專利名稱：以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物技術(shù)領(lǐng)域中的蛹蟲草子實體產(chǎn)品及其培育方法。
背景技術(shù)：
蛹蟲草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link又稱為北蟲草，屬于子囊菌門Ascomycota、子囊菌綱Ascomycetes、肉座菌目Hypocreales、麥角菌科Clavicipitaceae、蟲草屬Cordyceps的模式種。蛹蟲草為世界廣布種，我國各省均有分布，春至秋季在半埋于林地上或腐枝落葉層下鱗翅目昆蟲蛹上長出。
蛹蟲草與同屬的冬蟲夏草C.sinensis(Berk)Sacc.有極為相似的保健功效和藥用價值，如抗疲勞、抗衰老、增強免疫力、抗炎、對S180瘤等腫瘤均有較強的抑制作用。蛹蟲草以其豐富的營養(yǎng)成分和獨特的藥用價值受到消費者的青睞，市場需求不斷上漲。僅僅依靠自然資源無法滿足人們的需求，因此，加強蛹蟲草的人工栽培是解決這個矛盾的最佳途徑。目前除了利用米飯培養(yǎng)基栽培子實體外，還通過以昆蟲為寄主來培植蛹蟲草。潘中華等對家蠶蛹Bombyxmori L.培植蛹蟲草進行了較系統(tǒng)的研究，柞蠶蛹Antheraea pernyi Guerin-Meneville和蚱蟬蛹Cryptotympana pustulata Fabricius可用來培植蛹蟲草。
黃粉蟲別名大黃粉、黃粉甲，俗稱面包蟲，隸屬于鞘翅目擬步行蟲科Tenebrionidae營養(yǎng)價值高，還具有良好的藥用價值。黃粉蟲含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)，尤其蛋白質(zhì)含量很高，其中粗蛋白質(zhì)達55.23％～58.70％。黃粉蟲具有一定的促進生長、益智、抗疲勞和抗組織缺氧作用。不同劑量的黃粉蟲幼蟲粉均可顯著抑制高血脂大鼠血清中TC、TG的升高(P＜0.01)，說明黃粉蟲幼蟲粉有較明顯的調(diào)節(jié)血脂作用。特別是黃粉蟲能進行大規(guī)模人工飼養(yǎng)，為生產(chǎn)提供穩(wěn)定安全的原料來源。因此，利用黃粉蟲蛹進行蛹蟲草培植研究將具有廣闊的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用前景。但目前尚未有利用蛹蟲草菌感染黃粉蟲蛹培育出蛹蟲草子實體的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體產(chǎn)品及其培育方法。
本發(fā)明所提供的蛹蟲草子實體是用蛹蟲草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌種感染黃粉蟲蛹培育而成。
本發(fā)明所提供的以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體是一種新產(chǎn)品，有以下特征黃粉蟲蛹體呈黃棕色或棕褐色，體表略帶橙黃色的菌絲。子實體棒形或多分枝狀，橙黃色的，單個或多條叢生于黃粉蟲蛹體表。
本發(fā)明所提供的以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法包括菌種制備、對黃粉蟲蛹接種感染和出草等培養(yǎng)步驟。黃粉蟲蛹為黃粉蟲經(jīng)室內(nèi)培養(yǎng)取得。
具體的培育步驟如下(1)采用常規(guī)方法將采集或采購得到的蛹蟲草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link子實體在分離培養(yǎng)基上經(jīng)多孢分離純化得蛹蟲草菌種，然后經(jīng)一級菌種和二級菌種的菌種制備，將培養(yǎng)得到的二級菌種的液體菌種用經(jīng)滅菌的單層紗布過濾，得用于接種感染的二級菌種濾液；(2)用消毒劑對用于接種感染黃粉蟲蛹進行浸泡消毒，然后用無菌注射器吸入二級菌種濾液注入黃粉蟲蛹的前胸，每個黃粉蟲蛹可注入0.05ml～0.2ml菌種濾液；(3)將受感染的黃粉蟲蛹置于無菌的組培瓶內(nèi)進行保濕暗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是空氣相對濕度在80-100％，溫度為18-25℃，至黃粉蟲蛹體表外出現(xiàn)白色菌絲；然后進行光照誘導(dǎo)，光照強度要求在1000-2000Lux之間，至體表菌絲變成黃色，在蛹體表產(chǎn)生蛹蟲草子實體原基，繼續(xù)培養(yǎng)50-60天，在蛹體開始萎縮時采收蛹蟲草子實體。
本發(fā)明用于進行一級菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20％、葡萄糖2％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、維生素B1少許、瓊脂2％；用于進行二級菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、KH2PO40.4％、MgSO4·7H2O 0.4％、維生素B1少許，pH6.5。
本發(fā)明第一步中是采用常規(guī)方法對采集或采購的蛹蟲草進行分離純化取得菌種，并通過常規(guī)方法進行包括一級菌種和二級菌種的菌種制備。
其一級菌種制備是將分離純化的菌種接至無菌的試管中固體斜面培養(yǎng)基，20℃-25℃，避光培養(yǎng)7-10天，白色絨毛狀菌絲長滿斜面即得。二級菌種制備是將一級菌種接至經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基中，25℃，120r/m，振蕩培養(yǎng)7-10天，至菌球充滿液體培養(yǎng)基即得。
本發(fā)明第二步中對接種感染黃粉蟲蛹進行浸泡消毒的消毒劑可采用穩(wěn)定型二氧化氯。
本發(fā)明所得的蛹蟲草產(chǎn)品的子實體部分與野生蛹蟲草相似，營養(yǎng)成分相近。
以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草具有多種營養(yǎng)成分及有效活性成分，可作為食品應(yīng)用。以下為分析檢測結(jié)果分析檢測結(jié)果一

