專利名稱：釀酒酵母工程菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及釀酒酵母工程菌，以及該釀酒酵母工程菌在麩曲白酒生產(chǎn)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
太空誘變育種技術(shù)是將借助太空微重加重離子、多種宇宙射線、大交變磁場、短期過載和超真空等地面不可模擬的因素影響及誘變作用，使其生理和遺傳特性發(fā)生改變，并經(jīng)過地面選育獲得穩(wěn)定的生理和遺傳性狀，從中篩選出優(yōu)良菌株的過程，是集航天技術(shù)、生物技術(shù)和育種技術(shù)相結(jié)合的一項新途徑，在國內(nèi)外已有許多成功實例。
高溫制曲和高溫發(fā)酵是生產(chǎn)醬香型白酒的特殊工藝之一，雖然目前的釀酒酵母菌種如南陽混合酵母1308、K氏酵母、AS2109等在麩曲白酒生產(chǎn)過程已得到廣泛應(yīng)用，但這些菌種不耐高溫且得到的產(chǎn)品不具有醬香型白酒風(fēng)格。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述缺點而提供的一種同時具有產(chǎn)酒率高、產(chǎn)香能力強及耐高溫的特性，應(yīng)用于麩曲白酒生產(chǎn)，能使酒糟或添加高梁及其它釀酒原料生產(chǎn)出的翻沙酒和碎沙酒具有一定的醬香型白酒獨特風(fēng)格的釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)。
本發(fā)明的另一目的在于提供該釀酒酵母工程菌在麩曲白酒生產(chǎn)應(yīng)用。
本發(fā)明的釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)，其發(fā)酵和產(chǎn)香特性為在YEPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h接入YEPD發(fā)酵培養(yǎng)基，于36℃發(fā)酵3d，CO2失重8.36(g)，酒精含量6.43％(v/v)20℃，總酯含量0.64(g/L)。
上述的釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)，最佳發(fā)酵溫度為34～38℃。
該菌種已于2005年03月23日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，中國科學(xué)院微生物研究所)，保藏號CGMCC NO.1333，名稱為釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。
釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)的篩選方法(1)酵母菌篩選采用TTC平板初篩法選用神丹五號搭載的茅臺酒高溫大曲，從該酒曲中分離篩選各供試菌株對應(yīng)點接于TTC下層培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)2～3d，將已滅菌的TTC上層培養(yǎng)基冷卻至60℃，加入TTC染色劑溶液，混勻，立即傾于上述長出菌落的TTC下層平板上，28℃培養(yǎng)2～3h，觀察菌落變色快慢及顏色深淺，產(chǎn)酒精能力強的酵母菌落呈深紅色，次之為粉紅色；挑取變色快、顏色深、性狀良好的菌株接入YEPD斜面培養(yǎng)基保藏；(2)杜氏發(fā)酵管法初篩在18×180mm試管中加入10毫升YEPD發(fā)酵培養(yǎng)基，倒置放入12×75mm小管，制成杜氏發(fā)酵管，濕熱滅菌，分別挑取供試菌株一環(huán)，接種于杜氏管底部，28℃培養(yǎng)2～3d，觀察產(chǎn)氣情況，按氣柱高低依次排列，挑選產(chǎn)氣多的菌株；(3)酵母菌發(fā)酵法復(fù)篩把初篩選出的菌株活化后，在YEPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h接入YEPD發(fā)酵培養(yǎng)基，于28～38℃發(fā)酵3d，測定發(fā)酵液酒精產(chǎn)量和總酯含量，挑選出產(chǎn)量性狀優(yōu)良的本發(fā)明的釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)，其中最佳發(fā)酵溫度為34～38℃。
釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)生產(chǎn)翻沙酒的方法，包括如下步驟(1)在500份麥麩中加入190～220份水，蒸煮100～120min，攤涼，加入經(jīng)3～4級擴大培養(yǎng)的釀酒酵母工程菌J，堆積培養(yǎng)，翻曲培養(yǎng)后得到固體酵母；(2)將750份酒糟攤涼，加入上述固體酵母10份和1份糖化酶，拌勻、入窖發(fā)酵30d，得到翻沙酒。
利用釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)生產(chǎn)具有一定的醬香型白酒獨特風(fēng)格的碎沙酒的方法，包括如下步驟(1)在500份麥麩中加入190～220份水，蒸煮100～120min，攤涼，加入經(jīng)3～4級擴大培養(yǎng)的釀酒酵母工程菌J，堆積培養(yǎng)，翻曲培養(yǎng)后得到固體酵母；(2)將2000份酒糟和500份高梁，攤涼，加入上述固體酵母40份和4份糖化酶，拌勻、入窖發(fā)酵30d，得到碎沙酒。
本發(fā)明與其它釀酒工程菌相比，采用神丹五號搭載茅臺酒高溫大曲太空誘變育種，從該酒曲中分離篩選出的釀酒酵母工程菌J(Saccharomycescerevisiae J)集高產(chǎn)酒精、產(chǎn)酯能力強和耐高溫特性于一身，適用于麩曲白酒生產(chǎn)，且產(chǎn)品具有一定醬香型白酒的風(fēng)格。不僅可對酒糟資源進行再利用，也可在酒糟中添加高梁及其他釀酒原料，生產(chǎn)出具有一定的茅臺酒獨特風(fēng)格的翻沙酒和碎沙酒。
