專利名稱：一種編碼調(diào)控暖季型草坪草狗牙根抗寒抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子的基因及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是屬于植物分子生物學(xué)的領(lǐng)域，涉及一個(gè)編碼調(diào)控暖季型草坪草狗牙根(Bermuda grass)抗寒、抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子的基因包括該基因的核酸序列及根據(jù)堿基順序推導(dǎo)出的氨基酸序列，所具有的功能以及可以在轉(zhuǎn)基因領(lǐng)域中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
對(duì)于植物抗逆性方面的研究由來(lái)已久，以前的工作大都是停留在遺傳育種方面。近年來(lái)植物基因工程的飛速發(fā)展，在植物抗逆性方面帶來(lái)了前所未有的突破。但是植物的抗逆的特性并不是單個(gè)或少數(shù)幾個(gè)基因表達(dá)就能夠表現(xiàn)出來(lái)的，而是多個(gè)功能基因共同表達(dá)才能獲得的。因此一個(gè)優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因植物，也需要多個(gè)功能基因的導(dǎo)入和表達(dá)才能獲得我們所需要的抗性，而傳統(tǒng)的遺傳轉(zhuǎn)化方法是把逐個(gè)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)化來(lái)提高植物對(duì)逆境脅迫的耐性。如果可以在轉(zhuǎn)入一個(gè)基因后就可以同時(shí)調(diào)節(jié)幾個(gè)基因的表達(dá)，就會(huì)給轉(zhuǎn)基因操作帶來(lái)事倍功半的效果。植物中調(diào)控對(duì)外界干旱、高鹽、低溫等逆境脅迫應(yīng)答反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子DREB(drought-responsive element binding factor)就是這樣一種基因，該轉(zhuǎn)錄因子可以和特定的順勢(shì)作用元件結(jié)合，激活在啟動(dòng)子中含有該元件或該元件核心序列的基因的表達(dá)。自1998年DREB基因從擬南芥中被分離出來(lái)以來(lái)(Liu等Plant Cell，1998，10(8)1391-1406)，已受到廣泛的關(guān)注和得到深入的研究，目前除擬南芥外，已從其它許多植物如棉花，玉米，小麥，水稻，大豆中分離到類似DREB的基因，這些基因也具有類似的功能。但在草坪草中這方面的研究鮮為報(bào)道。
隨著生態(tài)環(huán)境的日益破壞，水資源的日益匱乏，草坪業(yè)的抗逆性研究具有更加廣闊的研究前景和應(yīng)用前景。狗牙根是一類優(yōu)質(zhì)的暖季型草坪草，色澤鮮綠，具有耐踐踏，彈性好等特點(diǎn)，是優(yōu)質(zhì)的足球場(chǎng)和高爾夫球場(chǎng)的主要建群種，也是優(yōu)質(zhì)的園藝觀賞草坪，提高狗牙根的抗逆性為其廣泛種植提供了基礎(chǔ)。本發(fā)明涉及克隆草坪草狗牙根中DREB基因，并鑒定其功能，為以后草坪草中抗逆基因的遺傳轉(zhuǎn)化作好前期性的工作。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一個(gè)編碼具有調(diào)控狗牙根抗寒抗鹽性的DREB轉(zhuǎn)錄因子的基因。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供編碼這種DREB轉(zhuǎn)錄因子的基因的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一個(gè)編碼具有調(diào)控草坪草狗牙根抗寒抗鹽性轉(zhuǎn)錄因子的基因(BeDREB)，其具有序列表SEQ ID No.1所示的堿基序列。
編碼的具有轉(zhuǎn)錄激活功能的調(diào)控狗牙根抗寒抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子，其具有序列表SEQID No.2所示的氨基酸序列。
本申請(qǐng)發(fā)明人經(jīng)過(guò)深入研究，分離并獲得了草坪草狗牙根的似DREB基因，并確定了其堿基序列，應(yīng)用生物學(xué)軟件進(jìn)行同源性比較，發(fā)現(xiàn)與其它植物中已經(jīng)報(bào)道的DREB基因序列具有較高的同源性，并具有DREB轉(zhuǎn)錄因子所特有的典型特征具有一個(gè)含有57個(gè)氨基酸的AP2/EREBP保守區(qū)，其中第14位和第19位的氨基酸分別為纈氨酸和谷氨酸，這兩個(gè)氨基酸被認(rèn)為是DREB轉(zhuǎn)錄因子與DRE順勢(shì)作用元件特異性性結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)。將該似DREB基因的的編碼區(qū)構(gòu)建到特定的YepGAP載體中，構(gòu)建表達(dá)載體，并使該表達(dá)載體導(dǎo)入本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建好酵母菌株(YW4721)中與特定的順勢(shì)作用元件結(jié)合激活雙報(bào)告基因的表達(dá)，從而鑒定出該似DREB基因具有DREB轉(zhuǎn)錄因子所特有的轉(zhuǎn)錄激活功能。
