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      檢測(cè)沙眼衣原體的方法及試劑盒的制作方法

      文檔序號(hào):426062閱讀:596來源:國知局
      專利名稱:檢測(cè)沙眼衣原體的方法及試劑盒的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明涉及一種檢測(cè)沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis)的方法及試劑盒。
      背景技術(shù)
      沙眼衣原體是一種非淋球菌尿道炎病原體,一種檢測(cè)其的方法是通過基因擴(kuò)增方法對(duì)沙眼衣原體細(xì)胞中的多拷貝的隱蔽性質(zhì)粒的部分序列進(jìn)行擴(kuò)增,并檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的方法參見(日本專利Nos.2719225和3127135)。

      發(fā)明內(nèi)容
      本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有較高敏感性和專一性的快速檢測(cè)沙眼衣原體的方法及試劑盒。
      本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn),如果使用根據(jù)沙眼衣原體的隱蔽性質(zhì)粒pLGV440的特定區(qū)域設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR,沙眼衣原體就可以被快速的檢測(cè),由此完成本發(fā)明。
      本發(fā)明提供了一種檢測(cè)沙眼衣原體的方法,包括使用從樣品中獲得的DNA作為模板進(jìn)行PCR并檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物,其中用于PCR的引物對(duì)是根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQID NO1的核苷酸序列中5157到5201位和5245到5276位的核苷酸序列設(shè)計(jì)的,擴(kuò)增這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列(本發(fā)明的檢測(cè)方法)。
      本發(fā)明還提供了應(yīng)用于本發(fā)明的方法的試劑盒,也就是,通過使用從樣品中獲得的DNA作為模板進(jìn)行PCR以檢測(cè)沙眼衣原體的試劑盒,該試劑盒包括根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中的5157到5201位和5245到5276位的核苷酸序列設(shè)計(jì)的引物對(duì),擴(kuò)增這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列(本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒)。
      本發(fā)明中,所述引物對(duì)優(yōu)選由具有SEQ ID NO2,3或4的核苷酸序列的寡核苷酸和具有SEQ ID NO5或6的核苷酸序列的寡核苷酸組成,更優(yōu)選由具有SEQ ID NO3的序列的寡核苷酸和具有SEQ ID NO5的序列的寡核苷酸,或具有SEQ ID NO4的序列的寡核苷酸和具有SEQ ID NO6的序列的寡核苷酸組成。
      本發(fā)明還提供了包含下述寡核苷酸和標(biāo)記物的雜交探針,所述寡核苷酸根據(jù)對(duì)應(yīng)于核苷酸序列SEQ ID NO1的5210到5245位區(qū)域的核苷酸序列設(shè)計(jì)的。
      核苷酸序列SEQ ID NO1是沙眼衣原體隱蔽性質(zhì)粒pLGV440的核苷酸序列(GenBank登錄號(hào)X06707),本領(lǐng)域技術(shù)人員在考慮到個(gè)體差異或其他類似因素導(dǎo)致的核苷酸序列差異的情況下,能夠很容易地鑒定并識(shí)別出具有突變的pLGV440的菌株中也存在的相應(yīng)于核苷酸序列SEQ ID NO1中的相應(yīng)核苷酸所表示的區(qū)域。
      附圖簡(jiǎn)述

      圖1顯示了一種擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生時(shí)間過程(實(shí)時(shí)PCR的檢測(cè)結(jié)果)a無拷貝,b2個(gè)拷貝,c20個(gè)拷貝,d200個(gè)拷貝,和e2000個(gè)拷貝。
      實(shí)施本發(fā)明的最佳方式(1)本發(fā)明的檢測(cè)方法本發(fā)明的檢測(cè)方法是一種包括將從樣品中獲得的DNA作為模板進(jìn)行PCR并檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的沙眼衣原體檢測(cè)方法,其中PCR所使用的引物對(duì)是根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中5157到5201位核苷酸和5245到5276位核苷酸的區(qū)域的核苷酸序列設(shè)計(jì)的,以使這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列被擴(kuò)增。
