專利名稱：新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種專門培養(yǎng)厭氧菌的裝置及方法，尤其是涉及一種用苛氧菌進行厭氧菌培養(yǎng)的裝置及方法。
背景技術(shù)：
厭氧菌在臨床上感染機體病例較為多見，有關(guān)厭氧菌培養(yǎng)在醫(yī)學檢驗領(lǐng)域里，一直困惑著人們，尤其在醫(yī)療條件比較差的大、中、小型醫(yī)院對解決厭氧菌培養(yǎng)有更大的難度，目前臨床上多數(shù)用現(xiàn)成購買的厭氧袋、厭氧罐、厭氧箱培養(yǎng)法，各種厭氧培養(yǎng)均是經(jīng)過物理的或化學的方法造成厭氧的環(huán)境，而采用厭氧罐、厭氧袋培養(yǎng)厭氧菌其工作程序繁瑣、制做復雜，要求條件苛刻，部分培養(yǎng)陽性率低，特別是對一些中小型及基層醫(yī)院的一般實驗室不能獨立完成厭氧菌的培養(yǎng)，很難達到需要標準?，F(xiàn)今由傳統(tǒng)的厭氧罐、厭氧袋培養(yǎng)厭氧菌發(fā)展到目前最先進的厭氧箱來培養(yǎng)厭氧菌，但因為厭氧箱本身造價高、費用昂貴，因地區(qū)差異，病人經(jīng)濟承受能力不同，如此先進的醫(yī)療設(shè)備很難普遍地推廣使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)構(gòu)簡單、操作方法簡便，經(jīng)濟實用，適宜廣泛推廣，不僅能給臨床提供直接、有效、經(jīng)濟的診斷指標，而且可提高厭氧菌的陽性檢出率的新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種培養(yǎng)出的厭氧菌陽性率高，結(jié)果可靠，方法簡便，適合大、中、小微生物實驗室的厭氧菌培養(yǎng)、費用低、簡便易學，便于普及推廣的新型厭氧菌培養(yǎng)的方法。
本發(fā)明的第一個目的由如下技術(shù)方案實施其由上、下相互吻合的器皿構(gòu)成，在所述上部器皿或下部器皿的任一器皿內(nèi)的周邊設(shè)有圍成一圈的隔離卡件，且所述隔離卡件的高度低于所在器皿的高度，所述隔離卡件與相應的器皿的外壁之間形成一區(qū)間，在所述區(qū)間內(nèi)的底部設(shè)有環(huán)形密封墊，所述另一器皿的上部邊緣扣在設(shè)有環(huán)形密封墊的所述器皿的環(huán)形密封墊上，所述上、下部器皿采用螺紋或卡接連接。
所述上、下部器皿的形狀為圓形、橢圓形、四邊形、多邊形或異形。
所述隔離卡件的形狀為圓形、橢圓形、四邊形、多邊形或異形。
所述環(huán)形密封墊的外圈邊緣與設(shè)有環(huán)形密封墊的所述器皿的底面形狀一致，所述環(huán)形密封墊的內(nèi)圈邊緣與所述隔離卡件的形狀一致。
所述上、下部器皿的高度為5-25mm，所述上、下部器皿的底面積為15cm2-140cm2，且在設(shè)有隔離卡件和環(huán)形密封墊的器皿的高度低于所述另一個器皿的高度。
在所述上部器皿或下部器皿內(nèi)的一個器皿或兩個器皿內(nèi)設(shè)有圈成一圈的隔離板，所述隔離板將所在器皿分成兩個區(qū)間——內(nèi)區(qū)間和外區(qū)間，所述內(nèi)區(qū)間為所述隔離板圈內(nèi)的區(qū)間，所述外區(qū)間為所述隔離板圈外的區(qū)間，且所述隔離板的高度要低于其所在器皿的高度。
在所述上部器皿或下部器皿的任一個器皿內(nèi)設(shè)有隔板，所述隔板將其所述器皿分成相互隔離的兩個區(qū)間，且所述隔板低于所在器皿的高度。
本發(fā)明的另一個目的由如下技術(shù)方案實施包括有如下步驟(1)、首先準備待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本；(2)、將步驟(1)所得標本在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)；即將已制備好的固體培養(yǎng)基置于所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的器皿中，冷卻、凝固，在盛有所述固體培養(yǎng)基的一個器皿中接種已知苛養(yǎng)菌，在盛有所述固體培養(yǎng)基的另一器皿中接種待培養(yǎng)的標本；或在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的所述上、下器皿的內(nèi)區(qū)間內(nèi)放入已制備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，在一個器皿中內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，在所述另一器皿中內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；或在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的所述上部器皿或下部器皿的任一器皿的內(nèi)區(qū)間內(nèi)和外區(qū)間放入已制備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，在所述內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，在所述外區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；或在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的所述上、下器皿的任一器皿，由隔板所隔開的相互隔離的兩個區(qū)間內(nèi)分別放入已制備