編碼具有調(diào)控狗牙根抗寒抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子的基因在轉(zhuǎn)基因植物育種的應(yīng)用植物抗逆性并不是單個(gè)基因所控制的結(jié)果，而是多個(gè)基因表達(dá)共同作用的結(jié)果。BeDREB轉(zhuǎn)錄因子是一個(gè)受低溫和高鹽特異誘導(dǎo)的反式作用因子，能夠與特定的DRE順勢(shì)作用元件結(jié)合，促進(jìn)啟動(dòng)子中含有這一元件或該元件核心序列(A/GCCGAC)的多個(gè)與逆境脅迫相關(guān)的基因的表達(dá)，從而激活植物體內(nèi)的多種抗逆機(jī)制。在DREB1A的轉(zhuǎn)基因擬南芥的研究山發(fā)現(xiàn)，DREB1A轉(zhuǎn)錄因子超表達(dá)在提高植物耐逆性的同時(shí)，還會(huì)產(chǎn)生生長(zhǎng)遲緩、植株矮化的負(fù)效應(yīng)，但這種負(fù)效應(yīng)在草坪草的生長(zhǎng)過(guò)程中反而是有利的。通常，草坪草是三分種，七分養(yǎng)護(hù)，為保持草坪草的美觀，需要經(jīng)常對(duì)草坪草進(jìn)行修剪，DREB類轉(zhuǎn)錄因子在轉(zhuǎn)入草坪草中后既能夠增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因草坪草的耐逆性，又能減少修剪的次數(shù)，從而節(jié)省了養(yǎng)護(hù)費(fèi)用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是BeDREB轉(zhuǎn)錄因子能夠與特定的順勢(shì)作用元件結(jié)合，激活多個(gè)與抗逆相關(guān)的基因，激發(fā)植物體內(nèi)的多種耐逆機(jī)制，所以說(shuō)，通過(guò)改良和增強(qiáng)一個(gè)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控能力，讓轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控多個(gè)與同類性狀有關(guān)的基因的表達(dá)，以提高植物對(duì)逆境脅迫的耐性，是提高農(nóng)作物抗逆性的最佳途徑，因此BeDREB為通過(guò)基因工程改良植物的抗逆性提供了一種全新的技術(shù)途徑，在草坪草的耐逆性的綜合改良過(guò)過(guò)程中具有廣泛的應(yīng)用前景和極大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，凡依照以下內(nèi)容所作的任何本領(lǐng)域的等同替換均屬于對(duì)本發(fā)明專利權(quán)的侵犯。


圖1-1為冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)條件下BeDREB基因的誘導(dǎo)表達(dá)模式圖，顯示RT-PCR分析的誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果。
圖1-2為圖1-1同樣條件和參數(shù)下擴(kuò)增作為內(nèi)參的狗牙根的actin的結(jié)果。
圖1-3為圖1-1和1-2做RT-PCR時(shí)模版RNA的量。
圖2為BeDREB1轉(zhuǎn)錄激活的表達(dá)載體圖和酵母單雜交的轉(zhuǎn)錄激活原理示意圖。
圖3-1為在0mM的3-AT的SD-Agar三缺培養(yǎng)基上BeDREB轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活功能的檢測(cè)結(jié)果圖。
圖3-2為在20mM的3-AT的SD-Agar三缺培養(yǎng)基上BeDREB轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活功能的檢測(cè)結(jié)果圖。
圖3-3為在30mM的3-AT的SD-Agar三缺培養(yǎng)基上BeDREB轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活功能的檢測(cè)結(jié)果圖。
圖3-4為在40mM的3-AT的SD-Agar三缺培養(yǎng)基上BeDREB轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活功能的檢測(cè)結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中所使用的方法均為本領(lǐng)域常規(guī)操作，詳見(jiàn)《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版)，本申請(qǐng)發(fā)明人克隆到了狗牙根的DREB cDNA，并確定了其堿基序列(命名為BeDREB)。
實(shí)施例1.
