專利名稱：微生物法生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從土壤中篩選到的新的微生物產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)的糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，還涉及利用該新菌株裂解有效霉素(又稱井岡霉素)生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺的方法。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及的有效霉烯胺(valienamine)和有效霉胺(validamine)結(jié)構(gòu)式如下(Chem.Rev.2003，1031955～1977) 有效霉烯胺，又稱井岡霉烯胺，分子式為C7H13NO4，重要的基團(tuán)有一個(gè)伯氨基(-NH2)，一個(gè)碳碳雙鍵(C＝C)，一個(gè)羥甲基(-CH2OH)，三個(gè)羥基(-OH)。其鹽酸鹽(C7H13NO4·HCl)的[α]D23為+68.6°(1N-HCl)，五乙酸鹽(C17H23NO9)的熔點(diǎn)為95℃，[α]D23為+30.2°(CHCl3)，遇茚三酮顯色反應(yīng)。
有效霉胺，又稱井岡霉胺，分子式為C7H15NO4，重要的基團(tuán)有一個(gè)伯氨基(-NH2)，一個(gè)羥甲基(-CH2OH)，三個(gè)羥基(-OH)，其鹽酸鹽(C7H13NO4·HCl)的[α]D23為+57.4°(1N-HCl)，熔點(diǎn)為229℃-232℃，[α]D21為+60.6°(H2O)，遇茚三酮顯色反應(yīng)。
有效霉烯胺和有效霉胺是兩種較強(qiáng)的糖苷酶抑制劑，同時(shí)也是很多其它糖苷酶抑制劑的核心結(jié)構(gòu)，可以用于合成有效霉醇胺(valiolamine)和伏格列波糖(voglibose)。
有關(guān)有效霉烯胺和有效霉胺的生產(chǎn)方法的研究已經(jīng)有30多年的歷史，日本人龜田等人曾經(jīng)采用過脫硝假單孢菌的菌體降解有效霉素A或有效霉亞基胺A，再進(jìn)行分離得到有效霉烯胺和有效霉胺，可是不能在僅以有效霉素類物質(zhì)為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)；而且對(duì)有效霉素的分解能力很弱，不適用于有效霉烯胺和有效霉胺的大量生產(chǎn)。
日本人龜田等在土壤中分離到一株能將有效霉素分解為有效霉烯胺和有效霉胺的菌株嗜糖黃桿菌(Flavobacterium saccharophilum)IFO13948(公開特許JP57-54593)。
日本人龜田等采用噬細(xì)胞菌屬產(chǎn)酶微生物(Cytophaga heparina)IFO12017(ATCC13125)和IFO14087株降解有效霉素或有效霉亞基胺生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺[特許公報(bào)(B2)平2-26957]。
日本人龜田等發(fā)現(xiàn)了土壤菌屬(Agrobacterium)或者氣單胞菌屬(Aeromonas)的微生物以及它們的變異株能分解有效霉素或有效霉亞基胺生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺。比如土壤菌屬(Agrobacterium)微生物，有Agrobacterum Radiobacter IFO 12664(ATCC 4718)株，IFO 13258(ATCC13332)株，IFO 13259(ATCC 13333)株，IFO 13532(ATCC 19358)株，IFO13533(ATCC 25235)株，以及Agrobacterium tumefaciens IFO 3058株等；氣單胞菌屬(Aeromonas)微生物，有Aeromonas hydrophila subsp.Anaerogenes IFO 13282，同亞種subsp.hydrophila IFO 13286，subsp.proteolyica IFO 13287，Aeromonas punctata subsp.cavice IFO 13288，以及Aeromonas salmonicida subsp.salmonicida IFO 12659等[特許公報(bào)(B2)平6-69380]。
根據(jù)文獻(xiàn)及專利查閱結(jié)果，已報(bào)道的能降解有效霉素的專利菌種包括假單胞菌屬(Pseudomonas，1個(gè)種，Pseudomonas denitrificans，反硝化假單胞菌)、黃桿菌屬(Flavobacterium，3個(gè)種)、嗜纖維菌屬(Cytophaga1個(gè)種，3個(gè)菌株)、土壤菌屬(Agrobacterium，2個(gè)種，其中Agrobacteriumradiobacter有5個(gè)菌株，Agrobacterium tumefaciens，1個(gè)種)、氣單胞菌屬(Aeromonas，5個(gè)種)。具體結(jié)果見附表1。