      樣品沒有特別的限制,只要包含或可能包含沙眼衣原體即可。這樣的例子包括尿,尿道拭子,子宮頸拭子等等??梢詮倪@些樣品中,在可以制備沙眼衣原體隱蔽性質(zhì)粒的條件下用常規(guī)方法提取出DNA。
      本發(fā)明的檢測(cè)方法中的PCR可以根據(jù)常規(guī)的PCR程序進(jìn)行,除了樣品中獲得的DNA用作模板并應(yīng)用特定的引物對(duì)之外。
      本發(fā)明中的引物對(duì)是根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中5157到5201位核苷酸的區(qū)域(第一區(qū)域)的核苷酸序列和對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中5245到5276位核苷酸的區(qū)域(第二區(qū)域)設(shè)計(jì)的,因此這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列可被擴(kuò)增。
      引物的長(zhǎng)度通常是10到40個(gè)核苷酸。并且,每個(gè)區(qū)域的位置和引物的長(zhǎng)度優(yōu)選設(shè)置為以使得Tm值應(yīng)為55到70℃,因此PCR中使用的退火溫度可以設(shè)置得相對(duì)高一些。此處的Tm值是用最近的相鄰堿基對(duì)分析計(jì)算出的數(shù)值。組成引物對(duì)的引物優(yōu)選設(shè)計(jì)成具有基本相同的Tm值。
      根據(jù)第一區(qū)域設(shè)計(jì)的引物的具體的例子包括具有核苷酸序列SEQ ID NO2(對(duì)應(yīng)于核苷酸序列SEQ ID NO1的5157到5185位核苷酸)的引物或其互補(bǔ)序列,具有核苷酸序列SEQ ID NO3(對(duì)應(yīng)于核苷酸序列SEQ ID NO1的5171到5201位核苷酸)的引物或其互補(bǔ)序列,和具有核苷酸序列SEQ IDNO4(對(duì)應(yīng)于核苷酸序列SEQ ID NO1的5171到5196位核苷酸)的引物或其互補(bǔ)序列。根據(jù)第二區(qū)域設(shè)計(jì)的引物的具體的例子包括具有核苷酸序列SEQ ID NO6(對(duì)應(yīng)于核苷酸序列SEQ ID NO1的5276到5252位核苷酸)的引物或其互補(bǔ)序列,和具有核苷酸序列SEQ ID NO7(對(duì)應(yīng)于核苷酸序列SEQ ID NO1的5276到5246位核苷酸)的引物或其互補(bǔ)序列。
      引物對(duì)設(shè)計(jì)成使這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列可以被擴(kuò)增,也就是,一條引物應(yīng)該是正義引物另一條應(yīng)該是反義引物。由于隱蔽性質(zhì)粒是一種環(huán)形質(zhì)粒,這兩個(gè)區(qū)域之間有兩段核苷酸序列。然而,引物通常設(shè)計(jì)成使較短的核苷酸序列被擴(kuò)增。
      引物對(duì)的優(yōu)選例子包括具有核苷酸序列SEQ ID NO2,3,或4的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO5或6的寡核苷酸的組合。并且,引物對(duì)更優(yōu)選的例子包括具有核苷酸序列SEQ ID NO3的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO5的寡核苷酸的組合,以及具有核苷酸序列SEQ ID NO4的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO6的寡核苷酸的組合。
      針對(duì)前述特定區(qū)域的引物對(duì),領(lǐng)域的技術(shù)人員可以在考慮到PCR條件的基礎(chǔ)上通過公知的方法進(jìn)行設(shè)計(jì)??梢允褂糜?jì)算機(jī)程序設(shè)計(jì)引物對(duì)。
      引物可通過混合兩種或多種正義引物和反義引物中的一種或兩種引物設(shè)計(jì)成混合引物。當(dāng)用于引物設(shè)計(jì)的區(qū)域發(fā)生了核苷酸突變時(shí),可以使用混合引物提高檢測(cè)效率。
      雖然PCR條件可以根據(jù)常規(guī)PCR方法設(shè)定,由于前述特定的引物對(duì)的使用,退火溫度應(yīng)設(shè)定得相對(duì)較高。退火溫度通常是50到70℃。因?yàn)橥嘶饻囟认鄬?duì)較高,在同等條件下進(jìn)行退火和延伸的兩步PCR的條件即可確定。
      PCR反應(yīng)混合物的組成的典型實(shí)例如下所示。