分析檢測結(jié)果二

分析檢測結(jié)果三

分析檢測結(jié)果四

分析檢測結(jié)果五

本發(fā)明利用液體菌種過濾取得菌液，用注射方式感染黃粉蟲蛹的技術(shù)，使黃粉蟲蛹感染率達80以上，培育出草率可達100％。所得產(chǎn)品的蟲草素達3.31mg/g，腺苷1.76mg/g，蟲草酸45.18mg/g。
本發(fā)明培育方法簡單，蛹蟲草子實體生長率高，生產(chǎn)成本低，是開發(fā)新型的蛹蟲草的一種有效、可靠的方法。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方法對本發(fā)明進一步說明。
(1)黃粉蟲化蛹將黃粉蟲Tenebrio molitor(L.)幼蟲于室內(nèi)培養(yǎng)得蟲蛹，用于培育蛹蟲草子實體。
(2)菌種制備(2.1)菌種采集蛹蟲草子實體，經(jīng)多孢分離純化所得，分離培養(yǎng)基配方葡萄糖1％、蛋白胨1％、MgSO4·7H2O0.05％、維生素B1少許、瓊脂1.5％，pH6.5。經(jīng)出草試驗，符合蛹蟲草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link的基本特征，無性型為擬青霉屬(Paecilomyces)，見《西南農(nóng)業(yè)學(xué)報》(梁宗琦.蛹蟲草的無性型及子實體的人工培養(yǎng)研究.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，1990(2)1-8)。
(2.2)一級菌種接至無菌的試管中固體斜面培養(yǎng)基，20℃-25℃，避光培養(yǎng)7-10天，白色絨毛狀菌絲長滿斜面即可。培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20％、葡萄糖2％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、維生素B1少許、瓊脂2％。
(2.3)二級菌種將一級菌種接種至經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基中，25℃，120r/m，振蕩培養(yǎng)7-10天，至菌球充滿全部液體培養(yǎng)基過濾即可。培養(yǎng)基配方葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、KH2PO40.4％、MgSO4·7H2O 0.4％、維生素B1少許，pH6.5。
(3)接種感染利用穩(wěn)定型二氧化氯消毒劑對黃粉蟲蛹進行浸泡消毒2-10min，用無菌的注射器吸入二級菌種，于黃粉蟲蛹胸前注入0.1mL，于無菌組培瓶內(nèi)進行培養(yǎng)。
(4)出草培養(yǎng)受感染的黃粉蟲蛹于無菌組培瓶內(nèi)進行培養(yǎng)?？諝庀鄬穸仍?0-100％；溫度為18-25℃。保濕方法可將組培瓶置于有適量水的托盤中，用透明的薄膜袋套住并把袋口扎緊。暗培養(yǎng)2-5天，黃粉蟲蛹體表外可出現(xiàn)白色菌絲，即進行光照誘導(dǎo)。光照強度要求在1000-2000Lux之間，經(jīng)1-2天，體表菌絲變成黃色，6-10天后，蛹體表有原基產(chǎn)生。繼續(xù)培養(yǎng)50-60天，蛹體開始萎縮時即可采收。
上述實施例經(jīng)過多次重復(fù)，均能達到本發(fā)明的目的，即生產(chǎn)出以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體。本發(fā)明中利用直接注射為感染途徑，使黃粉蟲蛹的感染率達到100％，是黃粉蟲蛹成功培育蛹蟲草子實體的基礎(chǔ)。
權(quán)利要求