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，由所述隔板隔開的所述一部分內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，由所述隔板隔開的所述另一部分內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；所述上部器皿與所述下部器皿旋緊密封，與外部空氣隔離，其中所述上部器皿和所述下部器皿中的所述固體培養(yǎng)基之間的間距至少大于5mm；然后將所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置放入37攝氏度恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10-18h，觀察所述接種待培養(yǎng)的標本的細菌的生長；(3)、同時將步驟(1)所得標本在普通有氧環(huán)境下培養(yǎng)；(4)、通過以上三個步驟觀察所培養(yǎng)出的細菌菌落，得以判斷待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本是厭養(yǎng)菌、兼性厭養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌或無細菌生長的任一種類型。
步驟(4)是通過如下方法判定(A)、將所述待培養(yǎng)的標本在新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)，通過細菌生長的情況判定(a)、如沒有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本為苛養(yǎng)菌，或無細菌生長；(b)、如有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本可能為厭養(yǎng)菌或兼性厭養(yǎng)菌；(B)、將所述待培養(yǎng)的標本在普通有養(yǎng)環(huán)境下的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，通過細菌生長的情況判定(a)、如沒有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本為厭養(yǎng)菌，或無細菌生長；(b)、如有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本可能為苛養(yǎng)菌或兼性厭養(yǎng)菌；通過上述步驟(A)、(B)細菌生長的情況綜合得到四種檢測結(jié)果，(I)、通過(A、a)和(B、a)得到結(jié)果是無細菌生長；(II)、通過(A、a)和(B、b)得到結(jié)果是苛養(yǎng)菌，即該標本為苛養(yǎng)菌感染；(III)、通過(A、b)和(B、a)得到結(jié)果是厭養(yǎng)菌，即該標本為厭養(yǎng)菌感染；(IV)、通過(A、b)和(B、b)得到結(jié)果是兼性苛養(yǎng)菌，即該標本為兼性苛養(yǎng)菌感染。
所述待培養(yǎng)的標本為人體或動物體分泌的濃汁、痰、胸腹水、分泌物、腦脊液、血液、尿液等。
所述固體培養(yǎng)基是固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基、固體營養(yǎng)培養(yǎng)基、固體選擇培養(yǎng)基、固體鑒別培養(yǎng)基的任一種。
該方法可用做厭養(yǎng)菌的藥物敏感試驗。
所述放入上、下部器皿的已準備好的固體培養(yǎng)基的厚度至少為3mm。
本發(fā)明的優(yōu)點是新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置結(jié)構(gòu)簡單、操作方法簡便，經(jīng)濟實用，適宜廣泛推廣，不僅能給臨床提供直接、有效、經(jīng)濟的診斷標準，同時對厭氧菌的培養(yǎng)結(jié)果準確、可靠。
新型厭氧菌培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出的厭氧菌陽性率高，結(jié)果可靠，方法簡便，適合大、中、小微生物實驗室的厭氧菌培養(yǎng)、費用低、簡便易學，便于普及推廣。用生物耗氧的方法創(chuàng)造無氧環(huán)境，取代物理、化學的方法，對推廣普及厭氧菌的培養(yǎng)起到很大的作用。利用苛氧菌在生長繁殖過程中將微環(huán)境中氧氣耗盡產(chǎn)生大量的CO2，造成厭氧環(huán)境，有利于厭氧菌的生長繁殖。隨著微生物學的發(fā)展，系列厭氧菌培養(yǎng)相關(guān)項目不斷更新，避免了現(xiàn)有的培養(yǎng)方法給病人造成的經(jīng)濟負擔，更重要的給臨床的診斷、治療造成困難和損失。而新方法簡單易行，經(jīng)濟實惠，適合于各級醫(yī)院、科研單位，且實驗準確、可靠、適用性強。
通過該方法對待培養(yǎng)的標本可通過培養(yǎng)厭氧菌，從而可更加準確的對待培養(yǎng)的標本鑒定，其結(jié)果可靠，方法簡便，適合大、中、小微生物實驗室的種屬鑒定、費用低、簡便易學，便于普及推廣。同時該方法可用做厭養(yǎng)菌的藥物敏感試驗。
附圖的圖面說明

圖1為本發(fā)明新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置實施例1的整體結(jié)構(gòu)剖面圖。
圖2為圖1的上部器皿的俯視圖。
圖3為圖1的下部器皿的俯視圖。
圖4為本發(fā)明新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置實施例2的整體結(jié)構(gòu)剖面圖。
圖5為圖4的上部器皿的俯視圖。