表1 降解有效霉素專利[特許公報(bào)(B2)]菌種匯總


另外，2004年4月，浙江工業(yè)大學(xué)鄭裕國(guó)等人已經(jīng)篩選到了嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonas malfrophilia)(CN 1563397)，該菌可以用于有效霉烯胺和有效霉胺的生產(chǎn)。2004年，日本還報(bào)道了利用Paenibacillus制備有效霉胺和有效霉烯胺的生產(chǎn)技術(shù)(JP 3586684B1)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種從土壤中篩選到的能將有效霉素裂解為有效霉烯胺和有效霉胺的新的微生物菌株；其次是提供一種利用該新的微生物裂解有效霉素生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺的方法。
本發(fā)明提供的新的微生物菌株屬于產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)的糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，該菌株已于2005年9月2日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，簡(jiǎn)稱CCTCC，保藏編號(hào)為CCTCC No.M 205095。
本發(fā)明從土壤中篩選到的新的菌株特性如下細(xì)胞形態(tài)短桿菌菌落形態(tài)好氧，30℃培養(yǎng)2天，在牛肉膏蛋白胨平板培養(yǎng)上的菌落呈圓形，直徑1毫米左右，隆起形狀為凸透鏡狀，邊緣整齊，光滑，質(zhì)地濕潤(rùn)易挑取，色澤呈乳白色，半透明。
生理生化特征革蘭氏陰性，牛肉膏蛋白胨斜面不擴(kuò)散，試管牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中30℃培養(yǎng)2天，渾濁，有絮狀沉淀形成，氧化酶陽(yáng)性，接觸酶陽(yáng)性，不運(yùn)動(dòng)，不產(chǎn)生吲哚，卵磷脂酶陽(yáng)性，不水解淀粉，鳥氨酸脫羧酶陰性，精氨酸脫羧酶陰性，賴氨酸脫羧酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陰性，酯酶(Tween 80)陰性，VP反應(yīng)陰性，酪素水解陰性，酪氨酸水解陽(yáng)性，不產(chǎn)生3-酮基乳糖。葡糖糖氧化型，不發(fā)酵乙醇，甲基紅反應(yīng)陰性，V-P反應(yīng)陰性，淀粉水解陰性，硝酸鹽還原陰性，亞硝酸鹽還原陰性，反硝化陽(yáng)性，脲酶陽(yáng)性，不液化明膠，產(chǎn)硫化氫，能利用丙二酸鹽、乙酸鹽、DL-乳酸鹽、丙酸鹽、戊酸鹽、檸檬酸鹽、3-羥基-丁酸鹽、L-脯氨酸，不能利用鼠李糖、N-乙酰葡萄糖胺、核糖、肌醇、蔗糖、麥芽糖、衣康酸、辛二酸鹽、L-丙氨酸、5-酮基-葡萄糖酸鹽、糖原、3-羥基-苯甲酸鹽、甘露醇、D-葡萄糖、水楊素、D-蜜二糖、L-巖藻糖、D-山梨醇、L-阿拉伯糖、癸酸鹽、組氨酸、2-酮基-葡萄糖酸鹽、4-羥基-苯甲酸鹽、L-絲氨酸。
根據(jù)以上細(xì)菌學(xué)特征，該新的菌株被鑒定屬于產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)的糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，該微生物具有裂解有效霉素生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺的能力。
本發(fā)明篩選到的新的菌株糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)不屬于上述已公開專利菌種的任何一種。
本發(fā)明所用到的原料是一種廣泛應(yīng)用的農(nóng)用抗生素——有效霉素，即井岡霉素，它是一種高效、安全的農(nóng)用抗生素，不污染環(huán)境，對(duì)人畜無害，目前已經(jīng)成為我國(guó)使用面積較廣、畝用成本最低、安全、無公害農(nóng)藥，是農(nóng)藥工業(yè)的一個(gè)重要品種。有效霉素是氨基糖苷類農(nóng)用抗生素，主要組分有A、B、C、D、E、F等，從有效霉素的結(jié)構(gòu)中可以發(fā)現(xiàn)，有效霉素是由有效霉烯胺、有效霉胺和β-D-葡萄糖等結(jié)構(gòu)組成。
本發(fā)明的新的微生物屬于產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)的糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，CCTCC No.M 205095。該新的菌株在20℃～40℃培養(yǎng)溫度下均能生長(zhǎng)，最適的生長(zhǎng)溫度為25℃～37℃，培養(yǎng)條件pH值6.0～8.0，最適的生長(zhǎng)pH值為中性或接近中性。該新的菌種或其菌體在含抗生素有效霉素的培養(yǎng)基上好氧發(fā)酵，具有裂解有效霉素制備有效霉烯胺和有效霉胺的能力。
