細(xì)胞核周圍的細(xì)胞質(zhì)因損傷壞死而形成的“核周亮?xí)灐?，是不被染色液著色的壞死區(qū)域，阻斷了RNA的信息傳遞以及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)合成與運(yùn)輸途徑。這種突變細(xì)胞也不能生長(zhǎng)繁殖；③突變細(xì)胞核周圍存在部分能合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞質(zhì)。而這種部分能合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞質(zhì)，是突變細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)，在條件適宜時(shí)將在新遺傳程序控制下進(jìn)行修復(fù)，完成病理狀態(tài)向一種新的生理狀態(tài)轉(zhuǎn)化，形成癌細(xì)胞克隆，進(jìn)而可發(fā)展成肉眼可見(jiàn)的癌瘤組織。故巴氏(1943)提出的“癌前核異質(zhì)”、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所和腫瘤醫(yī)院細(xì)胞學(xué)室(1976)描述的癌前核異質(zhì)的細(xì)胞形態(tài)、美國(guó)1988年Bethesda系統(tǒng)ASCUS定義的“核周亮?xí)灐奔?xì)胞，是無(wú)核仁的，對(duì)提示細(xì)胞的癌前病變可能沒(méi)有實(shí)際意義。
由于Giemsa、巴氏、H&E染色技術(shù)不能完全清晰地顯示細(xì)胞核染色質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)、核仁數(shù)目與形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞質(zhì)的功能狀態(tài)，可能使細(xì)胞病理學(xué)觀察形成了歷史性誤區(qū)，導(dǎo)致了細(xì)胞病理學(xué)觀察的結(jié)果與現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)的研究結(jié)論不完全吻合。正如國(guó)際著名病學(xué)家Karl Lennert教授的名言“技術(shù)是病理學(xué)之母”，以及我國(guó)程天明院士指出的那樣“病理學(xué)的理論和技術(shù)被視為一輛車的兩個(gè)輪子，缺一不可，互為依存，互相促進(jìn)，兩者的結(jié)合決定病理學(xué)的發(fā)展”。另一方面，對(duì)于癌前病變細(xì)胞的鑒別，細(xì)胞質(zhì)的功能狀態(tài)決定了突變細(xì)胞的能量供應(yīng)。因此，染色液能否清晰顯示細(xì)胞質(zhì)的壞死程度的界限就顯得非常重要。
造成Giemsa、巴氏及H&E染色技術(shù)在細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域中，對(duì)細(xì)胞顯示的結(jié)果與現(xiàn)代科學(xué)理論與研究結(jié)果不完全吻合的原因在于①Giemsa染色技術(shù)顯示的細(xì)胞色差弱，且極易染成模糊的色團(tuán)，使細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)不易分辨；②巴氏染色技術(shù)對(duì)組織病理學(xué)的貢獻(xiàn)極其巨大，該技術(shù)也被國(guó)內(nèi)外廣泛地用于細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域，學(xué)術(shù)界一直認(rèn)為“細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，分色明顯，透明度好，胞漿著色艷麗。其缺點(diǎn)是試劑種類多、染色手續(xù)繁雜、時(shí)間長(zhǎng)、不宜染厚涂片等”。巴氏染色技術(shù)對(duì)組織結(jié)構(gòu)的透明性能是無(wú)可挑剔的，但巴氏染色技術(shù)的這種透明性能對(duì)細(xì)胞病理學(xué)來(lái)說(shuō)，則可能是弱點(diǎn)。細(xì)胞病理學(xué)觀察的重點(diǎn)是細(xì)胞核、核仁的細(xì)微結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞漿的功能狀態(tài)，而巴氏的透明性能是建立在對(duì)細(xì)胞的破壞基礎(chǔ)上的。因?yàn)榘褪先旧号浞綄?duì)細(xì)胞蛋白質(zhì)破壞的化合物較多，例如在赫氏(Harris)蘇木素中的黃色氧化汞、橘黃G6與EA36中的磷鎢酸、分色用的鹽酸等都對(duì)細(xì)胞核、細(xì)胞漿蛋白質(zhì)產(chǎn)生水解作用。這種水解作用是巴氏染色液對(duì)組織病理切片產(chǎn)生透明作用的基礎(chǔ)，對(duì)組織病理結(jié)構(gòu)的觀察和鑒別是非常理想的。但在細(xì)胞病理學(xué)中，這種水解作用將對(duì)細(xì)胞核染色質(zhì)細(xì)微、特別是細(xì)小的核仁將因其水解作用而消失。③H&E染色技術(shù)的原理與巴氏相同，只是用伊紅染液替代橘黃G6與EA36，但染色過(guò)程中使用的乙醇-鹽酸分化液也同樣對(duì)細(xì)胞的蛋白質(zhì)產(chǎn)生水解作用。由于巴氏、H&E染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞的破壞作用，半個(gè)多世紀(jì)以來(lái)，細(xì)胞病理學(xué)觀察到的核仁數(shù)目范圍、核仁形態(tài)與現(xiàn)代科學(xué)研究結(jié)果不完全吻合；也正因?yàn)檫@種水解作用對(duì)細(xì)胞漿蛋白質(zhì)的破壞，導(dǎo)致鱗狀上皮癌前病變的鑒別至今尚未解決。
三.

