專利名稱：核酸提取用容器、固體基件的洗凈方法及洗凈機(jī)構(gòu)、和核酸精制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于從試樣中精制目的核酸的技術(shù)。
背景技術(shù)：
在醫(yī)療領(lǐng)域中，核酸分析由于以基因水平診斷感染癥或基因疾病所以起到重要的作用，現(xiàn)在，不限于醫(yī)療的領(lǐng)域，在農(nóng)業(yè)或食品領(lǐng)域等各領(lǐng)域中也應(yīng)用。通常，核酸的分析要經(jīng)過(guò)源自試樣的核酸的精制、所精制的核酸的擴(kuò)增和所擴(kuò)增的核酸的檢測(cè)這樣的過(guò)程。在考慮人的成本、再現(xiàn)性、分析效率的情況下，最好各過(guò)程由機(jī)械自動(dòng)地進(jìn)行，理想的是，最好全部過(guò)程用機(jī)械自動(dòng)地進(jìn)行(參照專利文獻(xiàn)1、2)。
作為以核酸精制的自動(dòng)機(jī)械化為目標(biāo)，有使用核酸結(jié)合性載體的方法。作為一個(gè)例子，有使用核酸結(jié)合性二氧化硅粒子和高離液(chaotropic)離子的方法(參照專利文獻(xiàn)3)。該方法是，讓具有使核酸結(jié)合性二氧化硅粒子和試樣中的核酸游離的能力的高離液離子與試樣混合，使試樣中的核酸與核酸結(jié)合性二氧化硅粒子結(jié)合，然后，分離固相和液相后，洗脫與核酸結(jié)合性二氧化硅粒子結(jié)合的核酸。然而，為了分離固相和液相，需要進(jìn)行離心分離或使用過(guò)濾器等的過(guò)濾等操作，實(shí)現(xiàn)機(jī)械化時(shí)的操作和裝置結(jié)構(gòu)復(fù)雜化。
作為使用核酸結(jié)合性載體的另一方法，有使用具有磁性的載體的方法(參照專利文獻(xiàn)4、5)。該方法是，在具有磁性的二氧化硅粒子上吸附核酸后，利用磁鐵分離二氧化硅粒子，在從分離的二氧化硅粒子中洗脫核酸后，回收洗脫液。該方法由于不進(jìn)行離心分離操作等而可以分離固相和液相，因此在用機(jī)械實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化方面有優(yōu)點(diǎn)。
然而，存在著核酸的回收率比較低，其回收率容易受到試樣種類的影響的問(wèn)題。而且，在采用PCR(聚合酶鏈反應(yīng)，Polymerase ChainReaction)法作為核酸的擴(kuò)增方法時(shí)，磁性二氧化硅粒子成為擴(kuò)增反應(yīng)的阻礙劑。另外，作為檢測(cè)核酸的代表性方法，要對(duì)核酸進(jìn)行標(biāo)識(shí)，利用光學(xué)方法測(cè)定該標(biāo)識(shí)。在采用這個(gè)方法的情況下，磁性二氧化硅的影響會(huì)生測(cè)定誤差，精制時(shí)的磁性二氧化硅粒子的含有量的偏差會(huì)使再現(xiàn)性惡化。
另外，作為核酸的精制方法，有利用在固體基件中含浸提取核酸所必要的試劑類的方法(參照專利文獻(xiàn)6～8)。利用這種方法，通過(guò)在固體基件上點(diǎn)附試樣，提取目的核酸。然后，當(dāng)擴(kuò)增核酸時(shí)，將可成為阻礙劑的剩余成分洗凈除去。更具體地說(shuō)，剩余成分的洗凈是通過(guò)利用沖頭將固體基件的一部分沖切成圓盤(pán)狀后，將沖切的圓盤(pán)狀的固體基件收容在微型管中，在微型管內(nèi)，從圓盤(pán)狀的固體基件洗脫剩余成分來(lái)進(jìn)行的。
在采用這個(gè)方法的情況下，不但需要沖切固體基件一部分的工序，而且為了沖切固體基件，需要使固體基件干燥。由于這樣，在洗凈圓盤(pán)狀固體基件前，需要相當(dāng)?shù)臅r(shí)間。另外，圓盤(pán)狀的固體基件的洗凈，由于是使剩余成分從固體基件擴(kuò)散在洗凈液中的方法，所以洗凈需相當(dāng)?shù)臅r(shí)間。特別是，為了得到很好的洗凈效果，需要反復(fù)更換保持在微型管中的洗凈液，因此在這點(diǎn)上，洗凈需要的時(shí)間長(zhǎng)。為了盡可能縮短洗凈需要的時(shí)間，不得不將圓盤(pán)狀的固體基件縮小。在這種情況下，可從試樣回收的目的核酸量少。其結(jié)果是，核酸的檢測(cè)靈敏度降低，另外，為了得到目的量核酸，需要將擴(kuò)增時(shí)間設(shè)定得長(zhǎng)。
另外，在利用圓盤(pán)狀固體基件的方法中，核酸的擴(kuò)增在用于進(jìn)行核酸洗凈的微型管中進(jìn)行，同時(shí)，核酸的分析也在微型管中，利用光學(xué)的方法進(jìn)行。由于這樣，在圓盤(pán)狀的固體基件不適當(dāng)大的情況下，圓盤(pán)狀的固體基件塞住測(cè)光路，只會(huì)阻礙核酸的分析。為了不產(chǎn)生這種問(wèn)題，不得不將圓盤(pán)狀的固體基件沖切成一定程度以下的大小例如2mm以下的大小，這樣產(chǎn)生上述的問(wèn)題，使得從試樣可回收的目的核酸的量減少。另外，作為使用者，將固體基件沖切為2mm以下大小的操作的負(fù)擔(dān)大，稱不上是操作效率好的方法。
然而，利用PCR法的核酸擴(kuò)增正在進(jìn)行機(jī)械的自動(dòng)化，市場(chǎng)上已有PCR裝置出售。作為PCR裝置，通常與核酸擴(kuò)增的同時(shí)，可以進(jìn)行所擴(kuò)增的核酸的檢測(cè)。
但是，在使用市場(chǎng)上出售的PCR裝置的情況下，需要使用專用的擴(kuò)增成套工具。通常的擴(kuò)增成套工具是，預(yù)先將引物和聚合酶等試劑裝入帶蓋的容器中。由于這樣，使用者要加強(qiáng)打開(kāi)容器的蓋后，將核酸溶液分別注入容器內(nèi)，在攪拌容器內(nèi)的反應(yīng)液、關(guān)閉蓋后，將該容器安裝在PCR裝置中的操作。即，通常的擴(kuò)增成套工具是，由于依賴使用者手操作的部分大，使用者的負(fù)擔(dān)大，又由于大量存在使用者的手操作，分析效率低，基于使用者技術(shù)水平的差異的再現(xiàn)性惡化。另外，在擴(kuò)增成套工具中所采用的容器，通常為通過(guò)樹(shù)脂成形，與蓋作成一體的通用品，在PCR裝置中，自動(dòng)地開(kāi)閉蓋困難。由于這樣，在利用通常的專用成套工具的方法中，在PCR裝置中自動(dòng)地進(jìn)行依賴使用者的手操作的操作困難。
作為核酸的擴(kuò)增方法，除了PCR法以外，還有例如ICAN(Isothermal and Chimeric Primer-initiated Amplification of Nucleic acid)法或LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)法。這些方法，與PCR法相比，核酸的精制度不很高，是不能很好地?cái)U(kuò)增目的核酸的方法。因此，在利用機(jī)械使核酸的精制和擴(kuò)增自動(dòng)化的情況下，除了PCR法以外，為了能夠采用其它的擴(kuò)增方法，需要確立提高核酸的精制度的方法。
專利文獻(xiàn)1特開(kāi)2001-149097號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2特開(kāi)2003-304899號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3專利第2680462號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)4特開(kāi)昭60-1564號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)5特開(kāi)平9-19292號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)6美國(guó)專利第5496562號(hào)說(shuō)明書(shū)專利文獻(xiàn)7美國(guó)專利第5939259號(hào)說(shuō)明書(shū)專利文獻(xiàn)8美國(guó)專利第6168922號(hào)說(shuō)明書(shū)發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于利用機(jī)械自動(dòng)地進(jìn)行核酸的精制、核酸的擴(kuò)增和核酸的測(cè)定這樣的核酸分析中的一系列工序，減輕使用者的負(fù)擔(dān)，同時(shí)改善分析效率和再現(xiàn)性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種在利用機(jī)械使核酸的精制和擴(kuò)增自動(dòng)化的情況下，可采用各種擴(kuò)增方法的核酸的精制技術(shù)。
在本發(fā)明的第一方面，提供一種核酸提取用容器，它包括用于從試樣中提取目的核酸且附載所提取的核酸的核酸提取元件；和與所述核酸提取元件分開(kāi)另外形成且具有收容所述核酸提取元件的收容槽的容器主體。
優(yōu)選為，核酸提取元件包括用于附載目的核酸的固體基件；和用于保持該固體基件的保持部件。
固體基件相對(duì)于保持部件的垂直軸為傾斜的狀態(tài)下被保持在保持部件上。優(yōu)選為，相對(duì)于垂直軸為水平或大致水平的狀態(tài)來(lái)保持。在種情況下，將固體基件作成圓盤(pán)形。
固體基件相對(duì)于上述垂直軸為傾斜的狀態(tài)，例如可通過(guò)相對(duì)于固體基件刺向保持部件來(lái)達(dá)到。在這種情況下，保持部件包括越向端部直徑越縮小的錐部；從錐部延伸并且貫通固體基件的銷狀部；和抑制固體基件從銷狀部脫離的卡止片。
另外，固體基件在相對(duì)于保持部件的垂直軸為平行或大致平行的狀態(tài)下，保持在保持部件上也可以。在這種情況下，優(yōu)選固體基件作成片狀。
固體基件相對(duì)于上述垂直軸為平行或大致平行的狀態(tài)，可通過(guò)將固體基件吊持在保持部件上達(dá)到。在這種情況下，保持部件具有夾持固體基件的端部并且吊持固體基件的夾持部。
優(yōu)選為，容器主體具有1個(gè)以上的用于保持洗凈液的洗凈槽，該洗凈液用于除去附著在固體基件上的剩余成分。在這種情況下，優(yōu)選為，在容器主體上設(shè)置有剩余洗凈液除去裝置，該剩余洗凈液除去裝置用于除去附著在固體基件或其周圍上的剩余洗凈液。
剩余洗凈液除去裝置包括例如吸水性部件。作為吸水性部件，可使用例如發(fā)泡樹(shù)脂或布等多孔質(zhì)粒。
本發(fā)明的核酸提取用容器可作為安裝在核酸分析裝置上使用的支架構(gòu)成。
在核酸分析裝置具有從收容槽取出附載目的核酸的核酸提取元件、將該核酸提取元件移送至其它部位的移送部件的情況下，核酸提取元件具有例如與所述移送部件卡合的卡合部。在這種情況下，卡合部作成用于嵌合例如移送部件的前端部的筒狀。優(yōu)選為，卡合部具有1個(gè)以上的凹陷部，該凹陷部是，當(dāng)嵌合移送部件的前端部時(shí)，使彈性力作用在移送部件上。1個(gè)以上的凹陷部包括槽、切口和貫通孔中的至少一個(gè)。
與此相對(duì)，保持部件具有例如用于解除移送部件和卡合部的嵌合狀態(tài)的突出部。優(yōu)選為，突出部是向外側(cè)突出的凸緣。在這種情況下，收容槽具有例如當(dāng)將核酸提取元件收容在該收容槽中時(shí)、與突出部卡止的臺(tái)階部。
在本發(fā)明的第二方面中，提供一種固體基件的洗凈方法，它是使用洗凈液從附載目的核酸的固體基件上除去目的核酸以外的剩余成分的方法，通過(guò)使固體基件相對(duì)于洗凈液沿上下方向進(jìn)行相對(duì)移動(dòng)，使上述固體基件浸漬上述洗凈液中的狀態(tài)和上述固體基件不浸漬在上述洗凈液中的狀態(tài)反復(fù)。
固體基件浸漬在洗凈液中的狀態(tài)和不浸漬的狀態(tài)的反復(fù)，在使固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)閮A斜的狀態(tài)下進(jìn)行。優(yōu)選為，使固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)榇怪被虼笾麓怪钡淖藙?shì)進(jìn)行。