圖6為圖4的下部器皿的俯視圖。
圖7為本發(fā)明新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置實施例3的整體結(jié)構(gòu)剖面圖。
圖8為圖7的上部器皿的俯視圖。
圖9為圖7的下部器皿的俯視圖。
圖10為本發(fā)明新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置實施例4上、下部器皿的形狀為正六邊形的整體結(jié)構(gòu)剖面圖。
圖11為圖10的上部器皿的俯視圖。
圖12為圖10的下部器皿的俯視圖。
圖13為本發(fā)明新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置實施例4上、下部器皿的形狀為圓形的整體結(jié)構(gòu)剖面圖。
圖14為圖13的上部器皿的俯視圖。
圖15為圖13的下部器皿的俯視圖。
圖16為本發(fā)明對待培養(yǎng)的物質(zhì)細菌種屬的判定方法的流程簡圖。
實施方式實施例1如圖1、圖2、圖3所示，新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置由上、下相互吻合的器皿構(gòu)成，在上部器皿1的周邊設(shè)圍成一圈的隔離卡件3，隔離卡件3的高度低于上部器皿1的高度，隔離卡件3與相應的上部器皿的外壁之間形成一區(qū)間，在區(qū)間內(nèi)的底部設(shè)有環(huán)形密封墊4。下部器皿2的上部邊緣9扣在上部器皿1的環(huán)形密封墊4上，上、下部器皿1、2采用螺紋或卡接連接。上部器皿1和下部器皿2的底面形狀為圓形。隔離卡件3和環(huán)形密封墊4的形狀也為圓形。上部器皿1與下部器皿2采用螺紋或卡接連接。上部器皿1的高度為5mm，下部器皿2的高度為15mm。上部器皿的內(nèi)徑為110mm，下部器皿外徑為105mm。
在使用時可以在上部器皿1和下部器皿2內(nèi)分別放入已準備好的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷卻、凝固，然后在其中一個器皿的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本，在另一個器皿的固體培養(yǎng)基上接種已知的苛養(yǎng)菌，然后將上、下器皿蓋緊，密封與外部空氣，已便于標本的培養(yǎng)。其中上部器皿和下部器皿中的固體培養(yǎng)基之間的間距至少大于5mm。
實施例2如圖4、圖5、圖6所示，新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置由上、下相互吻合的器皿構(gòu)成，在下部器皿2的周邊設(shè)圍成一圈的隔離卡件3，隔離卡件3的高度低于下部器皿2的高度，隔離卡件3與相應的下部器皿2的外壁之間形成一區(qū)間，在區(qū)間內(nèi)的底部設(shè)有環(huán)形密封墊4。上部器皿1的上部邊緣10扣在下部器皿2的環(huán)形密封墊4上，上、下部器皿1、2采用卡接連接。上部器皿1和下部器皿2的形狀為橢圓形。隔離卡件3的形狀為長方形，環(huán)形密封墊4的外圈邊緣形狀與下部器皿2的形狀一致，即也為橢圓形，環(huán)形密封墊4的內(nèi)圈邊緣形狀與隔離卡件3的形狀一致，為長方形。且環(huán)形密封墊4與下部器皿2的周邊和隔離卡件3緊密接觸，上部器皿1與下部器皿2采用卡接連接。上部器皿1的高度為25mm，上部器皿1在長軸長度為55mm，短軸長度為45mm，下部器皿2的高度為15mm，下部器皿2在長軸長度為60mm，短軸長度為50mm。在上部器皿1和下部器皿2內(nèi)的兩個器皿內(nèi)設(shè)有圈成一圈的隔離板5，隔離板5將所在器皿分成兩個區(qū)間——內(nèi)區(qū)間6和外區(qū)間7，內(nèi)區(qū)間6為隔離板5圈內(nèi)的區(qū)間，外區(qū)間7為隔離板5圈外的區(qū)間，且隔離板5的高度要低于其所在器皿的高度。
在使用時可以在上部器皿1和下部器皿2的內(nèi)區(qū)間6內(nèi)分別放入已準備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，然后在其中一個器皿內(nèi)區(qū)間6的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本，在另一個器皿內(nèi)區(qū)間6的固體培養(yǎng)基上接種已知的苛養(yǎng)菌，然后將上、下器皿蓋緊，密封與外部空氣，已便于標本的培養(yǎng)。其中上部器皿和下部器皿中的固體培養(yǎng)基之間的間距為8mm。
實施例3如圖7、圖8、圖9所示，新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置由上、下相互吻合的器皿構(gòu)成，在上部器皿1的周邊設(shè)圍成一圈的隔離卡件3，隔離卡件3的高度低于上部器皿1的高度，隔離卡件3與相應的上部器皿1的外壁之間形成一區(qū)間，在區(qū)間內(nèi)的底部設(shè)有環(huán)形密封墊4。下部器皿2的上部邊緣9扣在上部器皿1的環(huán)形密封墊4上，上、下部器皿1、2采用卡接連接。上部器皿1和下部器皿2的底面形狀為正方形。隔離卡件3和環(huán)形密封墊4的形狀也為正方形。上部器皿1與下部器皿2采用卡接連接。上部器皿1的高度為12mm，上部器皿1底面邊長為80mm，下部器皿2的高度為22mm，下部器皿1底面邊長為75mm。在上部器皿1內(nèi)設(shè)有圈成一圈的隔離板5，隔離板5將所在上部器皿分成兩個區(qū)間——內(nèi)區(qū)間6和外區(qū)間7，內(nèi)區(qū)間6為隔離板5圈內(nèi)的區(qū)間，外區(qū)間7為隔離板5圈外的區(qū)間，且隔離板5的高度要低于其所在上部器皿1的高度。