      DNA片段1分子或更多引物 100到2000nM核苷酸 每種100到500μMDNA聚合酶 0.25到1.25單位/μlTris-HCl(pH7到9) 1到5mMMgcl21.5到5mM表面活性劑或凝膠 0到25%(終體積25到100μl)此外,下面給出了一個(gè)溫度循環(huán)的典型例子,所述溫度循環(huán)通常重復(fù)30到60次。
      (1)變性90到95℃,1到60秒(2)退火55到70℃,6到60秒(3)延伸72到75℃,6到60秒下面給出了一個(gè)兩步PCR的溫度循環(huán)的典型例子,所述溫度循環(huán)通常重復(fù)30到60次。
      (1)變性90到95℃,1到60秒(2)退火和延伸55到70℃,6到60秒在本發(fā)明的檢測(cè)方法中,延伸產(chǎn)物可通過常規(guī)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的方法檢測(cè)。例如,擴(kuò)增產(chǎn)物可以通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),或通過實(shí)時(shí)PCR檢測(cè),其中PCR在底物存在下進(jìn)行,該底物當(dāng)與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合時(shí)熒光發(fā)生改變(例如,熒光染料,當(dāng)其與雙鏈DNA結(jié)合時(shí)其熒光強(qiáng)度發(fā)生改變,設(shè)計(jì)雜交探針以使其與單鏈DNA雜交,并且熒光強(qiáng)度會(huì)因雜交引起的熒光共振能量傳遞而改變等等),然后測(cè)量熒光。
      根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法,對(duì)于特定的區(qū)域可以設(shè)計(jì)具有相對(duì)高Tm值的引物,因而PCR中的退火溫度可以相對(duì)較高。相應(yīng)的,從變性溫度到退火溫度的降溫時(shí)間可以減少。此外,高退火溫度可使非特異性擴(kuò)增減少。而且,也可以實(shí)施在相同條件下進(jìn)行退火和延伸的兩步PCR。結(jié)果是,基因的擴(kuò)增更快的進(jìn)行。
      本發(fā)明還提供一種適于雜交檢測(cè)的雜交探針。這樣的雜交探針例子包括含有寡核苷酸和標(biāo)記物的探針,該寡核苷酸是根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中的核苷酸數(shù)5210到5245的區(qū)域的核苷酸序列設(shè)計(jì)的。這種寡核苷酸可以與正義或反義鏈互補(bǔ)。
      雜交探針的寡核苷酸鏈的長(zhǎng)度和Tm值可以根據(jù)雜交條件適當(dāng)?shù)拇_定。寡核苷酸的長(zhǎng)度通常是25到45個(gè)核苷酸,Tm值通常是50到70℃。當(dāng)雜交探針用于實(shí)時(shí)PCR時(shí),寡核苷酸Tm值優(yōu)選設(shè)置比引物的Tm值高2到5℃以致于探針可以在引物雜交前先行與目標(biāo)序列雜交。這樣的寡核苷酸的例子包括具有SEQ ID NO7的核苷酸序列的寡核苷酸。
      雜交探針可以在雜交條件下雜交不被抑制的方式進(jìn)行標(biāo)記。實(shí)時(shí)PCR的雜交探針優(yōu)選通過在與單鏈DNA雜交時(shí)熒光強(qiáng)度發(fā)生改變的方式進(jìn)行標(biāo)記。
      在本發(fā)明的檢測(cè)方法中,擴(kuò)增產(chǎn)物優(yōu)選通過使用本發(fā)明的雜交探針的檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)。
      (2)本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒是一種適用于本發(fā)明的檢測(cè)方法的試劑盒,也就是,一種以從樣品中獲得的DNA作為模板進(jìn)行PCR檢測(cè)沙眼衣原體的試劑盒,其特征在于包括根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中的5157到5201位核苷酸和5245到5276位核苷酸的區(qū)域的序列設(shè)計(jì)的引物對(duì),以使這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列可以被擴(kuò)增。
      該引物對(duì)如上文本發(fā)明檢測(cè)方法中所述。
      在本發(fā)明的試劑盒中,所述的引物可以單獨(dú)地,或以混合物形式包括于引物對(duì)中。
      本發(fā)明的試劑盒除了引物對(duì)之外還包括用于PCR和/或檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物所需試劑。這些試劑的例子包括前述的雜交引物。
      實(shí)施例下面,將參考下述實(shí)施例更具體地解釋本發(fā)明。