在本發(fā)明的第三方面中，提供一種核酸精制方法，它是使用具有附載目的核酸的固體基件和保持該固體基件的保持部件的核酸提取元件，精制目的核酸的方法，它包括將試樣含浸在上述在固體基件中、在所述固體基件中附載試樣中的目的核酸的核酸附載步驟；和使用洗凈液除去附著在所述固體基件上的目的核酸以外的剩余成分的洗凈步驟；并且所述洗凈步驟，通過(guò)使所述核酸提取元件相對(duì)于洗凈液沿上下方向相對(duì)地移動(dòng)，使所述核酸提取元件浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)和所述核酸提取元件不浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)反復(fù)來(lái)進(jìn)行。
在本發(fā)明的核酸精制方法中，作為核酸提取元件，使用以相對(duì)于保持部件的垂直軸為傾斜的狀態(tài)將固體基件保持在保持部件上的元件。在這種情況下，洗凈步驟，在使固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)閮A斜的狀態(tài)下，通過(guò)使提取元件沿上下方向移動(dòng)來(lái)進(jìn)行。優(yōu)選為，洗凈步驟，通過(guò)以使固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)榇怪被虼笾麓怪钡淖藙?shì)，使核酸提取元件沿上下方向移動(dòng)來(lái)進(jìn)行。
洗凈步驟包括在固體基件相對(duì)于洗凈液的反復(fù)浸漬結(jié)束后，利用吸水性部件除去附著在固體基件中的剩余洗凈液的作業(yè)。
在本發(fā)明的第四方面，提供一種固體基件的洗凈機(jī)構(gòu)，使用洗凈液從附載目的核酸的固體基件中除去目的核酸以外的剩余成分，使固體基件相對(duì)于洗凈液沿上下方向相對(duì)地移動(dòng)，使得所述固體基件浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)和所述固體基件不浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)反復(fù)。
本發(fā)明的洗凈機(jī)構(gòu)，例如在使固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)閮A斜的狀態(tài)下，使固體基件沿上下方向進(jìn)行移動(dòng)。優(yōu)選為，以使固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)榇怪被虼笾麓怪钡淖藙?shì)，使固體基件沿上下方向進(jìn)行移動(dòng)。
在本發(fā)明中，所謂“試樣”是包含源自動(dòng)物的生物試樣(例如全血、血清、血漿、尿、唾液或體液)和動(dòng)物以外的生物試樣的概念，所謂“核酸”是指DNA或RNA，是包含雙鏈DNA、單鏈DNA、質(zhì)粒DNA、基因組DNA、cDNA、源自外源性寄生生物(病毒、細(xì)菌、真菌等)的RNA、內(nèi)源性RNA的概念。


圖1是說(shuō)明核酸分析裝置的一個(gè)例子的全體立體圖。
圖2是表示圖1所示的核酸分析裝置的內(nèi)部結(jié)構(gòu)的平面圖。
圖3是沿著圖2的III-III線的剖面圖。
圖4是沿著圖1的IV-IV線的剖面圖。
圖5是表示核酸精制用支架的一個(gè)例子的全體立體圖。
圖6是沿著圖5的VI-VI線的剖面圖。
圖7A是核酸精制用支架的核酸提取元件的全體立體圖。
圖7B是核酸提取元件的剖面圖。
圖8是核酸擴(kuò)增用支架的全體立體圖。
圖9是沿著圖8的IX-IX線的剖面圖。
圖10是說(shuō)明固體基件的洗凈動(dòng)作的主要部分的剖面圖。
圖11是表示從核酸擴(kuò)增用支架取出蓋的動(dòng)作的主要部分的剖面圖。
圖12是說(shuō)明利用蓋的擴(kuò)散核酸提取元件的取出動(dòng)作的主要部分的剖面圖。
圖13A是說(shuō)明將核酸提取元件收容在核酸擴(kuò)增用支架的反應(yīng)槽中的動(dòng)作的主要部分的剖面圖；圖13B是說(shuō)明從反應(yīng)槽取出蓋的動(dòng)作的主要部分的剖面圖。
圖14是沿著圖13B的XIV-XIV線的剖面圖。
圖15是說(shuō)明溫度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)和測(cè)定機(jī)構(gòu)的與沿著圖2的XV-XV線的剖面相當(dāng)?shù)钠拭鎴D。
圖16是表示用于說(shuō)明核酸分析裝置的一個(gè)例子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)的平面圖。
圖17是沿著圖16的XVII-XVII線的剖面圖。
圖18是沿著圖16的XVIII-XVIII線的剖面圖。
圖19是表示核酸精制用支架的一個(gè)例子的全體立體圖。
圖20A是表示核酸精制用支架的核酸提取元件的立體圖；圖20B是其平面圖；圖20C是沿著圖20A的XXc-XXc線的剖面圖。
圖21是核酸精制用支架的容器中的與沿著圖19的XXI-XXI線的剖面相當(dāng)?shù)钠拭鎴D。
圖22是表示從容器的收容槽取出核酸提取元件的操作的主要部分的剖面圖。
圖23是核酸擴(kuò)增用支架的全體立體圖。
圖24A是沿著圖23的XXIVa-XXIVa線的剖面圖；圖24B是表示在圖24A中分離蓋的狀態(tài)的剖面圖。
圖25是說(shuō)明尖端件在噴嘴上的安裝動(dòng)作的主要部分的正面圖。
圖26是說(shuō)明核酸提取元件在噴嘴上的安裝動(dòng)作的主要部分的正面圖。
圖27是說(shuō)明從噴嘴取出尖端件的動(dòng)作的主要部分的正面圖。
圖28是說(shuō)明從噴嘴取出核酸提取元件的動(dòng)作的主要部分的正面圖。
圖29是表示旋轉(zhuǎn)部件插入核酸擴(kuò)增用支架的蓋中的動(dòng)作的主要部分的剖面圖。
圖30是說(shuō)明取出核酸擴(kuò)增用支架的蓋的動(dòng)作的主要部分的剖面圖。
圖31是表示將核酸提取元件收容在核酸擴(kuò)增用支架的反應(yīng)槽中的操作的主要部分的剖面圖。
圖32是說(shuō)明再安裝核酸擴(kuò)增用支架的蓋的動(dòng)作的主要部分的剖面圖。
圖33是用于說(shuō)明測(cè)定機(jī)構(gòu)的與沿著圖16的XXXIII-XXXIII線的剖面相當(dāng)?shù)钠拭鎴D。
圖34是表示實(shí)施例1(PCR法)中的熒光強(qiáng)度測(cè)定結(jié)果的圖形，它以橫軸為溫度，以縱軸為熒光強(qiáng)度的微分值來(lái)表示。
圖35是表示實(shí)施例2(ICAN法)中的熒光強(qiáng)度測(cè)定結(jié)果的圖形，它以橫軸為循環(huán)數(shù)，以縱軸為熒光強(qiáng)度來(lái)表示。
圖36是表示實(shí)施例3(LAMP法)中的熒光強(qiáng)度測(cè)定結(jié)果的圖形，它以橫軸為循環(huán)數(shù)，以縱軸為熒光強(qiáng)度來(lái)表示。
具體實(shí)施例方式
以下參照附圖，說(shuō)明本發(fā)明的第一和第二實(shí)施方式。
首先，參照?qǐng)D1～圖15說(shuō)明本發(fā)明的第一實(shí)施方式。
圖1～圖4所示的核酸分析裝置1可自動(dòng)地進(jìn)行試樣中的核酸的精制、所提取的核酸的擴(kuò)增和所擴(kuò)增的核酸的分析。如圖1和圖2所示，在框體10的內(nèi)部安裝并使用同一數(shù)目的多個(gè)核酸精制用支架2和核酸擴(kuò)增用支架3。
如圖5和圖6所示，核酸精制用支架2可適用于核酸分析裝置1中的核酸的自動(dòng)精制，具有核酸提取元件20和支架主體21。
核酸提取元件20是在從試樣中提取核酸時(shí)所利用的元件，收容在后述的支架主體21的收容槽27中。如圖7A和圖7B清楚地所示，該核酸提取元件20具有保持部件22和固體基件23。
保持部件22具有筒狀部24、凸緣部25和保持部26，例如全體由樹(shù)脂成形形成。
筒狀部24是在移動(dòng)核酸提取元件20時(shí)利用的部分(參照?qǐng)D4和圖12)，具有凹部24A和卡止頭24B。凹部24A用于嵌合后述的核酸精制用機(jī)構(gòu)5的插入銷50或核酸擴(kuò)增用支架3的蓋31的銷36B(參照?qǐng)D4和圖12)。卡止頭24B用于嵌合后述的核酸擴(kuò)增用支架3的蓋31的卡止爪36A，在半徑方向突出。
凸緣部25用于在將核酸提取元件20收容在后述的核酸精制用支架2的收容槽27中時(shí)，與收容槽27的臺(tái)階部27A卡合，作成向半徑方向的外側(cè)突出的環(huán)狀(參照?qǐng)D12)。
保持部26為保持固體基件23的部分，具有錐部26A、銷狀部26B和卡止片26C。錐部26A起著容易使附著在保持部26上的洗凈液向下方移動(dòng)的作用。銷狀部26B為貫通固體基件23的部分?？ㄖ蛊?6C用于在使銷狀部26B貫通固體基件23時(shí)，防止固體基件23從銷狀部26B(保持部26)脫離。
O形圈22A固定在保持部件22上，于保持部26的稍上方。如圖13B清楚地所示，該O形圈22A用于在將核酸提取元件20收容在核酸擴(kuò)增用的支架3的反應(yīng)槽34中時(shí)，與反應(yīng)槽34的內(nèi)面緊貼。即，在將核酸提取元件20收容在反應(yīng)槽34中的情況下，在O形圈22A與反應(yīng)槽34的內(nèi)面貼緊的位置的下方形成密閉空間。因?yàn)镺形圈22A配置在保持部26的上方，因此，固體基件23收容在密閉空間中。
固體基件23用于附載試樣中的核酸，例如可作為將核酸提取用的試劑類附載在濾紙上構(gòu)成。將該固體基件23作成圓盤(pán)狀。即，固體基件23刺入銷狀部26B的狀態(tài)下，水平或大致水平地支承，使得與保持部件22的垂直軸垂直。
在此，作為核酸提取用的試劑類，可舉出例如弱堿、螯合試劑、陰離子界面活性劑或陰離子洗劑和尿酸或尿酸鹽的組合，或者核酸吸附用載體和吸附促進(jìn)劑的組合。作為核酸吸附用載體，可以使用眾所周知的各種載體，典型地可使用二氧化硅珠。作為吸附促進(jìn)劑，如果是使細(xì)胞膜破壞或使試樣中的蛋白質(zhì)變性、對(duì)核酸與核酸吸附用載體的結(jié)合有幫助的物質(zhì)即可，例如可以使用高離液物質(zhì)(例如胍硫氰酸鹽、胍酸鹽)。如果固體基件23是可以高效率地吸附試樣中的核酸的結(jié)構(gòu)即可，其結(jié)構(gòu)不是僅限于上述的例子。
在上述的核酸提取元件20中，當(dāng)將核酸提取元件20收容在后述的核酸擴(kuò)增用支架3的反應(yīng)槽34中時(shí)，可以成為使固體基件23與反應(yīng)槽34的底離開(kāi)的狀態(tài)。這樣，由于固體基件23不位于后述的測(cè)光機(jī)構(gòu)8的測(cè)光路徑上，可以提高測(cè)光精度。由于固體基件23不位于測(cè)光路徑上，故可以使用尺寸大的固體基件23。這樣，固體基件23上可附載更多的核酸，可以進(jìn)行更高效率的核酸擴(kuò)增，還可提高分析精度。
如圖5和圖6所示，支架主體21具有收容槽27、三個(gè)洗凈槽281～283、試樣保持槽29和剩余液除去槽21A，由樹(shù)脂成形作成一體。
收容槽27用于收容核酸提取元件20，具有與核酸提取元件20的凸緣部25卡止的臺(tái)階部27A，在使用核酸精制用支架2前，優(yōu)選利用鋁薄膜等密封材料塞住該收容槽27的上部開(kāi)口27B，使得核酸提取元件20不從上部開(kāi)口27B脫離。密封材料在使用核酸精制用支架2時(shí)，可以由使用者剝離，也可以在核酸分析裝置1中自動(dòng)地剝離。
各洗凈槽281～283用于在將核酸附載在固體基件23中后，保持從固體基件23除去夾雜物用的洗凈液。優(yōu)選洗凈液預(yù)先裝入作為核酸精制用支架2的洗凈槽281～283中，但在分析時(shí)，將裝入核酸分析裝置1中的洗凈液分別注入洗凈槽281～283中也可以。作為洗凈液，可以使用核酸從固體基件23洗脫作用少、妨礙夾雜物結(jié)合的洗凈液(例如胍鹽酸鹽或乙醇)。在三個(gè)洗凈槽281～283中保持相同的洗凈液也可以，保持不同的洗凈液也可以。