在使用時可以在上部器皿1的內(nèi)區(qū)間6和外區(qū)間7內(nèi)分別放入已準備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，然后在內(nèi)區(qū)間6的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本，在外區(qū)間7的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上接種已知的苛養(yǎng)菌，然后將上、下器皿蓋緊，密封與外部空氣，已便于標本的培養(yǎng)。其中上部器皿和下部器皿中的固體培養(yǎng)基之間的間距為12mm。
實施例4如圖13、圖14、圖15所示，新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置由上、下相互吻合的器皿1、2構(gòu)成，在下部器皿2的周邊設(shè)圍成一圈的隔離卡件3，隔離卡件3的高度低于下部器皿1的高度，隔離卡件3與相應的下部器皿2的外壁之間形成一區(qū)間，在區(qū)間內(nèi)的底部設(shè)有環(huán)形密封墊4。上部器皿1的上部邊緣10扣在下部器皿2的環(huán)形密封墊4上，上、下部器皿1、2采用卡接連接。上部器皿1和下部器皿2的形狀可以為圓形，如圖10、圖11、圖12所示，上部器皿1和下部器皿2的形狀可以為正六邊形，邊長為35mm。上部器皿1和下部器皿2的形狀也可以為異形，如心形、卡通形狀等。隔離卡件3和環(huán)形密封墊4的形狀均為圓形，下部器皿2的高度為10mm，下部器皿2底面的內(nèi)徑為90mm，上部器皿1的高度為20mm，上部器皿1底面的外徑為86mm。在上部器皿1內(nèi)設(shè)有隔板8，隔板8的高度和隔離卡件3的高度之和至少要小于所在下部器皿2的高度。
使用時，在上部器皿1由隔板8所隔開的相互隔離的兩部分內(nèi)分別放入已準備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，由隔板8隔開的器皿的一部分內(nèi)的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，由隔板隔開的另一部分的器皿的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；然后將上、下器皿蓋緊，密封與外部空氣，已便于標本的培養(yǎng)。
實施例5新型厭氧菌培養(yǎng)的方法包括有如下步驟(1)、首先準備待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本，如人體或動物體分泌的濃汁、痰、胸腹水、分泌物、腦脊液、血液、尿液等。標本不能有污染。取下的標本要進快培養(yǎng)，不要把標本放置過久，防止厭養(yǎng)菌死亡及其他污染。培養(yǎng)前被用的厭養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)無細菌生長。
(2)、將步驟(1)所得標本在實施例1的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)；即將固體營養(yǎng)培養(yǎng)基置于實施例1的裝置中的上、下部器皿中，在一個器皿的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，在另一器皿的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本，將上部器皿與下部器皿旋緊密封，與外部空氣隔離，其中上部器皿和下部器皿中的營養(yǎng)培養(yǎng)基之間有間距，其間距至少大于5mm；然后將新型厭氧菌培養(yǎng)裝置放入37攝氏度恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)12h，觀察所述接種待培養(yǎng)的標本的細菌的生長；(3)、同時將步驟(1)所得標本在普通有氧環(huán)境下培養(yǎng)；通過以上三個步驟觀察所培養(yǎng)出的細菌菌落，得以判斷待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本是厭養(yǎng)菌、兼性厭養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌或非細菌感染中的任一種類型。
對待培養(yǎng)的物質(zhì)細菌種屬的判定方法(A)、將待培養(yǎng)的標本在用苛氧菌進行厭氧菌培養(yǎng)的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)，通過細菌生長的情況判定(a)、如沒有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本為苛養(yǎng)菌，或無細菌生長；(b)、如有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本可能為厭養(yǎng)菌或兼性厭養(yǎng)菌；(B)、將同樣的待培養(yǎng)的標本在普通有養(yǎng)環(huán)境下的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，通過細菌生長的情況判定(a)、如沒有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本為厭養(yǎng)菌，或無細菌生長；(b)、如有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本可能為苛養(yǎng)菌或兼性厭養(yǎng)菌；通過上述步驟(A)、(B)菌落生長的情況綜合得到四種檢測結(jié)果，(I)、通過(A、a)和(A、a)得到結(jié)果是無細菌生長，即該標本為非細菌感染；(II)、通過(A、a)和(B、b)得到結(jié)果是苛養(yǎng)菌，即該標本為苛養(yǎng)菌感染；(III)、通過(A、b)和(B、a)得到結(jié)果是厭養(yǎng)菌，即該標本為厭養(yǎng)菌感染；(IV)、通過(A、b)和(B、b)得到結(jié)果是兼性苛養(yǎng)菌，即該標本為兼性苛養(yǎng)菌感染。
