專(zhuān)利名稱(chēng)：一種微生物殺菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種用于防治植物葉部病害的生物農(nóng)藥及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著化學(xué)農(nóng)藥大量持續(xù)使用帶來(lái)的對(duì)生態(tài)環(huán)境及人體健康的直接或間接的污染和危害問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，近年來(lái)開(kāi)發(fā)利用無(wú)公害、對(duì)生態(tài)環(huán)境友好的活體微生物農(nóng)藥的研究及應(yīng)用越來(lái)越多，尤其是世界上的一些發(fā)達(dá)國(guó)家投入了大量的人力、物力、財(cái)力用于微生物農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。木霉菌作為自然界中廣泛存在的一種微生物，其對(duì)植物病原菌的生防作用早在上個(gè)世紀(jì)三十年代就被人們發(fā)現(xiàn)。木霉菌對(duì)真菌性植物病害有著多種類(lèi)型的作用機(jī)制，主要包括對(duì)病原真菌的重寄生作用、溶菌作用、營(yíng)養(yǎng)與生態(tài)位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)作用以及產(chǎn)抗生素作用。作為極具潛力的生防菌，因其具有對(duì)生態(tài)環(huán)境及人畜安全無(wú)害、作用機(jī)制獨(dú)特、不易產(chǎn)生抗藥性等多種優(yōu)點(diǎn)，目前在世界各國(guó)開(kāi)展木霉菌制劑研究相當(dāng)多，并且已登記木霉菌殺菌劑有十多個(gè)品種。我國(guó)在木霉菌劑研制上起步落后于一些發(fā)達(dá)國(guó)家，目前多數(shù)研究開(kāi)發(fā)仍處于研發(fā)階段，截止目前僅有一個(gè)木霉菌登記品種特立克。因此，我國(guó)木霉菌生防制劑開(kāi)發(fā)應(yīng)用空間極大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是針對(duì)上述問(wèn)題，提供一種菌株對(duì)多種植物病原真菌具有強(qiáng)烈的拮抗殺菌作用，以及該菌株制成藥劑的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案一種微生物，其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌Tr01(Trichoderma harzianum)，其保藏登記號(hào)為CGMCC No.1555。
一種微生物殺菌劑及其制備方法，(1)一級(jí)種培養(yǎng)采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基；二級(jí)種制備以稻粒培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得；發(fā)酵罐培養(yǎng)以稻粒為發(fā)酵材料，按照二級(jí)種與發(fā)酵料重量比1∶70～120接入二級(jí)種，并在24-29℃條件下供氧發(fā)酵，10-30天后，獲得孢子粉；(2)以孢子粉、木質(zhì)素磺酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉、輕質(zhì)碳酸鈣按重量比為8～12∶5～12∶2～6∶70～85配制成制劑。
本發(fā)明的有益效果利用木霉菌Tr01菌株發(fā)酵配制的生防制劑，可以用于多種蔬菜病害如灰霉病、葉霉病、早疫病、白粉病等防治，平均防效可達(dá)60-75％以上，增產(chǎn)5-15％以上。對(duì)多種蔬菜病害具有良好的防治作用，具有對(duì)人、動(dòng)物安全無(wú)害，對(duì)生態(tài)環(huán)境友好，無(wú)農(nóng)藥殘留與污染問(wèn)題，同時(shí)不存在病原菌產(chǎn)生抗藥性等多種優(yōu)點(diǎn)。
微生物(株)Tr01保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏時(shí)間2005年12月08日保藏編號(hào)CGMCC No155具體實(shí)施例方式實(shí)例1本項(xiàng)發(fā)明木霉菌株(Trichoderma harzianum，編號(hào)Tr01)是從作物根際土壤中分離篩選獲得。經(jīng)過(guò)菌株的分離培養(yǎng)、純化、鑒定轉(zhuǎn)移到PDA(培養(yǎng)基配方馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克、水1000毫升)試管斜面內(nèi)作為源菌種備用。