用于本發(fā)明菌種CCTCC No.M 205095的培養(yǎng)基是一些含有可以被上述菌株利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如碳源、氮源、無機(jī)鹽等，作為碳源的除了有效霉素外，還可以有葡萄糖、乳糖、麥芽糖、糊精、淀粉、甘油、甘露醇、山梨醇、油脂類(豆油、豬油等)；作為氮源的有肉汁、酵母膏、干酵母、大豆粉、玉米漿、蛋白胨、尿素、氨鹽(硫酸銨、氯化銨、硝酸銨、醋酸胺等)，肽類(二肽、三肽等)；無機(jī)鹽類有Na、K、Ca、Mg、Fe、Mn、Zn、Co、Ni等金屬鹽類和磷酸鹽、醋酸鹽等有機(jī)酸鹽類；另外，還可少量添加的物質(zhì)有氨基酸類(如谷氨酸、天冬氨酸、賴氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸等)、微生素(VB1、VB2、VB12、VC、VE、煙酸等)、核酸類(如嘌呤、嘧啶及其衍生物等)。用無機(jī)酸或有機(jī)酸、堿類調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，還可加入適量的消泡劑，如泡敵等。液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)均可，但是大量工業(yè)化生產(chǎn)時(shí)，液體培養(yǎng)基較為合適。可采用培養(yǎng)方式有靜置培養(yǎng)、搖動(dòng)培養(yǎng)或通風(fēng)攪拌培養(yǎng)等，大量生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺時(shí)宜采用深層通風(fēng)攪拌培養(yǎng)。
本發(fā)明的新的微生物產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)的糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenesfaecalis)，CCTCC No.M 205095，該菌株糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，CCTCC No.M 205095，經(jīng)種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后接入含底物有效霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵分解底物，或種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后分離得到菌體，將得到的菌體加入有效霉素的溶液中進(jìn)行反應(yīng)分解底物，然后對(duì)分解液進(jìn)行分離、提純，得到有效霉烯胺和有效霉胺。
本發(fā)明的種子培養(yǎng)基重量體積之比如下(g/L)葡萄糖10～40，蛋白胨5～20，酵母膏1～10，MgSO40.1～1，自來水配制。
發(fā)酵培養(yǎng)基中主要成分為有效霉素，其它組分為可以被本發(fā)明的新的微生物利用的碳源、氮源、無機(jī)鹽等，本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基組成各重量體積之比如下(g/L)有效霉素5～50，葡萄糖1～20，蛋白胨1～10，酵母粉1～10，MgSO40.1～1，用自來水配制。
用本發(fā)明的新的菌株糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，CCTCC No.M205095分解底物有效霉素生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺，其方法有(1)利用該新的微生物發(fā)酵分解底物有效霉素制備有效霉烯胺和有效霉胺菌種CCTCC No.M 205095經(jīng)過活化，接入上述滅菌的種子培養(yǎng)基培養(yǎng)制成種子液，將種子液接入到上述配制滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)發(fā)酵。
種子培養(yǎng)的控制條件如下培養(yǎng)溫度25℃～37℃，pH6.0～8.0，培養(yǎng)時(shí)間24h～48h，pH值接近中性為好，在通風(fēng)攪拌或振蕩條件下進(jìn)行為佳；發(fā)酵培養(yǎng)的控制條件溫度25℃～37℃，pH為6.0～8.0，發(fā)酵時(shí)間為72h～192h，pH值接近中性為好，在通風(fēng)攪拌或振蕩條件下進(jìn)行為佳。