發(fā)明內(nèi)容
體細(xì)胞快速染色技術(shù)是在前人基礎(chǔ)上發(fā)明的。①它克服染色劑對(duì)細(xì)胞核染色質(zhì)(富含DNA與組蛋白)、核仁(富含RNA)以及細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)的破壞作用；②新染色技術(shù)適合細(xì)胞蛋白質(zhì)的兩性電解質(zhì)特點(diǎn)，解決兩種染料的pH值梯度；③新技術(shù)改變了作用于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)的兩種染料中一種染料的吸收波長(zhǎng)，使作用于同一細(xì)胞的兩種染料之間的吸收峰距離加大，才能提高被染色細(xì)胞組分間的色差；因此，改技術(shù)的發(fā)明涉及原料制備、配方組成、對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的高色差染色效果；④新技術(shù)以甲醇作溶劑和細(xì)胞固定劑，提高了染色速度。
(一)原料制備 水溶性曙紅Y與HCl的化學(xué)反應(yīng)式、方法和步驟 1.稱取含量不少于85％的水溶性曙紅Y(Eosin Y)50克，溶于1000毫升蒸餾水。待完全溶解后加入濃鹽酸(含量不少于36～38％)26毫升，用磁力攪拌器充分?jǐn)嚢韬螅胖眠^(guò)夜析出沉淀。2～4層濾紙過(guò)濾，反復(fù)加蒸餾水(每次加水量1000毫升)，洗濾沉淀物5～10次。
2.水溶性署紅Y成品中所含的2％雜質(zhì)NaBr(溴化鈉)在水溶液中解離成離子，則由上述蒸餾水反復(fù)沖洗而被去除。
3.將沉淀物連同濾紙一起放置于80-90℃烤箱中烘干，即為“體細(xì)胞快速染色試劑(A)”的原料，將其收集裝瓶、備用(稱“原料曙紅”)。
(二)配方組成 體細(xì)胞快速染色試劑由“A”、“B”液組合1.體細(xì)胞快速染色試劑(A)液配方原料曙紅 2.50克亞甲藍(lán)0.05克甲醇(分析純) 800.0毫升蒸餾水200.0毫升最終容量 1000毫升2.體細(xì)胞快速染色試劑(B)液配方亞甲藍(lán) 2.50克高錳酸鉀 2.50克氯化鈉 8.50克氯化鉀 0.20克氯化鈣 0.20克(亞甲藍(lán)、高錳酸鉀分別溶于500毫升蒸餾水后合并，加熱氧化至500毫升容積，再依次加入氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣。最終容量100毫升，過(guò)濾后即可使用)。
3.吸收波長(zhǎng)的測(cè)定 按GB/T 9721-88化學(xué)試劑分子吸收分光光度法通則(紫外和可見(jiàn)光部分)。吸收池厚度1nm；原料水溶性曙紅Y的參比溶液為蒸餾水。測(cè)定方法①稱市售的水溶性曙紅Y0.25g定溶于100ml蒸餾水中，測(cè)定時(shí)用蒸餾水作1∶500稀釋；②體細(xì)胞快速染色試劑(A)液用80％的甲醇作1∶500稀釋，參比溶液為80％的甲醇，掃描范圍200～1000nm。③體細(xì)胞快速染色試劑(B)液用蒸餾水作1∶500稀釋，參比溶液為蒸餾水，掃描范圍200～1000nm。④將Giemsa原液0.07ml定溶于100ml蒸餾水中，以蒸餾水作參比，吸收池厚度1cm，掃描范圍200～1000nm。
原料水溶性曙紅Y在可見(jiàn)光區(qū)有一個(gè)515.0nm吸收峰，符合HG/T 3495-1999的最大吸收波長(zhǎng)510～518nm(圖1)。
體細(xì)胞快速染色試劑(A)液在紫外光區(qū)出現(xiàn)2個(gè)吸收峰，分別為214.0nm和215.0nm；在可見(jiàn)光區(qū)有一個(gè)521.0nm吸收峰(圖2)。
體細(xì)胞快速染色試劑(B)液在紫外光區(qū)出現(xiàn)1個(gè)吸收峰，波長(zhǎng)為289.0nm；在可見(jiàn)光區(qū)有一個(gè)657.0nm吸收峰(圖3)Giemsa染色液在可見(jiàn)光區(qū)有2個(gè)吸收峰，分別為539.0nm和649.0nm，兩個(gè)吸收峰間距為110.0nm(圖4)。
4.體細(xì)胞快速染色試劑吸收峰值范圍 經(jīng)國(guó)家藥品生物制品檢定所的檢定體細(xì)胞快速染色試劑(A)液在可見(jiàn)光區(qū)的吸收峰值范圍為521.0±5nm；體細(xì)胞快速染色試劑(B)液在可見(jiàn)光區(qū)的吸收峰值范圍為657±5nm。
(三)體細(xì)胞快速染色試劑與傳統(tǒng)Giemsa染色液的區(qū)別1.染色時(shí)機(jī)生成色差的區(qū)別 體細(xì)胞快速染色試劑(A)與(B)液在可見(jiàn)光區(qū)2個(gè)吸收峰間距達(dá)到136.0nm(657.0-521.0)；Giemsa染色液在可見(jiàn)光區(qū)2個(gè)吸收峰間距為110.0nm(649.0-539.0)。染料分子結(jié)構(gòu)與化學(xué)基團(tuán)不同，吸收波長(zhǎng)不同，對(duì)被染細(xì)胞產(chǎn)生的染色效果必然不同。客觀上，作用于細(xì)胞漿與細(xì)胞核的兩種不同染料，在可見(jiàn)光區(qū)吸收峰間的距離決定生成有色化合物的色差。