一級(jí)種固體培養(yǎng)基配方采用PDA平板培養(yǎng)基。將試管PDA中培養(yǎng)好的木霉菌菌種挑入PDA平板中，并在26℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7-9天后，平板表面產(chǎn)生濃綠色孢子后，用于固體擴(kuò)繁接種；
二級(jí)種培養(yǎng)基制備方法將稻粒在沸水中蒸煮20分鐘并浸泡30分鐘后，將稻粒撈出并裝入17×30cm的聚丙烯塑料袋中500g，并用袋套封口，在121℃、1個(gè)大氣壓下滅菌90分鐘。
將培養(yǎng)好的一級(jí)種接入二級(jí)種培養(yǎng)基中，每袋接入培養(yǎng)好的木霉菌PDA菌碟6個(gè)，然后封口，在28℃條件下培養(yǎng)10天后，待其菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)料后，進(jìn)行固體發(fā)酵罐的接種。
固體發(fā)酵罐發(fā)酵材料的準(zhǔn)備方法將固體發(fā)酵材料一稻粒裝入發(fā)酵罐中，利用蒸氣滅菌2小時(shí)后，用自來(lái)水冷卻至28℃即可。
按照1∶100比例接入發(fā)酵罐中培養(yǎng)好的二級(jí)菌種，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，開(kāi)始發(fā)酵，發(fā)酵控制條件如下第一階段為菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)階段，即在28℃、相對(duì)濕度95％條件下靜態(tài)培養(yǎng)，并進(jìn)行間隔定時(shí)供氧，發(fā)酵時(shí)間10天，此時(shí)發(fā)酵料菌絲生長(zhǎng)完成；第二階段為產(chǎn)孢發(fā)酵培養(yǎng)階段，發(fā)酵罐技術(shù)參數(shù)為溫度設(shè)置為26℃、濕度設(shè)定為85％，攪拌參數(shù)設(shè)定為1次/24小時(shí)，每次5分鐘，發(fā)酵10天后，發(fā)酵料上完全長(zhǎng)滿(mǎn)濃綠色分生孢子、無(wú)白色氣生菌絲后，取出發(fā)酵料。發(fā)酵好的材料，放置于控溫、控濕的無(wú)菌室中，進(jìn)行干燥處理，在26℃相對(duì)濕度25％條件下自然干燥后熟10天。干燥后的發(fā)酵料用旋風(fēng)式孢子收集機(jī)進(jìn)行收集，獲得高純度木霉菌孢子粉。
然后用小型攪拌機(jī)將木霉菌孢子粉、木質(zhì)素磺酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉、輕質(zhì)碳酸鈣等配料放入攪拌機(jī)中充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆?各組份用量按照孢子粉木質(zhì)素磺酸鈣十二烷基苯磺酸鈉輕質(zhì)碳酸鈣為10∶10∶5∶75的比例加入)，并分裝成每袋20克的木霉菌可濕粉殺菌劑。
利用該木霉菌殺菌劑600～800倍葉面噴霧防治灰霉病、葉霉病及白粉病等多種蔬菜病害可獲得75％以上的防治效果。
實(shí)例2經(jīng)過(guò)純化的木霉菌菌株(Trichoderma harzianum，編號(hào)Tr01)轉(zhuǎn)移到PDA(培養(yǎng)基配方馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克、水1000毫升)試管斜面內(nèi)作為源菌種備用，一級(jí)種、二級(jí)種制備同實(shí)例一。
固體發(fā)酵罐發(fā)酵材料的準(zhǔn)備方法將固體發(fā)酵材料一稻粒裝入發(fā)酵罐中，利用蒸氣滅菌2小時(shí)后，用自來(lái)水部冷卻至28℃即可。
按照1∶100比例接入發(fā)酵罐中培養(yǎng)好的二級(jí)菌種，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，開(kāi)始發(fā)酵，發(fā)酵控制條件如下第一階段為菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)階段，即在28℃、相對(duì)濕度95％條件下靜態(tài)培養(yǎng)，并進(jìn)行間隔定時(shí)供氧，發(fā)酵時(shí)間7天，此時(shí)發(fā)酵料菌絲生長(zhǎng)完成；第二階段為產(chǎn)孢發(fā)酵培養(yǎng)階段，發(fā)酵罐技術(shù)參數(shù)為溫度設(shè)置為26℃、濕度設(shè)定為85％，攪拌參數(shù)設(shè)定為1次/24小時(shí)，每次5分鐘。發(fā)酵10天后，發(fā)酵料上完全長(zhǎng)滿(mǎn)濃綠色分生孢子、無(wú)白色氣生菌絲后，取出發(fā)酵料。發(fā)酵好的材料，放置于控溫、控濕的無(wú)菌室中，進(jìn)行干燥處理，在26℃相對(duì)濕度25％條件下自然干燥10天。干燥后的發(fā)酵料用旋風(fēng)式孢子收集機(jī)進(jìn)行收集，獲得高純度木霉菌孢子粉。
