專利名稱：小鼠DNA聚合酶δ相互作用蛋白基因的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及小鼠基因，具體涉及DNA聚合酶δ相互作用蛋白基因。
背景技術(shù)：
在真核細(xì)胞中，已發(fā)現(xiàn)四種參與DNA復(fù)制的DNA聚合酶，即DNA聚合酶α、DNA聚合酶β、DNA聚合酶γ、DNA聚合酶δ。DNA聚合酶α負(fù)責(zé)起始DNA前導(dǎo)鏈和后隨鏈的復(fù)制，然后由DNA聚合酶δ負(fù)責(zé)前導(dǎo)鏈和后隨鏈的延伸。DNA聚合酶δ在DNA前導(dǎo)鏈的持續(xù)延伸過程中需要蛋白質(zhì)輔因子-增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的參與。哺乳動(dòng)物的DNA聚合酶δ包含一個(gè)催化亞基和一個(gè)小亞基，其中小亞基不行使酶的功能，但是對DNA聚合酶δ和PCNA的相互作用是必需的。
He等人通過酵母雙雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)一個(gè)可與DNA聚合酶δ小亞基相互作用的新蛋白，并命名為PDIP1(DNA polymerase delta-interacting protein 1)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該蛋白還能與PCNA相互作用并在PCNA存在時(shí)促進(jìn)DNA聚合酶δ的活性(He等，2001，Pro.Natl Acad.Sci.USA.，9811979-11984)。He等人還發(fā)現(xiàn)人類PDIP1基因的表達(dá)受TNF α誘導(dǎo)。
PDIP1蛋白能夠促進(jìn)DNA聚合酶δ的活性，而DNA聚合酶δ是真核細(xì)胞DNA復(fù)制的主要聚合酶，并且還參與DNA修復(fù)，因此PDIP1很可能參與DNA的復(fù)制，而且還具有促進(jìn)DNA修復(fù)和抗細(xì)胞凋亡作用。PDIP1基因的表達(dá)可以被TNF-α所誘導(dǎo)，而TNF-α是一種多功能的細(xì)胞因子，參與細(xì)胞的復(fù)制、凋亡等的調(diào)控，因此，PDIP1基因家族可能在TNF-α誘導(dǎo)和DNA復(fù)制/修復(fù)之間起到了一個(gè)橋梁作用。研究小鼠的PDIP1基因及其功能，對治療細(xì)胞調(diào)亡相關(guān)疾病的藥物開發(fā)具有十分重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了在小鼠細(xì)胞中克隆出人類PDIP1基因的同源基因-小鼠的PDIP1基因，以便用小鼠動(dòng)物模型研究PDIP1基因的功能以及PDIP1基因與人類疾病的關(guān)系。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明應(yīng)用生物信息學(xué)、cDNA末段快速擴(kuò)增、分子克隆、DNA測序等手段克隆了小鼠PDIP1基因的全長cDNA，并對其功能進(jìn)行了研究。
下面結(jié)合附圖進(jìn)一步詳述本發(fā)明。


圖1.PDIP1基因的cDNA核苷酸序列和編碼的氨基酸序列。圖中粗體的ATG和TGA表示開放閱讀框的起始密碼子和終止密碼子。
圖2.小鼠PDIP1、大鼠PDIP1和人PDIP1蛋白的氨基酸序列比較。一致序列用反白的字體表示。
圖3.小鼠PDIP1蛋白與PCNA相互作用的GST-Pulldown實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1.蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)，2.GST-PDIP1+PCNA，3.GST+PCNA。
圖4.小鼠PDIP1蛋白與PCNA相互作用的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
圖5.小鼠PDIP1蛋白在PCNA存在下促進(jìn)DNA聚合酶δ活性。
圖6.TNF-α誘導(dǎo)小鼠PDIP1基因的表達(dá)。