2.pH值范圍與染色時(shí)間上的區(qū)別 Giemsa染色試劑是由作用于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)的兩種染料按一定比例混合配制的，染色時(shí)要求pH范圍為6.4～6.8，一步完成染色(即染色時(shí)在規(guī)定的pH范圍內(nèi)只能有一種pH值)，染色時(shí)間范圍10～40分鐘。由于蛋白質(zhì)在某一pH時(shí)游離成正、負(fù)離子的趨勢(shì)相等(即成為兼性離子)，對(duì)作用于細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)的兩種染料的吸附量相等；又由于Giemsa染色液中作用細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)的兩種染料吸收峰距離小、導(dǎo)致Giemsa染色技術(shù)難以形成高色差。
體細(xì)胞快速染色技術(shù)分二步染色，體細(xì)胞快速染色試劑(A)液pH4～5、體細(xì)胞快速染色液試劑(B)液pH6～7，形成了適合細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)特別是核仁著色的pH梯度，其染色時(shí)間僅為1～2分鐘。
3.染色效率與清晰度的區(qū)別 體細(xì)胞快速染色技術(shù)的染色時(shí)間僅相當(dāng)于傳統(tǒng)Giemsa染色技術(shù)的1/10～1/20。高色差、梯度pH特點(diǎn)使細(xì)胞核、核仁、細(xì)胞質(zhì)的分色性能得以充分顯示(請(qǐng)參閱李元堂等，《臨床脫落細(xì)胞學(xué)圖譜》，山東科學(xué)技術(shù)出版社.2001年第1版)。
(四)體細(xì)胞快速染色技術(shù)與巴氏、H&E染色技術(shù)在細(xì)胞顯示上的區(qū)別根據(jù)同一肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞涂片樣本的染色比較①體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞無(wú)破壞作用，盡管細(xì)胞經(jīng)過(guò)體細(xì)胞快速染色液(A)中溶劑甲醇的短暫固定，但基本形態(tài)保持了自然狀態(tài)。由于體細(xì)胞快速染色技術(shù)的高色差、梯度pH，使細(xì)胞核染色質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)(染色質(zhì)點(diǎn)、塊或條索狀濃集)、核仁(包括很細(xì)小的核仁)數(shù)目以及核仁的多樣性變化、細(xì)胞的分色性能充分顯示了出來(lái)(圖5)；②巴氏染色技術(shù)對(duì)同一肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞的顯示表明，核染色質(zhì)的細(xì)微結(jié)構(gòu)、核仁的數(shù)目，特別是細(xì)小的核仁的色差以及細(xì)胞漿的分色性則較差，但其通明性能極佳(圖6)；③H&E染色技術(shù)對(duì)同一肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞的顯示則不如巴氏，但其染色步驟和時(shí)間則優(yōu)于巴氏(圖7)。
(五)體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)人類細(xì)胞的染色效果 體細(xì)胞快速染色試劑使用范圍為血液及骨髓細(xì)胞涂片、腫瘤穿刺物細(xì)胞涂片、手術(shù)切除物的組織細(xì)胞涂片、宮頸/陰道分泌物涂片、漿膜積液、尿液沉渣等涂片的快速染色。無(wú)論人類何種部位的細(xì)胞涂片，均能清晰地顯示細(xì)胞核、核膜、染色質(zhì)和核仁的數(shù)目、結(jié)構(gòu)、形態(tài)；胞漿的細(xì)微特征、組織碎片的結(jié)構(gòu)、涂片背景內(nèi)的基質(zhì)和分泌物。尤其是細(xì)胞核、核仁數(shù)目和形態(tài)以及細(xì)胞漿的分色性能優(yōu)于多種傳統(tǒng)的染色劑，更便于觀察者對(duì)某些診斷性特征的鑒別和分析，而獲得最有利于病人的判斷和解釋。
1.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞核與核仁的顯示 ①體細(xì)胞快速染色技術(shù)能清晰地顯示出間期細(xì)胞核中染色質(zhì)的網(wǎng)狀、顆粒狀結(jié)構(gòu)，以及點(diǎn)狀、塊狀和條索狀的染色質(zhì)濃集；②清晰顯示能分裂細(xì)胞的核仁數(shù)目、形態(tài)以及核仁網(wǎng)眼中暴露出的紫紅色染色質(zhì)顆粒。③核內(nèi)染色質(zhì)與核仁的色差顯著，染色質(zhì)為紫紅色，核仁則為藍(lán)色或淡藍(lán)色。