在預(yù)先將洗凈液裝入各洗凈槽281～283中的情況下，需要利用鋁薄膜等的密封材料塞住各洗凈槽281～283的上部開(kāi)口28A1～28A3。在這種情況下，個(gè)別地塞住各洗凈槽281～283的上部開(kāi)口28A1～28A3也可以，總括地塞住三個(gè)洗凈槽281～283的上部開(kāi)口28A1～28A3或總括地塞住三個(gè)洗凈槽281～283的上部開(kāi)口28A1～28A3和收容槽27的上部開(kāi)口27B也可以。
試樣保持槽29用于保持作為分析對(duì)象(提取核酸的對(duì)象)的試樣。試樣保持槽29對(duì)試樣的保持，在將核酸精制用支架2安裝在核酸分析裝置1上之前進(jìn)行也可以，在將核酸精制用支架2安裝在核酸分析裝置1上之后進(jìn)行也可以。在后者的情況下，優(yōu)選在核酸分析裝置1中自動(dòng)地將試樣分別注入試樣保持槽29中。作為試樣，可以使用全血、血清、血漿、尿、唾液或體液。
剩余液除去槽21A用于在洗凈核酸提取元件20中的固體基件23之后、除去附著在核酸提取元件20、固體基件23和保持部件22的保持部26上的剩余的洗凈液。在剩余液除去槽21A中，吸水性部件21Ad、21Ae與底壁21Aa和前后壁21Ab、21Ac緊貼固定。吸水性部件21Ad、21Ae由發(fā)泡樹(shù)脂或布等多孔質(zhì)材料構(gòu)成，通過(guò)接觸核酸提取元件20，從核酸提取元件20吸收除去剩余的洗凈液。
如圖8和圖9所示，核酸擴(kuò)增用支架3可適應(yīng)核酸分析裝置1中的核酸自動(dòng)擴(kuò)增和測(cè)定，具有支架主體30和蓋31。
支架主體30具有四個(gè)試劑類保持槽321～324、混合槽33和反應(yīng)槽34，由樹(shù)脂成形作成一體。
各試劑類保持槽321～324用于在水溶液或懸濁液狀態(tài)下保持核酸擴(kuò)增和測(cè)定所需要的試劑類。在此，保持在各試劑類保持槽321～324中的試劑類的種類，根據(jù)采用的擴(kuò)增方法和測(cè)定方法來(lái)選擇。作為擴(kuò)增方法，可以采用PCR(聚合酶鏈反應(yīng)，Polymerase Chain Reaction)法、ICAN(Isothermal and Chimeric Primer-initiated Amplification ofNucleic acid)法、LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification)法或NASBA(核糖核酸序列擴(kuò)增，Nucleic acid Sequence BaseaAmplification)法。在采用PCR法的情況下，作為試劑類，使用至少二種的引物、dNTP和DNA聚合酶。在采用ICAN法的情況下，作為試劑類，使用嵌合體引物、DNA聚合酶和RNaseH。在采用LAMP法的情況下，作為試劑類，使用1種以上的LAMP用引物、dNTP、鏈置換型DNA合成酶和逆轉(zhuǎn)錄酶。在采用NASBA法的情況下，作為試劑類，使用至少二種的引物、dNTP、rNTP、逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、RNaseH和RNA聚合酶。另一方面，作為測(cè)定方法，可采用熒光測(cè)定、發(fā)色測(cè)定、放射性活性測(cè)定或電泳。在核酸分析裝置1中采用熒光測(cè)定。在這種情況下，作為引物，優(yōu)選使用熒光引物。
混合槽33是在將保持在試劑類保持槽321～324中的二種以上的試劑類供給反應(yīng)槽34之前混合時(shí)所利用的部件。
優(yōu)選預(yù)先將試劑類裝入試劑類保持槽321～324中，在分析時(shí)，將裝入核酸分析裝置1中的試劑類分別注入試劑類保持槽321～324中也可以。在這種情況下，需要用鋁薄膜等密封材料塞住試劑類保持槽321～324的上部開(kāi)口32A1～32A4，但個(gè)別地塞住各試劑類保持槽321～324的上部開(kāi)口32A1～32A4也可以，總括地塞住4個(gè)試劑類保持槽321～324的上部開(kāi)口32A1～32A4或者總括地塞住4個(gè)試劑類保持槽321～324和混合槽33的上部開(kāi)口32A1～32A4、33A也可以。
反應(yīng)槽34用于收容混合試劑和核酸提取元件20，同時(shí)，提供使在核酸提取元件20中附載的核酸與在混合槽33中調(diào)整的混合試劑反應(yīng)的場(chǎng)所(參照?qǐng)D13和圖14)。反應(yīng)槽34具有筒狀部35和反應(yīng)檢測(cè)部37。
筒狀部35是安裝蓋31的部分，在其內(nèi)周面上作出螺紋槽35A。
反應(yīng)檢測(cè)部37提供引起核酸擴(kuò)增反應(yīng)的場(chǎng)所，同時(shí)，起到作為進(jìn)行熒光測(cè)定的檢測(cè)容器的作用。即，反應(yīng)檢測(cè)部37是從后述的測(cè)光機(jī)構(gòu)8的發(fā)光部80射出的光照射的部分(參照?qǐng)D15)。
蓋31用于選擇使反應(yīng)檢測(cè)部37的內(nèi)部是否為密閉狀態(tài)，可自由地在反應(yīng)槽34(筒狀部35)上安裝和拆卸。更具體地說(shuō)，通過(guò)作用旋轉(zhuǎn)力，蓋31可以選擇安裝在筒狀部35上的狀態(tài)和完全與筒狀部35(反應(yīng)槽34)分離的狀態(tài)。蓋31具有圓筒狀的主體部38、凸緣部39和保持部36。
主體部38具有與反應(yīng)槽34的筒狀部35的螺紋槽35A螺合的螺紋高出部38A和插入后述的蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6的旋轉(zhuǎn)部件60(參照?qǐng)D11B)的凹部38B。在凹部38B的內(nèi)周面上作出多個(gè)肋38C。多個(gè)肋38C在周方向上隔開(kāi)一定間隔，在上下方向延伸。各個(gè)肋38C的上端部作成越向上方寬度尺寸越小的錐形狀。
凸緣部39用于當(dāng)移動(dòng)從反應(yīng)槽34取出的蓋31時(shí)、與后述的蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6的外套部件61的爪64卡止(參照?qǐng)D11B)。該凸緣部39作成從主體部38的上端向半徑方向的外側(cè)突出的圓環(huán)狀。
如圖7B所示，保持部36用于保持核酸精制用支架2的核酸提取元件20，具有一對(duì)卡止爪36A和銷36B。
一對(duì)卡止爪36A用于與核酸提取元件20的卡止頭24B卡止，作成從主體部38的底面38D向下方突出。各卡止爪36A，在其前端設(shè)有鉤子部36Aa，該鉤子部36Aa可以搖動(dòng)。即，一對(duì)卡止爪36A的鉤子部36Aa可以互相接近和離開(kāi)。
銷36B用于插入核酸提取元件20的筒狀部24的凹部24A中，作成從主體部38的底面38D向下方突出。銷36B起到當(dāng)將核酸提取元件20保持在蓋31中時(shí)的導(dǎo)向裝置的作用，同時(shí)在將核酸提取元件20保持在蓋31中之后，可抑制核酸提取元件20相對(duì)于蓋31的松動(dòng)。
如圖1所示，在核酸分析裝置1的框體10中設(shè)有蓋11、顯示部12和操作部13。蓋11用于選擇框體10的內(nèi)部為露出狀態(tài)和不露出狀態(tài)，當(dāng)使支架2、3在框體10的內(nèi)部出入時(shí)，蓋11打開(kāi)，另一方面，在核酸分析時(shí)和裝置不使用時(shí)，蓋11為關(guān)閉狀態(tài)。顯示部12用于顯示分析結(jié)果等，例如由LCD構(gòu)成。操作部13用于進(jìn)行各種設(shè)定或者分析開(kāi)始時(shí)的操作部分。
如圖2和圖3所示，在框體10的內(nèi)部設(shè)有后述的吸液管裝置4、核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5、蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6、溫度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)7和測(cè)光機(jī)構(gòu)8。
吸液管裝置4主要用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增用支架3的混合液的調(diào)整，具有噴嘴40。根據(jù)需要，該吸液管裝置4可以用于將試樣或洗凈液供給核酸精制用支架2。
噴嘴40與圖外的泵連接，可吸引和排出液體。可以選擇將吸引力作用在噴嘴40的內(nèi)部的狀態(tài)和使排出力作用的狀態(tài)。該噴嘴40利用機(jī)構(gòu)手臂等驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)(圖中省略)可在上下方向和水平移動(dòng)，其動(dòng)作由CPU等構(gòu)成的控制部10控制。噴嘴40可在核酸擴(kuò)增用支架3的試劑類保持槽321～324、混合槽33、反應(yīng)槽34和核酸精制用支架2的收容槽27中移動(dòng)。在混合試樣的調(diào)整和將混合試樣分別注入反應(yīng)槽34(反應(yīng)檢測(cè)部37)的情況下，如圖3所示，在噴嘴40的前端部42上安裝尖端件43。如圖2所示，尖端件43在與噴嘴40(吸液管裝置4)的待機(jī)位置鄰接的部位上，保持在機(jī)架44中。在與該機(jī)架44鄰接的部位上配置廢棄使用完的尖端件43的廢棄盒45。
如圖2～圖4和圖10所示，核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5，在利用核酸精制用支架2的核酸提取元件20，提取試樣中的核酸時(shí)，用于控制核酸提取元件20的動(dòng)作。該核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5具有多個(gè)插入銷50、筒狀體51和支承框架52。
多個(gè)插入銷50用于嵌合于核酸提取元件20的筒狀部24，可以一體運(yùn)動(dòng)地支承在支承框架52上。
筒狀體51用于取出安裝在插入銷50上的核酸提取元件20，它從外面套著插入銷50，與插入銷50相互獨(dú)立，可以在上下方向移動(dòng)。即，筒狀體51在進(jìn)行從插入銷50上取出核酸提取元件20的動(dòng)作時(shí)以外，位于核酸提取元件20的上方(待機(jī)位置)，另一方面，當(dāng)進(jìn)行從插入銷50取出核酸提取元件20的動(dòng)作時(shí)，可相對(duì)于插入銷50向下方移動(dòng)。
支承框體52在多個(gè)核酸精制用支架2的并列方向上隔開(kāi)一定間隔支承多個(gè)插入銷50，同時(shí)，起移動(dòng)插入銷50的媒體的作用。該支承框架52利用圖外的驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)可在上下方向和前后方向移動(dòng)，其動(dòng)作由圖2所示的控制部10控制。由于這樣，多個(gè)插入銷50和安裝在其上的核酸提取元件20，可與支承框體52一起，在上下和前后方向移動(dòng)。這樣，多個(gè)核酸提取元件20可以總括地同時(shí)進(jìn)行試樣對(duì)固體基件23的含浸和固體基件23的洗凈和剩余液的除去(參照?qǐng)D10)。
如圖11和圖13所示，蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6用于從核酸擴(kuò)增用支架3的反應(yīng)槽34取出蓋31或?qū)⑸w31安裝在反應(yīng)槽34上，具有旋轉(zhuǎn)部件60和外套部件61。旋轉(zhuǎn)部件60和外套部件61利用圖外的驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)可以在上下方向和水平方向移動(dòng)，由控制部10(參照?qǐng)D2)控制其動(dòng)作。
旋轉(zhuǎn)部件60用于將旋轉(zhuǎn)力作用在核酸擴(kuò)增用支架3的蓋31上，同時(shí)，保持蓋31，移動(dòng)蓋31，具有大致圓柱形的前端部62。在旋轉(zhuǎn)部件60的前端部62形成多個(gè)助63。多個(gè)肋63在前端部62的周方向上，隔開(kāi)一定間隔，在上下方向延伸，各個(gè)肋63的下端部作成越向下方，其寬度尺寸越小的錐形狀。如圖14所示，這些肋63用于與蓋31的多個(gè)肋38C卡合，當(dāng)將前端部62插入蓋31的凹部38B中時(shí)，位于與凹部38B互相鄰接的肋38C之間。
