專利名稱：：液化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及液化含淀粉物質(zhì)的改良方法，該方法適于作為生產(chǎn)糖漿和發(fā)酵產(chǎn)品方法中的一個步驟。本發(fā)明還涉及生產(chǎn)乙醇的方法，包括根據(jù)本發(fā)明液化含淀粉原料。
背景技術(shù)：
：液化是本領(lǐng)域公知的方法，通過其將淀粉轉(zhuǎn)化成較短的鏈和粘性較低的糊精。該方法通常涉及加入α-淀粉酶的同時或之后的淀粉糊化。液化用于生產(chǎn)糖漿和發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的方法中。存在改進(jìn)液化步驟的需要，用于將淀粉轉(zhuǎn)化成糖漿和發(fā)酵產(chǎn)品，尤其是如乙醇。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供液化含淀粉物質(zhì)的改良方法，尤其是例如通過干磨(drymilling)減小了大小的含淀粉物質(zhì)。本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過用至少一種α-淀粉酶和麥芽糖淀粉酶(maltogenicamylase)或者用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶處理可以提高干磨含淀粉物質(zhì)的液化。認(rèn)為酯酶作用于含淀粉物質(zhì)中存在的脂質(zhì)來產(chǎn)生較小的分子，該較小的分子較少產(chǎn)生稱為凝沉淀粉(retrogradedstarch)的淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物。本發(fā)明方法的一個優(yōu)勢是通過降低糊化的熱或溫?zé)釢{液的粘度來提高液化并防止或至少減少蒸汽蒸煮(jetcooking)過程中凝沉淀粉的形成。此外，根據(jù)本發(fā)明，從含淀粉的原材料釋放出更多的碳水化合物。因此，本發(fā)明的第一個方面提供了液化含淀粉物質(zhì)的方法，包括用至少一種α-淀粉酶和麥芽糖(maltogenic)淀粉酶處理所述含淀粉物質(zhì)的步驟。本發(fā)明的第二個方面提供了液化含淀粉物質(zhì)的方法，包括用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶處理所述含淀粉物質(zhì)的步驟。液化方法的一個實(shí)施方案中，包括步驟i)用至少一種酯酶預(yù)處理含淀粉物質(zhì)的漿液，ii)用α-淀粉酶液化預(yù)處理的漿液優(yōu)選的實(shí)施方案中，減小含淀粉物質(zhì)的大小，優(yōu)選通過干磨?？梢砸远嚯A段(stage)熱漿處理(hotslurryprocess)來進(jìn)行液化步驟ii)，如三階段處理，在不同的溫度和保持時間(holdingtimes)下進(jìn)行。發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇和其它基于淀粉的產(chǎn)品如糖漿的生產(chǎn)中，含淀粉的原料，如全谷物或整谷粒(wholegrains)，優(yōu)選玉米，大小可以被減小，優(yōu)選通過干磨，以便打開結(jié)構(gòu)并使得可以進(jìn)一步加工。減小含淀粉物質(zhì)大小的技術(shù)，包括干磨，是本領(lǐng)域公知的。另一方面中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大小(b)用至少一種α-淀粉酶和至少一種麥芽糖淀粉酶液化步驟(a)的產(chǎn)物；(c)用碳水化合物源產(chǎn)生酶(carbohydratesourcegeneratingenzyme)來糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。優(yōu)選實(shí)施方案中，減小含淀粉物質(zhì)的大小，優(yōu)選通過干磨。根據(jù)本發(fā)明的液化方法進(jìn)行步驟(b)。分開或同時進(jìn)行步驟(c)和(d)(SSF方法)。另一方面中，本發(fā)明涉及生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大小(b)用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶液化步驟(a)的產(chǎn)物；(c)用碳水化合物產(chǎn)生酶糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。優(yōu)選實(shí)施方案中，減小含淀粉物質(zhì)的大小，優(yōu)選通過干磨。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行步驟(b)。分開或同時進(jìn)行步驟(c)和(d)(SSF方法)。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大小(b)i)用至少一種酯酶預(yù)處理所述含淀粉物質(zhì)的漿液，和ii)用α-淀粉酶液化預(yù)處理的漿液(c)用碳水化合物產(chǎn)生酶來糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。可以根據(jù)本發(fā)明的液化方法進(jìn)行步驟(b)和(c)。分開或同時進(jìn)行步驟(c)和(d)(SSF方法)。發(fā)明描述本發(fā)明提供了改良的液化方法，該方法適于用作生產(chǎn)如糖漿或發(fā)酵產(chǎn)品方法中的一個步驟。作為本發(fā)明方法的結(jié)果，防止或至少降低了凝沉淀粉的形成，并因此從含淀粉原材料中釋放出更多的碳水化合物。原料減小含淀粉原料的大小，優(yōu)選通過干磨。干磨方法是本領(lǐng)域公知的，通常包括在干或基本上干的狀態(tài)下研磨/磨碎含淀粉物質(zhì)如全谷物或整谷粒的步驟。然而，其他能夠減小含淀粉物質(zhì)大小的技術(shù)也被考慮到并落入本發(fā)明范圍之內(nèi)。乙醇生產(chǎn)中，干磨通常包括研磨(grinding)/磨碎(milling)全谷物或整谷粒來產(chǎn)生粗粉，使粗粉接受液化，糖化，發(fā)酵和任選地例如通過蒸餾收集的步驟。通?；谒璧陌l(fā)酵產(chǎn)品和所使用的方法來選擇原料。適用于本發(fā)明方法中的原料實(shí)例包括含淀粉原料，如塊莖，根，全谷物或整谷粒，谷類玉米，玉米穗軸(cob)，小麥，大麥，黑麥，高粱或谷類，含糖原料，如糖蜜，水果物質(zhì)，糖，甘蔗或甜菜，馬鈴薯，和含纖維素物質(zhì)，如木質(zhì)或植物殘余物。含淀粉的整谷粒(corngrain)是本發(fā)明的生產(chǎn)液化和發(fā)酵產(chǎn)品如的方法的優(yōu)選原料。發(fā)酵產(chǎn)品根據(jù)本發(fā)明，可能的發(fā)酵產(chǎn)品包括醇類(例如，乙醇，甲醇，丁醇，1，3-丙二醇)；有機(jī)酸(例如檸檬酸，醋酸，衣康酸，乳酸，葡糖酸，葡糖酸鹽或酯(gluconate)，乳酸，琥珀酸，2，5-二酮-D-葡糖酸)；酮類(例如丙酮)；氨基酸(例如谷氨酸)；氣體(例如H2和CO2)和更復(fù)雜的化合物，包括例如抗生素(例如青霉素和四環(huán)素)；酶；維生素(例如核黃素，B12，β-胡蘿卜素)；和激素。液化本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過用至少一種α-淀粉酶和至少一種麥芽糖淀粉酶或者用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶處理所述的含淀粉物質(zhì)可以提高含淀粉物質(zhì)的液化。因此本發(fā)明的第一個方面中提供了液化含淀粉物質(zhì)的方法，包括用至少一種α-淀粉酶和至少一種麥芽糖淀粉酶處理所述含淀粉物質(zhì)的步驟。根據(jù)本發(fā)明的第二個方面，提供了液化含淀粉物質(zhì)的方法，包括用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶處理含淀粉物質(zhì)的步驟。不受限于任何理論，認(rèn)為用淀粉酶和酯酶的組合物處理減少了凝沉淀粉的形成。認(rèn)為酯酶攻擊例如干磨的含淀粉物質(zhì)如玉米中存在的脂質(zhì)來產(chǎn)生較小的分子，該較小的分子較少產(chǎn)生蒸汽蒸煮過程中形成的稱為凝沉淀粉的淀粉-脂質(zhì)復(fù)合物。此外酯酶催化樹枝體(dendrimer)和可溶性淀粉鏈之間在油界面發(fā)生的反應(yīng)來形成新的結(jié)構(gòu)以防止蒸汽蒸煮和液化過程中形成的脂質(zhì)-淀粉復(fù)合物。還可以減少進(jìn)行液化所需的淀粉酶量。根據(jù)本發(fā)明，“液化”是其中含淀粉物質(zhì)，優(yōu)選(整)谷物顆粒(grain)原料分裂(水解)成麥芽糖糊精(糊精)的過程。根據(jù)本發(fā)明，通過將20-40wt％，優(yōu)選25-35wt％含淀粉物質(zhì)的漿液和水加熱至20-105℃，優(yōu)選60-95℃并加入酶來啟動液化(稀化(thinning))來進(jìn)行液化。