2.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞漿細(xì)微結(jié)構(gòu)的顯示 ①體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞漿具有顯著的分色性能，能清晰地顯示出鱗狀上皮細(xì)胞胞漿功能狀態(tài)，即細(xì)胞漿功能完好部分呈藍(lán)或淡藍(lán)色，而細(xì)胞漿壞死部分不著色(白色)；②對(duì)腺細(xì)胞或具有分泌功能的細(xì)胞分泌物不著色(白色)，便于觀察者根據(jù)細(xì)胞形態(tài)和胞漿內(nèi)空泡的特點(diǎn)對(duì)細(xì)胞類型的確定；③能清晰顯示出細(xì)胞漿內(nèi)的各種顆粒(包括細(xì)胞吞噬的各種異物)。
3.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)涂片背景物質(zhì)的顯示 能清晰顯示涂片背景中的基質(zhì)、細(xì)胞碎片、組織碎片、粘液絲、尿液沉渣中的結(jié)晶等。
4.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)宮頸/陰道分泌物涂片的顯示 ①能清晰顯示出光學(xué)顯微鏡下宮頸/陰道分泌物涂片中各種成分，包括炎性病變細(xì)胞、癌前病變細(xì)胞、癌細(xì)胞；②能清晰顯示出霉菌芽孢、假菌絲以及假菌絲內(nèi)含有的不規(guī)則染色質(zhì)；③清晰顯示出淋球菌、纖毛菌、加特納球桿菌；④清晰顯示出陰道毛滴蟲的形態(tài)特征前后鞭毛為紫色或淡紫紅色，與藍(lán)色或淡藍(lán)色胞漿形成顯著色差；并清晰顯示出滴蟲胞漿內(nèi)的紫紅色顆粒與空泡(由滴蟲吞噬的淀粉顆粒所致，體細(xì)胞快速染色對(duì)淀粉不著色)，這是目前國(guó)內(nèi)外傳統(tǒng)染色試劑尚未實(shí)現(xiàn)的染色效果。新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院國(guó)家藥品臨床試驗(yàn)基地的試驗(yàn)報(bào)告證明“體細(xì)胞快速染色液對(duì)滴蟲和加特納球桿菌的檢出率，顯著和非常顯著地優(yōu)于Giemsa染色液”。
(六)體細(xì)胞快速染色技術(shù)的染色效果而產(chǎn)生的發(fā)現(xiàn) 由于體細(xì)胞快速染色技術(shù)在細(xì)胞顯示上所產(chǎn)生的高色差，使細(xì)胞核、染色質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)；核仁的數(shù)目、形態(tài)結(jié)構(gòu)；細(xì)胞漿細(xì)微結(jié)構(gòu)的分色性能得到了充分顯示。使細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察的結(jié)果與現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)的相關(guān)理論與研究結(jié)果比較吻合，這就突破了國(guó)內(nèi)外傳統(tǒng)細(xì)胞病理學(xué)在核仁數(shù)目及形態(tài)、細(xì)胞質(zhì)功能狀態(tài)(被傳統(tǒng)細(xì)胞病理學(xué)一直排斥在判斷標(biāo)準(zhǔn)以外)的若干規(guī)定；并由體細(xì)胞快速染色試劑對(duì)鱗狀上皮細(xì)胞的染色效果，可能否定巴氏(1943)提出的“核異質(zhì)”中有關(guān)“癌前核異質(zhì)”作為提示癌前病變的形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)(沿用至今)。由于這種否定，導(dǎo)致產(chǎn)生和確定了鱗狀上皮“癌前病變細(xì)胞”形態(tài)的鑒別與判斷?！鞍┣安∽兗?xì)胞”形態(tài)的確定，可能使宮頸/陰道脫落細(xì)胞形態(tài)鑒別分成炎性(包括細(xì)胞反應(yīng)性改變)、癌前病變、惡性病變(癌)三大類。而這種分類一但成立，將有可能扭轉(zhuǎn)美國(guó)(1988)提出的Bethesda系統(tǒng)ASCUS定義造成的混亂。因ASCUS類型的細(xì)胞改變可以反映高度的良性病變或潛在的嚴(yán)重病變，這些病變又不能明確分類，而稱之為“未明確意義的不典型鱗狀細(xì)胞”(ASCUS)。
1.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)人類正常細(xì)胞核仁數(shù)目與形態(tài)的顯示 用正常人工流產(chǎn)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞，一部分涂片用國(guó)際公認(rèn)的Ag-NOR染色技術(shù)可以顯示出含有10個(gè)核仁組織區(qū)(NOR)的細(xì)胞。由于人類近端著絲粒染色體在進(jìn)化過(guò)程中隨機(jī)聯(lián)合的生物學(xué)特性，導(dǎo)致NOR的數(shù)目和形態(tài)在細(xì)胞群體中各占一定的比率(圖8)。另一部分涂片則用體細(xì)胞快速染色試劑染色，可清晰地顯示出5個(gè)形態(tài)、大小不一的藍(lán)色或淡藍(lán)色核仁。而細(xì)胞群體中處于靜止期的細(xì)胞，則由于DNA不復(fù)制NOR不活動(dòng)，因而核仁不被顯示。故體細(xì)胞快速染色試劑對(duì)正常細(xì)胞核仁數(shù)目的顯示范圍為0～5個(gè)(圖9)，與傳統(tǒng)細(xì)胞病理學(xué)觀察到的正常細(xì)胞有1～2個(gè)核仁的結(jié)論不同。但體細(xì)胞快速染色試劑對(duì)正常細(xì)胞核仁數(shù)目的顯示結(jié)果與現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)研究結(jié)果非常吻合。