本發(fā)明用人的PDIP1的cDNA序列去搜索GenBank的小鼠EST數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)兩段部分重疊的EST序列(GenBank登陸號分別為AI849007和AA546545)和人PDIP1基因cDNA高度相似，我們將這兩段EST序列拼接成一段1006bp的重疊群。然后，根據(jù)AI849007的5’端序列和AA546545的3’端序列設(shè)計(jì)一段引物，用PCR擴(kuò)增出一段1006bp的序列并測序。最后，用cDNA末段快速擴(kuò)增(RACE)的方法分別擴(kuò)增出這段1006bp序列的兩側(cè)序列。經(jīng)測序后，拼接出小鼠PDIP1基因的全長cDNA。用小鼠PDIP1的cDNA搜索小鼠基因組DNA序列數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)小鼠PDIP1基因位于小鼠第7號染色體的7F3區(qū)域內(nèi)，基因全長16.7kb，含有6個(gè)外顯子。
小鼠PDIP1的cDNA全長為1674bp，含有一個(gè)990bp的完整開放閱讀框，編碼一個(gè)含329個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)(圖1)。小鼠PDIP1蛋白和人的PDIP1蛋白氨基酸序列非常相似，兩者的序列一致性達(dá)91.8％。小鼠PDIP1蛋白41-138氨基酸為一個(gè)BTB/POZ結(jié)構(gòu)域，249-255氨基酸(QTKVEFP)為一個(gè)與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)相互作用的基序(motif)(圖2)。
本發(fā)明用體外GST-Pulldown(圖3)和體內(nèi)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(圖4)證實(shí)了PDIP1蛋白能夠與PCNA相互作用。并證實(shí)PDIP1在PCNA存在下能夠促進(jìn)DNA聚合酶δ的活性(圖5)；實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)重組小鼠TNF-α能顯著誘導(dǎo)小鼠PDIP1基因的表達(dá)(圖6)。
1小鼠PDIP1基因的cDNA編碼區(qū)擴(kuò)增和表達(dá)載體構(gòu)建(1)小鼠PDIP1基因的cDNA編碼區(qū)的擴(kuò)增在37℃溫度條件下，在5％CO2培養(yǎng)箱中用DMEM完全培養(yǎng)液(含10％新生牛血清，2mM L-谷氨酸，100U/ml青霉素)培養(yǎng)NIH3T3細(xì)胞，然后采用大連寶生物公司的Catrimox-14RNA提取試劑盒，提取NIH3T3細(xì)胞的RNA；并采用德國Qiagen公司的Sensiscript反轉(zhuǎn)錄試劑盒，以所提取的RNA為模板，按照產(chǎn)品說明書反轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后以cDNA作為模板用PCR擴(kuò)增出小鼠PDIP1基因的cDNA編碼區(qū)序列。PCR引物為正向5’-AAAGGTCGACTCCGCTCACTGGCATGT-3’
反向5’-GGGGTACCTCAGTCCTTGAAGACAATCTGT-3’。
(2)將PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳，切下約1Kb大小的片段，用Qiagen的凝膠回收試劑盒純化回收的擴(kuò)增片段。
(3)用NEB公司生產(chǎn)的Sal I和KpnI酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，然后連接到哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體pCMV-Myc(Clontech公司)中，得到在哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)PDIP1蛋白的表達(dá)載體pCMV-Myc-PDIP1，該載體可在培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)PDIP1蛋白。
(4)用NEB公司生產(chǎn)的Sal I和Not I酶切pCMV-Myc-PDIP1，回收約1Kb大小的片段，連接到Promega公司生產(chǎn)的原核表達(dá)載體pGEX-4T-2中，得到GST-PDIP1融合蛋白表達(dá)載體pGEX-4T-2-PDIP1，該表達(dá)載體可在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)GST-PDIP1融合蛋白。