1.實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備與脅迫處理所選實(shí)驗(yàn)材料為普通型狗牙根(Bermuda grass)，草種由中科院遺傳與發(fā)育研究所提供。播種前在水中浸種過(guò)夜，用0.1％的HgCl消毒12min，滅菌水沖洗4-5次，后在無(wú)菌操作條件下播種于含有1/2MS無(wú)機(jī)鹽的08％的瓊脂培養(yǎng)基上(pH5.8)，暗培養(yǎng)至種子發(fā)芽，后移至有固定光照控制和溫度(26℃)的培養(yǎng)室中長(zhǎng)至三周收獲幼苗。將幼苗洗凈(嚴(yán)防損傷幼苗)，置于4℃條件下冷誘導(dǎo)5小時(shí)，250mM的NaCl溶液中鹽誘導(dǎo)5小時(shí)，速于液氮中冷凍，保存于-80℃的冰箱中，用于克隆目的基因。
2.BeDREB基因的克隆根據(jù)對(duì)已報(bào)道的植物的AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子的保守結(jié)構(gòu)域的序列特征在有關(guān)的生物學(xué)軟件中進(jìn)行分析的結(jié)果，設(shè)計(jì)了與保守區(qū)兩端相對(duì)應(yīng)的特異性簡(jiǎn)并引物，分別以冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)5小時(shí)的狗牙根幼苗總的RNA 5ug為模板，做RT/PCR(TaKaRa RT-PCR Kit)，擴(kuò)增兩種脅迫下植物材料中的AP/EREBP保守區(qū)。
正向引物5′-AA(G)TGGGTT(G)GCTGAGATCCGTG-3′反向引物為5′-GCGCCATACATTGCCCTTGC-3′擴(kuò)增到了冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)狗牙根的AP2/EREBP保守區(qū)的基因序列，保守區(qū)序列同源性為100％；根據(jù)該保守區(qū)的基因序列，設(shè)計(jì)引物分別在冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)的狗牙根中擴(kuò)增3’端和5’端的基因序列(TaKaRa 5’-Full RACE Core Set，TaKaRa 3’-Full RACE CoreSet)，3’RACE引物正向引物；①5-ATGGCTTGGTTCATTCCC-3②5-TGGTTCATTCCCTACCGC-3反向引物oligo dT-3sites Adaptor Primer5’RACE引物反轉(zhuǎn)錄引物5’-ATTGCCCTTGC-3’正向引物①5’-ATGGCTTGGTTCATTCCC-3’②5’-TGGTTCATTCCCTACCGC-3’反向引物5’-TTGCCACGGTTGGGCTCACG-3’分別擴(kuò)增到冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)狗牙根中的5’端和3’端的序列，將所擴(kuò)增到的AP2/EREBP保守域基因序列，5’端的序列，3’端的序列進(jìn)行體外拼接，根據(jù)拼接的結(jié)果，再設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物冷誘導(dǎo)的正向引物5-AATTAAGAGCTCTCGGACCAGTTGGAGGAAAT-3反向引物5-AATTAAGTCGACCGCGGTTGGCTTATAGTATAGAG-3鹽誘導(dǎo)的正向引物5-AATTAAGAGCTCAGACCAGTTGGAGGAAAT-3反向引物5-AATTCCGTCGACTTGGGTTCAACGAGTAAA-3分別在冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)的狗牙根的基因組cDNA中擴(kuò)增到冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)條件下的草坪草狗牙根的似DREB全長(zhǎng)基因，經(jīng)過(guò)序列比較發(fā)現(xiàn)同源性達(dá)到97.5％，編碼區(qū)的序列同源性為接近100％，基本可以認(rèn)為是同一個(gè)基因，命名為BeDREB。
從草坪草狗牙根中分離到的BeDREB的cDNA的片段為1061bp，其中BeDREB的編碼區(qū)的堿基序列為753bp，根據(jù)堿基序列推測(cè)的氨基酸為251個(gè)，含有1個(gè)由57個(gè)氨基酸組成的AP2/EREBP保守區(qū)(下劃線部分)，第14位和第19位的氨基酸分別為纈氨酸(V)和谷氨酸(E)(以黑斜體字表示)。