2.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)人類惡性腫瘤細(xì)胞的核仁數(shù)目與形態(tài)的顯示由于正常分裂細(xì)胞核仁數(shù)目被體細(xì)胞快速染色試劑顯示的結(jié)果為0～5個(gè)，這就為鑒別人類惡性腫瘤細(xì)胞提出了一個(gè)新的參照標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)過(guò)大量的觀察，人類大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞涂片中可以觀察到5個(gè)以上的核仁數(shù)目(小細(xì)胞型惡性腫瘤、血液及骨髓發(fā)生的惡性腫瘤例外)，最多時(shí)可以顯示出惡性腫瘤細(xì)胞幾十個(gè)核仁(圖10)。
國(guó)內(nèi)外電鏡研究的結(jié)果證明，核仁沒(méi)有膜包圍，是由轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的前體rRNA(precursor rRNA，pre RNA)相互纏繞的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)人類細(xì)胞，特別是腫瘤細(xì)胞核仁形態(tài)的顯示結(jié)果表明核仁的形態(tài)為多態(tài)性，與傳統(tǒng)細(xì)胞病理學(xué)認(rèn)為的“圓形或卵圓形”有所不同。而且在核仁內(nèi)可以顯示出核仁網(wǎng)眼中暴露出的紫紅色染色質(zhì)顆粒(圖11)，這與電鏡證明的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)特點(diǎn)相似。這是迄今為止，傳統(tǒng)染色試劑均尚未實(shí)現(xiàn)的染色效果。
4.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞漿細(xì)微結(jié)構(gòu)的顯示 ①由于部分壞死細(xì)胞漿的電荷改變，與體細(xì)胞快速染色試劑不發(fā)生染色反應(yīng)而形成白色區(qū)域有功能的部分細(xì)胞漿則與體細(xì)胞快速染色試劑產(chǎn)生染色反應(yīng)，形成藍(lán)或淡藍(lán)色區(qū)域。這種較強(qiáng)烈的色差，為鑒別細(xì)胞漿的功能狀態(tài)提供了可靠依據(jù)。②由于細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)被體細(xì)胞快速染色試劑染成紫紅色，凡是進(jìn)入細(xì)胞漿的染色質(zhì)碎片或顆粒(包括細(xì)胞吞噬的物質(zhì))，在細(xì)胞漿藍(lán)、白背景的襯托下均顯示的格外清晰。
5.體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)鱗狀上皮“癌前病變細(xì)胞”的顯示 根據(jù)現(xiàn)代細(xì)胞遺傳學(xué)“突變細(xì)胞形成癌”的理論和研究結(jié)果，癌的形成是單克隆的，即細(xì)胞突變(遺傳物質(zhì)損傷與重組)→選擇優(yōu)勢(shì)→克隆形成→形成肉眼可見(jiàn)的惡性腫瘤。無(wú)疑，細(xì)胞突變(遺傳物質(zhì)損傷與重組)→選擇優(yōu)勢(shì)這個(gè)階段應(yīng)屬于“癌前病變”范疇。
(1)“癌前核異質(zhì)”提示癌前病變可能無(wú)意義 有關(guān)巴氏(1943)提出“核異質(zhì)”中的鱗狀上皮細(xì)胞“癌前核異質(zhì)”，在我國(guó)較早的形態(tài)描述，見(jiàn)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所與腫瘤醫(yī)院細(xì)胞學(xué)室(1976)《臨床腫瘤細(xì)胞學(xué)圖譜》，該著作對(duì)宮頸鱗狀細(xì)胞“癌前核異質(zhì)”形態(tài)進(jìn)行了這樣的描述“核大，核染質(zhì)不勻，核周有空泡”(圖12)。直到1988年，美國(guó)提出的Bethesda系統(tǒng)仍沒(méi)有解決“癌前病變細(xì)胞”的形態(tài)鑒別，而將鱗狀上皮細(xì)胞出現(xiàn)的“核周亮?xí)灐睔w入ASCUS(未明確意義的不典型鱗狀細(xì)胞)。這個(gè)ASCUS定義包括了高度良性病變和潛在的嚴(yán)重病變，正如美國(guó)細(xì)胞病理學(xué)家Kini指出的那樣“此種分類已經(jīng)造成并繼續(xù)造成在病理學(xué)技術(shù)學(xué)家、病理學(xué)家和臨床醫(yī)師的很大混亂”。由于體細(xì)胞快速染色試劑對(duì)細(xì)胞漿部分壞死區(qū)域不著色，部分完好細(xì)胞漿因蛋白質(zhì)等電點(diǎn)未改變而被染成藍(lán)或淡藍(lán)色(圖13)。