該方法中培養(yǎng)基組成中的有效霉素既是微生物利用的碳源，又是被微生物裂解的底物；底物有效霉素裂解為有效霉亞基胺，有效霉亞基胺有A、B兩種，有效霉亞基胺再經(jīng)過裂解，生成有效霉烯胺(valienamine)和有效霉胺(validamine)(2)利用該新的微生物細(xì)胞，利用細(xì)胞催化裂解底物有效霉素制備有效霉烯胺和有效霉胺菌種CCTCC No.M 205095經(jīng)過活化，接入滅菌的種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～37℃，pH6.0～8.0，培養(yǎng)菌體到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后離心，收集菌體；將得到的菌體加入底物有效霉素溶液中，利用菌體裂解底物有效霉素生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺；有效霉素濃度，用重量體積之比表示(kg/L，％)1.0％～10.0％；反應(yīng)溫度25℃～37℃，反應(yīng)時(shí)間4h～96h，在通風(fēng)攪拌或振蕩的條件下進(jìn)行為佳。
在裂解有效霉素過程中pH值用無機(jī)酸或有機(jī)酸、堿類調(diào)節(jié)控制。
有效霉烯胺和有效霉胺為易溶于水的堿性物質(zhì)，因而可以采用水溶性堿性物質(zhì)的分離、精制方法，例如離子交換樹脂、活性炭、多孔高聚物，葡聚糖凝膠、離子交換劑等進(jìn)行吸附后解吸、層析等。
分離過程如下將含有有效霉烯胺和有效霉胺的發(fā)酵液或細(xì)胞催化反應(yīng)液離心或過濾除去菌體，再將上清液或?yàn)V液用大孔弱酸陽(yáng)離子交換樹脂進(jìn)行離子交換，用氨水溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，濃縮液用強(qiáng)堿性層析樹脂進(jìn)行層析，用水作為洗脫劑，收集只含有有效霉烯胺或有效霉胺的部分。冷凍干燥，得到成品。用薄層層析和氣相分析的方法對(duì)生產(chǎn)的有效霉烯胺和有效霉胺進(jìn)行分析，操作過程和實(shí)驗(yàn)條件按文獻(xiàn)J.Antibiot，1984，371301～1305和專利文獻(xiàn)EP0063456的方法進(jìn)行，所得到的結(jié)果與它們完全一致。由此可見，利用本發(fā)明的微生物能裂解有效霉素生產(chǎn)有效霉烯胺和有效霉胺。
具體實(shí)施方案下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏5，MgSO40.2，自來水配制，滅菌備用。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)有效霉素15，葡萄糖5，蛋白胨10，酵母粉10，MgSO40.2，以自來水配制，滅菌備用。
種子液的制備取500mL種子培養(yǎng)基，平均分裝在10個(gè)250mL三角瓶中，滅菌。接入斜面CCTCC No.M 205095進(jìn)行培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，在30℃搖床培養(yǎng)36h作為種子液。
發(fā)酵在15L發(fā)酵罐中裝入10L發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌。然后，接入種子液進(jìn)行發(fā)酵，接種量5％(V/V，即接入0.5L種子液)，發(fā)酵溫度30℃，pH7.0，通風(fēng)量3.5vvm，發(fā)酵時(shí)間96h。
產(chǎn)物的分離收集上述發(fā)酵液10L，離心分離除去菌體，上清液上柱(D113樹脂，NH4+)，進(jìn)行離子交換，用蒸餾水洗滌后，再用0.5mol/L的氨水洗脫，減壓濃縮，再將濃縮液上柱層析(Dowex 1×2，OH-)，用蒸餾水洗脫，用薄層層析方法進(jìn)行分析(硅膠板G青島海洋化工廠；層析劑，正丙醇/乙酸/水＝4∶1∶1；0.5％茚三酮顯色，有效霉烯胺Rf＝0.45，有效霉胺的Rf＝0.39)，分段收集洗脫液，收集只含有有效霉烯胺或有效霉胺的部分，然后進(jìn)行真空冷凍干燥。得到8.1克有效霉烯胺和2.4克有效霉胺。
實(shí)施例2種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖10，蛋白胨20，酵母膏1，MgSO40.1，自來水配制，滅菌備用。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)有效霉素20，葡萄糖5，蛋白胨10，酵母粉10，MgSO40.2，以自來水配制，滅菌備用。
種子液的制備取150mL種子培養(yǎng)基，平均分裝在3個(gè)250mL三角瓶中，滅菌。接入斜面CCTCC No.M 205095進(jìn)行培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，在25℃搖床培養(yǎng)48h作為種子液。
發(fā)酵20個(gè)500mL的三角瓶中，每瓶裝入100mL發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌，然后接入種子液進(jìn)行發(fā)酵，接種量5％(即接入5mL種子液)，發(fā)酵溫度28℃，pH7.0，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵時(shí)間144h。