然后將得到的菌種進一步進行生化鑒定。同時該方法可用做厭養(yǎng)菌的藥物敏感試驗。
實施例6新型厭氧菌培養(yǎng)的方法包括有如下步驟(1)、首先準備待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本，如人體或動物體分泌的濃汁、痰、胸腹水、分泌物、腦脊液、血液、尿液等。標本不能有污染。取下的標本要進快培養(yǎng)，不要把標本放置過久，防止厭養(yǎng)菌死亡及其他污染。培養(yǎng)前備用的厭養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)無細菌生長。
(2)、將步驟(1)所得標本在實施例2的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)；即在新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的上、下器皿的內(nèi)區(qū)間內(nèi)放入固體鑒別培養(yǎng)基，在一個器皿中內(nèi)區(qū)間的固體鑒別培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，在另一器皿中內(nèi)區(qū)間的固體鑒別培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本，將上部器皿與下部器皿旋緊密封，與外部空氣隔離，其中上部器皿和下部器皿中的固體鑒別培養(yǎng)基之間的間距為8mm；然后將苛氧菌進行厭氧菌培養(yǎng)的裝置放入37攝氏度恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10h，觀察接種待培養(yǎng)的標本的細菌的生長；(3)、同時將步驟(1)所得標本在普通有氧環(huán)境下培養(yǎng)；通過以上三個步驟觀察所培養(yǎng)出的菌落，得以判斷待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本是厭養(yǎng)菌、兼性厭養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌或非細菌感染中的任一種類型。
其對待培養(yǎng)的標本細菌種屬鑒定的方法如實施例5。然后將得到的菌種進一步進行生化鑒定。
該方法可用做厭養(yǎng)菌的藥物敏感試驗。
實施例7新型厭氧菌培養(yǎng)的方法包括有如下步驟(1)、首先準備待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本，如人體或動物體分泌的濃汁、痰、胸腹水、分泌物、腦脊液、血液、尿液等。標本不能有污染。取下的標本要進快培養(yǎng)，不要把標本放置過久，防止厭養(yǎng)菌死亡及其他污染。培養(yǎng)前被用的厭養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)無細菌生長。
(2)、將步驟(1)所得標本在實施例3的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)；在使用時可以在上部器皿1的內(nèi)區(qū)間6和外區(qū)間7內(nèi)分別放入固體選擇培養(yǎng)基，然后在內(nèi)區(qū)間6的固體選擇培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本，在外區(qū)間7內(nèi)的固體選擇培養(yǎng)基上接種已知的苛養(yǎng)菌，將上部器皿與下部器皿旋緊密封，與外部空氣隔離，其中上部器皿和下部器皿中的營養(yǎng)培養(yǎng)基之間的間距至少大于10mm；然后將苛氧菌進行厭氧菌培養(yǎng)的裝置放入37攝氏度恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h，觀察接種待培養(yǎng)的標本的菌落的生長；(3)、同時將步驟(1)所得標本在普通有氧環(huán)境下培養(yǎng)；通過以上三個步驟觀察所培養(yǎng)出的菌落，得以判斷待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本是厭養(yǎng)菌、兼性厭養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌或非細菌感染中的任一種。
其對待培養(yǎng)的標本細菌種屬鑒定的方法如實施例5。然后將得到的菌種進一步進行生化鑒定。
實施例8新型厭氧菌培養(yǎng)的方法，包括有如下步驟(1)、首先準備待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本，如人體或動物體分泌的濃汁、痰、胸腹水、分泌物、腦脊液、血液、尿液等。標本不能有污染。取下的標本要進快培養(yǎng)，不要把標本放置過久，防止厭養(yǎng)菌死亡及其他污染。培養(yǎng)前被用的厭養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)無細菌生長。