利用該結(jié)構(gòu)，當(dāng)使旋轉(zhuǎn)部件60的前端部62旋轉(zhuǎn)時(shí)，前端部61的肋63和凹部38的肋38C互相干涉，因此，前端部62可以抑制在蓋31的凹部38B中的空旋轉(zhuǎn)，可以適當(dāng)?shù)貙⑿D(zhuǎn)部件60的旋轉(zhuǎn)力給與蓋31。另外，凹部38B的多個(gè)肋38C的上端部作成越向上方向?qū)挾仍郊?xì)的錐形狀，另一方面，旋轉(zhuǎn)部件60的前端部61的多個(gè)肋63作成越向下方向其寬度越細(xì)的錐形狀。由于這樣，可容易而可靠地將旋轉(zhuǎn)部件60的前端部61插入蓋31的凹部38B中。
外套部件61從外面套著旋轉(zhuǎn)部件60，作成圓筒狀，這種外套部件61具有用于與凸緣部39卡止的爪64。爪64的前端部64上設(shè)有鉤子部65，鉤子部65可以搖動(dòng)。當(dāng)將旋轉(zhuǎn)部件60的前端部62插入蓋31的凹部38B中時(shí)，爪64與蓋31的凸緣部39卡止。這樣，蓋31與旋轉(zhuǎn)部件60作成一體，通過(guò)移動(dòng)旋轉(zhuǎn)部件60和外套部件61，可以移動(dòng)蓋31。另外，當(dāng)利用旋轉(zhuǎn)部件60將蓋31再安裝在反應(yīng)槽34上時(shí)，爪62自動(dòng)解除與蓋31的凸緣部39的卡止?fàn)顟B(tài)。
如圖15所示，溫度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)7通過(guò)控制熱塊70的溫度，控制保持在核酸擴(kuò)增用支架3的反應(yīng)檢測(cè)部37中的液體的溫度。利用圖外的溫度傳感器監(jiān)視熱塊70的溫度，根據(jù)溫度傳感器的監(jiān)視結(jié)果，對(duì)熱塊70的溫度進(jìn)行反饋控制。在熱塊70上形成與核酸擴(kuò)增用支架3的反應(yīng)檢測(cè)部37的外觀形狀對(duì)應(yīng)的凹部71。這樣，在熱塊7中，可以有選擇而且有效地調(diào)節(jié)反應(yīng)槽34的溫度。在熱塊70中還作出與凹部71連接的直線形貫通孔72、73。貫通孔72將在后述的測(cè)光機(jī)構(gòu)8的發(fā)光部80射出的光引導(dǎo)至反應(yīng)槽34的反應(yīng)檢測(cè)部37上，貫通孔73將透過(guò)反應(yīng)檢測(cè)部37的光引導(dǎo)至受光部81。
測(cè)光機(jī)構(gòu)8具有發(fā)光部80和受光部81。發(fā)光部80通過(guò)貫通孔72將激發(fā)光照射在反應(yīng)檢測(cè)部37上。受光部81，通過(guò)貫通孔73接收將激發(fā)光照射在反應(yīng)檢測(cè)部37上時(shí)的熒光。在測(cè)光機(jī)構(gòu)8中，從發(fā)光部80連續(xù)地照射激發(fā)光，另一方面，在受光部81中，通過(guò)連續(xù)地監(jiān)視熒光的量，可以實(shí)時(shí)地把握核酸的擴(kuò)增程度。
其次，說(shuō)明核酸分析裝置1的動(dòng)作。
在核酸分析裝置1中進(jìn)行核酸分析的情況下，首先如圖1～圖4所示，將核酸精制用支架2和核酸擴(kuò)增用支架3安裝在核酸分析裝置1中。安裝的支架2、3的個(gè)數(shù)，如果核酸精制用支架2的個(gè)數(shù)和核酸擴(kuò)增用支架3的個(gè)數(shù)相同，則任何個(gè)數(shù)也可以。在以下的說(shuō)明中，作為核酸精制用支架2，使用預(yù)先將洗凈液保持在洗凈槽281～283中的支架，在將核酸精制用支架2安裝在核酸分析裝置1中之前，將試樣保持在試樣保持槽29中。
其次，確認(rèn)設(shè)在核酸分析裝置1中的顯示部12，并通過(guò)對(duì)操作部13進(jìn)行操作，進(jìn)行安裝在核酸分析裝置1中的支架2、3的個(gè)數(shù)和與支架2、3的種類(精制方法、擴(kuò)增方法、測(cè)定方法)相應(yīng)的設(shè)定。在上述設(shè)定結(jié)束的情況下，在核酸分析裝置1中自動(dòng)地進(jìn)行核酸的精制、擴(kuò)增和測(cè)定。
如圖4所示，核酸的精制是在核酸精制用支架2中，通過(guò)利用核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5移動(dòng)核酸提取元件20進(jìn)行的。
更具體地說(shuō)，首先在使核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5的插入銷50位于核酸精制用支架2的容器21的收容槽27上方的狀態(tài)下，驅(qū)動(dòng)支承框架52，使插入銷50向下運(yùn)動(dòng)后向上運(yùn)動(dòng)。通過(guò)使插入銷50向下運(yùn)動(dòng)，插入銷50嵌合在核酸提取元件20的筒狀部24中，多個(gè)核酸提取元件20與核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5成為一體，通過(guò)使插入銷50向上運(yùn)動(dòng)，核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5將核酸提取元件20升高。
其次，如圖10所示，與支承框架52一起，移動(dòng)插入銷50，將核酸提取元件20的固體基件23浸漬在保持在核酸精制用支架2的試樣保持槽29中的試樣29L中，這樣，在固體基件23中附載試樣29L的核酸。
其次，依次將固體基件23浸漬在保持在三個(gè)洗凈槽281～283中的洗凈液28L1～28L3中。更具體地說(shuō)，固體基件23的洗凈通過(guò)利用核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5，在各洗凈槽28中，使固體基件23反復(fù)上下運(yùn)動(dòng)來(lái)進(jìn)行。這時(shí)，在核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5中進(jìn)行控制，使得固體基件23完全浸漬在洗凈液28L1～28L3的狀態(tài)和固體基件23位于洗凈液28L1～28L3的液面上方的狀態(tài)反復(fù)。
利用這種洗凈方法，當(dāng)從固體基件23位于液面上方的狀態(tài)向下方移動(dòng)，浸漬在洗凈液28L1～28L3中時(shí)，固體基件23敲擊液面。這時(shí)，由于固體基件23水平或大致水平地被支承，故大的負(fù)荷作用在固體基件23上。另一方面，當(dāng)固體基件23在洗凈液28L1～28L3的內(nèi)部移動(dòng)時(shí)，由于固體基件23水平或大致水平地被支承，故大的移動(dòng)阻力作用在固體基件23上，這作為產(chǎn)生對(duì)流的負(fù)荷作用在洗凈液上。利用這些作用，可以高效率地從固體基件23除去夾雜物。這樣，在以后進(jìn)行的核酸擴(kuò)增工序中，可有效地抑制夾雜物阻礙核酸擴(kuò)增的情形，可以高精度地進(jìn)行核酸的分析。這種效果不限于以水平狀態(tài)移動(dòng)固體基件23的情況，在以固體基件23相對(duì)于垂直軸為傾斜的狀態(tài)進(jìn)行移動(dòng)的情況下，也可得到。
最后，使核酸提取元件20的前端部分與保持于剩余液除去槽21A中的吸水性部件21Ad、21Ae接觸。由于吸水性部件21Ad與剩余液除去槽21A的底壁21Aa和前后壁21Ab、21Ac接觸地來(lái)配置，故在使核酸提取元件20的前端部與這些全部吸水部件21Ad接觸的情況下，從核酸提取元件20的前端部，主要是從固體基件23和保持部件22的保持部26高效率地除去剩余洗凈液。結(jié)果，在以后利用核酸提取元件20進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，可以抑制洗凈液中含有的雜質(zhì)對(duì)核酸擴(kuò)增的阻礙。
洗凈結(jié)束后的固體基件23，在保持在核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5中的狀態(tài)下，送風(fēng)干燥也可以。在固體基件23的洗凈結(jié)束(根據(jù)情況送風(fēng)干燥結(jié)束)的情況下，從插入銷50上取出核酸提取元件20，將核酸提取元件20再收容在核酸精制用支架2的收容槽27中。核酸提取元件20從插入銷50的取出，如上所述，可通過(guò)使核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5的筒狀體51向下運(yùn)動(dòng)，使筒狀體51與卡止頭24B干涉來(lái)進(jìn)行。
這樣，在核酸精制用支架2中，通過(guò)將核酸附載在固體(核酸提取元件20)上，可以容易地在核酸分析裝置1中移動(dòng)固體基件23。在這點(diǎn)上，核酸精制用支架2對(duì)自動(dòng)進(jìn)行核酸分析有幫助。
核酸的擴(kuò)增是通過(guò)在核酸擴(kuò)增用支架3中，調(diào)整混合試劑，將該試劑分注于核酸擴(kuò)增用支架3的反應(yīng)槽34中之后，與保持部件22一起，將附載核酸的固體基件23收容在反應(yīng)槽34中來(lái)進(jìn)行。在反應(yīng)槽34中，混合試劑和固體基件23共存的情況下，根據(jù)所采用的擴(kuò)增方法的種類，控制熱塊70(參照?qǐng)D15)的溫度，調(diào)節(jié)反應(yīng)槽34的溫度。
混合試劑的調(diào)整是通過(guò)在將尖端件43安裝在吸液管裝置4的噴嘴40的前端部42上之后，依次按規(guī)定量將保持在核酸擴(kuò)增用支架3的試劑類保持槽321～324中的試劑類注入每一個(gè)混合槽33中之后，利用吸液管裝置4的吸液操作，將注入液混合來(lái)進(jìn)行(參照?qǐng)D3)。
混合液向反應(yīng)槽34的注入，是在利用蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6從反應(yīng)槽34取出蓋31之后，利用吸液管裝置4進(jìn)行的。如圖11A和圖11B所示，利用蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6取出蓋31是在將蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6的旋轉(zhuǎn)部件60的前端部62插入蓋31的凹部38B中之后，使旋轉(zhuǎn)部件60旋轉(zhuǎn)，并向上運(yùn)動(dòng)來(lái)進(jìn)行的。在將旋轉(zhuǎn)部件60插入凹部38B的情況下，外套部件61的爪64的鉤子部65與蓋31的凸緣部39卡止。由于這樣，從反應(yīng)槽34取出的蓋31可以與旋轉(zhuǎn)部件60和外套部件61一起移動(dòng)。這樣，在核酸分析裝置1和核酸擴(kuò)增用支架3中，為了達(dá)到核酸的擴(kuò)增進(jìn)而核酸分析的全自動(dòng)化，要下功夫，使得容易且可靠地從核酸擴(kuò)增用支架3取出蓋31。
另一方面，利用蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6和核酸擴(kuò)增用支架3的蓋31進(jìn)行固體基件23在反應(yīng)槽34中的收容。更具體地說(shuō)，如圖12和圖13所示，固體基件23的收容可通過(guò)核酸提取元件20在蓋31中的保持和蓋31的再安裝在反應(yīng)槽34中的一系列操作來(lái)進(jìn)行。