然后將漿液在95-140℃，優(yōu)選105-125℃的溫度下進(jìn)行蒸汽蒸煮來完成漿液的糊化。然后將漿液冷卻至60-95℃，并加入更多的酶來完成水解(第二次液化)。本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，以多階段過程如三階段過程來進(jìn)行液化，其中第一階段在80至105℃的范圍進(jìn)行，第二階段在65至95℃的溫度范圍，和第三階段在40-75℃的溫度。優(yōu)選實(shí)施方案中，在以下的溫度階段進(jìn)行三個階段第一階段80-95℃，第二階段75-85℃，和第三階段60至70℃。根據(jù)本發(fā)明，第一階段的保溫時間為10至90分鐘，第二階段為30-120分鐘，第三階段為30-120分鐘。本發(fā)明的液化方法通常在pH4.5-6.5，尤其是5至6的pH進(jìn)行。淀粉酶可以是任何淀粉酶，優(yōu)選以下“淀粉酶”部分中提及的淀粉酶。優(yōu)選實(shí)施方案中，淀粉酶是α-淀粉酶和/或麥芽糖淀粉酶。酯酶可以是任何酯酶，優(yōu)選“酯酶”部分中提及的酯酶。優(yōu)選的酯酶是脂酶，磷脂酶和角質(zhì)酶，或其混合物。可以在脂肪酸氧化酶(fattyacidoxidizingenzymes)，優(yōu)選脂肪氧合酶(lipoxygenase)的存在下，進(jìn)行本發(fā)明的液化方法或本發(fā)明的預(yù)處理步驟，如以下的“脂肪酸氧化酶”部分中進(jìn)一步限定的。一個實(shí)施方案中，液化過程包括步驟I)用至少一種酯酶預(yù)處理含淀粉物質(zhì)的漿液和ii)用α-淀粉酶液化預(yù)處理的漿液。優(yōu)選減小預(yù)處理物質(zhì)的大小，優(yōu)選通過干磨。如上所述，可以以三階段熱漿液過程來進(jìn)行液化。本發(fā)明的一實(shí)施方案中，在預(yù)處理過程中將酯酶和麥芽糖淀粉酶一起使用。另一個實(shí)施方案中，在預(yù)處理過程中存在酯酶，麥芽糖淀粉酶和α-淀粉酶。進(jìn)一步的實(shí)施方案中，在預(yù)處理過程中存在酯酶，麥芽糖淀粉酶和碳水化合物源產(chǎn)生酶，如葡糖淀粉酶和可選的真菌酸性α-淀粉酶。本發(fā)明方法的另一個實(shí)施方案中，用酯酶，麥芽糖淀粉酶和/或α-淀粉酶處理來液化例如通過干磨減小大小的含淀粉物質(zhì)，經(jīng)過或不經(jīng)過預(yù)處理。優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過使優(yōu)選的例如通過干磨減小大小的含淀粉物質(zhì)的含水漿液經(jīng)受酯酶，優(yōu)選脂酶；麥芽糖淀粉酶；和α-淀粉酶，優(yōu)選酸性淀粉酶，如真菌酸性α-淀粉酶來進(jìn)行預(yù)處理，接著用α-淀粉酶液化。優(yōu)選在20-105℃，優(yōu)選60-95℃溫度范圍的含水熱漿液中進(jìn)行處理。發(fā)酵產(chǎn)品方法本發(fā)明的發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的生產(chǎn)方法通常包括減小含淀粉物質(zhì)原料的大小，例如通過干磨，液化，糖化，發(fā)酵和任意地例如通過蒸餾收集的步驟。生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的生產(chǎn)方法中，減小含淀粉的原料如全谷物或整谷粒優(yōu)選玉米的大小，例如通過干磨，以便打開結(jié)構(gòu)并允許進(jìn)一步的處理。一方面中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大小(b)用至少一種α-淀粉酶和至少一種麥芽糖淀粉酶來液化步驟(a)的產(chǎn)物；(c)用碳水化合物源產(chǎn)生酶來糖化步驟(b)中獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。可以根據(jù)本發(fā)明的液化方法來進(jìn)行步驟(b)。另一方面中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大??；(b)用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶液化步驟(a)的產(chǎn)物；(c)用碳水化合物源產(chǎn)生酶來糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)?？梢愿鶕?jù)本發(fā)明的液化方法來進(jìn)行步驟(b)。再一方面中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品如乙醇的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大小(b)i)用至少一種酯酶預(yù)處理所述含淀粉物質(zhì)的漿液ii)用α-淀粉酶液化預(yù)處理的漿液。(c)用碳水化合物產(chǎn)生酶來糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的液化方法來進(jìn)行步驟(b)。順序或同時進(jìn)行步驟(c)和(d)(SSF方法)。發(fā)酵步驟后可以是任選的收集，如發(fā)酵產(chǎn)品的蒸餾。糖化“糖化”是其中麥芽糖糊精(如來自液化過程的產(chǎn)物)轉(zhuǎn)化成可以通過發(fā)酵微生物如酵母代謝的低分子糖DP1-3(即碳水化合物源)的步驟。可以使用本領(lǐng)域共知的糖化步驟來進(jìn)行本發(fā)明發(fā)酵產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的糖化步驟。通常使用至少一種或多種碳水化合物源產(chǎn)生酶如葡糖淀粉酶來酶促進(jìn)行糖化。本發(fā)明生產(chǎn)乙醇方法中的糖化步驟可以是本領(lǐng)域中公知的糖化步驟。一個實(shí)施方案中，將葡糖淀粉酶，α-葡糖苷酶和/或酸性α-淀粉酶用于處理液化的含淀粉物質(zhì)。完全糖化步驟可持續(xù)達(dá)約24至約72小時或更長時間，且通常在約30至65℃的溫度和4至5的pH下進(jìn)行，通常約pH4.5。然而，更優(yōu)選的是進(jìn)行預(yù)糖化步驟，在30-65℃的溫度，通常約60℃持續(xù)約40至90分鐘，接著完成同時糖化和發(fā)酵方法(SSF方法)的發(fā)酵過程中的糖化。乙醇生產(chǎn)中，通常以同時糖化和發(fā)酵(SSF)方法來進(jìn)行糖化，其中不存在糖化的保溫階段，意味著一起加入發(fā)酵微生物如酵母和酶。SSF方法中，通常就在發(fā)酵之前，引入例如高于50℃溫度的預(yù)糖化步驟。發(fā)酵乙醇生產(chǎn)中，發(fā)酵微生物優(yōu)選是酵母，將其施加到糖化的醪液。“發(fā)酵微生物”指的是適用于所需發(fā)酵過程中的任何微生物。根據(jù)本發(fā)明的合適發(fā)酵微生物能夠?qū)⑻侨缙咸烟腔螓溠刻侵苯踊蜷g接發(fā)酵即轉(zhuǎn)化成所需的發(fā)酵產(chǎn)品。發(fā)酵微生物的實(shí)例包括真菌生物體，如酵母。優(yōu)選的酵母包括酵母屬(Saccharomyces)的一些種，尤其是釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)。可購得的酵母包括，例如，REDSTAR/LesaffreETHANOLRED(從RedStar/Lesaffre，USA獲得)，F(xiàn)ALI(從Fleischmann’sYeast，BurnsPhilpFoodInc的分部，USA獲得)，SUPERSTART(從Altech獲得)，GERTSTRAND(從GertStrandAB，Sweden獲得)和FERMIOL(從DSMSpecialties獲得)。優(yōu)選實(shí)施方案中，將酵母施加至醪液，且將發(fā)酵進(jìn)行24-96小時，如通常35-60小時。優(yōu)選實(shí)施方案中，溫度通常為26-34℃，尤其是約32℃，且pH通常為3-6，優(yōu)選約pH4-5。酵母細(xì)胞的優(yōu)選應(yīng)用量為每mL發(fā)酵液105至1012個活酵母數(shù)，優(yōu)選107至1010，尤其是5×107。在乙醇產(chǎn)生階段的過程中，酵母細(xì)胞數(shù)優(yōu)選為107至1010，尤其是約2×108。關(guān)于酵母用于發(fā)酵的更多指導(dǎo)可以在例如“ThealcoholTextbook”(編輯K.Jacques，T.P.Lyons和D.R.Kelsall，NottinghamUniversityPress，UnitedKingdom1999)中找到，在此將其引入作為參考。收集發(fā)酵后，通過例如蒸餾來收集醪液來提取發(fā)酵產(chǎn)品，如醇類產(chǎn)品(尤其是乙醇)。在其中終產(chǎn)品是乙醇的情況中，可以將其用作例如燃料乙醇；飲用乙醇，即，適于飲用的酒精(potableneutralspirits)；或工業(yè)乙醇。淀粉轉(zhuǎn)化用于生產(chǎn)糖漿如葡萄糖，麥芽糖，寡聚麥芽糖(malto-oligosaccharides)和寡聚異麥芽糖(isomalto-oligosaccharides)的傳統(tǒng)淀粉轉(zhuǎn)化過程中也可以包括本發(fā)明的液化方法。