1.一種以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體，其特征在于用蛹蟲草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌種感染黃粉蟲蛹培育而成，其黃粉蟲蛹體呈黃棕色或棕褐色，體表略帶橙黃色的菌絲，子實體棒形或多分枝狀，橙黃色的，單個或多條叢生于黃粉蟲蛹體表。
2.一種以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體的培育方法，其培育步驟如下(1)將蛹蟲草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌種在分離培養(yǎng)基上經(jīng)多孢分離純化得蛹蟲草菌種，然后經(jīng)一級菌種和二級菌種的菌種制備，將培養(yǎng)得到的二級菌種的液體菌種用經(jīng)滅菌的單層紗布過濾，得用于接種感染的二級菌種濾液；(2)用消毒劑對用于接種感染黃粉蟲蛹進行浸泡消毒，然后用無菌注射器吸入二級菌種濾液注入黃粉蟲蛹的前胸，每個黃粉蟲蛹注入0.05ml～0.2ml菌種濾液；(3)將受感染的黃粉蟲蛹置于無菌的組培瓶內(nèi)進行保濕暗培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是空氣相對濕度在80-100％，溫度為18-25℃，至黃粉蟲蛹體表外出現(xiàn)白色菌絲；然后進行光照誘導(dǎo)，光照強度要求在1000-2000Lux之間，至體表菌絲變成黃色，在蛹體表產(chǎn)生蛹蟲草子實體原基，繼續(xù)培養(yǎng)50-60天，在蛹體開始萎縮時采收蛹蟲草子實體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛹蟲草子實體的培育方法，其特征在于進行一級菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20％、葡萄糖2％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、維生素B1少許、瓊脂2％；進行二級菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為葡萄糖2％、蛋白胨0.4％、KH2PO40.4％、MgSO4·7H2O 0.4％、維生素B1少許，pH6.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛹蟲草子實體的培育方法，其特征在于對接種感染黃粉蟲蛹進行浸泡消毒的消毒劑為穩(wěn)定型二氧化氯。
全文摘要
本發(fā)明提供一種以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體及其培育方法，所提供的蛹蟲草子實體是用蛹蟲草Cordyceps militaris(L.Fr.)Link菌種感染黃粉蟲蛹培育而成，具有以下特征黃粉蟲蛹體呈黃棕色或棕褐色，體表略帶橙黃色的菌絲。子實體棒形或多分枝狀，橙黃色的，單個或多條叢生于黃粉蟲蛹體表。本發(fā)明所提供的培育方法包括菌種制備、對黃粉蟲蛹接種感染和出草等培養(yǎng)步驟。以黃粉蟲蛹為寄主的蛹蟲草子實體產(chǎn)品具有多種營養(yǎng)成分及有效活性成分，可作為食品應(yīng)用。其培育方法簡單，蛹蟲草子實體生長率高，生產(chǎn)成本低，是開發(fā)新型的蛹蟲草的一種有效、可靠的方法。
文檔編號C12N1/14GK1793317SQ200510101348
公開日2006年6月28日 申請日期2005年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月16日
發(fā)明者李泰輝, 林群英, 宋斌, 黃浩, 鐘月金, 沈亞恒 申請人:廣東省微生物研究所