如圖7B和圖12所示，核酸提取元件20在蓋31中的保持是通過(guò)利用蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6使蓋31位于核酸精制用支架2的收容槽27的上方后，使蓋31向下運(yùn)動(dòng)來(lái)進(jìn)行的。在使蓋31向下運(yùn)動(dòng)的過(guò)程中，蓋31的銷36B插入核酸提取元件20的筒狀部24的凹部24A中。這樣，可限制蓋31和核酸提取元件20的筒狀部24的位置關(guān)系，可適當(dāng)?shù)貙⑸w31的一對(duì)卡止爪36A引導(dǎo)至與筒狀部24的卡止頭24B對(duì)應(yīng)的位置。這樣，一對(duì)卡止爪36A從上方壓在卡止頭24B上。結(jié)果，一對(duì)卡止爪36A移動(dòng)，使它們的鉤子部36Aa互相離開(kāi)。進(jìn)而，在使一對(duì)卡止爪36A向下方移動(dòng)的情況下，蓋31的銷36B更深地插入筒狀部24的凹部24A中，同時(shí)，當(dāng)鉤子部36Aa位于卡止頭24B下方時(shí)，鉤子部36Aa互相接近。結(jié)果，一對(duì)卡止爪36A與卡止頭24B卡止，將核酸提取元件20保持在蓋31上。這個(gè)狀態(tài)，通過(guò)蓋31的銷36B插入筒狀部24的凹部24A中而牢固地維持，可以抑制核酸提取元件20相對(duì)于蓋31的松動(dòng)。
如圖13所示，蓋31的再安裝是在使蓋31與反應(yīng)槽34的位置一致的狀態(tài)下，通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)保持蓋31的旋轉(zhuǎn)部件60進(jìn)行的。即，在位置一致的狀態(tài)下，通過(guò)將旋轉(zhuǎn)力加在蓋31上，蓋31與反應(yīng)槽34的筒狀部35螺合。在蓋31與筒狀部35螺合的情況下，外套部件61的爪64與蓋31的凸緣部39卡止的狀態(tài)被解除。這樣，旋轉(zhuǎn)部件60和外套部件61，可以與蓋31相獨(dú)立地移動(dòng)。另一方面，由于核酸提取元件20保持在蓋31中，故核酸提取元件20收容在反應(yīng)槽34中。如上所述，由于在核酸提取元件20中，O形圈22A配置在保持部26稍為上方的位置，故在密閉空間中，核酸提取元件20的固體基件23固定在距反應(yīng)槽34中的底部一定距離的位置上。由于先將混合試劑收容在反應(yīng)檢測(cè)部37中，因此，在反應(yīng)檢測(cè)部37中，固體基件23的全體被浸漬。這樣，從固體基件23溶出核酸，另一方面，溶出的核酸與試劑類反應(yīng)而擴(kuò)增。
這樣，在核酸分析裝置1中，利用蓋31的安裝拆卸所需要的蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6，可以將收容槽27的核酸提取元件20移送至反應(yīng)槽34中收容。即，在核酸分析裝置1中不需要設(shè)置個(gè)別的機(jī)構(gòu)用于移送核酸提取元件20。由于這樣，當(dāng)在一個(gè)裝置中進(jìn)行核酸的精制和核酸的擴(kuò)增時(shí)，可以避免裝置的復(fù)雜化，抑制裝置的大型化，并且還可以抑制控制動(dòng)作機(jī)構(gòu)的數(shù)目的增加，因此在這點(diǎn)上也是有利的。
如圖15所示，核酸的測(cè)定，在成為利用遮光構(gòu)件9覆蓋反應(yīng)槽34的上方的狀態(tài)后，利用測(cè)光機(jī)構(gòu)8進(jìn)行。
在測(cè)光機(jī)構(gòu)8中，利用發(fā)光部80將激發(fā)光照射在反應(yīng)槽34的反應(yīng)檢測(cè)部37上，另一方面，在受光部81中接收這時(shí)在反應(yīng)檢測(cè)部37上產(chǎn)生的熒光。如上所述，由于固體基件23安裝在不阻礙測(cè)光機(jī)構(gòu)8的測(cè)光的位置。因此，在核酸分析裝置1中，可以高精度地進(jìn)行核酸的測(cè)定。
如上所述，在核酸分析裝置1中，只通過(guò)安裝上述結(jié)構(gòu)的核酸精制用支架2和核酸擴(kuò)增用支架3的組，即可以自動(dòng)進(jìn)行核酸的分析。在核酸精制用支架2和核酸精制擴(kuò)增用支架3中，也作了各種努力，使得可以自動(dòng)地進(jìn)行核酸的分析。由于這樣，在利用核酸分析裝置1、核酸精制用支架2和核酸擴(kuò)增用支架3的情況下，在核酸的提取操作和核酸的擴(kuò)增操作中，除了將支架2、3安裝在核酸分析裝置1中以外，沒(méi)有依賴使用者手工操作的部分。由于這樣，可以顯著減輕核酸分析中使用者的負(fù)擔(dān)。同時(shí)，不會(huì)因?yàn)槭褂谜呒夹g(shù)水平差異，核酸的回收率產(chǎn)生偏差等，測(cè)定再現(xiàn)性不會(huì)惡化。
本發(fā)明不限于上述實(shí)施方式中說(shuō)明的例子。例如，核酸提取元件的固體基件，不必一定要保持成與保持部件的垂直軸水平或大致水平的狀態(tài)，固體基件也不必一定要作成圓盤(pán)狀形式，另外，將固體基件保持在保持部件上的結(jié)構(gòu)也不限于使固體基件刺入的結(jié)構(gòu)。而且，核酸擴(kuò)增用支架的蓋不必一定要作成完全與支架主體分離的結(jié)構(gòu)，將附屬于支架主體的反應(yīng)槽的上部開(kāi)口進(jìn)行開(kāi)閉的也可以。
其次，參照?qǐng)D16～圖33說(shuō)明本發(fā)明的第二實(shí)施方式。在以下參照的附圖中，與先前所述的本發(fā)明的第一實(shí)施方式同樣的部件用相同的符號(hào)表示，省略其重復(fù)說(shuō)明。
圖16～圖18所示的核酸分析裝置1’，與先前所述的核酸分析裝置1(參照?qǐng)D1等)同樣，安裝并使用相同數(shù)目的多個(gè)核酸精制用支架2’和核酸擴(kuò)增用支架3’。如圖17所示，它具吸液管裝置4’和核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’。
如圖19所示，核酸精制用支架2’用于進(jìn)行核酸分析裝置1’的核酸的自動(dòng)精制，具有核酸提取元件20’和支架主體21’。
核酸提取元件20’用于附載試樣中的核酸，如圖20A～圖20C清楚地所示，具有保持部件22’和固體基件23’。保持部件22’具有筒狀部24’、凸緣部25’和夾持部26’，全體由樹(shù)脂成形制成。
筒狀部24’是移動(dòng)核酸提取元件20’時(shí)所利用的部件(參照?qǐng)D18和圖22)，具有凹部24A’、凹陷部24B’、24C’和多個(gè)肋24D’。凹部24A’是用于嵌合后述的吸液管裝置4’的噴嘴40’的前端部42’(參照?qǐng)D26A和圖26B)或者核酸精制用機(jī)構(gòu)5’的插入銷50(參照?qǐng)D18)的部件，作成圓柱形。凹陷部24B’、24C’是用于將彈性給與筒狀部24’，包含一對(duì)V字形的切口24B’和矩形貫通孔24C’。即，凹陷部24B’、24C’，當(dāng)將噴嘴40’的前端部42’或插入銷50’嵌合在凹部24A’中時(shí)(參照?qǐng)D18和圖22)，將彈性力作用在其上，有使嵌合可靠的作用。多個(gè)肋24D’是當(dāng)將噴嘴40’的前端部42’或插入銷50’嵌合在凹部24A’中時(shí)、將摩擦力作用在其上、可使嵌合可靠的部件，在筒狀部24’的內(nèi)面上，在上下方向延伸。
凸緣部25’作成向著半徑方向的外側(cè)突出的環(huán)狀。該凸緣部25’是當(dāng)將核酸提取元件20’保持在目的部位(核酸精制用支架2’的收容槽27和核酸擴(kuò)增用支架3’的反應(yīng)槽34’)上時(shí)、與設(shè)在目的部位的臺(tái)階部27A、36’卡止用的部件(參照?qǐng)D21和圖33)。
夾持部26’是用于夾持固體基件23’的端部、使固體基件23’與保持部件22’成為一體的部件，它由一對(duì)爪26a’構(gòu)成。為了提高核酸的回收效率，優(yōu)選一對(duì)爪26a’與固體基件23’的接觸面積作成極小。這是因?yàn)?，如后所述，在核酸附著在固體基件23’上后，核酸被洗脫和回收，在一對(duì)爪26a’與固體基件23’接觸的部分上存在的核酸洗脫不容易。
固體基件23’用于附載試樣中的核酸，例如以在濾低上附載核酸提取用的試劑類的形式構(gòu)成。固體基件23’作成長(zhǎng)方形，通過(guò)將端部夾持在夾持部26’中，吊持在保持部件22’上。
如圖19和圖21所示，支架主體21’與先前所述的核酸精制用支架2的支架主體21(參照?qǐng)D5和圖6)相同，具有收容槽27、三個(gè)洗凈槽281～283和試樣保持槽29，但剩余液除去槽21A(參照?qǐng)D5和圖6)省略。當(dāng)然，在支架主體21’上設(shè)置剩余液除去槽也可以。
如圖23、圖24A和圖24B所示，核酸擴(kuò)增用支架3’可進(jìn)行核酸分析裝置1’的核酸自動(dòng)擴(kuò)增和測(cè)定，具有支架主體30’和蓋31’。
支架主體30’具有5個(gè)試劑類保持槽32’、混合槽33’和反應(yīng)槽34’，這些槽32’、33’、34’由樹(shù)脂成形作成一體。
各試劑類保持槽32’用于在水溶液或懸濁液狀態(tài)下保持核酸擴(kuò)增和測(cè)定所必要的試劑類。各試劑類保持槽32’的橫剖面為大致矩形，但正確地說(shuō)，為4個(gè)側(cè)面32A’的中央部向內(nèi)突出的形態(tài)。即，試劑類保持槽32’的四個(gè)角為90°以下的銳角。這樣，可抑制試劑類附著在試劑類保持槽32’的側(cè)面32A’上的狀態(tài)，可將試劑類保持在試劑類保持槽32’的底部。結(jié)果，可以有效地利用保持在試劑類保持槽32’中的試劑類，即使在使用高價(jià)的試劑的情況下，也使保持于試劑類保持槽32’中的試劑的量少，可以降低制造成本。這個(gè)結(jié)果也可通過(guò)在試劑類保持槽32’的側(cè)面32A’上作出槽或肋得到。
保持在各試劑類保持槽32’中的試劑類的種類，根據(jù)所采用的擴(kuò)增方法和測(cè)定方法來(lái)選擇。作為擴(kuò)增方法，可以采用PCR法、ICAN法、LAMP法或NASBA法。
混合槽33’是，在供給反應(yīng)槽34’之前，混合保持在試劑類保持槽32’中的二種以上的試劑類，調(diào)整混合試劑類時(shí)所利用的部件。該混合槽33’也與先前所述的試劑類保持槽32’同樣，四個(gè)角的角度作成90°以下的銳角。當(dāng)然，在混合槽33’的側(cè)面33A’作出槽或肋也可以。
反應(yīng)槽34’用于收容混合試劑和核酸提取元件20’，同時(shí)，可提供使在核酸提取元件20’中附載的核酸與在混合槽33’中調(diào)整的混合試劑進(jìn)行反應(yīng)的場(chǎng)所(參照?qǐng)D33)。該反應(yīng)槽34’具有筒狀部35和反應(yīng)檢測(cè)部37，在它們之間設(shè)有臺(tái)階部36’。該臺(tái)階部36’是用于與核酸提取元件20’的凸緣部25’卡止的部分(參照?qǐng)D33)，通過(guò)將反應(yīng)檢測(cè)部37的直徑設(shè)定得比筒狀部35的直徑小而設(shè)置。
蓋31’用于選擇是否密閉反應(yīng)檢測(cè)部37的內(nèi)部，可在反應(yīng)槽34’(筒狀部35)上自由安裝和拆卸。更具體地說(shuō)，通過(guò)使旋轉(zhuǎn)力作用，蓋31’可以選擇安裝在筒狀部35上的狀態(tài)和與筒狀部35(反應(yīng)槽34)完全分離的狀態(tài)。蓋31’與先前所述的核酸擴(kuò)增用支架3的蓋31(參照?qǐng)D9)同樣，具有圓筒狀的主體部38和凸緣部39。但在核酸分析裝置1’中，由于利用吸液管裝置4’的噴嘴40’移動(dòng)核酸提取元件20’，故在蓋31’中省略了設(shè)在先前所述的核酸擴(kuò)增用支架3的蓋31上的保持部36(參照?qǐng)D7B和圖9)。
圖16和圖17所示的吸液管裝置4’，用于進(jìn)行在核酸擴(kuò)增用支架3’中的混合液調(diào)整和向混合液的反應(yīng)槽34’的移動(dòng)。如圖25～圖28所示，吸液管裝置4’具有噴嘴40’和取出部件41’。
噴嘴40’可吸引和排出液體，同時(shí)，可在上下方向和水平方向移動(dòng)，可以在核酸擴(kuò)增用支架3’的試劑類保持槽32’、混合槽33’、反應(yīng)槽34’和核酸精制用支架2’的收容槽27中移動(dòng)(參照?qǐng)D16和圖17)。在混合試樣的調(diào)整和向反應(yīng)槽34’(反應(yīng)檢測(cè)部37)注入混合試樣的情況下，如圖25A和圖25B所示，在噴嘴40’的前端部42’上安裝尖端件43。在噴嘴40’的前端部42’的安裝尖端件43的部分上嵌入O形圈42a’。當(dāng)將尖端件43安裝在前端部42’上時(shí)，可以提高前端部42’和尖端件43的接觸部分的緊貼性。