根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)理研究結(jié)果細(xì)胞核中DNA復(fù)制必需RNA轉(zhuǎn)錄，RNA將遺傳信息傳遞給細(xì)胞漿中的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成；細(xì)胞核所需的蛋白質(zhì)，如組蛋白、DNA聚合酶、RNA聚合酶、基因調(diào)節(jié)蛋白等，都是在細(xì)胞漿中合成的。細(xì)胞漿中合成的蛋白質(zhì)通過(guò)核蛋白輸入信號(hào)而輸入細(xì)胞核。
過(guò)去30年的研究已證明損傷因子對(duì)細(xì)胞器和中間代謝途徑造成的影響。損傷因子可引起細(xì)胞器代償失調(diào)，細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的恒定就會(huì)受到損害。離子泵運(yùn)送機(jī)制障礙導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，出現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)池?cái)U(kuò)張(渾濁腫脹)、破裂和融合成大泡，這就是光學(xué)顯微鏡下見(jiàn)到的水樣變性。損傷因子可引起聚核蛋白體完全脫粒(degranulation)和解聚(disaggregation)及蛋白質(zhì)合成停止。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成停止時(shí)，就不能形成脂蛋白的主要成分，結(jié)果出現(xiàn)脂肪空泡和包涵體。損傷嚴(yán)重時(shí)，將出現(xiàn)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基器的廣泛破壞。破壞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)最初表現(xiàn)為細(xì)胞漿的灶狀變性區(qū)。而線粒體則因低氧、缺氧和營(yíng)養(yǎng)障礙，導(dǎo)致基質(zhì)蛋白質(zhì)凝聚和收縮、嵴腫脹和展開(kāi)以及膜破裂。線粒體損傷將減少細(xì)胞ATP的供應(yīng)，對(duì)蛋白質(zhì)的合成和細(xì)胞分裂具有深遠(yuǎn)影響。損傷早期還嚴(yán)重影響線粒體內(nèi)膜和細(xì)胞膜的離子運(yùn)送。
對(duì)鱗狀細(xì)胞來(lái)說(shuō)，核周空泡是由隨機(jī)的細(xì)胞漿區(qū)域性壞死所致。由于壞死區(qū)域蛋白質(zhì)表面電荷性質(zhì)發(fā)生了改變，體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示出了顯著色差。胞漿蛋白質(zhì)變性的程度，決定部分壞死細(xì)胞質(zhì)的顏色變化。
無(wú)論從核仁制造核糖體，還是從粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成蛋白質(zhì)，或是從胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)運(yùn)輸途徑考慮。有核周空泡的細(xì)胞不可能生存下去，因?yàn)檫z傳信息傳遞和蛋白質(zhì)向核內(nèi)運(yùn)輸?shù)耐緩奖粔乃绤^(qū)域所阻斷；核周圍細(xì)胞漿凝固性壞死或液化，都將導(dǎo)致細(xì)胞核的固縮而最終死亡。所以，鱗狀上皮“癌前核異質(zhì)”細(xì)胞以及Bethesda系統(tǒng)中ASCUS細(xì)胞出現(xiàn)的“核周亮?xí)灐笨赡苁羌?xì)胞炎性病變的一種形態(tài)類型，對(duì)提示鱗狀上皮細(xì)胞癌前病變可能無(wú)實(shí)際意義。
(2)體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)鱗狀上皮“癌前病變細(xì)胞”形態(tài)的顯示 由外源或/和內(nèi)源性損傷因子，引起遺傳物質(zhì)損傷和重組的突變細(xì)胞具有新遺傳特征，但必須在細(xì)胞核周圍，存在部分完好的細(xì)胞漿以及漿內(nèi)部分完好的細(xì)胞器，才能保證遺傳信息傳遞、細(xì)胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)合成及運(yùn)輸?？梢哉f(shuō)，這是突變細(xì)胞修復(fù)損傷，從病理向一種新的生理狀態(tài)轉(zhuǎn)化，形成選擇優(yōu)勢(shì)→克隆→肉眼可見(jiàn)腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)。