淀粉酶合適的淀粉酶包括α-淀粉酶，β-淀粉酶和麥芽糖淀粉酶，或其混合物。α-淀粉酶根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的α-淀粉酶是真菌或細(xì)菌來源的。一個實(shí)施方案中，α-淀粉酶是芽孢桿菌α-淀粉酶，如，來源自地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)，解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)和嗜熱脂肪芽孢桿菌(B.stearothermophilus)的菌株。其他α-淀粉酶包括來源自芽孢桿菌NCIB12289，NCIB12512，NCIB12513或DSM9375菌株的α-淀粉酶，所有這些都被詳細(xì)描述于WO95/26397中，和Tsukamoto等，BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications，151(1988)，pp.25-31中所述的α-淀粉酶。α-淀粉酶還可以是變體和/或雜交體，尤其是WO96/23873，WO96/23874，WO97/41213，WO99/19467，WO00/60059和WO02/10355任一中所述的一種(所有文獻(xiàn)在此引入作為參考)。特別考慮的α-淀粉酶變體描述于美國專利No.6,093,562，6,297,038或美國專利No.6,187,576中(在此引入作為參考)并包括在位置R179至G182缺失一個或兩個氨基酸的嗜熱脂肪芽孢桿菌α-淀粉酶(BSGα-淀粉酶)變體，優(yōu)選公開于WO1996/023873中的雙缺失-參見例如第20頁第1-10行(在此引入作為參考)，與WO99/19467所公開的SEQIDNO3中所示的野生型BSGα-淀粉酶氨基酸序列相比較優(yōu)選對應(yīng)于Δ(181-182)，或缺失氨基酸R179和G180，使用WO99/19467中SEQIDNO3的編號(在此引入作為參考)。更優(yōu)選的是芽孢桿菌α-淀粉酶，尤其是嗜熱脂肪芽孢桿菌α-淀粉酶，與WO99/19467所公開的SEQIDNO3中所示的野生型BSGα-淀粉酶氨基酸序列相比較，其具有對應(yīng)于Δ(181-182)的雙缺失且進(jìn)一步包括N193F取代(也稱為1181*+G182*+N193F)。特別考慮的α-雜交淀粉酶包括地衣芽孢桿菌α-淀粉酶(顯示于WO99/19467的SEQIDNO4中)的445個C-端氨基酸殘基，和來源自解淀粉芽孢桿菌的α-淀粉酶(顯示于WO99/19467的SEQIDNO5中)的37個N-端氨基酸殘基，并具有以下取代G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S(使用WO99/19467的SEQIDNO4的編號)。尤其優(yōu)選的是具有下列突變H154Y，A181T，N190F，A209V和Q264S的一個或多個的變體和/或在位置176和179之間缺失兩個殘基的變體，優(yōu)選缺失E178和G179(使用WO99/19467的SEQIDNO5的編號)。其他考慮的細(xì)菌α-淀粉酶是EP1022334中公開的KSM-K36α-淀粉酶并作為FREMBP6945保藏，和EP1022334中公開的KSM-K38α-淀粉酶并作為FERMBP-6946保藏。因此還考慮變體，尤其是WO02/31124中公開的變體(來自NovozymesA/S)。其他α-淀粉酶包括來源自曲霉屬(Aspergillus)菌株如米曲霉(Aspergillusoryzae)和黑曲霉(Aspergillusniger)的α-淀粉酶。優(yōu)選實(shí)施方案中，α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶。更優(yōu)選的實(shí)施方案中，酸性α-淀粉酶是酸性真菌α-淀粉酶或酸性細(xì)菌α-淀粉酶。更優(yōu)選，酸性α-淀粉酶是來源自曲霉屬的酸性真菌α-淀粉酶。可購得的酸性真菌淀粉酶是SP288(從NovozymesA/S，Denmark獲得)。一個實(shí)施方案中，α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶。術(shù)語“酸性α-淀粉酶”意思是這樣的α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)，其在3.0至7.0，優(yōu)選3.5至6.0，或更優(yōu)選4.0-5.0范圍的pH下以有效量加入時具有活性。優(yōu)選的酸性真菌α-淀粉酶是芬加密爾(Fungamyl)樣α-淀粉酶。本發(fā)明的公開內(nèi)容中，術(shù)語“芬加密爾樣α-淀粉酶”表示與WO96/23874中SEQIDNO10中所示的氨基酸序列呈現(xiàn)高度同一性，即高于50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95或甚至99％相同的α-淀粉酶。當(dāng)用作麥芽糖產(chǎn)生酶時，真菌α-淀粉酶的加入量可以為0.001-1.0AFAU/gDS，優(yōu)選0.002-0.5AFAU/gDS，優(yōu)選0.02-0.1AFAU/gDS。優(yōu)選的α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶，優(yōu)選來自曲霉屬，優(yōu)選是黑曲霉種。優(yōu)選實(shí)施方案中，酸性真菌α-淀粉酶是來自黑曲霉的一種，在Swiss-prot/TeEMBL數(shù)據(jù)庫公開為“AMYA_ASPNG”，主要登錄號為no.P56271。還考慮一系列具有與此至少70％同一性的酸性真菌淀粉酶變體，如至少80％或甚至至少90％同一性。其他涉及的α-淀粉酶包括WO2005/003311(在此引入作為參考)中所公開的雜交α-淀粉酶。優(yōu)選的包括α-淀粉酶的商業(yè)組合物包括來自DSM的MYCOLASETM；BANTM，TERMAMYLTMSC，F(xiàn)UNGAMYLTM，LIQUOZYMETMX和SANTMSUPER，來自NovozymesA/SDenmark的SANTMEXTRAL，和CLARASETML-40,000，DEX-LOTM，SPEYMEFRED，SPEZYMETMAA和SPEZYMETMDELTAAA(GenencorInt，USA)，和以商品名稱SP288銷售的的酸性α-淀粉酶(從NovozymesA/S，Denmark可獲得)。α-淀粉酶的加入量是本領(lǐng)域公知的。以AUU單位測量時，酸性α-淀粉酶活性優(yōu)選存在量為5-50,0000AAU/kgDS，以500-50,000AAU/kgDS的量，或更優(yōu)選100-10,000AAU/kgDS的量，如500-1,000AAU/kgDS。真菌酸性α-淀粉酶的優(yōu)選加入量為10-10,000AFAU/kgDS，500-2,500AFAU/kgDS的量，更優(yōu)選100-1,000AFAU/kgDS的量，如約500AFAU/kgDS。麥芽糖淀粉酶淀粉酶還可以是麥芽糖α-淀粉酶?！胞溠刻铅?淀粉酶”(葡聚糖1，4-α-麥芽糖水解酶，E.C.3.2.1.133)能夠?qū)⒅辨湹矸酆椭ф湹矸鬯獬搔?構(gòu)象的麥芽糖。來自嗜熱脂肪芽孢桿菌菌株NCIB11837的麥芽糖α-淀粉酶以商品名MALTOGENASETM可從NovozymesA/S購得。麥芽糖α-淀粉酶描述于美國專利No.4,598,048，4,604,355和6,162,628中，在此將其引入作為參考。酯酶如在此所用的，“酯酶”也稱為羧酸酯水解酶，指的是作用于酯鍵的酶，并包括根據(jù)酶命名法(分別可從http//www.chem.qmw.ac.uk/iubmb/enzyme或來自EnzymeNomenclature1992，AcademicPress，SanDiego，California，增補(bǔ)1(1993)，增補(bǔ)2(1994)，增補(bǔ)3(1995)，增補(bǔ)4(1997)和增補(bǔ)5，Eur.J.Biochem.1994，223，1-5；Eur.J.Biochem.1995，232，1-6；Eur.J.Biochem.1996，237，1-5；Eur.J.Biochem.1997，250；1-6和Eur.J.Biochem.1999，264，610-650獲得)歸類于E.C.3.1.1羧酸酯水解酶的酶。酯酶的非限制性實(shí)例包括芳基酯酶，三?；视椭?，乙酰酯酶，乙酰膽堿酯酶，膽堿酯酶，托品酯酶，果膠酯酶，固醇酯酶，葉綠素酶，L-阿拉伯內(nèi)酯酶，葡糖酸內(nèi)酯酶，糖醛酸內(nèi)酯酶(uronolactonase)，鞣酸酶，視黃基-棕櫚酰酯酶，羥丁酯-二聚物水解酶，酰基甘油脂酶，3-氧己二酸烯醇內(nèi)酯酶，1，4-內(nèi)酯酶，半乳糖脂酶，4-吡哆醇內(nèi)酯酶，?