(2)、將步驟(1)所得標本在實施例4的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)；即在新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中，由隔板所隔開的下部器皿內(nèi)，相互隔離的兩部分內(nèi)分別放入固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基，由隔板隔開的一部分器皿的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，由隔板隔開的另一部分器皿的固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；將上部器皿與下部器皿旋緊密封，與外部空氣隔離，然后將苛氧菌進行厭氧菌培養(yǎng)的裝置放入37攝氏度恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15h，觀察接種待培養(yǎng)的標本的菌落的生長；(3)、同時將步驟(1)所得標本在普通有氧環(huán)境下培養(yǎng)；通過以上三個步驟觀察所培養(yǎng)出的菌落，得以判斷待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本是厭養(yǎng)菌、兼性厭養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌或非細菌感染中的任一種類型。
其對待培養(yǎng)的標本細菌種屬鑒定的方法如實施例5。然后將得到的菌種進一步進行生化鑒定。
實施例9用傳統(tǒng)的厭氧培養(yǎng)罐內(nèi)、厭氧培養(yǎng)袋的培養(yǎng)方法與該方法進行平行對照實驗培養(yǎng)。
實例說明

注其中，培養(yǎng)出的苛養(yǎng)菌有金黃色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，甲型鏈球菌，乙型鏈球菌，變形桿菌屬，肺炎克雷伯氏桿菌屬等。培養(yǎng)出的兼性厭養(yǎng)菌有肺炎球菌，埃希氏菌屬，葡萄球菌等。培養(yǎng)出的厭養(yǎng)菌有擬桿菌屬，梭桿菌屬，雙歧桿屬等。藥敏試驗略。
通過上表說明共培養(yǎng)各類標本總例數(shù)為52例，其中無細菌生長11例；培養(yǎng)出苛氧菌21例，兼性厭氧菌8例用本方法培養(yǎng)出厭氧菌12例，用厭氧袋法培養(yǎng)出厭氧菌8例，用厭氧罐法共培養(yǎng)出厭氧菌3例。從而可知采用本方法所培養(yǎng)的厭氧菌陽性率高，結(jié)果可靠，方法簡便，適合大、中、小微生物實驗室的厭氧菌培養(yǎng)、費用低、簡便易學，便于普及推廣的。用生物耗氧的方法創(chuàng)造無氧環(huán)境，取代物理、化學的方法。對推廣普及厭氧菌的培養(yǎng)起到很大的作用。利用苛氧菌在生長繁殖過程中將微環(huán)境中氧氣耗盡產(chǎn)生大量的CO2，造成厭氧環(huán)境，有利于厭氧菌的生長繁殖。隨著微生物學的發(fā)展，系列厭氧菌培養(yǎng)相關(guān)項目不斷更新，避免了現(xiàn)有的培養(yǎng)方法給病人造成的經(jīng)濟負擔，更重要的給臨床的診斷、治療造成困難和損失。而新方法簡單易行，經(jīng)濟實惠，適合于各級醫(yī)院、科研單位，且實驗準確、可靠、適用性強。
同時通過該方法對待培養(yǎng)的標本可通過厭氧培養(yǎng)，從而可更加準確的對待培養(yǎng)的標本判定該標本可能屬于的四種情形無細菌生長、苛養(yǎng)菌感染、厭養(yǎng)菌感染、兼性苛養(yǎng)菌感染，其結(jié)果可靠，方法簡便，適合大、中、小微生物實驗室的種屬鑒定、費用低、簡便易學，便于普及推廣。其對于臨床醫(yī)學具有極其實用的意義和價值。
實施例10采用本發(fā)明的方法，以培養(yǎng)濃汁為例其所用器皿可采用實施例1的厭氧菌培養(yǎng)的裝置。
第一步、將待培養(yǎng)的濃汁按實施例5方法培養(yǎng)，其中固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上接種的苛氧菌為大腸桿菌，將兩種不同條件的培養(yǎng)基即在厭氧菌培養(yǎng)的裝置中進行無氧環(huán)境下培養(yǎng)的培養(yǎng)基和有氧環(huán)境培養(yǎng)的培養(yǎng)基，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)過夜之后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，有氧培養(yǎng)無細菌生長，而在本厭氧培養(yǎng)的裝置內(nèi)的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上有直徑約2mm，圓形，微凸，灰白色，表面光滑，邊緣整齊，不溶血的菌落生成。涂片革蘭氏染色，顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)長短不一，兩端鈍圓而濃染的革蘭氏陰性桿菌。初步鑒定為革蘭氏陰性厭氧桿菌屬。