由于體細(xì)胞快速染色試劑的高色差、合適的pH值剃度對(duì)細(xì)胞核、核仁以及細(xì)胞漿細(xì)微結(jié)構(gòu)的清晰顯示，癌前病變的鱗狀上皮細(xì)胞被清晰顯示“核染色質(zhì)不均；核周有部分藍(lán)或淡藍(lán)色細(xì)胞漿，漿內(nèi)可出現(xiàn)紫紅色顆粒或部分紅藍(lán)交替的色調(diào)；有1～2個(gè)藍(lán)或淡藍(lán)色的核仁，有時(shí)可見(jiàn)很大的核仁；胞體因發(fā)展階段不同而呈現(xiàn)多形性變化”(圖14-18)。
客觀上，細(xì)胞(包括正常細(xì)胞或突變細(xì)胞)對(duì)核糖體需求量非常大，rRNA基因數(shù)目必須重復(fù)和高速轉(zhuǎn)錄才能與之匹配。所以，癌前病變細(xì)胞的核仁被“體細(xì)胞快速染色試劑”顯示出來(lái)是符合科學(xué)邏輯的。核仁的存在，表明了DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、核糖體生產(chǎn)、胞漿中蛋白質(zhì)合成和運(yùn)輸在進(jìn)行。這可能是癌前病變細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒別的科學(xué)依據(jù)。
自巴氏(1943)、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所及腫瘤醫(yī)院細(xì)胞學(xué)室(1976)、美國(guó)(1988)提出的Bethesda系統(tǒng)ASCUS定義中有關(guān)“癌前核異質(zhì)”、“核周亮?xí)灐钡镊[狀上皮形態(tài)描述的全部文獻(xiàn)記載中，尚未發(fā)現(xiàn)此類細(xì)胞有核仁存在的描述。既然此類鱗狀上皮細(xì)胞無(wú)核仁，就不能證明DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、核糖體生產(chǎn)、胞漿中蛋白質(zhì)合成和運(yùn)輸在進(jìn)行。因此，“癌前核異質(zhì)”、“核周亮?xí)灐钡镊[狀上皮作為提示癌前病變可能缺乏科學(xué)依據(jù)的支持。
由于腫瘤來(lái)源于單一細(xì)胞克隆之前的突變概率以及時(shí)間的依賴過(guò)程所決定，在宮頸/陰道分泌物涂片的細(xì)胞群體中，癌前病變細(xì)胞的數(shù)量很少，這需要觀察者仔細(xì)認(rèn)真。在一定意義上說(shuō)，每次的發(fā)現(xiàn)和確定都可能使宮頸原位癌的形成減少一次，這是一件非常有意義而有益于全人類的工作。
四.


圖1是原料水溶性曙紅Y的吸收波長(zhǎng)；圖2是體細(xì)胞快速染色試劑(A)液的吸收波長(zhǎng)；圖3是體細(xì)胞快速染色試劑(B)液的吸收波長(zhǎng)；圖4是Giemsa染色劑的吸收波長(zhǎng)；圖5-7是同一肝細(xì)胞性肝癌樣本體細(xì)胞快速染色技術(shù)與巴氏、H&E染色效果的比較；圖8是Ag-NOR技術(shù)顯示的正常人工流產(chǎn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞核仁組織區(qū)圖9是體細(xì)胞快速染色試劑顯示的正常人工流產(chǎn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞核仁(與圖5為同一樣本)；圖10是體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示巨大癌細(xì)胞核仁數(shù)目；圖11是體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示巨大癌細(xì)胞核仁形態(tài)與核仁中顆粒；圖12中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所與腫瘤醫(yī)院細(xì)胞學(xué)室(1976)描述的鱗狀上皮“癌前核異質(zhì)”形態(tài)(原圖復(fù)制)；圖13是體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示鱗狀上皮核周圍胞漿壞死區(qū)域；圖14-18是體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示鱗狀上皮癌前病變細(xì)胞形態(tài)；圖19是體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示的陰道分泌物中霉菌(分泌物涂片)；圖20是體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示的陰道分泌物中滴蟲(分泌物涂片)；圖21是體細(xì)胞快速染色技術(shù)顯示的卵巢轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞(手術(shù)切除物涂片)。
五.