agaccagttggaggaaatcgagggaggaaggagatctctctgtctatctcttctctcgct 60ctccatggagcgggtggaggtgcagggaggggcatcctccgctggccaagtcaggaagaa 120M E R V E V Q G G A S S A G Q V R K KGaggatgcgaaggaaaagcactggccccgactccattgctgagacaatcaagcggtggaa 180R M R R K S T G P D S I A E T I K R W KGgaacacaaccagaagatccatgaggacaggaaggctccagccaagggttccaagaaagg 240E H N Q K I H E D R K A P A K G S K K GGtgcatggctgggaaaggaggtcctgagaatgggaactgtgcttaccgcggtgtaaggca 300C M A G K G G P E N G N CA Y R G V R 0Gcggacgtggggcaaatgggtggctgagatccgtgagcccaaccgtggcaatcggctgtg 360R T W G K W V A E I R E P N R G N R L WGcttggttcattccctaccgctctggaggctgctcatgcatacgacgaggctgcgagggc 420L G S F P T A L E A A H A Y D E A A R ACatgtacggtcccacagcacgtgtcaatttttcggagagttctgctgatgcaaactcagg 480M Y G P T A R V N F S E S S A D A N S GTtgcacgtcagcactttccttactggcgtctaacataccgccagcttctcaacggtctga 540C T S A L S L L A S N I P P A S Q R S DTgacaaagatgaggtggaatctgtggagactgaggtgcatgaggtgaaaatggaagtgaa 600D K D E V E S V E T E V H E V K M E V NTgatgacatgcgaagcgtccacgtggagcgtaagaccctggaggttttccaatctgagga 660D D M R S V H V E R K T L E V F Q S E EGagcgtgttgcgcaaggaaggggatgtaagttatgattacttccatgtcgaagatgttct 720S V L R K E G D V S Y D Y F H V E D V LTgagatgataattgtagaattgaatgctgctaaaaaaattgaagtacatgaagaatacca 780E M I I V E L N A A K K I E V H E E Y QAgatggagatgatggttttagtctcttcacatattaaaggcgtcgtcatgtggagctgta 840D G D D G F S L F T Y*Ggaataacttcattctagctgttaggaaacgcttcaacctgaagctctgtagtctttgtg 900Ttttcaccttactgagacatagctctatactataagccaaccggtacaagaagttgtcct 960
Gtttgttgagttcctgtactatagtagaaaatgaatccatgtttaatgagttctcttgga 1020Tgttgatattgtacattttactcgttgaacccaaaaaaaaa1061實(shí)施例2.逆境脅迫下BeDREB基因的表達(dá)模式將上述方法(實(shí)施例1)培養(yǎng)的狗牙根幼苗洗凈，分別置于4℃和250mM的NaCl溶液中，分別按0、1、2、4、8、12、小時(shí)的時(shí)間間隔取樣，并立即用液氮速凍，置于-80℃冰箱中用于總RNA的分離。用Trizol(GIBCO公司)方法分離狗牙根植株的總RNA。
通過(guò)RT-PCR的方法來(lái)研究分析冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)條件下的BeDREB的誘導(dǎo)表達(dá)模式(所用試劑盒為TaKaRa realtime One-step RT-PCR kit)，RNA模板均為1.2ug，引物如下正向引物5-AATTAAGAGCTCTCGGACCAGTTGGAGGAAAT-3反向引物5-AATTAAGTCGACCGGTTGGCTTATAGTATAGAG-3在同樣的參數(shù)條件及反應(yīng)條件下擴(kuò)增狗牙根的actin作為內(nèi)參。