而且，吸液管裝置4’具有如圖示22所示從核酸精制用支架2’的收容槽27取出核酸提取元件20’、以及如圖31所示將該核酸提取元件20’移動(dòng)至核酸擴(kuò)增用支架3’的反應(yīng)槽34’中的作用。如圖26A和圖26B所示，在進(jìn)行這種動(dòng)作的情況下，在噴嘴40’的前端部42’上安裝核酸提取元件20’。
如圖27和圖28所示，取出部件41’用于取出安裝在噴嘴40’的前端部42’上的尖端件43或核酸提取元件20’。該取出部件41’從外面套著噴嘴40’，使得可以與噴嘴40’獨(dú)立地在上下方向移動(dòng)。即，當(dāng)進(jìn)行從噴嘴40’的前端部42’取出尖端件43或核酸提取元件20’的動(dòng)作時(shí)以外，取出部件41’位于尖端件43的端面43a或核酸提取元件20’的凸緣25’的上方(待機(jī)位置)，另一方面，當(dāng)進(jìn)行將它們?nèi)〕龅膭?dòng)作時(shí)，可相對(duì)于噴嘴40’向下方移動(dòng)。在從待機(jī)位置向下方移動(dòng)取出部件41’一定距離以上的情況下，取出部件41’的端面41A’與尖端件43的端面43a或核酸提取元件20’的凸緣部25’干涉，將向下方的力作用在尖端件43或核酸提取元件20’上。這樣，從噴嘴40’的前端部42’取出尖端件43或核酸提取元件20’。
如圖16～圖18所示，核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’用于在利用核酸提取元件20’提取試樣中的核酸時(shí)控制核酸提取元件20’的動(dòng)作。該核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’與先前所述的核酸分析裝置1的核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5(參照?qǐng)D2～圖4)同樣，具有多個(gè)插入銷50’、筒狀體51和支承框架52。各插入銷50’作成與噴嘴40’的前端部42’類似的形狀，使得可以適當(dāng)?shù)嘏c核酸提取元件20’的筒狀部24’嵌合。
其次，說(shuō)明核酸分析裝置1’的動(dòng)作。
如圖16～圖18所示，在核酸分析裝置1’中，在將核酸精制用支架2’和核酸擴(kuò)增用支架3’安裝在核酸分析裝置1’上之后，通過(guò)進(jìn)行與支架2’、3’的個(gè)數(shù)和種類(精制方法、擴(kuò)增方法、測(cè)定方法)相對(duì)應(yīng)的設(shè)定，自動(dòng)地進(jìn)行核酸的精制、擴(kuò)增和測(cè)定。
如圖18所示，核酸的精制，通過(guò)在核酸精制用支架2’中，由核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’移動(dòng)核酸提取元件20’來(lái)進(jìn)行。更具體地說(shuō)，首先，將核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’的多個(gè)插入銷50’與所對(duì)應(yīng)的核酸提取元件20’的筒狀部24’嵌合，成為可以一體化地移動(dòng)多個(gè)核酸提取元件20’的狀態(tài)。在這個(gè)狀態(tài)下，利用核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’將多個(gè)核酸提取元件20’的固體基件23’浸漬在試樣中，使試樣中的核酸附著在各固體基件23’上。
最后，依次將固體基件23’浸漬在三個(gè)洗凈槽281～283(參照?qǐng)D19)的洗凈液中。更具體地說(shuō)，固體基件23’的洗凈是通過(guò)利用核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’，在各洗凈槽281～283(參照?qǐng)D19)中，使固體基件23’反復(fù)上下運(yùn)動(dòng)來(lái)進(jìn)行的。這時(shí)，控制核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’，使固體基件23’完全浸漬在洗凈液中的狀態(tài)和固體基件23’位于洗凈液的液面上方的狀態(tài)反復(fù)。利用這種洗凈方法，由于可從固體基件23’高效率地除去夾雜物，所以在以后進(jìn)行的核酸擴(kuò)增工序中，可以有效地抑制夾雜物對(duì)核酸擴(kuò)增的阻礙，可以高精度地進(jìn)行核酸的分析。
洗凈結(jié)束后的固體基件23’在保持核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)5’中的狀態(tài)下送風(fēng)干燥也可以。在固體基件23’的洗凈結(jié)束(根據(jù)情況，送風(fēng)干燥結(jié)束)的情況下，從插入銷50’取出核酸提取元件20’，將核酸提取元件20’再收容在核酸精制用支架2’的收容槽27中(參照?qǐng)D19和圖21)。
在核酸精制用支架2’中，通過(guò)將目的核酸附載在固體(核酸提取元件20’)上，可以容易地在核酸分析裝置1’中移動(dòng)目的核酸。在這點(diǎn)上，核酸精制用支架2’對(duì)自動(dòng)地進(jìn)行核酸分析有幫助。
核酸的擴(kuò)增，通過(guò)在核酸擴(kuò)增用支架3’中調(diào)制混合試劑，將該試劑注入核酸擴(kuò)增用支架3’的反應(yīng)槽34’中之后，與保持部件22’一起，將附載核酸的固體基件23’移送至反應(yīng)槽34’中來(lái)進(jìn)行。又如圖33所示，在反應(yīng)槽34’中，在混合試劑和固體基件23’共存的情況下，根據(jù)所采用的擴(kuò)增方法的種類，控制熱塊70的溫度，可以調(diào)節(jié)反應(yīng)槽34’的溫度。
混合試劑的調(diào)制和混合試劑在反應(yīng)槽34’中的注入，與先前所述的核酸分析裝置1(參照?qǐng)D1等)同樣，通過(guò)控制吸液管裝置4’的動(dòng)作來(lái)進(jìn)行。在將混合試劑注入反應(yīng)槽34’中的情況下，如圖31所示，需要利用蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6，從反應(yīng)槽34’取出蓋31’，但蓋31’的取出，如圖29和圖30所示，在將蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)6的旋轉(zhuǎn)部件60插入蓋31’的凹部38B’中之后，通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)部件60，并使它向上運(yùn)動(dòng)來(lái)進(jìn)行。在將旋轉(zhuǎn)部件60插入凹部38B’中的情況下，旋轉(zhuǎn)部件60的爪62與蓋31’的凸緣部39’卡止，因此，從反應(yīng)槽34’取出的蓋31’可以與旋轉(zhuǎn)部件60一起移動(dòng)。這樣，在核酸分析裝置1’和核酸擴(kuò)增用支架3’中，為了達(dá)到核酸的擴(kuò)增進(jìn)而核酸分析的全自動(dòng)化，要下功夫，使得容易且可靠地從核酸擴(kuò)增用支架3’上取出蓋31’。
另一方面，固體基件23’向反應(yīng)槽34’的移送，可通過(guò)核酸提取元件20’從核酸精制用支架2’的收容槽27中的取出(參照?qǐng)D22)、核酸提取元件20’向核酸擴(kuò)增用支架3’的反應(yīng)槽34’中的移動(dòng)和核酸提取元件20’從噴嘴40’中的取出(參照?qǐng)D28和圖31)的一系列操作來(lái)進(jìn)行。
如圖22所示，核酸提取元件20’的取出，可通過(guò)在使噴嘴40’位于核酸精制用支架2’的收容槽27的上方后，使噴嘴40’向下運(yùn)動(dòng)，使噴嘴40’的前端部42’與核酸提取元件20’的筒狀部24’嵌合后，使噴嘴40’向上運(yùn)動(dòng)來(lái)進(jìn)行。在筒狀部24’中作出V字形切口24B’和矩形貫通孔24C’這樣的凹陷部24B’、24C’(參照?qǐng)D20A～圖20C)。由于這樣，在使噴嘴40’的前端部42’與筒狀部24’嵌合的情況下，可將適當(dāng)?shù)膹椥粤κ┘釉谇岸瞬?2’上。這樣，在筒狀部24’中，核酸提取元件20’適當(dāng)?shù)乇３衷趪娮?0’的前端部42’上。
核酸提取元件20’的移動(dòng)是在將核酸提取元件20’保持在噴嘴40’的前端部42’上的狀態(tài)下，通過(guò)移動(dòng)噴嘴40’來(lái)進(jìn)行的。
如圖28和圖31所示，核酸提取元件20’的取出是通過(guò)使噴嘴40’的前端部42’，與核酸提取元件20’一起，位于反應(yīng)槽34’的內(nèi)部，使取出部件41’相對(duì)于噴嘴40’向下方移動(dòng)來(lái)進(jìn)行。即，在使取出部件41’向下方移動(dòng)的情況下，取出部件41’與核酸提取元件20’的凸緣部25’干涉，將向下方的力作用在凸緣部25’進(jìn)而核酸提取元件20’上，可從噴嘴40’的前端部42’取出核酸提取元件20’。
這樣，在核酸分析裝置1’中，可利用試樣調(diào)整所需要的噴嘴40’和取出部件41’進(jìn)行核酸提取元件20’的移動(dòng)。由于這樣，當(dāng)在1個(gè)裝置中進(jìn)行核酸的精制和核酸的擴(kuò)增時(shí)，由于利用本來(lái)必要的結(jié)構(gòu)(吸液管裝置4)可抑制裝置的復(fù)雜化。另外，由于可以抑制應(yīng)控制的動(dòng)作機(jī)構(gòu)數(shù)目的增加，故在這點(diǎn)上，對(duì)抑制裝置結(jié)構(gòu)復(fù)雜化和大型化有利。
如圖31所示，在保持部件22’的凸緣部25’，從噴嘴40’的前端部42’取出的核酸提取元件20’與反應(yīng)槽34’的臺(tái)階部36’卡止。這時(shí)，固體基件23’在其下端與反應(yīng)檢測(cè)部37的底部離開(kāi)一定距離的狀態(tài)下，收容在反應(yīng)檢測(cè)部37中。由于混合試劑先收容在反應(yīng)檢測(cè)部37中，故在反應(yīng)檢測(cè)部37中，固體基件23’的全體被浸漬，這樣，從固體基件23’溶出核酸，另一方面，所溶出的核酸與試劑類反應(yīng)而擴(kuò)增。
如上所述，固體基件23’的下端成為與反應(yīng)檢測(cè)部37的底部離開(kāi)的狀態(tài)。更具體地說(shuō)，固體基件23’的下端位置是不阻礙測(cè)光機(jī)構(gòu)8對(duì)反應(yīng)檢測(cè)部37的激發(fā)光照射和熒光測(cè)定的位置(參照?qǐng)D33)。這樣，在附著核酸方面使用固體載體的情況下，在核酸的測(cè)定中，該固體載體不會(huì)阻礙測(cè)定。
核酸的測(cè)定，如圖32和圖33所示，成為再安裝反應(yīng)槽34’的蓋31’的狀態(tài)，另一方面，在用遮光部件9覆蓋反應(yīng)槽34’上方的狀態(tài)之后利用測(cè)光機(jī)構(gòu)8進(jìn)行。利用測(cè)光機(jī)構(gòu)8進(jìn)行的核酸測(cè)定，與先前所述的核酸分析裝置1(參照?qǐng)D1等)同樣地進(jìn)行。
如上所述，在核酸分析裝置1’中，與先前所述的核酸分析裝置1(參照?qǐng)D1等)同樣，只通過(guò)安裝上述結(jié)構(gòu)的核酸精制用支架2’和核酸擴(kuò)增用支架3’，就可以自動(dòng)地進(jìn)行核酸的分析，在核酸的提取操作和核酸的擴(kuò)增操作中，除了將支架2’、3’安裝在核酸分析裝置1中以外，沒(méi)有依賴使用者手工操作的部分。由于這樣，可以顯著地減輕核酸分析中的使用者的負(fù)擔(dān)，同時(shí)，不會(huì)產(chǎn)生因使用者技術(shù)水平差異造成的核酸回收率偏差等，不會(huì)使測(cè)量定再現(xiàn)性惡化。
以下，利用上述的本發(fā)明第一實(shí)施方式的核酸精制用支架、核酸擴(kuò)增用支架和核酸分析裝置，通過(guò)SNP(單核苷酸多態(tài)性，SingleNucleotide Polymorphism)分類，研究是否可以適當(dāng)?shù)鼐坪蛿U(kuò)增作為目的核酸的人基因組DNA。