2重組小鼠PDIP1蛋白的表達(dá)和純化(1)將pGEX-4T-2-PDIP1重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中。
(2)將轉(zhuǎn)化菌液涂抹在含50μg/ml氨芐青霉素的2×YT培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)過夜，挑單菌落于2×YT液體培養(yǎng)基，在37℃下震蕩培養(yǎng)。
(3)當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)渾濁時(shí)，在600nm下測定菌液光密度(OD)值，當(dāng)OD值達(dá)到0.5時(shí)，加入IPTG至終濃度為1mM，在17℃下誘導(dǎo)培養(yǎng)6小時(shí)。
(4)4℃下4000g離心15分鐘，收集細(xì)菌沉淀。棄上清，每500ml細(xì)菌沉淀用冰預(yù)冷的20ml PBS溶液重懸，加入1mM PMSF，在冰上30分鐘，用超聲波破碎細(xì)胞。
(5)加入終濃度為1％的Triton X-100，冰上搖1小時(shí)，充分溶解GST融合蛋白。
(6)4℃，18000g離心30分鐘，沉淀細(xì)菌殘?jiān)筒蝗芙獾碾s質(zhì)。
(7)取出上清置于50ml離心管，向其中加入1ml 50％的耦連有谷胱甘肽的Sepharose 4B珠子。
(8)室溫，緩慢的上下顛倒混勻1小時(shí)，使耦連有谷胱甘肽的Sepharose 4B與GST融合蛋白充分結(jié)合。
(9)4℃，500g離心并收集沉淀。
(10)小心移走上清，10ml PBS洗沉淀，4℃，500g離心，小心棄去上清。重復(fù)洗3次。(11)加入2倍凝膠珠體積的洗脫液(125mM Tris-HCl pH8.0，25mM glutathione，100mM NaCl，0.1％Triton X-100)，洗脫5次，每次10min，離心收集洗脫的上清，即為所要提取的GST-PDIP1的融合蛋白溶液。
3小鼠PDIP1蛋白與PCNA相互作用的GST-Pulldown實(shí)驗(yàn)(1)按2所述的方法表達(dá)和純化GST蛋白、GST-PDIP1融合蛋白。
(2)取2ug GST蛋白和2ug His-PCNA融合蛋白，2ug GST-PDIP1融合蛋白和2ug His-PCNA融合蛋白分別置于兩個(gè)Eppendorf管中。每管加入800ul結(jié)合緩沖液(50mM Tris-HCl pH7.5，150mM NaCl，1-0％glycerol，1mM EDTA，0.05％Nonidet P-40，5mM DTT and proteaseinhibitors)，充分混勻后于4℃上下顛倒混勻2h。
(3)加入用1×PBS活化好的50％的谷胱甘肽瓊脂糖4B凝膠珠50ul，置于4℃再上下顛倒混勻2h。
(4)4℃，500g離心5min，去上清。沉淀下來的凝膠珠用結(jié)合緩沖液重懸，4℃下混勻洗滌3min，500g離心5min，去上清。再重復(fù)洗滌三次，最后用20ul的載樣緩沖液重懸，100℃加熱5min，隨之進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。
(5)用電轉(zhuǎn)移的方法(恒壓14v，4℃電轉(zhuǎn)移過夜)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到尼龍膜上。
(6)將轉(zhuǎn)移好的尼龍膜用含10％脫脂奶粉的TBS緩沖液作為封閉劑封閉30-60min。然后按1∶1000的比例用封閉劑稀釋PCNA的單抗，讓稀釋的抗體與尼龍膜結(jié)合1h。隨后用TBS緩沖液洗膜4次，每次10min。將與辣根過氧化物酶偶連的羊抗鼠IgG作為二抗，用封閉劑稀釋2000倍，將膜浸沒其中，結(jié)合1h，隨后用TBS緩沖液洗膜4次，每次10min。最后用DAB/NiCl2顯色。
(7)結(jié)果(圖3)表明GST-PDIP1和His-PCNA混合后，用谷胱甘肽瓊脂糖4B凝膠珠能將His-PCNA沉淀下來，而GST和His-PCNA混合后，用谷胱甘肽瓊脂糖4B凝膠珠不能將His-PCNA沉淀下來。說明PDIP1和PCNA能相互作用。
