專利名稱：Ena礦物質(zhì)生物活性溶液、其制造方法及其在預(yù)防骨質(zhì)疏松癥方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法以及通過該方法制造的用于預(yù)防和改善骨質(zhì)疏松癥的生物活性溶液。更具體地說，本發(fā)明涉及通過使用富含礦物質(zhì)的魷魚骨和/或紅海藻作為主要原料而制造的礦物質(zhì)生物活性組合物以及使用這些組合物的保健食品。
背景技術(shù)：
隨著工業(yè)社會(huì)的升級和專業(yè)化，以前吃慢食的飲食生活已經(jīng)轉(zhuǎn)向吃快食的飲食生活，由于生活環(huán)境的壓力和污染因素，現(xiàn)代人必需的礦物質(zhì)的供應(yīng)已經(jīng)出現(xiàn)不足，并且現(xiàn)代人必需的鈣的供應(yīng)還不順暢。
盡管人體所需的礦物質(zhì)在人體中以極少的量存在，但其承擔(dān)了重要的角色，即幫助細(xì)胞生長和維持人體組織，并控制身體的活動(dòng)。特別是，在人體新陳代謝中承擔(dān)重要角色的鈣是預(yù)防骨質(zhì)疏松癥不可缺少的，但要供應(yīng)人類和哺乳動(dòng)物所需的適量鈣很難，并且還有這樣的問題，即其攝取量增加了，但吸收率很低。
骨質(zhì)疏松癥是老年人、更年期后的女性或男性?；嫉墓趋兰膊?。實(shí)際上，其早期診斷和預(yù)防還不夠。骨質(zhì)疏松癥主要是因?yàn)槿狈Υ菩约に?、生長激素和雄性激素等激素而發(fā)生的，其次是在甲狀腺疾病后發(fā)生的。骨質(zhì)疏松癥的病癥是，隨著破骨細(xì)胞的破骨量超過造骨細(xì)胞的造骨量，骨密度降低。它最初沒有特別的癥狀，但即使是輕微的撞擊，也很容易發(fā)生骨折。在更年期的女性中，骨密度的降低會(huì)很快發(fā)生，并且骨密度的降低在男性和女性中都會(huì)緩慢地發(fā)生。在這種骨質(zhì)疏松癥中，已顯示，血清中的鈣(Ca)和總堿性磷酸酶發(fā)生了變化，與骨生成有關(guān)的激素(例如，雌二醇、骨鈣素等)以及與骨質(zhì)溶解有關(guān)的激素(例如，甲狀旁腺激素等)的濃度發(fā)生了變化。而且，尿中排出的吡啶啉(其是用作骨質(zhì)溶解指標(biāo)的膠原質(zhì)交聯(lián)劑)增加了。
在骨質(zhì)疏松癥的治療中，服用雌性激素作為激素的補(bǔ)充治療，并且據(jù)報(bào)告，激素的補(bǔ)充治療應(yīng)在圍絕經(jīng)期的晚期或更年期的早期就開始，以便獲得最大的療效(Stepan J.J.等5(2003)Endocr Regul 37(4)225-238；Chen L.等(2000)20(4)283-286)。而且，適合雌性激素投藥禁忌的骨質(zhì)疏松癥治療劑包括鈣、雙磷酸化合物、降血鈣素、雷洛西芬、維生素D等。
同時(shí)，降血鈣素是在甲狀腺的C細(xì)胞中產(chǎn)生的激素。其在人體中的生理作用還不清楚，但目前認(rèn)為其涉及對鈣平衡進(jìn)行短時(shí)間的輕微控制，并且醫(yī)藥劑量顯示了對骨質(zhì)溶解的抑制效果。特別是，據(jù)報(bào)告，降血鈣素對高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥更有效。對骨質(zhì)疏松癥有療效的治療劑的例子包括市場上的“Fosamax”和“Evista”，其通過對破骨細(xì)胞的產(chǎn)生和活動(dòng)的阻止作用來抑制破骨或減慢破骨的速度，以這種機(jī)制來顯示其療效，還有一種新的骨質(zhì)疏松癥治療劑，稱為“Porteo”，其通過加快造骨細(xì)胞的產(chǎn)生和活動(dòng)來幫助形成新的骨頭。盡管在新的化學(xué)藥物中，雷洛西芬已經(jīng)成為一種選擇性雌性激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)以及一種在骨質(zhì)心血管系統(tǒng)中用作雌性激素功效藥的理想藥物，但作為胸部和子宮的雌性激素對抗藥，最近已經(jīng)報(bào)告了該藥物在其新陳代謝期間所顯示的毒性(Hirsimaki P.等(2002)Breast J.8(2)92-96)。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液以及該溶液的制造方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供新的礦物質(zhì)生物活性溶液，其對預(yù)防和改善骨質(zhì)疏松癥有用。本發(fā)明涉及一種制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法以及對預(yù)防和改善骨質(zhì)疏松癥有用的應(yīng)用了所述溶液的組合物。更具體地說，本發(fā)明涉及通過使用富含礦物質(zhì)的魷魚骨和/或紅海藻作為主要原料而制造的ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液組合物以及使用這些組合物的保健食品。