      實(shí)施例1通過PCR檢測(cè)從沙眼衣原體的隱蔽性質(zhì)粒的核苷酸序列(SEQ ID NO1,GenBank登錄號(hào)X06707)的第一區(qū)域(5157到5201位核苷酸)和第二區(qū)域(5245到5276位核苷酸),選擇了具有高GC含量(48到55%)和高Tm值(63到65℃)(通過最近相鄰堿基對(duì)方法計(jì)算出)的核苷酸序列。也就是,選擇3種類型的上游引物(SEQ ID NO2,3和4)和2種類型的下游引物(SEQ ID NO5和6)作為目標(biāo)結(jié)合序列。然后,合成具有這些目標(biāo)結(jié)合序列的寡核苷酸作為引物。
      表1上游(正向)引物CT-F5157-29cag tca cac cca aaa gct ctg gga gca tg(SEQ IDNO2)CT-F5171-31agc tct ggg agc atg ttc tta gtc tca gca g(SEQID NO3)CT-F5171-26agc tct ggg agc atg ttc tta gtc tc(SEQ ID NO4)下游(反向)引物CT-R5276-25tcg cgt agg gct tag aat cac ctt c(SEQ ID NO5)CT-R5276-31tcg cgt agg gct tag aat cac ctt ctc gta c(SEQID NO6)使用包括前述上游和下游擴(kuò)增引物(SEQ ID NOS2-5,3-5和4-6)的組合的三種引物進(jìn)行PCR。反應(yīng)混合物(25uL)包含了1x基因Taq緩沖液,0.625U Gene Taq聚合酶(Nippon Gene),dGTP,dCTP,dATP和dUTP各0.2mM,上游和下游引物各0.5μM,和2到2000拷貝沙眼衣原體細(xì)胞基因組DNA(ATCC菌株CT-VR878)。為確定適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)溫度,使用了溫度梯度作為在iCycler(BIORAD)中擴(kuò)增反應(yīng)的退火溫度進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)溫度如下所示95℃4分鐘,(95℃30秒,62到72℃梯度30秒,72℃30秒)x50循環(huán),然后72℃7分鐘。擴(kuò)增的出現(xiàn)通過將產(chǎn)物上3%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行確認(rèn)。
      無論使用那一個(gè)引物對(duì),可以在相對(duì)較高的退火溫度條件64.0到68.2℃下檢測(cè)2拷貝的沙眼衣原體細(xì)胞基因組DNA。
      上述結(jié)果顯示前述引物序列有較好的敏感性和專一性,對(duì)于縮短反應(yīng)時(shí)間是有效的。
      實(shí)施例2利用兩步PCR的檢測(cè)在實(shí)施例1中使用的引物對(duì)中,引物對(duì)SEQ ID NOS3-5和4-6用于兩步PCR。反應(yīng)混合物(25μL)包含1xΔTth緩沖液,0.625U ΔTth(TOYOBO),各0.2mM的dGTP,dCTP,dATP和dUTP,各0.5μM的上游和下游引物,和2到2000拷貝的沙眼衣原體細(xì)胞基因組DNA(ATCC菌株CT-VR878)。反應(yīng)溫度如下所示95℃1分鐘,(95℃15秒,65或68℃20秒)x2循環(huán),以及(90℃15秒,65或68℃20秒)x58循環(huán)。反應(yīng)使用熱循環(huán)器(TaKaRa)進(jìn)行。擴(kuò)增的出現(xiàn)通過將產(chǎn)物上3%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行確認(rèn)。
      當(dāng)使用引物對(duì)SEQ ID NOS4-5時(shí),可以在退火溫度為68℃時(shí)檢測(cè)2拷貝的沙眼衣原體細(xì)胞基因組DNA。當(dāng)使用引物對(duì)SEQ ID NOS6-7時(shí),可以在退火溫度65℃時(shí)檢測(cè)2拷貝的沙眼衣原體細(xì)胞基因組DNA。
      上述結(jié)果顯示可以將兩步PCR的反應(yīng)時(shí)間進(jìn)一步縮短。
      實(shí)施例3利用實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)在實(shí)施例1中使用的引物對(duì)中,引物對(duì)SEQ ID NOS3-5用于兩步PCR。反應(yīng)混合物(25μL)包含1xΔTth緩沖液,0.625U ΔTth(TOYOBO),各0.2mM的dGTP,dCTP,dATP和dUTP,1μM上游引物,0.5μM下游引物,0.2μM實(shí)時(shí)檢測(cè)的探針(5FL-CT-5210-365’-caa agc tag aac aac gcc gcc ttc cat tcttga tgc-3’(SEQ ID NO7),5’端的c使用熒光染料標(biāo)記,標(biāo)記物種類BODIPY-FL(Molecular Probe)),和2到2000拷貝沙眼衣原體細(xì)胞基因組DNA(ATCC菌株CT-VR878)。反應(yīng)溫度如下所示95℃1分鐘,(95℃15秒,65℃20秒)x2循環(huán),(90℃15秒,65℃20秒)x58循環(huán)。反應(yīng)在icycler(BIO-RAD)中進(jìn)行。實(shí)時(shí)檢測(cè)程序按照日本專利公開(特開)No.2001-286300所述。