然后用小型攪拌機(jī)將木霉菌孢子粉、木質(zhì)素磺酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉、輕質(zhì)碳酸鈣等配料放入攪拌機(jī)中充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆?各組份用量按照孢子粉木質(zhì)素磺酸鈣十二烷基苯磺酸鈉輕質(zhì)碳酸鈣為10∶5∶2.5∶82.5的比例加入)，并分裝成每袋20克的木霉菌可濕粉殺菌劑。
利用該木霉菌殺菌劑600～800倍葉面噴霧防治灰霉病、葉霉病及白粉病等多種蔬菜病害可獲得60％以上的防治效果。
權(quán)利要求
1.一種微生物，其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌Tr01(Trichoderma harzianum)，其保藏登記號(hào)為CGMCC No.1555。
2.一種微生物殺菌劑及其制備方法，其特征在于(1)一級(jí)種培養(yǎng)采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基；二級(jí)種制備以稻粒培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得；發(fā)酵罐培養(yǎng)以稻粒為發(fā)酵材料，按照二級(jí)種與發(fā)酵料重量比1∶70～120接入二級(jí)種，并在24～29℃條件下供氧發(fā)酵，10～30天后，獲得孢子粉；(2)以孢子粉、木質(zhì)素磺酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉、輕質(zhì)碳酸鈣按重量比為8～12∶5～12∶2～6∶70～85，配制成制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種微生物殺菌劑及其制備方法，其特征在于(1)一級(jí)種培養(yǎng)采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基；二級(jí)種制備以稻粒培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得；發(fā)酵罐培養(yǎng)以稻粒為發(fā)酵材料，按照二級(jí)種與發(fā)酵料重量比1∶100接入二級(jí)種，并在24～29℃條件下供氧發(fā)酵，10～30天后，獲得孢子粉；(2)以孢子粉、木質(zhì)素磺酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉、輕質(zhì)碳酸鈣按重量比為10∶10∶5∶75配制成制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種微生物殺菌劑及其制備方法，其特征在于(1)一級(jí)種培養(yǎng)采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基；二級(jí)種制備以稻粒培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得；發(fā)酵罐培養(yǎng)以稻粒為發(fā)酵材料，按照二級(jí)種與發(fā)酵料重量比1∶100接入二級(jí)種，并在24～29℃條件下供氧發(fā)酵，10～30天后，獲得孢子粉；(2)以孢子粉、木質(zhì)素磺酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉、輕質(zhì)碳酸鈣按重量比為10∶5∶2.5∶82.5配制成制劑。
全文摘要
一種微生物殺菌劑及其制備方法是一種用于防治植物葉部病害的生物農(nóng)藥及其制備方法。本發(fā)明就是提供一種菌株對(duì)多種植物病原真菌具有強(qiáng)烈的拮抗殺菌作用，以及該菌株制成藥劑的生產(chǎn)方法。一種微生物，其特征在于它是用于植物真菌病害生物防治的木霉菌Tr01。一種微生物殺菌劑及其制備方法(1)一級(jí)種培養(yǎng)采用常規(guī)PDA培養(yǎng)基；二級(jí)種制備以稻粒培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得；發(fā)酵罐培養(yǎng)以稻粒為發(fā)酵材料，按照二級(jí)種與發(fā)酵料重量比1∶70～120接入二級(jí)種，并在24－29℃條件下供氧發(fā)酵，10－30天后，獲得孢子粉；(2)以孢子粉、木質(zhì)素磺酸鈣、十二烷基苯磺酸鈉、輕質(zhì)碳酸鈣按重量比為8～12∶5～12∶2～6∶70～85配制成制劑。
文檔編號(hào)C12P3/00GK1793323SQ20051013678
公開(kāi)日2006年6月28日 申請(qǐng)日期2005年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日
發(fā)明者朱茂山, 蔡忠杰, 關(guān)天舒 申請(qǐng)人:遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所