第二步(1)、把第一步培養(yǎng)出來的厭氧菌分別接種在葡萄糖、乳糖、麥芽糖、苷露醇、蔗糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、海藻糖、水楊素、七葉苷、液化明膠、靛基質(zhì)、觸酶試驗和20％膽汁的微量反應鑒定管內(nèi)，把以上微量反應鑒定管放在實施例1所述的一個新的厭氧菌培養(yǎng)的裝置的下部器皿2內(nèi)，在該裝置的上部器皿內(nèi)的固體培養(yǎng)基上接種大腸桿菌。將上、下部器皿吻合旋緊密封，與外界空氣隔絕；(2)、采用實施例5所用的方法，把第一步培養(yǎng)出來的厭氧菌均勻涂在另一個新的厭氧菌培養(yǎng)的裝置的下部器皿的固體營養(yǎng)培養(yǎng)基上，再在涂有該厭氧菌的培養(yǎng)基上分別貼上青霉素、慶大霉素、萬古霉素、卡那霉素、紅霉素和利福平的藥敏紙片。在該厭氧菌培養(yǎng)的裝置的上部器皿的固體培養(yǎng)基接種大腸桿菌。將上、下部器皿吻合旋緊密封，與外界空氣隔絕；將(1)和(2)所用的兩個厭氧菌培養(yǎng)的裝置一起放入37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)過夜。結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥敏試驗；本厭氧菌對青霉素、慶大霉素、萬古霉素和卡那霉素耐藥；紅霉素和利福平敏感。
生化鑒定本厭氧菌在葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、木糖、七葉苷、液化明膠和20％的膽汁呈陽性反應。對苷露醇、阿拉伯糖、鼠李糖、海藻糖、水楊素、靛基質(zhì)、觸酶試驗呈陰性反應。
結(jié)論通過以上鑒定該厭氧菌為為脆弱擬桿菌群。
權(quán)利要求
1.一種新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置，其特征在于，其由上、下相互吻合的器皿構(gòu)成，在所述上部器皿或下部器皿的任一器皿內(nèi)的周邊設(shè)有圍成一圈的隔離卡件，且所述隔離卡件的高度低于所在器皿的高度，所述隔離卡件與相應的器皿的外壁之間形成一區(qū)間，在所述區(qū)間內(nèi)的底部設(shè)有環(huán)形密封墊，所述另一器皿的上部邊緣扣在設(shè)有環(huán)形密封墊的所述器皿的環(huán)形密封墊上，所述上、下部器皿采用螺紋或卡接連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置，其特征在于，所述上、下部器皿的底面形狀為圓形、橢圓形、四邊形、多邊形或異形。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置，其特征在于，所述隔離卡件的形狀為圓形、橢圓形、四邊形、多邊形或異形。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置，其特征在于，所述環(huán)形密封墊的外圈邊緣與設(shè)有環(huán)形密封墊的所述器皿的底面形狀一致，所述環(huán)形密封墊的內(nèi)圈邊緣與所述隔離卡件的形狀一致。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置，其特征在于，所述上、下部器皿的高度為5-25mm，所述上、下部器皿的底面積為15cm2-140cm2，且在設(shè)有隔離卡件和環(huán)形密封墊的器皿的高度低于所述另一個器皿的高度。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置，其特征在于，在所述上部器皿或下部器皿內(nèi)的一個器皿或兩個器皿內(nèi)設(shè)有圈成一圈的隔離板，所述隔離板將所在器皿分成兩個區(qū)間——內(nèi)區(qū)間和外區(qū)間，所述內(nèi)區(qū)間為所述隔離板圈內(nèi)的區(qū)間，所述外區(qū)間為所述隔離板圈外的區(qū)間，且所述隔離板的高度要低于其所在器皿的高度。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置，其特征在于，在所述上部器皿或下部器皿的任一個器皿內(nèi)設(shè)有隔板，所述隔板將其所述器皿分成相互隔離的兩個區(qū)間，且所述隔板低于所在器皿的高度。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括有如下步驟(1)、首先準備待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本；(2)、將步驟(1)所得標本在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)；即將已制備好的固體培養(yǎng)基置于所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的器皿中，冷卻、凝固，在盛有所述固體培養(yǎng)基的一個器皿中接種已知苛養(yǎng)菌，在盛有所述固體培養(yǎng)基的另一器皿中接種待培養(yǎng)的標本；或在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的所述上、下器皿的內(nèi)區(qū)間內(nèi)放入已制備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，在一個器皿中內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，在所述另一器皿中內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；或在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的所述上部器皿或下部器皿的任一器皿的內(nèi)區(qū)間內(nèi)和外區(qū)間放入已制備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，在所述內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，在所述外區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；或在所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