具體實(shí)施例方式
體細(xì)胞快速染色技術(shù)對(duì)人體各系統(tǒng)的細(xì)胞涂片，空氣干燥后即可滴加體細(xì)胞快速染色試劑(A)液4～5滴，染30～60秒鐘，自來(lái)水沖洗后再加體細(xì)胞快速染色試劑(B)液4～5滴，染30～60秒鐘，自來(lái)水沖洗后即可鏡檢。若長(zhǎng)期保存標(biāo)本，用乙醚脫去鏡油，光學(xué)樹(shù)脂膠封片即可。體細(xì)胞快速染色技術(shù)配方大吸收峰距離(圖2-3)形成的高色差、pH值梯度，使細(xì)胞核染色質(zhì)細(xì)微結(jié)構(gòu)、核仁數(shù)目范圍(圖8、9)、核仁形態(tài)多樣性以及核仁內(nèi)紫紅色顆粒(圖10、11)、細(xì)胞質(zhì)功能狀態(tài)(圖14-18)得到清晰顯示，從而使鱗狀上皮“癌前病變細(xì)胞”形態(tài)的鑒別成為可能。
經(jīng)體細(xì)胞快速染色試劑染色的霉菌芽胞呈藍(lán)或淡藍(lán)色、假菌絲內(nèi)染色質(zhì)呈不規(guī)則塊狀(圖19)；與原核細(xì)胞無(wú)核膜的特點(diǎn)吻合。對(duì)陰道滴蟲(圖47)的顯示結(jié)果比較獨(dú)特，清晰顯示出前后鞭毛與胞漿內(nèi)的紫紅色顆粒；與滴蟲自身生物學(xué)特性吻合(滴蟲靠鞭毛前進(jìn)、靠波動(dòng)膜旋轉(zhuǎn))。
權(quán)利要求
1.一種組織細(xì)胞的高色差、梯度pH值、快速染色的配方，該配方(A)液吸收波長(zhǎng)521±5nm(說(shuō)明書附圖1/8中圖2)、pH值4～5；(B)液吸收波長(zhǎng)657±5nm(說(shuō)明書附圖2/8中圖3)，pH值6～7；其特征在于清晰而正確顯示細(xì)胞核細(xì)微結(jié)構(gòu)、核仁數(shù)目、核仁形態(tài)多樣性以及核仁內(nèi)的紫紅色顆粒(說(shuō)明書附圖4/8、5/8中圖8、9、10、11；8/8中圖21)、細(xì)胞質(zhì)的功能狀態(tài)(說(shuō)明書附圖5/8、6/8、7/8中圖13-18)；清晰顯示霉菌假菌絲內(nèi)不規(guī)則的染色質(zhì)形態(tài)(說(shuō)明書附圖7/8中圖19)；清晰顯示陰道滴蟲鞭毛、核及胞漿內(nèi)顆粒狀結(jié)構(gòu)(說(shuō)明書附圖8/8中圖20)。
2.由權(quán)利要求1的技術(shù)特征，導(dǎo)致宮頸/陰道鱗狀上皮細(xì)胞癌前病變細(xì)胞形態(tài)的確定，其形態(tài)特征在于核染色質(zhì)不均；核周有部分藍(lán)或淡藍(lán)色細(xì)胞漿，漿內(nèi)可出現(xiàn)紫紅色顆?；虿糠旨t藍(lán)交替的色調(diào)；有1～2個(gè)藍(lán)或淡藍(lán)色的核仁，有時(shí)可見(jiàn)很大的核仁；胞體因發(fā)展階段不同而呈現(xiàn)多形性變化(說(shuō)明書附圖5/8、6/8、7/8中圖13-18)。
全文摘要
體細(xì)胞快速染色技術(shù)屬于細(xì)胞病理學(xué)領(lǐng)域，解決了傳統(tǒng)的巴氏、H&E染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞蛋白質(zhì)的破壞作用，克服了Giemsa染色技術(shù)對(duì)細(xì)胞染色不清晰、染色時(shí)間長(zhǎng)的弱點(diǎn)。體細(xì)胞快速染色試劑的主要技術(shù)特征是高色差、梯度pH值、著色快速。梯度pH值適合細(xì)胞酸性物質(zhì)與堿性物質(zhì)對(duì)染色試劑的要求，對(duì)細(xì)胞蛋白質(zhì)不產(chǎn)生破壞作用；高色差性能提高了光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞核、細(xì)胞漿中可見(jiàn)物質(zhì)的分色性能。染色后的細(xì)胞核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、核仁的數(shù)目和形態(tài)、核仁內(nèi)紫紅色顆粒、滴蟲的鞭毛與胞漿內(nèi)顆粒、霉菌假菌絲內(nèi)不規(guī)則染色質(zhì)形態(tài)得以清晰顯示，癌前病變細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒別結(jié)果與現(xiàn)代細(xì)胞遺傳學(xué)研究結(jié)果相吻合(圖1)。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK1587962SQ20041006227
公開(kāi)日2005年3月2日 申請(qǐng)日期2004年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月5日
發(fā)明者竹琴, 殷路 申請(qǐng)人:竹琴, 殷路