      結(jié)果顯示在圖1中,使用實(shí)施例中的引物對(duì),可以在退火溫度為65℃時(shí)檢測(cè)2拷貝的沙眼衣原體細(xì)胞基因組DNA。
      工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供了一種具有較高的敏感性和專一性的快速檢測(cè)沙眼衣原體的方法。
      序列表&lt;110&gt;Arkray.Inc.
      &lt;120&gt;檢測(cè)沙眼衣原體的方法及試劑盒&lt;130&gt;G849-OPC4043&lt;150&gt;JP 2003-50662&lt;151&gt;2003-02-27&lt;160&gt;7&lt;210&gt;1&lt;211&gt;7501&lt;212&gt;DNA&lt;213&gt;沙眼衣原體&lt;400&gt;1tttgcaactc ttggtggtag actttgcaac tcttggtggt agactttgca actcttggtg 60gtagactttg caactcttgg tggtagactt ggtcataatg gacttttgtt gaaaaatttc120ttaaaatctt agagctccga ttttgaatag ctttggttaa gaaaatgggc tcgatggctt180tccataaaag taggttgttc ttaacttttg gggacgcgtc ggaaatttgg ttatctactt240tatctcatct aactagaaaa aattatgcgt ctgggattaa ctttcttgtt tctttagaga300ttctggattt atcggaaacc ttgataaagg ctatttctct tgaccacagc gaatctttgt360ttaaaatcaa gtctctagat gtttttaatg gaaaagtcgt ttcagaggcc tctaaacagg420ctagagcggc atgctacata tctttcacaa agtttttgta tagattgacc aagggatata480ttaaacccgc tattccattg aaagattttg gaaacactac attttttaaa atccgagaca540aaatcaaaac agaatcgatt tctaagcagg aatggacagt tttttttgaa gcgctccgga600tagtgaatta tagagactat ttaatcggta aattgattgt acaagggatc cgtaagttag660acgaaatttt gtctttgcgc acagacgatc tattttttgc atccaatcag atttcctttc720gcattaaaaa aagacagaat aaagaaacca aaattctaat cacatttcct atcagcttaa780tggaggagtt gcaaaaatac acttgtggga gaaatgggag agtatttgtt tctaaaatag840ggattcctgt aacaacaagt caggttgcgc ataattttag gcttgcagag ttctatagtg900ctatgaaaat aaaaattact cctagagtac ttcgtgcaag cgctttgatt catttaaagc960aaataggatt aaaagatgag gaaatcatgc gtatttcctg tctttcatcg agacaaagtg 1020tgtgttctta ttgttctggg gaagaggtaa gtcctctagt acaaacaccc ccaatattgt 1080gatataatta aaattatatt catattctgt tgccagaaaa aacactttta ggctatatta 1140gagccaatct tctttgaagc gttgtcttct cgagaagatt tatcgtacgc aaatatcatc 1200tttgcggttg cgtgtcctgt gaccttcatt atgtcggagt ctgagcaccc taggcgtttg 1260tactccgtca cagcggttgc tcgaagcacg tgcggggtta tcttaaaagg gattgcagct 1320tgtagtcctg cttgagagaa cgtgcgggcg atttgcctta accccaccat ttttccggag 1380cgagttacga agacaaaacc tcttcgttga ccgatgtact cttgtagaaa gtgcataaac 1440ttctgaggat aagttataat aatcctcttt tctgtctgac ggttcttaag ctgggagaaa 1500