4小鼠PDIP1蛋白與PCNA相互作用的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(1)將小鼠的PCNA基因和PDIP1基因的編碼區(qū)分別克隆到pCMV-HA和pCMV-Myc載體上，構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒HA-PCNA和Myc-PDIP1。
(2)質(zhì)粒HA-PCNA和Myc-PDIP1共轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞。
(3)轉(zhuǎn)染48小時(shí)之后，收集細(xì)胞。在4℃條件下，800g離心2分鐘，棄上清。沉淀用RIPA緩沖液(50mM Tris-HCl pH7.2，150mM NaCl，1％Triton X-100，1％Sodium Dexycholate，0.1％SDS，1mM PMSF)重懸。細(xì)胞于-70℃快速冷凍15分鐘，然后于37℃快速融解15分鐘。重復(fù)三次。
(4)細(xì)胞裂解液在4℃條件下18000g離心10分鐘，上清轉(zhuǎn)移至一新管中，并加入抗Myc抗體(2ug)室溫反應(yīng)2小時(shí)。加入蛋白質(zhì)-A/G偶聯(lián)的Sepharose繼續(xù)在室溫反應(yīng)2小時(shí)。在4℃條件下800g離心2分鐘，棄上清珠子用裂解緩沖液重懸。重復(fù)三次，在第四次洗滌后，Sepharose用20μl的加樣緩沖液重懸，100℃加熱5分鐘。
(5)進(jìn)行SDS/PAGE電泳后，轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)于尼龍膜。用抗PCNA的抗體做Western Blot檢測。
(6)同時(shí)，用抗PCNA的抗體來做免疫沉淀反應(yīng)，而用抗Myc的抗體做Western blot檢測。
結(jié)果見附圖4，用抗Myc的抗體可以沉淀HA-PCNA，用抗PCNA的抗體也可以沉淀Myc-PDIP1，說明，PCNA和PDIP1在細(xì)胞內(nèi)可以相互作用。
5、小鼠PDIP1蛋白在PCNA存在下促進(jìn)DNA聚合酶δ活性。
GST蛋白和GST-PDIP1融合蛋白分別與小牛胸腺DNA聚合酶δ在4℃溫度條件下保溫30分鐘，然后用Tan等人的方法(參見J.Biol Chem，86，2611230-12316)測定DNA聚合酶的活性。如圖5所示空心柱表示在PCNA不存在下小牛胸腺DNA聚合酶δ的活性，而實(shí)心柱表示在PCNA存在下小牛胸腺DNA聚合酶δ的活性。
6TNF-α誘導(dǎo)小鼠PDIPl基因的表達(dá)(1)小鼠NIH3T3細(xì)胞的培養(yǎng)與TNF-α處理在37℃溫度條件下，在5％CO2培養(yǎng)箱中用DMEM完全培養(yǎng)液(含10％新生牛血清，2mM L-谷氨酸，100U/ml青霉素)培養(yǎng)NIH3T3細(xì)胞，至細(xì)胞密度為70％左右時(shí)往培養(yǎng)基中加入放線菌酮(終濃度為10μg/ml)處理30分鐘，然后加入重組小鼠TNF-α(終濃度為20ng/ml)。分別在加入TNF-α后0小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)，收獲細(xì)胞。
(2)然后采用大連寶生物公司的Catrimox-14RNA提取試劑盒，提取經(jīng)TNF-α處理不同時(shí)間的NIH3T3細(xì)胞的RNA。
(3)cDNA的合成采用德國Qiagen公司的Sensiscript反轉(zhuǎn)錄試劑盒，以所提取的RNA為模板，按照產(chǎn)品說明書反轉(zhuǎn)錄合成cDNA的第一條鏈，作為定量PCR反應(yīng)擴(kuò)增的模板。。
(4)定量PCR定量PCR在伯樂公司的iCycler iQ實(shí)時(shí)PCR儀上進(jìn)行。小鼠PDIP1基因的定量PCR引物為正向5’-GGGACGATGAAGAGAACCGAG-3’和反向5’-GTCCTTGAAGACAATCTGTTGGC-3’。
用18S rRNA作為各個(gè)樣品mRNA表達(dá)水平的內(nèi)對照。18S rRNA的定量PCR引物序列如下正向5’-GCCCTGTAATTGGAATGAGTCCACTT-3’反向5’-GCTCCCAAGATCCAACTACGAGCTTT-3’。