實(shí)施例1(核酸精制用支架的形成)核酸精制用支架的形成如下這樣進(jìn)行，在利用下面說(shuō)明的方法形成支架主體(參照?qǐng)D中的符號(hào)21)和核酸提取元件(參照?qǐng)D中的符號(hào)20)之后，將核酸提取元件收容在支架主體的收容槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)27)中，而且通過(guò)將作為吸水性部件(參照?qǐng)D中的符號(hào)21Ad、21Ae)的發(fā)泡樹(shù)脂(INOAC CORPORATION公司制，發(fā)泡聚氨脂SAQ)固定在剩余液除去槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)21A)中。吸水性部件21Ad的尺寸為5mm×8mm×17mm，吸水性部件21Ae的尺寸為5mm×11mm×14mm。
支架主體通過(guò)使用PET的樹(shù)脂成形形成圖5和圖6所示的形態(tài)。
另一方面，核酸提取元件通過(guò)將固體基件(參照?qǐng)D中的符號(hào)23)保持在保持部件(參照?qǐng)D中的符號(hào)22)上形成。固體基件通過(guò)利用沖頭將FTA Classic Card(Whatman社，Cat.No WB120205)沖切成Φ2.5mm的圓盤(pán)狀來(lái)形成。FTA Classic Card是以纖維素為主成分的核酸收集用濾紙。另一方面，通過(guò)使用PET的樹(shù)脂成形，將保持部件作成圖7A和圖7B所示的形態(tài)。在樹(shù)脂成形后的保持部件中，不形成卡止片(參照?qǐng)D中的符號(hào)26C)，在固體基件的中心開(kāi)孔，插入保持部件的銷狀部(參照?qǐng)D中的符號(hào)26B)中之后，通過(guò)熱處理銷狀部的前端部，形成卡止片。如上所述，卡止片用于防止固體基件從銷狀部中脫落。
(核酸擴(kuò)增用支架的形成)核酸精制用支架如下這樣來(lái)形成，即，通過(guò)使用PET的樹(shù)脂成形，將支架主體(參照?qǐng)D中的符號(hào)30)和蓋(參照?qǐng)D中的符號(hào)31)作成圖8和圖9所示的形態(tài)后，通過(guò)使蓋與支架主體的反應(yīng)槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)34)螺合而形成。
(核酸的精制)核酸的精制是在將試樣(參照?qǐng)D中的符號(hào)29L)注入核酸精制用支架主體的試樣保持槽(參照?qǐng)D中符號(hào)29)中，將洗凈液(參照?qǐng)D中的符號(hào)28L1～28L3)分別注入三個(gè)洗凈槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)281～283)中之后，將核酸精制用支架安裝在核酸分析裝置(參照?qǐng)D中的符號(hào)1)中，在核酸分析裝置中自動(dòng)地進(jìn)行。
作為試樣，使用全血(抗凝固劑含有肝素Na)，其注入量為120μL。作為洗凈液28L1，使用下述表1所示的洗凈液I(800μL)，作為洗凈液28L2，使用下述表1所示的洗凈液I(600μL)，作為洗凈液28L3，使用下述表1所示的洗凈液II(600μL)。
表1

另一方面，在核酸分析裝置中，驅(qū)動(dòng)核酸精制用動(dòng)作機(jī)構(gòu)(參照?qǐng)D中的符號(hào)5)，使核酸提取元件(固體基件)進(jìn)行以下所述的動(dòng)作。
首先，成為將核酸動(dòng)作機(jī)構(gòu)的插入銷(參照?qǐng)D中的符號(hào)50)嵌合在保持部件的筒狀部(參照?qǐng)D中的符號(hào)24)中的狀態(tài)，將固體基件浸漬在試樣保持槽中的全血中。其次，利用三個(gè)洗凈槽281～283洗凈固體基件。固體基件的洗凈按洗凈槽281→洗凈槽282→洗凈槽283的順序依次改變所使用的洗凈槽28L1～28L3。利用洗凈槽281的固體基件的洗凈，通過(guò)以固體基件23的全體位于洗凈液28L1的液面上方的狀態(tài)和完全浸漬在28L1中的位置之間的20Hz，上下運(yùn)動(dòng)1分鐘來(lái)進(jìn)行。另一方面，在利用洗凈槽282、283的固體基件的洗凈中，除了上下運(yùn)動(dòng)的時(shí)間為2分鐘以外，與利用洗凈槽281的情況相同。
接著，除去有可能阻礙以后所進(jìn)行的核酸擴(kuò)增反應(yīng)的剩余成分。剩余成分的除去，通過(guò)將固體基件和保持部件的前端部分(卡止片、銷狀部、錐部(參照?qǐng)D中的符號(hào)26)壓在吸水性部件(參照?qǐng)D中的符號(hào)21Ad、26Ae)上來(lái)進(jìn)行。
(核酸擴(kuò)增的確認(rèn))核酸的擴(kuò)增，通過(guò)使用下述表2的試劑混合液A、B的PCR法進(jìn)行，核酸擴(kuò)增的程度，利用作為將藥劑代謝酶進(jìn)行編碼的堿基序列的CYP2C19*2*3的SNP(單核苷酸多態(tài)性，Single NucleotidePolymorphism)分類來(lái)確認(rèn)。
表2

序列號(hào)1gttttctcttagatatgcaataattttccca序列號(hào)2cgagggttgttgatgtccatc序列號(hào)3gaaaaattgaatgaaaacatcaggattgta
序列號(hào)4gtacttcagggcttggtcaata序列號(hào)5ttatgggttcccgggaaataatc-(BODIPY-FL)序列號(hào)6gcaccccctggatcc-(TAMRA)更具體地說(shuō)，核酸擴(kuò)增的確認(rèn)是在個(gè)別地將試劑混合液A或試劑混合液B注入核酸擴(kuò)增用支架主體的試劑類保持槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)321、322)后，將核酸擴(kuò)增用支架安裝在核酸分析裝置(參照?qǐng)D中的符號(hào)1)中，在核酸分析裝置中自動(dòng)地進(jìn)行。
在核酸分析裝置中，驅(qū)動(dòng)吸液管裝置(參照?qǐng)D中的符號(hào)4)、蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)(參照?qǐng)D中的符號(hào)6)和溫度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)(圖中的符號(hào)7)，使核酸提取元件(固體基件)進(jìn)行下述的動(dòng)作。
首先，在將尖端件(圖中的符號(hào)43)安裝在吸液管裝置的噴嘴(圖中的符號(hào)40)上之后，從試劑類保持槽33A采取30μL的試劑混合液A，從試劑類保持槽33B采取30μm的試劑混合液B，分別注入混合槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)33)中。其次，利用噴嘴的吸排活動(dòng)，進(jìn)行試劑混合液A、B的攪拌和混合，調(diào)制反應(yīng)液之后，利用噴嘴采取50μL的反應(yīng)液，將它注入反應(yīng)槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)34)中。
另一方面，在利用蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)的旋轉(zhuǎn)部件(參照?qǐng)D中的符號(hào)60)，從核酸擴(kuò)增用支架上取出蓋(參照?qǐng)D中的31)之后，移動(dòng)蓋，使蓋的卡止爪(參照?qǐng)D的符號(hào)36A)與核酸提取元件的卡止頭(參照?qǐng)D中的符號(hào)24B)卡合，使它們成為一體。
接著，利用蓋安裝拆卸機(jī)構(gòu)，與蓋一起將核酸提取元件20收容在核酸擴(kuò)增支架的反應(yīng)槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)34)中，并利用旋轉(zhuǎn)部件的旋轉(zhuǎn)，用蓋關(guān)閉反應(yīng)槽。這樣，固體基件在完全浸漬在反應(yīng)液中的狀態(tài)下，密閉保持在反應(yīng)槽(圖中34)中。
接著，驅(qū)動(dòng)溫度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)的熱塊(參照?qǐng)D中的符號(hào)70)，改變反應(yīng)槽中的反應(yīng)液溫度，進(jìn)行目的核酸的擴(kuò)增。溫度變化為在95℃下120秒→將(95℃下4秒+54℃下60秒)進(jìn)行50次循環(huán)→95℃下60秒→45℃下90秒。
在SNP分類中，采用Tm解析。當(dāng)進(jìn)行Tm解析時(shí)，以1℃/3秒的比例，使核酸擴(kuò)增的反應(yīng)液溫度從45℃上升至95℃，實(shí)時(shí)地測(cè)定這時(shí)的熒光強(qiáng)度。測(cè)定波長(zhǎng)為515～555nm(*2)、585～750nm(*3)二種，分別在測(cè)定波長(zhǎng)((*2)、(*3))中進(jìn)行SNP分類。在各自波長(zhǎng)下測(cè)定熒光強(qiáng)度的結(jié)果表示在以橫軸為溫度、以縱軸為熒光強(qiáng)度的微分值(變化率)的圖34中。
從圖34可看出，在測(cè)定波長(zhǎng)*2和*3任何一種情況下，在所測(cè)定的熒光強(qiáng)度的微分值(變化率)的變化曲線中，出現(xiàn)二個(gè)峰。這些峰與SNP類型的野生型和突變型對(duì)應(yīng)，在可區(qū)別它們程度上，可以確認(rèn)很好地?cái)U(kuò)增目的核酸。
實(shí)施例2在本實(shí)施例中，與實(shí)施例1同樣，在進(jìn)行核酸的精制后，采用ICAN法作為擴(kuò)增法，進(jìn)行SNP分類。作為擴(kuò)增試劑，使用TaKaRa公司制Cycleave ICAN human ALDH2分類試劑盒(目錄號(hào)CY101)。應(yīng)保持在支架主體的試劑類保持槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)321、322)中的試劑混合液A、B的組成如表3所示。這些試劑混合液A、B的注入量、混合條件和反應(yīng)液的注入量與實(shí)施例1的情況相同。
表3

(反應(yīng)條件)反應(yīng)是在將固體基件浸漬在反應(yīng)液中狀態(tài)下，在70℃下培育300秒后，在60℃下進(jìn)行1小時(shí)。這1小時(shí)的反應(yīng)是由不進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定的第一階段的30秒和進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定的第二階段的30秒作為1個(gè)循環(huán)的60次循環(huán)構(gòu)成，在各循環(huán)的第二階段實(shí)時(shí)地測(cè)定熒光強(qiáng)度。測(cè)定波長(zhǎng)取515～555nm(mt)、585～750nm(wt)二種，分別在SNP類型的突變型和野生型中進(jìn)行SNP分類。在各自波長(zhǎng)下測(cè)定熒光強(qiáng)度的結(jié)果表示在以橫軸為循環(huán)數(shù)、以縱軸為熒光強(qiáng)度的圖35中。
從圖35可看出，在經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)數(shù)后，與SNP類型突變型對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度增加，而與SNP類型野生型對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度，即使增加循環(huán)數(shù)，熒光強(qiáng)度也幾乎不增加。因此，從圖35所示結(jié)果可知，在可區(qū)別SNP類型野生型和突變型的程度上可確認(rèn)有選擇且充分地?cái)U(kuò)增目的核酸(SNP類型野生型)。