具體實施例方式
以下通過實施例和比較例來進一步說明本發(fā)明的釀酒酵母工程菌J的有益效果。
實施例1釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)的篩選(1)酵母菌篩選采用TTC平板初篩法選用神丹五號搭載的茅臺酒高溫大曲，從該酒曲中分離篩選各供試菌株對應(yīng)點接于TTC下層培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)2～3d，將已滅菌的TTC上層培養(yǎng)基冷卻至60℃，加入TTC染色劑溶液，混勻，立即傾于上述長出菌落的TTC下層平板上，28℃培養(yǎng)2～3h，觀察菌落變色快慢及顏色深淺，產(chǎn)酒精能力強的酵母菌落呈深紅色，次之為粉紅色；挑取變色快、顏色深、性狀良好的菌株接入YEPD斜面培養(yǎng)基保藏；(2)杜氏發(fā)酵管法初篩在18×180mm試管中加入10mLYEPD發(fā)酵培養(yǎng)基，倒置放入12×75mm小管，制成杜氏發(fā)酵管，濕熱滅菌，分別挑取供試菌株一環(huán)，接種于杜氏管底部，28℃培養(yǎng)2～3d，觀察產(chǎn)氣情況，按氣柱高低依次排列，挑選產(chǎn)氣多的菌株；(3)酵母菌發(fā)酵法復(fù)篩把初篩選出的菌株活化后，在YEPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h接入YEPD發(fā)酵培養(yǎng)基，于34～38℃發(fā)酵3d，測定發(fā)酵液酒精產(chǎn)量和總酯含量，挑選出產(chǎn)量性狀優(yōu)良的本發(fā)明的釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiaeJ)。
實施例2采用實施例1得到的釀酒酵母工程菌J(Saccharomycescerevisiae J)利用茅臺酒新鮮酒糟(即丟糟)生產(chǎn)翻沙酒(1)在500kg麥麩中加入200kg水，蒸煮100～120min，攤涼，加入經(jīng)3～4級擴大培養(yǎng)的實施例1得到的釀酒酵母工程菌J，堆積培養(yǎng)，翻曲培養(yǎng)后得到固體酵母；(2)將750kg酒糟攤涼，加入上述固體酵母10kg和1kg糖化酶，拌勻、入窖發(fā)酵30d，得到翻沙酒。
比較例1采用AS2109利用茅臺酒新鮮酒糟(即丟糟)生產(chǎn)翻沙酒用AS2109替代釀酒酵母工程菌J，其它同實施例2。
實施例3采用本發(fā)明的釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)利用茅臺酒酒糟和高梁生產(chǎn)碎沙酒(1)在500kg麥麩中加入190～220kg水，蒸煮100～120min，攤涼，加入經(jīng)3～4級擴大培養(yǎng)的實施例1得到的釀酒酵母工程菌J，堆積培養(yǎng)，翻曲培養(yǎng)后得到固體酵母；
(2)將2000kg茅臺酒酒糟和500kg高梁，攤涼，加入上述固體酵母40kg和4kg糖化酶，拌勻、入窖發(fā)酵30d，得到碎沙酒。
比較例2采用AS2109利用茅臺酒酒糟+高梁生產(chǎn)碎沙酒用AS2109替代釀酒酵母工程菌J，其它同實施例3。
釀酒酵母工程菌J與AS2109發(fā)酵特性比較結(jié)果如下表

權(quán)利要求
1.一種釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)CGMCC No.1333，其發(fā)酵和產(chǎn)香特性為在YEPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h接入YEPD發(fā)酵培養(yǎng)基，于36℃發(fā)酵3d，CO2失重8.36g，酒精含量6.43％(v/v)20℃，總酯含量0.64g/L。
2.如權(quán)利要求1所述的釀酒酵母工程菌J，其中最佳發(fā)酵溫度為34～38℃。
3.釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)生產(chǎn)翻沙酒的方法，包括如下步驟(1)在500份麥麩中加入190～220份水，蒸煮100～120min，攤涼，加入經(jīng)3～4級擴大培養(yǎng)的釀酒酵母工程菌J，堆積培養(yǎng)，翻曲培養(yǎng)后得到固體酵母；(2)將750份酒糟攤涼，加入上述固體酵母10份和1份糖化酶，拌勻、入窖發(fā)酵30d，得到翻沙酒。
4.釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)生產(chǎn)碎沙酒的方法，包括如下步驟(1)在500份麥麩中加入190～220份水，蒸煮100～120min，攤涼，加入經(jīng)3～4級擴大培養(yǎng)的釀酒酵母工程菌J，堆積培養(yǎng)，翻曲培養(yǎng)后得到固體酵母；(2)將2000份茅臺酒酒糟和500份高梁，攤涼，加入上述固體酵母40份和4份糖化酶，拌勻、入窖發(fā)酵30d，得到碎沙酒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種釀酒酵母工程菌J(Saccharomyces cerevisiae J)及其應(yīng)用，其發(fā)酵和產(chǎn)香特性為在YEPD液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h接入YEPD發(fā)酵培養(yǎng)基，于36℃發(fā)酵3d，CO
文檔編號C12R1/865GK1807582SQ20051000321
公開日2006年7月26日 申請日期2005年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月19日
發(fā)明者季克良, 郭坤亮, 呂云懷, 王和玉, 曹大明 申請人:中國貴州茅臺酒廠有限責(zé)任公司