PCR反應(yīng)體系為iQ SYBR Green Supermix(伯樂公司)12.5μl，兩條引物各1μl(10pg)，cDNA模板各1μl，無菌水9.5μl。反應(yīng)程序?yàn)?4℃預(yù)變性2分鐘，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)(每個(gè)循環(huán)包括94℃變性30秒，61℃退火30秒，72℃延伸30秒)，最后72℃延伸5分鐘。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示TNF-α可以誘導(dǎo)小鼠PDIP1基因的表達(dá)。用TNF-α處理NIH3T3細(xì)胞，隨著TNF-α處理時(shí)間延長，PDIP1基因的mRNA量增加，處理6小時(shí)的時(shí)候，PDIP1基因的mRNA量達(dá)到最大值，6小時(shí)以后，PDIP1基因的mRNA量不再增加1.本發(fā)明提供了一個(gè)小鼠新基因PDIP1基因的全長cDNA序列，并描述了其編碼的蛋白產(chǎn)物和功能。便于以小鼠為動(dòng)物模型研究PDIP1基因的功能和開發(fā)基因藥物。
2.本發(fā)明的小鼠PDIP1基因編碼的蛋白產(chǎn)物可促進(jìn)DNA聚合酶δ的催化活性，從而促進(jìn)DNA的復(fù)制和修復(fù)。因此，本發(fā)明的PDIP1基因可用于篩選治療DNA的復(fù)制、修復(fù)相關(guān)疾病的藥物。
3.本發(fā)明的小鼠PDIP1基因的表達(dá)可以被TNF-α所誘導(dǎo)，而TNF-α是一種多功能的細(xì)胞因子，參與細(xì)胞的復(fù)制、凋亡等的調(diào)控，被廣泛用于腫瘤治療、免疫性疾病的治療。本發(fā)明的PDIP1基因可用于篩選治療細(xì)胞凋亡相關(guān)疾病的藥物。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1小鼠PDIP1基因的全長cDNA的克隆(1)用人的PDIP1的cDNA序列(GenBank登陸號AF401315)去搜索GenBank的小鼠EST數(shù)據(jù)庫，發(fā)現(xiàn)兩段部分重疊的小鼠EST序列(GenBank登陸號分別為AI849007和AA546545)和人PDIP1基因cDNA高度相似，我們將這兩段EST序列拼接成一段1006bp的重疊群。然后，根據(jù)AI849007的5’端序列和AA546545的3’端序列設(shè)計(jì)一段引物，用PCR擴(kuò)增出一段1006bp的序列并測序。引物序列為正向5’-GTTGAAGTGCTCACAGACGC-3’反向5’-AGGTCAGTCCTTGAAGACAATC-3’。
(2)根據(jù)這段1006bp序列設(shè)計(jì)基因特異性引物(GSP)，5’端基因特異性引物5’-CTGGCACTCTCAGGCAGTGGCAC-3’3’端基因特異性引物5’-GACGATGAAGAGAACCGAGAGCACC-3’采用Clontech公司的SMART RACE試劑盒并按說明書分別擴(kuò)增出這段1006bp序列的兩側(cè)序列。經(jīng)測序后，拼接出長度為1674bp全長cDNA。經(jīng)檢索GenBank數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)，該序列為一新的小鼠基因，因此，我們命名為小鼠PDIP1基因(GenBank登陸號AF534881)。小鼠PDIP1的cDNA核苷酸序列和編碼的氨基酸序列如圖1所示。小鼠PDIP1、大鼠PDIP1和人PDIP1蛋白的氨基酸序列比較結(jié)果(見圖2)表明小鼠PDIP1蛋白與大鼠和人的PDIP1蛋白的氨基酸序列高度相似。
序列表<110>湖南師范大學(xué)<120>小鼠DNA聚合酶δ相互作用蛋白基因<160>1<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>1674<212>DNA<213>小鼠(Mus musculus)<400>1gagagcgcgc gatggggcgg ctggtggacg tcgcggagta gctgtggaga gtgggcgtgt60gcgccgagcg gccgggcgcc ggcgctggag tcgcgggatc tcagggaacc ggaccggggc120gcagagaggg cctccgactg ccacccgcgt ccgctcactg gcatgtcggc cgaggcctcg180ggcccggcgc cggctgcggc cgaatgcttg gagtccccta gcccctcgag tgtggagcct240ggctccccct cgtacagtct gaagcccctc