實(shí)施例3在本實(shí)施例中，與實(shí)施例1同樣，進(jìn)行核酸的精制后，采用LAMP法作為擴(kuò)增法，進(jìn)行SNP分類。作為擴(kuò)增試劑，使用榮研化學(xué)公司制Loopamp P450分類試劑盒(CYP2C9*3)，保持在支架主體的試劑類保持槽(參照?qǐng)D中的符號(hào)33A、33B)中的試劑混合液A、B的組成如表3所示。試劑混合液A、B的注入量、混合條件和反應(yīng)液的注入量與實(shí)施例1的情況相同。
表4

(反應(yīng)條件)反應(yīng)是在將固體基件浸漬在反應(yīng)液中的狀態(tài)下，在95℃下處理5分鐘后，在60℃下進(jìn)行1小時(shí)的反應(yīng)。這一小時(shí)的反應(yīng)是以不進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定的第一階段30秒和進(jìn)行熒光強(qiáng)度測(cè)定的第二階段30秒為1個(gè)循環(huán)的60個(gè)循環(huán)構(gòu)成，在各循環(huán)的第二階段、在測(cè)定波長(zhǎng)為515～555nm下實(shí)時(shí)地測(cè)定熒光強(qiáng)度。在各循環(huán)的第二階段中測(cè)定熒光強(qiáng)度的結(jié)果表示在以橫軸為循環(huán)數(shù)、縱軸為熒光強(qiáng)度的圖36中。
從圖36可看出，在經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)數(shù)后，與SNP類型突變型對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度(圖中的A等位基因)增加，而與SNP類型野生型對(duì)應(yīng)的熒光強(qiáng)度(圖中的G等位基因)，即使增加循環(huán)數(shù)，熒光強(qiáng)度也幾乎不增加。因此，從圖36所示結(jié)果可知，在可區(qū)別SNP類型野生型和突變型的程度上可確認(rèn)有選擇且很好地?cái)U(kuò)增目的核酸(SNP類型野生型)。
從實(shí)施例1～3的結(jié)果可看出，在利用本發(fā)明第一實(shí)例方式中所述的核酸提取元件進(jìn)行核酸精制的情況下，不限于PCR法，即使在采用ICAN法或LAMP法作為擴(kuò)增方法的情況下，也可以適當(dāng)?shù)財(cái)U(kuò)增目的的核酸。如上所述，在目的核酸的精制度不高的情況下，ICAN法和LAMP法不能引起充分的擴(kuò)增反應(yīng)。因此，本發(fā)明第一實(shí)施方式中所述的精制方法，可以適當(dāng)?shù)鼐颇康暮怂?。因此，上述的精制方法不僅是PCR法，作為其以外的擴(kuò)增方法的前處理，也可適當(dāng)?shù)厥褂?，并且?duì)縮短擴(kuò)增時(shí)間有幫助。
另外，在實(shí)施例1～3中已經(jīng)證實(shí)，通過(guò)使用本發(fā)明的第一實(shí)施方式中所述的核酸精制用支架、核酸提取用支架和核酸分析裝置，可自動(dòng)地進(jìn)行核酸分析。在這種情況下，作為核酸擴(kuò)增方法，不限于PCR法，可以采用以PCR法為代表的眾所周知的各種擴(kuò)增方法，這也已被證實(shí)。
在實(shí)施例1～3中，研究了基于本發(fā)明第一實(shí)施方式中所述的例子而適當(dāng)?shù)財(cái)U(kuò)增核酸的情況，在采用本發(fā)明第二實(shí)施方式中所述的結(jié)構(gòu)的情況下，也可以適當(dāng)?shù)財(cái)U(kuò)增核酸，能夠得到上述的效果。
權(quán)利要求
1.一種核酸提取用容器，其特征在于，它包括用于從試樣中提取目的核酸且附載所提取的核酸的核酸提取元件；和與所述核酸提取元件分開(kāi)另外形成且具有用于收容所述核酸提取元件的收容槽的容器主體。
2.如權(quán)利要求1所述的核酸提取用容器，其特征在于所述核酸提取元件包括用于附載目的核酸的固體基件；和用于保持該固體基件的保持部件。
3.如權(quán)利要求2所述的核酸提取用容器，其特征在于所述固體基件以相對(duì)于所述保持部件的垂直軸為傾斜的狀態(tài)被保持。
4.如權(quán)利要求3所述的核酸提取用容器，其特征在于所述固體基件相對(duì)于所述垂直軸為水平或大致水平地被支承。
5.如權(quán)利要求3所述的核酸提取用容器，其特征在于所述固體基件以刺入所述保持部件的狀態(tài)被支承在所述保持部件上。
6.如權(quán)利要求5所述的核酸提取用容器，其特征在于所述保持部件包括越向端部直徑越縮小的錐部；從所述錐部延伸并且用于貫通所述固體基件的銷狀部；和用于抑制所述固體基件從所述銷狀部脫離的卡止片。
7.如權(quán)利要求3所述的核酸提取用容器，其特征在于所述固體基件作成圓盤(pán)狀。
8.如權(quán)利要求2所述的核酸提取用容器，其特征在于所述固體基件作成片狀，并且在所述保持部件上以吊持的狀態(tài)被保持。
9.如權(quán)利要求8所述的核酸提取用容器，其特征在于所述保持部件具有用于夾持所述固體基件的端部并且吊持所述固體基件的夾持部。
10.如權(quán)利要求2所述的核酸提取用容器，其特征在于所述容器主體具有1個(gè)以上的用于保持洗凈液的洗凈槽，該洗凈液用于除去附著在所述固體基件上的剩余成分。
11.如權(quán)利要求10所述的核酸提取用容器，其特征在于在所述容器主體上設(shè)置有剩余洗凈液除去裝置，該剩余洗凈液除去裝置用于除去附著在所述固體基件或其周圍的剩余洗凈液。
12.如權(quán)利要求11所述的核酸提取用容器，其特征在于所述剩余洗凈液除去裝置包括吸水性部件。
13.如權(quán)利要求1所述的核酸提取用容器，其特征在于它作為安裝在核酸分析裝置中使用的支架構(gòu)成。
14.如權(quán)利要求13所述的核酸提取用容器，其特征在于在所述核酸分析裝置具有用于從所述收容槽取出附載目的核酸的核酸提取元件、將該核酸提取元件移送至其它部位的移送部件的情況下，所述核酸提取元件具有用于與所述移送部件卡合的卡合部。
15.如權(quán)利要求14所述的核酸提取用容器，其特征在于所述卡合部作成用于嵌合所述移送部件的前端部的筒狀。
16.如權(quán)利要求15所述的核酸提取用容器，其特征在于所述卡合部具有1個(gè)以上的凹陷部，該凹陷部用于當(dāng)嵌合所述移送部件的前端部時(shí)，使彈性力能夠作用在所述移送部件上。
17.如權(quán)利要求16所述的核酸提取用容器，其特征在于所述1個(gè)以上的凹陷部包括槽、切口和貫通孔中的至少一個(gè)。
18.如權(quán)利要求14所述的核酸提取用容器，其特征在于所述保持部件具有用于解除所述移送部件和所述卡合部的嵌合狀態(tài)的突出部。
19.如權(quán)利要求18所述的核酸提取用容器，其特征在于所述突出部是向外側(cè)突出的凸緣。
20.如權(quán)利要求18所述的核酸提取用容器，其特征在于所述收容槽具有當(dāng)將所述核酸提取元件收容在該收容槽中時(shí)、與所述突出部卡止的臺(tái)階部。
21.一種固體基件的洗凈方法，它是使用洗凈液從附載有目的核酸的固體基件上除去目的核酸以外的剩余成分的方法，通過(guò)使所述固體基件相對(duì)于洗凈液沿上下方向進(jìn)行相對(duì)移動(dòng)，使所述固體基件浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)和所述固體基件不浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)反復(fù)。
22.如權(quán)利要求21所述的固體基件的洗凈方法，其特征在于所述固體基件浸漬在洗凈液中的狀態(tài)和不浸漬的狀態(tài)的反復(fù)，在使所述固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)閮A斜的狀態(tài)下進(jìn)行。
23.如權(quán)利要求22所述的固體基件的洗凈方法，其特征在于所述固體基件浸漬在洗凈液中的狀態(tài)和不浸漬的狀態(tài)的反復(fù)，在使所述固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)樗交虼笾滤降臓顟B(tài)下進(jìn)行。
24.如權(quán)利要求21所述的固體基件的洗凈方法，其特征在于在所述洗凈液中的浸漬結(jié)束后，利用吸水性部件除去附著在所述固體基件上的剩余洗凈液。
25.一種核酸精制方法，它是使用具有用于附載目的核酸的固體基件和用于保持該固體基件的保持部件的核酸提取元件，精制目的核酸的方法，它包括將試樣含浸在所述在固體基件中、在所述固體基件中附載試樣中的目的核酸的核酸附載步驟；和使用洗凈液除去附著在所述固體基件上的目的核酸以外的剩余成分的洗凈步驟；并且所述洗凈步驟，通過(guò)使所述核酸提取元件相對(duì)于洗凈液沿上下方向相對(duì)地移動(dòng)，使所述核酸提取元件浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)和所述核酸提取元件不浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)反復(fù)來(lái)進(jìn)行。
26.如權(quán)利要求25所述的核酸精制方法，其特征在于作為所述核酸提取元件，使用以相對(duì)于所述保持部件的垂直軸為傾斜的狀態(tài)將所述固體基件保持在所述保持部件上的元件，并且所述洗凈步驟，在使所述固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)閮A斜的狀態(tài)下，通過(guò)使所述提取元件沿上下方向移動(dòng)來(lái)進(jìn)行。
27.如權(quán)利要求26所述的核酸精制方法，其特征在于所述洗凈步驟，以使所述固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)榇怪被虼笾麓怪钡淖藙?shì)，通過(guò)使所述核酸提取元件沿上下方向移動(dòng)來(lái)進(jìn)行。
28.如權(quán)利要求25所述核酸精制方法，其特征在于所述洗凈步驟包括在所述固體基件相對(duì)于所述洗凈液的反復(fù)浸漬結(jié)束后，利用吸水性部件除去附著在所述固體基件上的剩余洗凈液的作業(yè)。
29.一種固體基件的洗凈機(jī)構(gòu)，用于使用洗凈液從附載有目的核酸的固體基件中除去目的核酸以外的剩余成分，使固體基件相對(duì)于洗凈液沿上下方向相對(duì)地移動(dòng)，使得所述固體基件浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)和所述固體基件不浸漬在所述洗凈液中的狀態(tài)反復(fù)。
30.如權(quán)利要求29所述的固體基件的洗凈機(jī)構(gòu)，其特征在于在使所述固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)閮A斜的狀態(tài)下，使所述固體基件沿上下方向進(jìn)行移動(dòng)。
31.如權(quán)利要求30所述的固體基件的洗凈機(jī)構(gòu)，其特征在于以使所述固體基件相對(duì)于上下方向?yàn)榇怪被虼笾麓怪钡淖藙?shì)，使所述固體基件沿上下方向進(jìn)行移動(dòng)。
全文摘要
本發(fā)明涉及核酸提取用容器(2)，該核酸提取用容器包括用于從試樣提取目的核酸且附著所提取的核酸的核酸提取元件(20)；和與核酸提取元件(20)分開(kāi)另外形成且具有收容核酸提取元件(20)的收容槽(27)的容器主體。核酸提取元件(20)包括附載目的核酸的固體基件(23)；和保持該固體基件(23)的保持部件(20)。優(yōu)選為，固體基件(23)以相對(duì)于保持部件(20)的垂直軸為傾斜的狀態(tài)被保持。
文檔編號(hào)C12M1/00GK1965080SQ200580018070
公開(kāi)日2007年5月16日 申請(qǐng)日期2005年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月2日
發(fā)明者鐮田達(dá)夫, 太田進(jìn)一, 江川浩司 申請(qǐng)人:愛(ài)科來(lái)株式會(huì)社