專利名稱：一種黑曲霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黑曲霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
眾所周知，曲霉屬(Aspergillus)較多地發(fā)現(xiàn)于發(fā)酵食品，是一類產(chǎn)復(fù)合酶的菌株，能產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、果膠酶、糖化酶、纖維素酶、植酸酶等用于工業(yè)生產(chǎn)。它們還可以產(chǎn)生溶血酶類用于消除動(dòng)脈及靜脈血栓。有些菌系能產(chǎn)生多種有機(jī)酸如檸檬酸、蘋果酸、延胡索酸等。
在普洱茶大生產(chǎn)過程中，該菌系能分泌酶類作用于基質(zhì)。在淀粉酶的作用下，將原料中的直鏈支鏈淀粉降解為糊精及各種低分子糖類，如麥芽糖、葡萄糖等，在蛋白酶的作用下，將不易消化的大分子蛋白質(zhì)降解為蛋白胨、多肽及各種氨基酸。在果膠酶、糖化酶、纖維素酶的作用下使發(fā)酵基質(zhì)大分子不溶物質(zhì)轉(zhuǎn)化為可溶解于水的小分子物質(zhì)，對普洱茶品質(zhì)的形成帶來積極的作用。
在普洱茶研究領(lǐng)域，由于長期缺乏學(xué)科的研究，尤其是從微生物的角度來進(jìn)行普洱茶的研究。而如何通過對云南普洱茶加工中微生物的研究，并從普洱茶加工中篩選有益優(yōu)勢微生物菌株應(yīng)用到生產(chǎn)中來提升普洱茶的品質(zhì)尚未見公開的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從微生物的角度對普洱茶進(jìn)行研究，為生產(chǎn)企業(yè)提供高品質(zhì)普洱茶有益菌株來源。本發(fā)明的另一目的是通過控制有益菌種在普洱茶生產(chǎn)中的比例，為促進(jìn)云南普洱茶品質(zhì)穩(wěn)定和提高發(fā)揮作用。
本發(fā)明的黑曲霉真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及黑曲霉純化培養(yǎng)工序后得到，生產(chǎn)菌株為黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏單位地址北京是海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，保藏日期2005年5月16日，保藏號CGMCC No.1373。
本發(fā)明的黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501的形態(tài)學(xué)特征為該菌類生長稍局限，10-14天直徑可達(dá)2.5-3cm，菌絲初為白色，常常出現(xiàn)黃色區(qū)域，厚絨狀，黑色，反而無色或中央部分略帶黃褐色。在顯微鏡下觀察分生孢子頭幼時(shí)球形，漸變?yōu)榉派湫位蛄殉蓭讉€(gè)放射的柱狀物，一般為1-3mm，直徑15-20μm，壁厚，光滑。頂囊球形一般直徑45-75μm。小梗雙層，自頂囊全面著生，褐色，梗基一般20-30×5-6μm，長者可達(dá)60-70μm，寬8-10μm，有的具橫隔，分生孢子球形，直徑大多4-5μm，粗糙。
本發(fā)明經(jīng)公知的初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、黑曲霉純化培養(yǎng)等傳統(tǒng)工序后得到。
本發(fā)明的黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501真菌有提高普洱茶品質(zhì)的作用，可應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)工藝中。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于將PAsp0501按一定的比例用于普洱茶的大生產(chǎn)過程中，其普洱茶中的茶多糖含量為2-4％、茶褐素含量為10-12％，普洱茶的品質(zhì)有明顯的提高，并縮短了加工時(shí)間，對普洱茶品質(zhì)的穩(wěn)定和提高發(fā)揮重要作用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1PAsp0501菌種的篩選從采集到的茶樣中，通過公知的平板分離(培養(yǎng)基用黑曲霉分離純化培養(yǎng)基)得到48株黑曲霉菌株。黑曲霉純化培養(yǎng)基為葡萄糖30g、NaNO330g、K3PO41g、MgSO40.25g、KCL0.25g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml、ph值6.8、在121℃滅菌30min。再通過碳酸鈣透明圈法選出可同時(shí)產(chǎn)生酶活性較高的AG、CMC、果膠酶的5號菌株作為試驗(yàn)菌。篩選方法如下A.初篩將分離到的黑曲霉菌株接種到培養(yǎng)基(瓊脂20g、葡萄糖20g、CaCO325g、加水至1000ml、PH6.5-7、在121℃高壓鍋中滅菌30min)上，于30℃培養(yǎng)三天。原理是葡萄糖淀粉酶會(huì)在生長中將培養(yǎng)基中的葡萄糖轉(zhuǎn)化為酸并擴(kuò)散到培養(yǎng)基中，與其中的CaCO3作用，產(chǎn)生透明圈。選出其中透明圈大的菌株供復(fù)篩。