accccgaaca gcaagtatgt gaagctgaac300gtgggcggct cgctgcatta caccacgctg cgcaccctca cggggcagga caccatgctc360aaggccatgt tcagcggccg cgttgaagtg ctcacagacg cgggaggttg ggtgctgatt420gaccggagtg gccgccactt tggcacaatt ctcaactacc tgcgggacgg gtcggtgcca480ctgcctgaga gtgccagaga actcggggag ctgctaggtg aagcccgata ctacctggtc540cagggcctga ttgaagactg tcagctggcg ctgcagcaaa aaagggagaa gctgtcgcca600ctatgcctca tccccacagt gacatcaccc cgggaagagc agcagctcct ggccagcacc660tccaagcctg tggtgaagct tctacacaac cgcagtaaca acaagtactc ttacaccagc720acttcagatg acaacttact gaagaacatc gagctgtttg acaaactagc cctgcgcttc780catgggcggc tgctcttcct caaggatgtc ctaggagatg agatttgctg ctggtctttc840tacgggcagg gccgaaaaat tgccgaggtg tgctgtacct ccatagtcta tgctacggag900aagaagcaga ccaaggtgga attccctgag gctcggatct ttgaggagac actgaacatc960ttaatttatg agaattcccg tggcccagat ctcgctctcc tggaggccac agggggtgca 1020gctggaggtg gtggggcagg ccgaggggac gatgaagaga accgagagca ccgtgtccgg 1080aggattcacg tccgccgcca tatcacccac gatgagcgtc cccacggcca acagattgtc 1140ttcaaggact gaccttggcc ttcccccgct gtcctcttgc ttctgggacc tagtccctct 1200gtctctttgc cccggctctg ctggccaagt cgtgggtctt ccctctgtcc cctcgttgca 1260tgctgttttc agtgagccct ttccttccag tcataaccac tcactgctaa ccacatggta 1320cattccagca tttccctctg gcggcgctct tcagaaagcc agtgaccgcc cctcctctac 1380atccttgttc tgccatcttt ctcttaccat ctgattccct ttctgttttg ttaatacatt 1440gaacacacgt gtagaaagga cagtgctatc agccacactc caagctgctt tccgccattg 1500caacagagta ctttgcccct cctgccccac catccgccac ctccctaact ttgtactagg 1560ctggcctgga cctgtgccag ctctgctatc gtgatctgtt tcatattatt tattatttta 1620attttctatt aaattattgg aataaagttg agctgaaggt ctaaaaaaaa aaaa 167權(quán)利要求
1.一種小鼠DNA聚合酶δ相互作用蛋白基因，其特征在于該基因的核苷酸序列如下gagagcgcgc gatggggcgg ctggtggacg tcgcggagta gctgtggaga gtgggcgtgt 60gcgccgagcg gccgggcgcc ggcgctggag tcgcgggatc tcagggaacc ggaccggggc120gcagagaggg cctccgactg ccacccgcgt ccgctcactg gcatgtcggc cgaggcctcg180ggcccggcgc cggctgcggc cgaatgcttg gagtccccta gcccctcgag tgtggagcct240ggctccccct cgtacagtct gaagcccctc accccgaaca gcaagtatgt