反應(yīng)體系及參數(shù)(25ul的反應(yīng)體系) 反應(yīng)條件 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在同樣的反應(yīng)條件和反應(yīng)參數(shù)下，以同等量的RNA作為模板進(jìn)行RT-PCR(圖1-3)，作為內(nèi)參的actin基因表達(dá)量恒定(如圖1-2)，而B(niǎo)eDREB的表達(dá)量隨著逆境脅迫時(shí)間的不同，顯示出差異(如圖1-1)與沒(méi)有誘導(dǎo)的對(duì)照control相比，BeDREB在冷誘導(dǎo)1小時(shí)和鹽誘導(dǎo)1小時(shí)已有較高的表達(dá)量，且冷誘導(dǎo)條件下BeDREB的表達(dá)量稍高于鹽誘導(dǎo)條件下的表達(dá)量，繼續(xù)延長(zhǎng)誘導(dǎo)時(shí)間，該基因持續(xù)表達(dá)，在脅迫誘導(dǎo)4小時(shí)時(shí)，無(wú)論是在冷誘導(dǎo)條件下或鹽誘導(dǎo)條件下，BeDREB的表達(dá)都達(dá)到最高。其后隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，無(wú)論是在冷誘導(dǎo)條件下還是鹽誘導(dǎo)條件下，BeDREB還在持續(xù)表達(dá)，但已表現(xiàn)為稍稍下降的趨勢(shì)，至12個(gè)小時(shí)時(shí)仍維持一定的表達(dá)量。
實(shí)施例3.BeDREB轉(zhuǎn)錄激活載體的構(gòu)建和BeDREB蛋白轉(zhuǎn)錄激活功能的檢測(cè)一.將實(shí)施例1中所擴(kuò)增到的冷誘導(dǎo)和鹽誘導(dǎo)的BeDREB基因用限制性內(nèi)切酶Sall和Sacl(酶切位點(diǎn)在擴(kuò)全長(zhǎng)基因時(shí)已加在引物序列中)進(jìn)行雙酶切，同時(shí)將YepGAP112載體也用Sall和Sacl進(jìn)行雙酶切，將雙酶切后的片段和載體用T4 DNA Ligase進(jìn)行連接構(gòu)建表達(dá)載體，將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化入含雙報(bào)道基因的酵母菌株(YW4271，Clontech公司)中(如圖2-1和2-2所示)。
二.BeDREB的轉(zhuǎn)錄激活實(shí)驗(yàn)四個(gè)SD三缺培養(yǎng)基平板(-His/-Trp/-Ura)分別含0mM3-AT，20mM3-AT，30mM3-AT，40mM3-AT均被分成8份。每個(gè)平板上左側(cè)的四個(gè)部分依次為對(duì)照DREB1A，冷誘導(dǎo)材料中擴(kuò)增的BeDREB，鹽誘導(dǎo)材料中擴(kuò)增的BeDREB，YEPGAP空載體轉(zhuǎn)化野生型的酵母菌株的生長(zhǎng)情況；右側(cè)的四個(gè)部分為對(duì)照DREB1A，冷誘導(dǎo)狗牙根中擴(kuò)增的BeDREB，鹽誘導(dǎo)狗牙根中擴(kuò)增的BeDREB，YEPGAP空載體轉(zhuǎn)化突變型酵母菌株的生長(zhǎng)情況。
用含3-AT的SD-Agar三缺培養(yǎng)基(三缺SD固體培養(yǎng)基，His-Trp-Ura-，Clontech公司)檢測(cè)其生長(zhǎng)情況(用4個(gè)3-AT濃度0mM，20mM，30mM，40mM檢測(cè))，結(jié)果如圖3-1至3-4所示，BeDREB在轉(zhuǎn)化入野生型的酵母菌株(含野生型的DRE順勢(shì)作用元件)中后，可以和DRE順勢(shì)作用元件結(jié)合，在含20mM，30mM，40mM的3-AT的SD-Agar三缺培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，而將BeDREB轉(zhuǎn)化入突變型的酵母菌株(將DRE元件突變)后，不能和突變的元件結(jié)合，而在含3-AT的SD-Agar三缺培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)(在0mM的3-AT的三缺培養(yǎng)基平板上突變型的酵母菌株具有滲漏表達(dá))。說(shuō)明BeDREB蛋白能特異結(jié)合DRE順勢(shì)作用元件，激活下游目的基因的表達(dá)，具有調(diào)控草坪草狗牙根抗逆性應(yīng)答的功能。
序列表<110>北京揚(yáng)華生物科技有限公司<120>一個(gè)編碼調(diào)控暖季型草坪草狗牙根抗寒抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子的基因及其應(yīng)用<130>