；舛緣A水解酶，氨酰-tRNA水解酶，D-阿拉伯內(nèi)酯酶，6-磷酸葡糖酸內(nèi)酯酶，磷脂酶A1，6-乙酰葡糖脫乙酰酶，脂蛋白脂酶，二氫香豆素脂酶，檸檬苦素-D-環(huán)-內(nèi)酯酶，類固醇內(nèi)酯酶，三乙酸-內(nèi)酯酶(triacetate-lactonase)，放線菌素內(nèi)酯酶，苔色素酸-縮酚酸(orsellinate-depside)水解酶，頭孢菌素C脫乙酰酶，綠原酸酯水解酶，α-氨基酸酯酶，4-草酰乙酸甲酯酶，羧甲烯丁烯羥酸內(nèi)酯酶(Carboxymethylenebutenolidase)、，deoxylimonate-A-環(huán)-內(nèi)酯酶，2-乙酰-1-烷基甘油磷酸膽堿酯酶，鐮刀霉氨酸-C鳥氨酸酯酶，芥子酸膽堿酯酶，蠟酯水解酶，佛波醇-二酯水解酶，磷脂酰肌醇脫乙酰酶，唾液酸O-乙酰酯酶，乙酰氧丁炔基并噻吩脫乙酰酶(acetoxybutynylbithiophenedeacetylase)，乙酰水楊酸脫乙酰酶，甲基傘形基乙酸脫乙酰酶(methylumbelliferyl-acetatedeacetylase)，2-吡喃酮-4，6-二羧酸內(nèi)酯酶，N-乙酰半乳糖胺聚糖脫乙酰酶，保幼激素酯酶，雙(2-乙基己基)鄰苯二甲酸酯酶，蛋白質(zhì)-谷氨酸甲基酯酶，11-順-視黃基-棕櫚酸水解酶，全-反-視黃基棕櫚酸水解酶，L-鼠李糖酸-1，4-內(nèi)酯酶，5-(3，4-二乙酰氧基丁-1-炔基)-2，2’-并噻吩脫乙酰酶，脂肪?；阴ズ铣擅福咎撬?1，4-內(nèi)酯酶，N-乙酰葡糖胺磷脂酰肌醇脫乙酰酶，西曲酸苯甲酯酶(cetraxatebenzylesterase)，乙酰烷基甘油乙酰水解酶和乙酰木聚糖酯酶。本發(fā)明中所用的優(yōu)選酯酶是脂肪分解酶，如脂酶(歸類于E.C.3.1.1.3，EC3.1.1.23和/或EC3.1.1.26)和磷脂酶(歸類于EC3.1.1.4和/或EC3.1.1.32，包括歸類于EC3.1.1.5的溶血磷脂酶)。其它優(yōu)選的酯酶是角質(zhì)酶(歸類于EC3.1.1.74)。酯酶有效量的實(shí)例是0.01至400LU/gDS(干固體)。優(yōu)選，酯酶的使用量為0.1至100LU/gDS，更優(yōu)選為0.5至50LU/gDS，更優(yōu)選為1至20LU/gDS。此后可以使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來獲得酯酶含量的進(jìn)一步優(yōu)化。優(yōu)選實(shí)施方案中，酯酶是脂肪分解酶，更優(yōu)選是脂酶。如在此所用的，“脂肪分解酶”指的是脂酶和磷脂酶(包括溶血-磷脂酶)。脂肪分酶優(yōu)選是微生物來源的，尤其是細(xì)菌、真菌或酵母來源的。所用的脂肪分解酶可以來源自任何來源，包括，例如，犁頭霉屬(Absidia)的菌株，尤其是Absidiablakesleena和傘枝犁頭霉(Absidiacorymbifera)；無色桿菌屬(Achromobacter)的菌株，尤其是解毒無色桿菌(Achromobacteriophagus)；氣單胞菌屬(Aeromonas)的菌株；鏈格孢屬(Alternaria)的菌株，尤其是甘藍(lán)鏈格孢(Alternariabrassiciola)；曲霉屬的菌株，尤其是黑曲霉和黃曲霉(Aspergillusflavus)；無色桿菌屬的菌株，尤其是解毒無色桿菌；短梗霉屬(Aureobasidium)的菌株，尤其是出芽短梗霉(Aureobasidiumpullulans)；芽孢桿菌屬的菌株，尤其是短小芽孢桿菌(Bacilluspumilus)，嗜熱脂肪芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)；白僵菌屬(Beauveria)的菌株；索絲菌屬(Brochothrix)的菌株，尤其是熱殺索絲菌(Brochothrixthermosohata)；假絲酵母屬(Candida)的菌株，尤其是柱狀假絲酵母(Candidacylindracea(Candidarugosa))，Candidaparalipolytica，和南極假絲酵母(Candidaantarctica)；色桿菌屬(Chromobacter)的菌株，尤其是粘稠色桿菌(Chromobacterviscosum)；鬼傘屬(Coprinus)的菌株，尤其是Coprinuscinerius；鐮孢菌屬(Fusarium)的菌株，尤其是尖孢鐮孢菌(Fusariumoxysporum)，腐皮鐮孢菌(Fusariumsolani)，豌豆腐皮鐮孢菌(Fusariumsolanipisi)和大刀玫瑰色鐮孢菌(Fusariumroseumculmorum)；地霉屬(Geotricum)的菌株，尤其是潘氏地霉(Geotricumpenicillatum)；漢遜氏酵母屬(Hansenula)的菌株，尤其是異常漢遜氏酵母(Hansenulaanomala)；腐殖霉屬(Humicola)的菌株，尤其是Humicolabrevispora，Humicolabrevisvar.thermoidea，和Humicolainsolens；Hyphozyma的菌株；乳桿菌屬(Lactobacillus)的菌株，尤其是彎曲乳桿菌(Lactobacilluscurvatus)；綠僵菌屬(Metarhizium)的菌株；毛霉屬(Mucor)的菌株；擬青霉屬(Paecilomyces)的菌株；青霉屬(Penicillium)的菌株，尤其是圓弧青霉(Penicilliumcyclopium)，皮落青霉(Penicilliumcrustosum)和擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum)；假單胞菌屬(Pseudomonas)的菌株，尤其是銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，產(chǎn)堿假單胞菌(Pseudomonasalcaligenes)，洋蔥假單胞菌(Pseudomonascepacia)(同，洋蔥伯克霍爾德氏菌(Burkholderiacepacia))，熒光假單胞菌(Pseudomonasfluorescens)，莓實(shí)假單胞菌(Pseudomonasfragi)，嗜麥芽假單胞菌(Pseudomonasmaltophilia)，門多薩假單胞菌(Pseudomonasmendocina)，脂解臭味假單胞菌(Pseudomonasmephiticalipolytica)，產(chǎn)堿假單胞菌，植物假單胞菌(Pseudomonasplantari)，類產(chǎn)堿假單胞菌(Pseudomonaspseudoalcaligenes)，惡臭假單胞菌(Pseudomonasputida)，施氏假單胞菌(Pseudomonasstutzeri)和Pseudomonaswisconsinensis；絲核菌屬(Rhizoctonia)的菌株，尤其是腐皮絲核菌(Rhizoctoniasolani)；根毛霉屬(Rhizomucor)的菌株，尤其是米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)；根霉菌屬(Rhizopus)的菌株，尤其是日本根霉(Rhizopusjaponicus)，小孢根霉(Rhizopusmicrosporus)和結(jié)節(jié)根霉(Rhizopusnodosus)；紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium)的菌株，尤其是念珠紅冬孢酵母(Rhodosporidiumtoruloides)；紅酵母屬(Rhodotorula)的菌株，尤其是粘紅酵母(Rhodotorulaglutinis)；擲孢酵母屬(Sporobolomyces)的菌株，尤其是Sporobolomycesshibatanus；高溫霉屬(Thermomyces)的菌株，尤其是綿狀高溫霉(Thermomyceslanuginosus)(之前為Humicolalanginosa)；Thiarosporella的菌株，尤其是Thiarosporellaphaseolina；木霉屬(Trichoderma)的菌株，尤其是哈茨木霉(Trichodermaharzianum)和里氏木霉(Trichodermareesei)；和/或輪枝孢菌屬(Verticillium)的菌株。優(yōu)選實(shí)施方案中，脂肪分解酶來源自曲霉屬的菌株，無色桿菌屬的菌株，芽孢桿菌屬的菌株，假絲酵母屬的菌株，色桿菌屬的菌株，鐮孢菌屬的菌株，腐殖霉屬的菌株，Hyphozyma的菌株，假單胞菌屬的菌株，根毛霉屬的菌株，根霉屬的菌株或高溫霉屬的菌株。更優(yōu)選的實(shí)施方案中，脂肪分解酶是脂酶。在此可利用脂酶改變例如來自玉米基質(zhì)的發(fā)酵培養(yǎng)基(包括發(fā)酵酵母)中的甘油三酯油脂(triglycerideoilsandfats)的結(jié)構(gòu)和組成的能力。脂酶催化不同類型的甘油三酯轉(zhuǎn)化，如水解，酯化和酯交換。合適的脂酶包括酸性，中性和堿性脂酶，如本領(lǐng)域公知的，盡管與中性或堿性脂酶相比較，酸性脂酶(如例如脂酶GAMANO50，從Amano可獲得)似乎在較低的脂酶濃度更有效。用于本發(fā)明中的優(yōu)選脂酶包括南極假絲酵母脂酶和柱狀假絲酵母脂酶。更優(yōu)選的脂酶是純化的脂酶，如南極假絲酵母脂酶(脂酶A)，南極假絲酵母脂酶(脂酶B)，柱狀假絲酵母脂酶，和卡門柏青霉(Penicilliumcamembertii)脂酶。所述脂酶可以是EP258,068-A中公開的一種脂酶，或可以是脂酶變體，如WO00/60063或WO00/32578(在此將其引入作為參考)中所公開的變體。