B.復(fù)篩用250ml三角瓶裝50ml培養(yǎng)基(葡萄糖50g、蛋白胨3g、(NH4)2HPO40.4g、KH2PO40.2g、MgSO4·7H2O0.1g)滅菌后接入初篩的黑曲霉菌種，于振蕩搖瓶培養(yǎng)3天(30℃)。然后用PHS-2型酸度計(jì)測定酸度。每株菌接種三瓶。最后選出一株產(chǎn)酸最多的菌株作為產(chǎn)酶菌種。
C.最后把選出的菌種接種到天然培養(yǎng)基上(葡萄糖30g、麩皮10g、玉米粉50g、蛋白胨10g、酵母膏1.0g、加蒸餾水至1000，ph值6.5-7)。放到28℃恒溫箱中早晚搖動(dòng)培養(yǎng)5～7天后，在無菌超作臺(tái)上用無菌濾紙過濾，無菌收獲濾紙上的菌絲和黑曲霉的孢子，放到28℃恒溫箱中干燥即可用于接種發(fā)酵試驗(yàn)。
實(shí)施例2PAsp0501的生產(chǎn)應(yīng)用將毛茶按傳統(tǒng)的方法進(jìn)行濕熱，隨后在毛茶中接種重量比為0.1-0.8％的PAsp0501讓其發(fā)酵，當(dāng)堆溫升高到30±3℃時(shí)，PAsp0501開始進(jìn)行代謝，并且隨著堆溫進(jìn)一步的升高，分泌出大量的葡萄糖淀粉酶、纖維素酶和果膠酶等。這些酶對茶葉中的內(nèi)含成分進(jìn)行氧化、水解。其中還原糖、可溶性碳水化合物和水化果膠呈現(xiàn)不斷增加的趨勢，但由于此時(shí)茶葉中除PAsp0501外，還有大量的其它微生物開始滋生，多糖水解產(chǎn)物被這許多的微生物用于生長繁殖所消耗，因此可溶性碳水化合物的含量到出堆時(shí)比普洱茶大生產(chǎn)和模擬大生產(chǎn)的都少。同時(shí)在出堆茶樣中粗纖維的含量也較傳統(tǒng)處理的少，這說明，接種PAsp0501到毛茶原料中讓其發(fā)酵的過程比起大生產(chǎn)和模擬大生產(chǎn)的發(fā)酵程度都深，PAsp0501能加速形成普洱茶品質(zhì)特征和縮短加工時(shí)間。
經(jīng)接種PAsp0501后生產(chǎn)的普洱茶，其品質(zhì)有明顯的提高，普洱茶中的茶多糖含量為2-4％、茶褐素含量為10-12％，形成的普洱茶產(chǎn)品，湯色紅濃明亮，滋味甘滑，獨(dú)特陳香。
權(quán)利要求
1.一種黑曲霉真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)初篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及黑曲霉純化培養(yǎng)工序后得到，其特征在于生產(chǎn)菌株為黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501，保藏日期2005年5月16日，保藏號CGMCC No.1373。
2.權(quán)利1所說的黑曲霉真菌，其特征在于該真菌有提高普洱茶品質(zhì)的作用，可應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)工藝中。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黑曲霉真菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的具有提高普洱茶品質(zhì)功能的真菌，由生產(chǎn)菌株和輔料經(jīng)初傳統(tǒng)的篩、復(fù)篩、天然培養(yǎng)基培養(yǎng)、及黑曲霉純化培養(yǎng)工序后得到，其特征在于生產(chǎn)菌株為黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501，保藏日期2005年5月16日，保藏號CGMCC No.1373。該真菌有提高普洱茶品質(zhì)的作用，可應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)工藝中。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于將PAsp0501按一定的比例用于普洱茶的大生產(chǎn)過程中，其普洱茶中的茶多糖含量為2－4％、茶褐素含量為10－12％，普洱茶的品質(zhì)有明顯的提高，并縮短了加工時(shí)間，對普洱茶品質(zhì)的穩(wěn)定和提高發(fā)揮重要作用。
文檔編號A23F3/06GK1752202SQ20051001094
公開日2006年3月29日 申請日期2005年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月28日
發(fā)明者周紅杰, 龔加順, 秘鳴, 趙龍飛 申請人:秘鳴