<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>1061<212>mRNA<213>禾本科狗牙根屬(Bermuda grass)<400>1agaccagttg gaggaaatcg agggaggaag gagatctctc tgtctatctc ttctctcgct 60ctccatggag cgggtggagg tgcagggagg ggcatcctcc gctggccaag tcaggaagaa 120gaggatgcga aggaaaagca ctggccccga ctccattgct gagacaatca agcggtggaa 180ggaacacaac cagaagatcc atgaggacag gaaggctcca gccaagggtt ccaagaaagg 240gtgcatggct gggaaaggag gtcctgagaa tgggaactgt gcttaccgcg gtgtaaggca 300gcggacgtgg ggcaaatggg tggctgagat ccgtgagccc aaccgtggca atcggctgtg 360gcttggttca ttccctaccg ctctggaggc tgctcatgca tacgacgagg ctgcgagggc 420catgtacggt cccacagcac gtgtcaattt ttcggagagt tctgctgatg caaactcagg 480ttgcacgtca gcactttcct tactggcgtc taacataccg ccagcttctc aacggtctga 540tgacaaagat gaggtggaat ctgtggagac tgaggtgcat gaggtgaaaa tggaagtgaa 600tgatgacatg cgaagcgtcc acgtggagcg taagaccctg gaggttttcc aatctgagga 660gagcgtgttg cgcaaggaag gggatgtaag ttatgattac ttccatgtcg aagatgttct 720tgagatgata attgtagaat tgaatgctgc taaaaaaatt gaagtacatg aagaatacca 780agatggagat gatggtttta gtctcttcac atattaaagg cgtcgtcatg tggagctgta 840ggaataactt cattctagct gttaggaaac gcttcaacct gaagctctgt agtctttgtg 900ttttcacctt actgagacat agctctatac tataagccaa ccggtacaag aagttgtcct 960
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Lys Asp Glu Val Glu Ser Val Glu Thr Glu Val His Glu Val Lys Met165 170 175Glu Val Asn Asp Asp Met Arg Ser Val His Val Glu Arg Lys Thr Leu180 185 190Glu Val Phe Gln Ser Glu Glu Ser Val Leu Arg Lys Glu Gly Asp Val195 200 205Ser Tyr Asp Tyr Phe His Val Glu Asp Val Leu Glu Met Ile Ile Val210 215 220Glu Leu Asn Ala Ala Lys Lys Ile Glu Val His Glu Glu Tyr Gln Asp225 230 235 240Gly Asp Asp Gly Phe Ser Leu Phe Thr Tyr245 250
權(quán)利要求
1.一個(gè)編碼具有調(diào)控草坪草狗牙根抗寒抗鹽性轉(zhuǎn)錄因子的基因，其具有序列表SEQ ID No.1所示的堿基序列。
2.編碼的具有轉(zhuǎn)錄激活功能的調(diào)控狗牙根抗寒抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子，其具有序列表SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。
3.權(quán)利要求1所述的編碼具有調(diào)控狗牙根抗寒抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子的基因用于轉(zhuǎn)基因植物育種的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一個(gè)編碼具有調(diào)控草坪草狗牙根抗寒抗鹽性轉(zhuǎn)錄因子的基因，其具有序列表SEQ ID No.1所示的堿基序列。該基因編碼具有轉(zhuǎn)錄激活功能的調(diào)控狗牙根抗寒抗鹽性的轉(zhuǎn)錄因子，其具有序列表SEQ ID No.2所述的氨基酸序列。本發(fā)明公開(kāi)的基因可用于轉(zhuǎn)基因植物育種，激活下游目的基因的表達(dá)，具有調(diào)控植物抗逆性應(yīng)答的功能。
文檔編號(hào)C12N5/10GK1746307SQ20041007452
公開(kāi)日2006年3月15日 申請(qǐng)日期2004年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月7日
發(fā)明者謝永麗, 劉敬梅, 王自章 申請(qǐng)人:北京揚(yáng)華生物科技有限公司