gaagctgaac300gtgggcggct cgctgcatta caccacgctg cgcaccctca cggggcagga caccatgctc360aaggccatgt tcagcggccg cgttgaagtg ctcacagacg cgggaggttg ggtgctgatt420gacggagtg gccgccactt tggcacaatt ctcaactacc tgcgggacgg gtcggtgcca480ctgcctgaga gtgccagaga actcggggag ctgctaggtg aagcccgata ctacctggtc540cagggcctga ttgaagactg tcagctggcg ctgcagcaaa aaagggagaa gctgtcgcca600ctatgcctca tccccacagt gacatcaccc cgggaagagc agcagctcct ggccagcacc660tccaagcctg tggtgaagct tctacacaac cgcagtaaca acaagtactc ttacaccagc720acttcagatg acaacttact gaagaacatc gagctgtttg acaaactagc cctgcgcttc780catgggcggc tgctcttct caaggatgtc ctaggagatg agatttgctg ctggtctttc840tacgggcagg gccgaaaaat tgccgaggtg tgctgtacct ccatagtcta tgctacggag900aagaagcaga ccaaggtgga attccctgag gctcggatct ttgaggagac actgaacatc960ttaatttatg agaattcccg tggcccagat ctcgctctcc tggaggccac agggggtgca 1020gctggaggtg gtggggcagg ccgaggggac gatgaagaga accgagagca ccgtgtccgg 1080aggattcacg tccgccgcca tatcacccac gatgagcgtc cccacggcca acagattgtc 1140ttcaaggact gaccttggc ttcccccgct gtcctcttgc ttctgggacc tagtccctct 1200gtctctttgc cccggctctg ctggccaagt cgtgggtctt ccctctgtcc cctcgttgca 1260tgctgttttc agtgagccct ttccttccag tcataaccac tcactgctaa ccacatggta 1320cattccagca tttccctctg gcggcgctct tcagaaagcc agtgaccgcc cctcctctac 1380atccttgttc tgccatcttt ctcttaccat ctgattccct ttctgttttg ttaatacatt 1440gaacacacgt gtagaaagga cagtgctatc agccacactc caagctgctt tccgccattg 1500caacagagta ctttgcccct cctgccccac catccgccac ctccctaact ttgtactagg 1560ctggcctgga cctgtgccag ctctgctatc gtgatctgtt tcatattatt tattatttta 1620attttctatt aaattattgg aataaagttg agctgaaggt ctaaaaaaaa aaaa 167全文摘要
本發(fā)明涉及一種小鼠DNA聚合酶δ相互作用蛋白基因，小鼠PDIP1的cDNA全長1674bp，位于小鼠第7號染色體的7F3區(qū)域內(nèi)，基因全長16.7kb。PDIP1蛋白能與DNA聚合酶δ和PCNA相互作用，并在PCNA存在下促進(jìn)DNA聚合酶δ活性。PDIP1基因可能參與DNA復(fù)制、修復(fù)以及細(xì)胞凋亡。本發(fā)明的PDIP1基因可用于建立小鼠動(dòng)物模型，篩選治療DNA復(fù)制、修復(fù)以及細(xì)胞凋亡相關(guān)疾病的藥物。
文檔編號C12N15/12GK1757726SQ200510031929
公開日2006年4月12日 申請日期2005年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月28日
發(fā)明者張健, 周建林, 胡翔 申請人:湖南師范大學(xué)