優(yōu)選的商業(yè)脂酶包括LECITASETM，LIPOLASETM，LIPEXTM和NOVOZYM735(從NovozymesA/S，Denmark可獲得)和GAMANOTM50(從Amano可獲得)。脂酶優(yōu)選的加入量為約1至400LU/gDS，優(yōu)選1至10LU/gDS，更優(yōu)選1至5LU/gDS。本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述至少一種酯酶是角質(zhì)酶。角質(zhì)酶是能夠降解角質(zhì)的酶。角質(zhì)酶可以來源自任何來源。優(yōu)選的實(shí)施方案中，角質(zhì)酶來源自曲霉屬的菌株，尤其是米曲霉；鏈格孢屬的菌株，尤其是甘藍(lán)鏈格孢菌；鐮孢菌屬的菌株，尤其是腐皮鐮孢菌，豌豆腐皮鐮孢菌，大刀玫瑰色鐮孢菌或接骨木玫瑰色鐮孢菌(Fusariumroseumsambucium)；長蠕孢屬(Helminthosporum)的菌株，尤其是蒜頭長蠕孢(Helminthosporumsativum)；腐殖霉屬的菌株，尤其是Humicolainsolens，假單胞菌屬的菌株，尤其是門多薩假單胞菌或惡臭假單胞菌，絲核菌屬的菌株，尤其是腐皮絲核菌；鏈霉菌屬(Streptomyces)的菌株，尤其是瘡痂鏈霉菌(Streptomycesscabies)；或單格孢霉(Ulocladium)，尤其是Ulocladiumconsortiale。最優(yōu)選的實(shí)施方案中，角質(zhì)酶來源自Humicolainsolens，尤其是HumicolainsolensDSM1800菌株。Humicolainsolens角質(zhì)酶描述于WO96/13580中，在此將其引入作為參考。角質(zhì)酶可以是變體，如WO00/34450和WO01/92502(在此將其引入作為參考)中公開的變體的一種，。優(yōu)選的角質(zhì)酶變體包括WO01/92502的實(shí)施例2中所列的變體，在此特意將其引入作為參考。角質(zhì)酶的有效量為0.01至400LU/gDS，優(yōu)選約0.1至100LU/gDS，更優(yōu)選1至50LU/gDS。此后可以使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法來獲得角質(zhì)酶含量的進(jìn)一步優(yōu)化。另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述至少一種酯酶是磷脂酶。如在此所用的，術(shù)語磷脂酶是具有對于磷脂活性的酶。磷脂，如卵磷脂或磷脂酰膽堿，由外部(sn-1)和中間(sn-2)位置被兩個脂肪酸酯化、第三個位置被磷酸酯化的甘油構(gòu)成；磷酸可以進(jìn)而被酯化成氨基醇。磷脂酶是參與磷脂水解的酶?？梢澡b別出幾種類型的磷脂酶活性，包括磷脂酶A1和A2，其水解一個脂肪?；?分別在sn-1和sn-2位置)來形成溶血磷脂；和溶血磷脂酶(或磷脂酶B)，其水解溶血磷脂中剩余的脂肪酰基。磷脂酶C和磷脂酶D(磷酸二酯酶)分別釋放二?；视突蛄字帷Ｐg(shù)語磷脂酶包括具有磷脂酶活性的酶，例如，磷脂酶A(A1或A2)，磷脂酶B活性，磷脂酶C活性或磷脂酶D活性。在此結(jié)合本發(fā)明的酶所使用的術(shù)語“磷脂酶A”意在涵蓋具有磷脂酶A1和/或磷脂酶A2活性的酶?？梢酝ㄟ^具有其他活性的酶以及如例如具有磷脂酶活性的脂酶來提供磷脂酶活性。磷脂酶活性可以例如來自具有磷脂酶副活性(sideactivity)的脂酶。本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，由基本上只具有磷脂酶活性的酶來提供磷脂酶活性，且其中磷脂酶活性不是副活性。磷脂酶可以是任何來源的，例如動物來源(如例如哺乳動物)，例如來自胰腺(例如，牛或豬胰腺)，或蛇毒或蜂毒?；蛘?，磷脂酶可以是微生物來源的，例如，來自絲狀真菌，酵母或細(xì)菌，如曲霉屬或種，例如，黑曲霉；網(wǎng)柄菌屬(Dictyostelium)，例如D.discoideum；毛霉屬，例如爪哇毛霉(M.javanicus)，大毛霉(M.mucedo)，細(xì)胞毛霉(M.subtilissimus)；脈孢霉屬(Neurospora)，例如粗糙脈孢霉(N.crassa)；根毛霉屬，例如R.pusillus；根霉屬，例如無根根霉(R.arrhizus)，日本根霉，葡枝根霉(R.stolonifer)；核盤菌屬(Sclerotinia)，例如大豆核盤菌(S.libertiana)；發(fā)癬菌屬(Trichophyton)，例如深紅色發(fā)癬菌(T.rubrum)；Whetzelinia，例如W.sclerotiorum；芽孢桿菌屬，例如巨大芽孢桿菌(B.megaterium)，枯草芽孢桿菌；檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)，例如弗氏檸檬酸桿菌(C.freundii)；腸桿菌屬(Enterbacter)，例如產(chǎn)氣腸桿菌(E.aerogenes)，陰溝腸桿菌(E.cloacae)；愛德華氏菌屬(Edwardsiella)，遲鈍愛德華氏菌(E.tarda)；歐文氏菌屬(Erwinia)，例如草生歐文氏菌(E.herbicola)；埃希氏菌屬(Escherichia)，例如大腸埃希氏菌(E.coli)；克雷伯氏菌(Klebsiella)，例如肺炎克雷伯氏菌(K.pneumoniae)；變性菌屬(Proteus)，例如普通變性菌(P.vulgaris)；普羅威登斯菌屬(Providencia)，例如斯氏普羅威登斯菌(P.stuartii)；沙門氏菌屬(Salmonella)，例如鼠傷寒沙門氏菌(S.typhimurium)；沙雷氏菌屬(Serratia)，例如液化沙雷氏菌(S.liquefasciens)，粘質(zhì)沙雷氏菌(S.marcescens)；志賀氏菌屬(Shigella)，例如弗氏志賀氏菌(S.flexneri)；鏈霉菌屬(Streptomyces)，例如紫紅鏈霉菌(S.violeceoruber)；耶爾森氏菌屬(Yersinia)，例如小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Y.enterocolitica)。因此，磷脂酶可以是真菌的，例如來自核菌綱(Pyrenomycetes)，如鐮孢菌屬，如大刀鐮孢菌，異孢鐮孢菌(F.heterosporum)，腐皮鐮孢菌的菌株，或尖孢鐮孢菌菌株。磷脂酶還可以來自曲霉屬中的絲狀真菌菌株，如泡盛曲霉(Aspergillusawamori)，臭曲霉(Aspergillusfoetidus)，日本曲霉，黑曲霉或米曲霉的菌株。優(yōu)選的商業(yè)磷脂酶包括LECITASETM和LECITASETMULTRA(從NovozymesA/S，Denmark可獲得)。磷脂酶的有效量為0.01至400LU/gDS，優(yōu)選約0.1至100LU/gDS，更優(yōu)選1至50LU/gDS。此后可以使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法來獲得磷質(zhì)酶含量的進(jìn)一步優(yōu)化。脂肪酸氧化酶術(shù)語“脂肪酸氧化酶”意思是至少一種這樣的酶。本發(fā)明的內(nèi)容中，“脂肪酸氧化酶”是水解底物亞油酸比水解底物丁香醛連氮更高效的酶?！案咝А钡囊馑际蔷哂懈叩姆磻?yīng)速率。這可以使用WO03/035972(在此引入作為參考)的實(shí)施例2中所述方法來測試，并計算(1)對底物亞油酸每分鐘提高的吸收值(234nm處的吸收值)，和(2)對底物丁香醛連氮每分鐘提高的吸收值(530nm處的吸收值)之間的差異，即計算反應(yīng)速率差異(RRD)＝(d(A234)/dt-d(A530)/dt)。如果RRD高于零，所述的酶取得在此所定義的脂肪酸氧化酶的資格。如果RRD是零，或低于零，所述的酶不是脂肪酸氧化酶。具體的實(shí)施方案中，RRD為至少0.05，0.10，0.15，0.20或至少0.25吸收值單位/分鐘。具體的實(shí)施方案中，酶是清楚了解的。再進(jìn)一步，對于WO03/035972的實(shí)施例2的方法，調(diào)節(jié)酶劑量以獲得234nm或530nm處每分鐘最大的吸收值提高。具體的實(shí)施方案中，最大的吸收值提高范圍為0.05-0.50；0.07-0.4；0.08-0.3；0.09-0.2；或0.10-0.25吸收值單位每分鐘。酶劑量范圍可以為例如0.01-20；0.05-15；或0.10-10mg酶蛋白每ml?；蛘撸梢詫ⅰ爸舅嵫趸浮倍x為能夠比氧化丁香醛連氮更高效地氧化不飽和脂肪酸的酶。可以在本申請實(shí)施例1中所述的標(biāo)準(zhǔn)血氧計裝置中在pH6和30℃下來比較酶的活性，包括丁香醛連氮或亞油酸作為底物。具體的實(shí)施方案中，將脂肪酸氧化酶定義為歸類于EC1.11.1.3，或EC1.13.11.-的酶。EC1.13.11.-意思是其任何亞類，目前是四十九種EC1.13.11.1-EC1.13.11.49。將EC1.11.1.3命名為脂肪酸過氧化物酶，EC1.13.1-指作用于單個供體引入兩個氧原子的加氧酶。更具體的實(shí)施方案中，將EC1.13.11.-酶歸類于EC1.13.11.12，EC1.13.11.31，EC1.13.11.33，EC1.13.11.34，EC1.13.11.40，EC1.13.11.44或EC1.13.11.45，分別命名為脂肪氧合酶，花生四烯酸12-脂肪氧合酶，花生四烯酸15-脂肪氧合酶，花生四烯酸5-脂肪氧合酶，花生四烯酸8-脂肪氧合酶，亞油酸二醇酯合酶(linoleatediolsynthase)，和亞油酸11-脂肪氧合酶。