收集上述發(fā)酵液1.8L，進(jìn)行分離、純化，步驟同實(shí)施例1。得到1.9克有效霉烯胺和0.4克有效霉胺。
實(shí)施例3種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖40，蛋白胨5，酵母膏10，MgSO41，自來水配制，滅菌備用。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)有效霉素30，葡萄糖5，蛋白胨10，酵母粉10，MgSO40.2，以自來水配制，滅菌備用。
種子液的制備取150mL種子培養(yǎng)基，平均分裝在3個(gè)250mL三角瓶中，滅菌。接入斜面CCTCC No.M 205095進(jìn)行培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，在37℃搖床培養(yǎng)24h作為種子液。
發(fā)酵20個(gè)500mL的三角瓶中，每瓶裝入100mL發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌，然后接入種子液進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度35℃，pH7.2，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵時(shí)間144h。
收集上述發(fā)酵液1.8L，進(jìn)行分離、純化，步驟同實(shí)施例1，得到2.1克有效霉烯胺和0.8克有效霉胺。
實(shí)施例4種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖25，蛋白胨15，酵母膏5，MgSO40.4，自來水配制，滅菌備用。
種子液的制備同實(shí)施例1。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)有效霉素50，葡萄糖1，蛋白胨10，酵母粉1，MgSO41，以自來水配制，滅菌備用。
發(fā)酵20個(gè)500mL的三角瓶中，每瓶裝入100mL發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌，然后接入種子液進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度25℃，pH6.0，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵時(shí)間192h。
收集上述發(fā)酵液1.8L，進(jìn)行分離、純化，步驟同實(shí)施例1，得到2.2克有效霉烯胺和0.9克有效霉胺。
實(shí)施例5種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖30，蛋白胨8，酵母膏6，MgSO40.5，自來水配制，滅菌備用。
種子液的制備同實(shí)施例1。
發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)有效霉素5，葡萄糖20，蛋白胨1，酵母粉10，MgSO40.1，以自來水配制，滅菌備用。
發(fā)酵20個(gè)500mL的三角瓶中，每瓶裝入100mL發(fā)酵培養(yǎng)基，滅菌，然后接入種子液進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵溫度37℃，pH8.0，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，發(fā)酵時(shí)間72h。
收集上述發(fā)酵液1.8L，進(jìn)行分離、純化，步驟同實(shí)施例1，得到0.7克有效霉烯胺和0.2克有效霉胺。
實(shí)施例6種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏5，MgSO40.2，自來水配制，滅菌備用。
菌體的制備取500mL種子培養(yǎng)基，平均分裝在10個(gè)250mL三角瓶中，滅菌。接入斜面CCTCC No.M 205095進(jìn)行培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，在30℃搖床培養(yǎng)菌體到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，離心，收集菌體。
細(xì)胞催化反應(yīng)將收集得到的菌體加入到100mL含5.0％的有效霉素水溶液中，反應(yīng)溫度30℃，反應(yīng)時(shí)間48h。
收集上述發(fā)酵液100mL，進(jìn)行分離、純化，步驟同實(shí)施例1，得到0.4克有效霉烯胺和0.1克有效霉胺。
實(shí)施例7種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖10，蛋白胨20，酵母膏10，MgSO40.1，自來水配制，滅菌備用。
菌體的制備同實(shí)施例6。
細(xì)胞催化反應(yīng)將收集得到的菌體加入到100mL 1.0％的有效霉素水溶液中，反應(yīng)溫度37℃，反應(yīng)時(shí)間4h。