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      &lt;223&gt;引物&lt;400&gt;2cagtcacacc caaaagctct gggagcatg 29&lt;210&gt;3&lt;211&gt;31&lt;212&gt;DNA&lt;213&gt;人工序列&lt;220&gt;
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      &lt;223&gt;引物
      &lt;400&gt;4agctctggga gcatgttctt agtctc 26&lt;210&gt;5&lt;211&gt;25&lt;212&gt;DNA&lt;213&gt;人工序列&lt;220&gt;
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      &lt;223&gt;探針&lt;400&gt;7caaagctaga acaacgccgc cttccattct tgatgc 3權(quán)利要求
      1.一種用于檢測(cè)沙眼衣原體的方法,該方法包括將從樣品中獲得的DNA作為模板進(jìn)行PCR并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),其中PCR所使用的引對(duì)物對(duì)是根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中的5157到5201位和5245到5276位的核苷酸序列設(shè)計(jì)的,以擴(kuò)增這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其中引物對(duì)由具有核苷酸序列SEQ IDNO2,3,或4的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO5或6的寡核苷酸組成。
      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其中引物對(duì)由具有核苷酸序列SEQ IDNO3的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO5的寡核苷酸組成,或由具有核苷酸序列SEQ ID NO4的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO6的寡核苷酸組成。
      4.一種用于以由樣品中獲得的DNA作為模板進(jìn)行PCR來檢測(cè)沙眼衣原體的試劑盒,包括根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中的5157到5201位和5245到5276位的核苷酸序列設(shè)計(jì)的,用于擴(kuò)增這兩個(gè)區(qū)域之間的核苷酸序列的引物對(duì)。
      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒,其中所述引物對(duì)由具有核苷酸序列SEQID NO2,3,或4的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO5或6的寡核苷酸組成。
      6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒,其中引物對(duì)由具有核苷酸序列SEQ IDNO3的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO5的寡核苷酸組成,或由具有核苷酸序列SEQ ID NO4的寡核苷酸和具有核苷酸序列SEQ ID NO6的寡核苷酸組成。
      7.一種雜交探針,包括寡核苷酸和標(biāo)記物,其中,所述寡核苷酸是根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1的核苷酸序列中的5210到5245位的核苷酸序列設(shè)計(jì)的。
      全文摘要
      一種檢測(cè)沙眼衣原體的方法,包括以從樣品中獲得的DNA作為模板進(jìn)行PCR并檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。其中,用于PCR的引物對(duì)是根據(jù)對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO1所示堿基序列的NO.5157到5201和5245到5276位的堿基序列設(shè)計(jì)的,以擴(kuò)增這兩個(gè)區(qū)域之間的堿基序列。由此提供了一種具有較高敏感性和專一性的快速檢測(cè)沙眼衣原體的方法。
      文檔編號(hào)C12Q1/68GK1754001SQ20048000519
      公開日2006年3月29日 申請(qǐng)日期2004年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月27日
      發(fā)明者豬瀨健, 堀井美希 申請(qǐng)人:愛科來株式會(huì)社
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