脂肪酸氧化酶有效量的實(shí)例為0.001至400U/gDS(干固體)。優(yōu)選，脂肪酸氧化酶的使用量為0.01至100U/gDS，更優(yōu)選0.05至50U/gDS，再更優(yōu)選0.1至20U/gDS。此后使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法來獲得脂肪酸氧化酶含量的進(jìn)一步優(yōu)化。脂肪氧合酶優(yōu)選的實(shí)施方案中，脂肪酸氧化酶是脂肪氧合酶(LOX)，歸類于EC1.13.11.12，其是催化多不飽和脂肪酸尤其是順，順-1，4-二烯例如亞油酸的氧化并產(chǎn)生氫過氧化物的酶。但其他的底物也可以被氧化，例如單不飽和脂肪酸。微生物脂肪氧合酶可以來源自，例如，釀酒酵母，維氏高溫放線菌(Thermoactinomycesvulgaris)，尖孢鐮孢菌，F(xiàn)usariumproliferatum，綿狀高溫霉，稻米梨孢霉(Pyriculariaoryzae)和地霉屬的菌株。來源自禾頂囊殼(Gaeumannomycesgraminis)的脂肪氧合酶的制備描述于WO02/20730的實(shí)施例3-4中。來源自Magnaporthesalvinii的脂肪氧合酶在米曲霉中的表達(dá)描述于WO02/086114的實(shí)施例2中，且可以使用標(biāo)準(zhǔn)方法來純化這種酶，如WO02/20730的實(shí)施例4中所述的。脂肪氧合酶(LOX)還可以從植物種子中提取，如大豆，豌豆，鷹嘴豆(chickpea)和菜豆(kidneybean)。或者，脂肪氧合酶可以從哺乳動物細(xì)胞獲得，例如，兔子的網(wǎng)織紅細(xì)胞?？梢匀纭安牧吓c方法”部分中所述的來測定脂肪氧合酶活性。脂肪氧合酶(LOX)有效量的實(shí)例為0.001至400U/gDS(干固體)。優(yōu)選，脂肪氧合酶的使用量為0.01至100U/gDS，更優(yōu)選0.05至50U/gDS，再更優(yōu)選0.1至20U/gDS。此后可以使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法來獲得脂肪氧合酶含量的進(jìn)一步優(yōu)化。碳水化合物源產(chǎn)生酶術(shù)語“碳水化合物源產(chǎn)生酶”包括葡糖淀粉酶(為葡萄糖產(chǎn)生者)，β-淀粉酶和麥芽糖淀粉酶(為麥芽糖產(chǎn)生者)。碳水化合物源產(chǎn)生酶能夠給本發(fā)明方法中所用的發(fā)酵微生物提供能量用于產(chǎn)生乙醇和/或可以直接或間接轉(zhuǎn)化成所需的發(fā)酵產(chǎn)物，優(yōu)選乙醇。碳水化合物源產(chǎn)生酶可以是屬于定義范圍內(nèi)的酶的混合物。特別考慮的混合物是至少葡糖淀粉酶和α-淀粉酶，尤其是酸性淀粉酶，甚至更優(yōu)選酸性真菌α-淀粉酶的混合物。每葡糖淀粉酶活性(AUG)的酸性真菌α-淀粉酶活性(AFAU)之間的比例(AFAU每AGU)在本發(fā)明的實(shí)施方案中為至少0.1，尤其是至少0.16，如0.12至0.50的范圍。以下的部分列出了所涉及的葡糖淀粉酶，α-淀粉酶和β-淀粉酶的實(shí)例?？梢岳斫飧鶕?jù)本發(fā)明所用的酶應(yīng)當(dāng)以有效量添加。葡糖淀粉酶根據(jù)本發(fā)明所用的葡糖淀粉酶可以來源自任何合適的來源，例如，來源自微生物或植物。優(yōu)選的葡糖淀粉酶是真菌或細(xì)菌來源的，選自曲霉屬葡糖淀粉酶，尤其是黑曲霉G1或G2葡糖淀粉酶(Bole等，(1984)，EMBOJ.3(5)，p.1097-1102)，或其變體，如WO92/00381，WO00/04136和WO01/04273中所公開的(來自Novozymes，Denmark)；泡盛曲霉葡糖淀粉酶(WO84/02921)，米曲霉(Agric.Biol.Chem.(1991)，55(4)，p.941-949)，或其變體或片段。其他曲霉屬葡糖淀粉酶變體包括提高熱穩(wěn)定性的變體G137A和G139A(Chen等(1996)，Prot.Eng.9，499-505)；D257E和D293E/Q(Chen等(1995)，Prot.Engng.8，575-582)；N182(Chen等(1994)，Biochem.J.301，275-281)；二硫鍵，A246C(Fierobe等(1996)，Biochemistry，35，8698-8704)；和在位置A435和S436引入Pro殘基(Li等(1997)，ProteinEngng.10，1199-1204)。其他葡糖淀粉酶包括Atheliarolfsiis(之前命名為Corticiumrolfsii)葡糖淀粉酶(參見美國專利No，4,727,026和(Nagasaka，Y.等，(1998)Purificationandpropertiesoftheraw-starch-degradingglucoamylasesfromCorticiumrolfsii(來自Corticiumrolfsii的淀粉原料降解葡糖淀粉酶的純化和特性)，ApplMicrobiolBiotechnol50323-330)，踝節(jié)菌屬(Talaromyces)葡糖淀粉酶，具體地來源自Talaromycesemersonii(WO99/28448)，Talaromycesleycettanus(美國專利No.Re.32,153)，Talaromycesduponti，嗜熱踝節(jié)菌(Talaromycesthermophilus)(美國專利No.4,587,215)。所考慮的細(xì)菌葡糖淀粉酶包括來自梭菌屬(Clostridium)的葡糖淀粉酶，特別是C.theroamylolyticum(EP135,138)和熱硫化氫梭菌(C.thermohydrosulfuricum)(WO86/01831)?？少彽玫陌ㄆ咸堑矸勖傅慕M合物包括AMG200L；AMG300L；SANTMSUPER，SANTMEXTRAL，SPIRIZYMETMPLUS，SPIRIZYMETMFUEL，SPIRIZYMETMB4U和AMGTME(來自NovozymesA/S)；OPTIDEXTM300(來自GenencorInt)；AMIGASETM和AMIGASETMPLUS(來自DSM)；G-ZYMETMG900，G-ZYMETM和G990ZR(來自GenencorInt.)。實(shí)施方案中，葡糖淀粉酶的加入量可以為0.02-20AGU/gDS，優(yōu)選0.1-10AGU/gDS，如2AGU/gDS。β-淀粉酶至少根據(jù)本發(fā)明，β-淀粉酶(E.C.3.2.1.2)是給予外切作用(exo-acting)的麥芽糖淀粉酶的傳統(tǒng)命名，其催化直鏈淀粉，支鏈淀粉和相關(guān)葡萄糖聚合物中的1，4-α-葡糖苷鍵的水解。麥芽糖單位以逐步的方式連續(xù)從非還原鏈末端移除直至分子降解，或在支鏈淀粉的情況中，直至達(dá)到分支點(diǎn)。釋放的麥芽糖具有β異頭構(gòu)象，因此命名為β-淀粉酶。已經(jīng)從各種植物和微生物中分離出β-淀粉酶(W.M.Fogarty和C.T.Kelly，ProgressinIndustrialMicrobiology，vol.15，pp.112-115，1979)。這些β-淀粉酶的特征在于具有40℃至65℃的最佳溫度，和4.5至7的最佳pH?？少彽玫膩碜源篼湹摩?淀粉酶是來自NovozymesA/S，Denmark的NOVOZYMTMWBA和來自GenencorInt.，USA的SPEZYMETMBBA1500。酶的產(chǎn)生在此涉及的酶可以來源自或獲得自任何合適的來源或，包括細(xì)菌，真菌，酵母或哺乳動物來源。本文中術(shù)語“來源”(derived)意思從天然存在該酶的生物體分離該酶，即，酶的氨基酸序列的同一性與天然酶相同。術(shù)語“來源”還意味著酶可以在宿主生物體中重組產(chǎn)生，重組產(chǎn)生的酶具有與天然酶相同的身份或具有改變的氨基酸序列，例如，具有一個或多個氨基酸缺失，插入和/或取代，即重組產(chǎn)生的酶是天然氨基酸序列的突變體和/或片段，或是通過本領(lǐng)域已知的核酸改組(shuffling)方法產(chǎn)生的酶。天然酶的意思范圍內(nèi)包括天然變體。此外，術(shù)語“來源”包括合成產(chǎn)生的酶，例如通過肽合成。術(shù)語“來源”還包括已經(jīng)改變的酶，例如通過糖基化，磷酸化，或通過其他化學(xué)改變，不管是體內(nèi)或體外。本文中術(shù)語“獲得”(obtained)的意思是所述酶具有與天然酶相同的氨基酸序列。該術(shù)語包括從天然存在該酶的生物體分離的，或從重組表達(dá)該酶的同類或別種生物體分離的所述酶，或合成生產(chǎn)的，例如通過例如肽合成生產(chǎn)的酶。對于重組生產(chǎn)的酶，術(shù)語“獲得”和“來源”指的是酶的身份(identity)而不是重組生產(chǎn)該酶宿主生物體的身份。酶還可以是純化的。如在此所用的術(shù)語“純化的”涵蓋這樣的酶，其來源自微生物，而不具有該微生物的其他成分。術(shù)語“純化的”還涵蓋這樣的酶，其獲得自天然生物體，而不具有該天然生物體的其他成分。酶可以是純化的，只具有少量的其他蛋白質(zhì)存在?！捌渌鞍踪|(zhì)”的表述具體涉及其他酶。