收集上述發(fā)酵液100mL，進(jìn)行分離、純化，步驟同實(shí)施例1，得到0.09克有效霉烯胺和0.04克有效霉胺。
實(shí)施例8種子培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖40，蛋白胨5，酵母膏1，MgSO41，自來水配制，滅菌備用。
菌體的制備同實(shí)施例6。
細(xì)胞催化反應(yīng)將收集得到的菌體加入到100mL 10.0％的有效霉素水溶液中，反應(yīng)溫度25℃，反應(yīng)時(shí)間96h。
收集上述發(fā)酵液100mL，進(jìn)行分離、純化，步驟同實(shí)施例1，得到0.5克有效霉烯胺和0.2克有效霉胺。
權(quán)利要求
1.一種利用微生物糞產(chǎn)堿菌裂解有效霉素制備有效霉烯胺和有效霉胺的方法，其特征是所述的微生物屬于產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)的糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，CCTCC No.M 205095，該菌株或該菌株菌體具有裂解底物有效霉素為有效霉烯胺和有效霉胺的能力；所述糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，CCTCC No.M 205095，經(jīng)種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后接入含底物有效霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵分解底物，或種子培養(yǎng)基培養(yǎng)后分離得到菌體，將得到的菌體加入有效霉素的溶液中進(jìn)行反應(yīng)分解底物，然后對(duì)分解液進(jìn)行分離、提純，得到有效霉烯胺和有效霉胺。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的種子培養(yǎng)基，各組成的重量體積之比，即g/L為葡萄糖10～40，蛋白胨5～20，酵母膏1～10，MgSO40.1～1，自來水配制。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的發(fā)酵培養(yǎng)基，各組成的重量體積之比，即g/L為有效霉素5～50，葡萄糖1～20，蛋白胨1～10，酵母粉1～10，MgSO40.1～1，以自來水配制。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征是在種子培養(yǎng)基中接入微生物CCTCC No.M 205095進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～37℃，pH6.0～8.0，培養(yǎng)時(shí)間24h～48h，得到種子液；種子液接入含底物有效霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，其發(fā)酵條件是發(fā)酵溫度25℃～37℃，pH6.0～8.0，發(fā)酵時(shí)間為72h～192h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是在種子培養(yǎng)基中接入微生物CCTCC No.M 205095進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25℃～37℃，pH6.0～8.0，培養(yǎng)菌體到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，然后離心分離，得到菌體；將分離得到的菌體，加入含底物有效霉素的溶液中進(jìn)行反應(yīng)，利用菌體分解底物，反應(yīng)溫度25℃～37℃，反應(yīng)時(shí)間4h～96h。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征是底物有效霉素的濃度為1.0％～10.0％，反應(yīng)溫度25℃～37℃，反應(yīng)時(shí)間4h～96h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的具有裂解有效霉素為有效霉烯胺和有效霉胺的微生物，該微生物屬于產(chǎn)堿菌屬(Alcaligenes)的糞產(chǎn)堿菌(Alcaligenes faecalis)，CCTCC No.M 205095，還公開了利用該微生物裂解有效霉素制備有效霉烯胺和有效霉胺的方法。
文檔編號(hào)C12R1/05GK1772914SQ20051006136
公開日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月1日
發(fā)明者鄭裕國(guó), 薛亞平, 王遠(yuǎn)山, 陳小龍, 沈寅初 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)