中的所述上、下器皿的任一器皿，由隔板所隔開的相互隔離的兩個區(qū)間內(nèi)分別放入已制備好的固體培養(yǎng)基，冷卻、凝固，由所述隔板隔開的所述一部分內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種已知苛養(yǎng)菌，由所述隔板隔開的所述另一部分內(nèi)區(qū)間的固體培養(yǎng)基上接種待培養(yǎng)的標本；所述上部器皿與所述下部器皿旋緊密封，與外部空氣隔離，其中所述上部器皿和所述下部器皿中的所述固體培養(yǎng)基之間的間距至少大于5mm；然后將所述新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置放入37攝氏度恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10-18h，觀察所述接種待培養(yǎng)的標本的細菌的生長；(3)、同時將步驟(1)所得標本在普通有氧環(huán)境下培養(yǎng)；(4)、通過以上三個步驟觀察所培養(yǎng)出的細菌菌落，得以判斷待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本是厭養(yǎng)菌、兼性厭養(yǎng)菌、苛養(yǎng)菌或無細菌生長的任一種類型。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，步驟(4)是通過如下方法判定(A)、將所述待培養(yǎng)的標本在新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)，通過細菌生長的情況判定(a)、如沒有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本為苛養(yǎng)菌，或無細菌生長；(b)、如有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本可能為厭養(yǎng)菌或兼性厭養(yǎng)菌；(B)、將所述待培養(yǎng)的標本在普通有養(yǎng)環(huán)境下的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，通過細菌生長的情況判定(a)、如沒有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本為厭養(yǎng)菌，或無細菌生長；(b)、如有細菌生長，則所述待培養(yǎng)的標本可能為苛養(yǎng)菌或兼性厭養(yǎng)菌；通過上述步驟(A)、(B)細菌生長的情況綜合得到四種檢測結(jié)果，(I)、通過(A、a)和(B、a)得到結(jié)果是無細菌生長；(II)、通過(A、a)和(B、b)得到結(jié)果是苛養(yǎng)菌，即該標本為苛養(yǎng)菌感染；(III)、通過(A、b)和(B、a)得到結(jié)果是厭養(yǎng)菌，即該標本為厭養(yǎng)菌感染；(IV)、通過(A、b)和(B、b)得到結(jié)果是兼性苛養(yǎng)菌，即該標本為兼性苛養(yǎng)菌感染。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述待培養(yǎng)的標本為人體或動物體分泌的濃汁、痰、胸腹水、分泌物、腦脊液、血液、尿液等。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基是固體基礎(chǔ)培養(yǎng)基、固體營養(yǎng)培養(yǎng)基、固體選擇培養(yǎng)基、固體鑒別培養(yǎng)基的任一種。
12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，該方法可用做厭養(yǎng)菌的藥物敏感試驗。
13.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種新型厭氧菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述放入上、下部器皿的已準備好的固體培養(yǎng)基的厚度至少為3mm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種專門培養(yǎng)厭氧菌的裝置及方法，該裝置由上、下相互吻合的器皿構(gòu)成，在任一器皿內(nèi)的周邊設(shè)有隔離卡件，隔離卡件與相應的器皿的外壁之間形成的區(qū)間內(nèi)設(shè)有環(huán)形密封墊。該方法包括有如下步驟(1)準備待培養(yǎng)的物質(zhì)——標本；(2)在新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置中進行無氧環(huán)境培養(yǎng)；(3)同時將步驟(1)的標本在普通有氧環(huán)境下培養(yǎng)；(4)判定。優(yōu)點是新型厭氧菌培養(yǎng)的裝置結(jié)構(gòu)簡單、操作方法簡便，經(jīng)濟實用，適宜廣泛推廣，不僅能給病人提供直接、有效、經(jīng)濟的診斷標準，同時對厭氧菌的培養(yǎng)結(jié)果準確、可靠。新型厭氧菌培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出的厭氧菌陽性率高，結(jié)果可靠，適合大、中、小微生物實驗室的厭氧菌培養(yǎng)、費用低。
文檔編號C12M3/00GK1635109SQ200410090290
公開日2005年7月6日 申請日期2004年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月4日
發(fā)明者王慧勇, 王懋 申請人:王慧勇