如在此所用的術(shù)語“純化的”還涉及除去其他成分，具體是其他蛋白質(zhì)，最具體地是存在于本發(fā)明的酶所來源的細(xì)胞中的其他酶。酶可以是“基本上純的”，即，沒有產(chǎn)生其的生物體的其他成分，即，例如，重組產(chǎn)生酶的宿主生物體。優(yōu)選實(shí)施方案中，酶至少75％(w/w)純，更優(yōu)選至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％或至少99％純。另一優(yōu)選實(shí)施方案中，酶是100％純。根據(jù)本發(fā)明所用的酶可以是適用于在此所述方法中的任何形式，如例如干粉或顆粒，非粉化顆粒，液體，穩(wěn)定化的液體，或受保護(hù)酶的形式。例如美國專利No.4,106,991和4,661,452中所公開的來產(chǎn)生顆粒，并可以任選地通過本領(lǐng)域已知的方法來包衣。例如可以根據(jù)確定的方法通過加入穩(wěn)定劑來穩(wěn)定液體酶制劑，這些穩(wěn)定劑如糖，糖醇或另一種多元醇，乳酸或另一種有機(jī)酸。根據(jù)EP238,216中所公開的方法來制備受保護(hù)的酶。盡管本發(fā)明方法內(nèi)容中沒有特意提及，可以理解以“有效量”來使用酶或試劑。材料與方法酶α-淀粉酶A具有以下突變的嗜熱脂肪芽孢桿菌α-淀粉酶變體I181*+G182*+N193F，公開于美國專利No.6,187,576中并應(yīng)要求可從NovozymesA/S，Denmark獲得。麥芽糖淀粉酶A來源自嗜熱脂肪芽孢桿菌菌株NCIB11837的麥芽糖淀粉酶，公開于美國專利No.4,598,048中并應(yīng)要求可從NovozymesA/S，Denmark獲得。用于碘滴定方法的儲液0.1NI2將1.3gI2和2.0gKI溶解于100mL去離子水中。方法同源性(同一性)的測定術(shù)語多肽“同源性”意思是兩個氨基酸序列之間的同一性程度。通過本領(lǐng)域已知的計算程序來適當(dāng)?shù)販y定同一性，如，GCG程序包中提供的GAP(ProgramManualfortheWisconsinPackage，第8版，1994年8月，GeneticsComputerGroup，575ScienceDrive，Madison，Wisconsin，USA53711)(Needleman，S.B.和Wunsch，C.D.，(1970)，JournalofMolecularBiology，48，443-453)。使用以下的設(shè)定來用于多肽序列比較GAP形成罰分(creationpenalty)3.0和GAP延伸罰分(extensionpenalty)0.1。α-淀粉酶活性(KNU)使用馬鈴薯淀粉作為底物來測定淀粉分解活性。該方法基于酶對變性馬鈴薯淀粉的分解，反應(yīng)后將淀粉/酶溶液樣品與碘溶液混合。最初，形成藍(lán)黑色，但在淀粉的分解過程中，藍(lán)色變淡并逐漸轉(zhuǎn)變成紅棕色，與有色玻璃標(biāo)準(zhǔn)相比較。1個千Novoα-淀粉酶單位(KNU)定義為標(biāo)準(zhǔn)條件下(即，37℃+/-0.05；0.0003MCa2+；和pH5.6)糊精化5260mg淀粉干物質(zhì)MerckAmylumsolubile的酶含量。更詳細(xì)描述該分析方法的文件包EB-SM-0009.02/01應(yīng)要求可以從NovozymesA/S，Denmark獲得，在此包括該文件作為參考。FAU活性的測定1個真菌α-淀粉酶單位(FAU)定義為每小時降解5.26g淀粉(MerckAmylumsolubileErg.B.6，批號9947275)的酶含量，基于以下的標(biāo)準(zhǔn)條件底物可溶性淀粉溫度37℃pH4.7反應(yīng)時間7-20分鐘酸性α-淀粉酶活性的測定(AFAU)以AFAU(酸性真菌α-淀粉酶單位)來測量酸性α-淀粉酶活性，相對于酶標(biāo)準(zhǔn)來測定。所用的標(biāo)準(zhǔn)是AMG300L(來自NovozymesA/S，Denmark，野生型黑曲霉G1葡糖淀粉酶，還公開于Boel等，(1984)，EMBOJ.3(5)，p.1097-1102)和WO92/00381)。該AMG中的中性α-淀粉酶在室溫存儲3周后從約1FAU/mL跌落至低于0.05FAU/mL。根據(jù)以下的描述來測定該AMG標(biāo)準(zhǔn)中的酸性α-淀粉酶活性。該方法中，將1個AFAU定義為標(biāo)準(zhǔn)條件下每小時降解5.260mg淀粉干物質(zhì)的酶含量。碘與淀粉但不與降解產(chǎn)物形成藍(lán)色的復(fù)合物。因此顏色的強(qiáng)度直接與淀粉濃度成比例。在特定的分析條件下使用反比色法(reversecolorimetry)以淀粉濃度的降低來測定淀粉酶活性。α-淀粉酶淀粉+碘→糊精+寡糖40℃，pH2.5藍(lán)色/紫色(violet)t＝23秒脫色(decoloration)標(biāo)準(zhǔn)條件/反應(yīng)條件(每分鐘)底物淀粉，約0.17g/L緩沖劑檸檬酸鹽，約0.03M碘(I2)0.03g/LCaCl21.85mMpH2.50±0.05培養(yǎng)溫度40℃反應(yīng)時間23秒波長λ＝590nm酶濃度0.025AFAU/mL酶工作范圍0.01-0.04AFAU/mL這些優(yōu)選的更多詳細(xì)內(nèi)容可在EB-SM-0259.02/01中找到，應(yīng)要求可以從NovozymesA/S，Denmark獲得，并引入作為參考。酸性α-淀粉酶單位(AUU)可以以AUU(酸性α-淀粉酶單位)來衡量酸性α-淀粉酶活性，這是一種絕對方法。1個酸性淀粉酶單位(AUU)是指這樣的酶量標(biāo)準(zhǔn)條件下每小時將1g淀粉(100％干物質(zhì))轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物，該產(chǎn)物與已知濃度的碘溶液反應(yīng)后，與顏色基準(zhǔn)在620nm具有相同的透射(transmission)。標(biāo)準(zhǔn)條件/反應(yīng)條件底物可溶性淀粉，濃度約20gDS/L緩沖劑檸檬酸鹽，約0.13M，pH＝4.2碘溶液40.176g碘化鉀+0.088g碘/L自來水15°-20°dH(德國硬度)pH4.2培養(yǎng)溫度30℃反應(yīng)時間11分鐘波長620nm酶濃度0.13-0.19AAU/mL酶工作范圍0.13-0.19AAU/mL淀粉應(yīng)當(dāng)是Lintner淀粉，這是實(shí)驗(yàn)室用作比色指示劑的稀糊淀粉。通過稀釋鹽酸處理的天然淀粉來獲得Lintner淀粉，使得其保留與碘產(chǎn)生藍(lán)色的能力。更多的詳細(xì)內(nèi)容可以在EP0140410B2中找到，在此包括其公開內(nèi)容作為參考。葡糖淀粉酶活性(AGI)葡糖淀粉酶(等同于淀粉葡糖苷酶)將淀粉轉(zhuǎn)化成葡萄糖。在此通過用于活性測定的葡萄糖氧化酶方法來測定葡萄糖的量來。該方法描述于Starch-GlucoamylaseMethodwithSubsequentMeasurementofGlucosewithGlucoseOxidase(淀粉-葡糖淀粉酶方法，隨后用葡萄糖氧化酶來測量葡萄糖)“ApprovedmethodsoftheAmericanAssociationofCerealChemists”Vol.1-2AACC，來自AmericanAssociationofCerealChemists，(2000)；ISBN1-891127-12-8的部分76-11中。1個葡糖淀粉酶單位(AGI)是在方法的標(biāo)準(zhǔn)條件下每分鐘形成1微摩爾葡萄糖的酶量。標(biāo)準(zhǔn)條件/反應(yīng)條件底物可溶性淀粉濃度約16g干物質(zhì)/L。緩沖劑醋酸鹽，約0.04M，pH＝4.3pH4.3培養(yǎng)溫度60℃反應(yīng)時間15分鐘反應(yīng)終止加入NaOH至濃度約為0.2g/L(pH～9)酶濃度0.15-0.55AAU/mL。淀粉應(yīng)當(dāng)是Lintner淀粉，這是實(shí)驗(yàn)室用作比色指示劑的稀糊(thin-boiling)淀粉。通過稀釋鹽酸處理的天然淀粉來獲得Lintner淀粉，使得其保留與碘產(chǎn)生藍(lán)色的能力。葡糖淀粉酶活性(AGU)將Novo葡糖淀粉酶單位(AGU)定義為標(biāo)準(zhǔn)條件下每分鐘水解1微摩爾麥芽糖的酶量，所述標(biāo)準(zhǔn)條件為37℃，pH4.3，，底物麥芽糖23.2mM，緩沖劑醋酸鹽0.1M，反應(yīng)時間5分鐘。可以使用自動分析儀系統(tǒng)。將變旋酶加入葡萄糖脫氫酶試劑中，使得存在的任何α-D-葡萄糖轉(zhuǎn)化成β-D-葡萄糖。葡萄糖脫氫酶特異性地與以上提及的反應(yīng)中的β-D-葡萄糖反應(yīng)，形成NADH，使用光度計在340nm處測定，用來衡量初始葡萄糖濃度。更詳細(xì)描述該分析方法的文件包(EB-SM-0131.02/01)應(yīng)要求可從NovozymesA/S，Denmark獲得，在此包括該文件作為參考。角質(zhì)酶活性(LU)使用甘油三丁酸酯作為底物測定水解脂肪活性來測定角質(zhì)酶活性。該方法基于酶對甘油三丁酸酯的水解，并將堿消耗作為時間的函數(shù)來表示。1個脂酶單位(LU)定義為標(biāo)準(zhǔn)條件下(即，30℃；pH7.0；使用阿拉伯膠作為乳化劑和甘油三丁酸酯作為底物)每分鐘釋放1微摩爾可滴定丁酸的酶量。更詳細(xì)描述該分析方法的文件AF95/5應(yīng)要求可從NovozymesA/S，Denmark獲得，在此包括該文件作為參考。脂肪氧合酶活性通過監(jiān)控氫過氧化物的形成在25℃用分光光度法來測定脂肪氧合酶活性。對于標(biāo)準(zhǔn)分析，將10微升酶加入1ml石英比色皿中，比色皿含有980微升25mM磷酸鈉緩沖液(pH7.0)和10微升底物溶液(用0.2％(v/v)吐溫20分散的10mM亞油酸(不應(yīng)長期保存))。通常通過將酶充分稀釋來確保在頭一分鐘內(nèi)的轉(zhuǎn)換最大為加入底物的10％。跟蹤(follow)234nm處的吸收值，并根據(jù)曲線的線性部分估算速率。假定順-反-共軛(過氧)羥基脂肪酸具有23,000M-1cm-1的分子消光系數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)碘滴定方法將少量等份試樣(10-20mL)的液化物質(zhì)在試管中煮沸幾分鐘在冰浴中冷卻加入10-12滴碘溶液混合并將樣品置于冰水中約10分鐘實(shí)施例實(shí)施例1用α-淀粉酶和麥芽糖淀粉酶液化將α-淀粉酶A和麥芽糖淀粉酶A加入干磨碎玉米(30％固體)的漿液中，加熱至85℃并保持2小時。將該系統(tǒng)的物理效應(yīng)與只用α-淀粉酶A進(jìn)行的液化相比較。用α-淀粉酶A和麥芽糖淀粉酶A制得的醪液使用標(biāo)準(zhǔn)的碘滴定方法顯示出較少的凝沉淀粉，并具有較低的粘度。權(quán)利要求1.液化含淀粉物質(zhì)的方法，包括用至少一種α-淀粉酶和麥芽糖淀粉酶來處理所述的含淀粉物質(zhì)。2.液化含淀粉物質(zhì)的方法，包括用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶來處理所述的含淀粉物質(zhì)。3.權(quán)利要求2的方法，其中液化包括(a)用至少一種酯酶預(yù)處理所述含淀粉物質(zhì)的漿液，和(b)用至少一種α-淀粉酶液化預(yù)處理的漿液。4.權(quán)利要求1-3任一項的方法，其中減小含淀粉物質(zhì)的大小，優(yōu)選通過干磨。5.權(quán)利要求3的方法，其中在預(yù)處理過程中進(jìn)一步存在麥芽糖淀粉酶。6.權(quán)利要求2的方法，其中使含淀粉物質(zhì)的漿液經(jīng)受酯酶，優(yōu)選脂酶，麥芽糖淀粉酶和α-淀粉酶，優(yōu)選酸性淀粉酶，如真菌酸性α-淀粉酶來進(jìn)行預(yù)處理。7.權(quán)利要求3的方法，其中淀粉酶是麥芽糖淀粉酶和/或α-淀粉酶。8.權(quán)利要求1的方法，其中以多階段來進(jìn)行液化，如三個階段，優(yōu)選第一階段的溫度范圍為80至105℃，第二階段的溫度范圍為65至95℃，和第三階段的溫度范圍為40-75℃。9.權(quán)利要求8的方法，其中在以下的溫度階段進(jìn)行多階段液化第一階段80-95℃；第二階段75-85℃；和第三階段60至70℃。10.權(quán)利要求8或9的方法，其中第一階段的保持時間為10至90分鐘，第二階段為30-120分鐘，第三階段為30-120分鐘。11.權(quán)利要求1-10中的任一項的方法，其中用酯酶和麥芽糖淀粉酶和/或α-淀粉酶來處理含淀粉物質(zhì)。12.權(quán)利要求1-11中的任一項的方法，其中含淀粉物質(zhì)是全谷物或整谷粒，優(yōu)選玉米，小麥，大麥或高粱。13.權(quán)利要求1-12中的任一項的方法，其中淀粉酶或麥芽糖淀粉酶是細(xì)菌來源的，優(yōu)選芽孢桿菌屬的菌株，尤其是嗜熱脂肪芽孢桿菌。14.權(quán)利要求2-13中的任一項的方法，其中酯酶是脂酶，磷脂酶或角質(zhì)酶，或其組合。15.權(quán)利要求1-14中的任一項的方法，其中在脂肪酸氧化酶，優(yōu)選脂肪氧合酶存在下進(jìn)行液化。16.權(quán)利要求1-15中的任一項的方法，其中在溫度為20-105℃，優(yōu)選60-95℃的水漿液中進(jìn)行(預(yù))處理。17，生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大?。?b)如權(quán)利要求1中所述的用至少一種α-淀粉酶和至少一種麥芽糖淀粉酶來液化步驟(a)的產(chǎn)物；(c)用碳水化合物源產(chǎn)生酶來糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。18.生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大?。?b)用至少一種淀粉酶和至少一種酯酶來液化步驟(a)的產(chǎn)物；(c)用碳水化合物源產(chǎn)生酶來糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。19.生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)物的方法，包括(a)減小含淀粉物質(zhì)的大??；(b)i)用至少一種酯酶來預(yù)處理所述含淀粉物質(zhì)的漿液，ii)用α-淀粉酶來液化預(yù)處理的漿液；(c)用碳水化合物源產(chǎn)生酶來糖化步驟(b)中所獲得的液化物質(zhì)；和(d)使用發(fā)酵微生物來發(fā)酵糖化的物質(zhì)。20.權(quán)利要求17-19中的任一項的方法，其中通過干磨來減小含淀粉物質(zhì)的大小。21.權(quán)利要求17-20中的任一項的方法，其中以同時糖化和發(fā)酵步驟(SSF)來進(jìn)行步驟b)和c)。22.權(quán)利要求17-20中的任一項的方法，其中含淀粉物質(zhì)是全谷物或整谷粒，優(yōu)選玉米，小麥，大麥或高粱。23.權(quán)利要求19的方法，其中進(jìn)一步在麥芽糖淀粉酶的存在下來進(jìn)行步驟(b)i)中的預(yù)處理。24.權(quán)利要求17-23中的任一項的方法，其中碳水化合物源產(chǎn)生酶是葡糖淀粉酶或α-淀粉酶，或其混合物，優(yōu)選酸性真菌α-淀粉酶活性(AFAU)每葡糖淀粉酶活性(AGU)(AFAU每AGU)為至少0.1，特別是至少0.16，如0.12至0.50的混合物。25.權(quán)利要求17-24中的任一項的方法，進(jìn)一步包括蒸餾所發(fā)酵的物質(zhì)。26.權(quán)利要求17-25中的任一項的方法，其中所述發(fā)酵微生物是酵母。27.權(quán)利要求17-26中的任一項的方法，其中在20-105℃，優(yōu)選60-95℃溫度范圍內(nèi)在水漿液中進(jìn)行處理或預(yù)處理。28.權(quán)利要求19-27中的任一項的方法，其中在預(yù)處理過程中進(jìn)一步存在麥芽糖淀粉酶。29.權(quán)利要求19-28中的任一項的方法，其中使含淀粉物質(zhì)的漿液經(jīng)受酯酶，優(yōu)選脂酶，麥芽糖淀粉酶和α-淀粉酶，優(yōu)選酸性淀粉酶，如真菌酸性α-淀粉酶來進(jìn)行預(yù)處理。30.權(quán)利要求19-29中的任一項的方法，其中淀粉酶是麥芽糖淀粉酶和/或α-淀粉酶。31.權(quán)利要求17-30中的任一項的方法，其中以多階段來進(jìn)行液化，如三個階段，優(yōu)選第一階段的溫度范圍為80至105℃，第二階段的溫度范圍為65至95℃，和第三階段的溫度范圍為40-75℃。32.權(quán)利要求31的方法，其中在以下的溫度階段進(jìn)行多階段液化第一階段80-95℃，第二階段75-85℃；和第三階段60至70℃。33.權(quán)利要求31或32的方法，其中階段一的保溫時間為10至90分鐘，第二階段為30-120分鐘，和第三階段為30-120分鐘。34.權(quán)利要求17-33中的任一項的方法，其中用酯酶和麥芽糖淀粉酶和/或α-淀粉酶來處理含淀粉物質(zhì)。35.權(quán)利要求17-34中的任一項的方法，其中含淀粉物質(zhì)是全谷物或整谷粒，優(yōu)選玉米，小麥，大麥或高粱。36.權(quán)利要求17-35中的任一項的方法，其中淀粉酶或麥芽糖淀粉酶是細(xì)菌來源的，優(yōu)選芽孢桿菌屬的菌株，尤其是嗜熱脂肪芽孢桿菌。37.權(quán)利要求18-36中的任一項的方法，其中酯酶是脂酶，磷脂酶或角質(zhì)酶，或其組合。38.權(quán)利要求17-37中的任一項的方法，其中在脂肪酸氧化酶，優(yōu)選脂肪氧合酶的存在下進(jìn)行液化。39.權(quán)利要求18-38中的任一項的方法，其中在20-105℃，優(yōu)選60-95℃溫度范圍內(nèi)的水漿液中進(jìn)行(預(yù))處理。40.權(quán)利要求17-39中的任一項的方法，其中發(fā)酵產(chǎn)物是乙醇。全文摘要本發(fā)明提供了液化含淀粉物質(zhì)的方法，包括用至少一種α－淀粉酶和麥芽糖淀粉酶或至少一種淀粉酶和至少一種酯酶來處理所述含淀粉物質(zhì)的步驟。文檔編號C12P1/02GK1960748SQ200580011785公開日2007年5月9日申請日期2005年2月17日優(yōu)先權(quán)日2004年2月19日發(fā)明者洛里·亨德森,卡門·科斯塔布爾申請人:諾維信北美公司