下面將詳細(xì)說明本發(fā)明本發(fā)明用于制造一種堿性溶液，其通過精煉紫菜、瓊脂、江蘺、海索面、紅毛菜、蜈蚣藻、線形杉藻和三叉仙菜(其是可以食用的天然海藻)以及紅海藻淀粉和魷魚骨(其是主要成分)來分布天然礦物質(zhì)。
本發(fā)明的堿性水溶液是根據(jù)包括下列步驟的方法制造的清洗和壓碎魷魚骨和紅海藻；
通過燃燒壓碎的材料來制造無機(jī)礦物質(zhì)；將無機(jī)礦物質(zhì)冷卻到室溫并將其制成微小的粉末；用水離子化微小的粉末；以及通過沉淀和過濾微小的粉末獲得堿性水溶液。
以上紅海藻指100％植物可食用海藻，其是紅色或紫色的植物群，因?yàn)槠涑巳~綠素之外還含有紅色的助色團(tuán)。其植物體是多細(xì)胞的，大多數(shù)時(shí)間是絲狀或葉狀的，并且生長在海洋中。紫菜、瓊脂、鹿角海蘿等都屬于這些紅色的海藻。魷魚骨也叫烏賊骨，其是魷魚中部的干白骨。
對于本發(fā)明中使用上述紅海藻和魷魚骨來制造無機(jī)礦物質(zhì)的方法，優(yōu)選地，將紅海藻和魷魚骨清洗干凈并徹底干燥，并且在1,000至2,000℃下將其加熱和燃燒1小時(shí)。將細(xì)菌或雜質(zhì)完全燃燒和除去之后，只留下了無機(jī)的礦物質(zhì)。然后，將這些礦物質(zhì)完全冷卻到室溫，并使用粉碎機(jī)壓碎成微小的顆粒。
接著，通過使用燃燒后的魷魚骨或紅海藻將壓碎的礦物質(zhì)溶解于水中。
在對溶解了以上燃燒后的礦物質(zhì)的水進(jìn)行離子化時(shí)，優(yōu)選地，在80至100℃下，通過水泵，在高于10個(gè)大氣壓的壓力下，利用高度差，將其壓碎，持續(xù)時(shí)間在1小時(shí)以上。當(dāng)水泵的壓力至少大于10k時(shí)有效。因而沉淀和過濾離子化的溶液。通過讓離子化溶液靜止15至35小時(shí)來自然沉淀出礦物質(zhì)淤泥之后，使用沉淀過濾器來過濾上層清液，以制造堿性的礦物質(zhì)生物活性溶液。


結(jié)合附圖閱讀以下詳細(xì)說明時(shí)，將更全面地了解本發(fā)明及其許多附帶的優(yōu)點(diǎn)，所附圖形包括圖1顯示了用于溶液離子化步驟的設(shè)備；圖2顯示了對整個(gè)測試期間每個(gè)組的動(dòng)物平均體重變化進(jìn)行比較的曲線圖；圖3是說明動(dòng)物尸體解剖期間測得的每個(gè)組中的動(dòng)物平均體重變化的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；
圖4顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對血清中的鈣濃度變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖5顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對血清中的磷濃度變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖6顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對血清中的雌二醇濃度變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖7顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對血清中的骨鈣素濃度變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖8顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對血清中的堿性磷酸酶濃度變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖9顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對骨質(zhì)溶解期間隔離到血清中的吡啶啉濃度變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖10顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對枝狀骨組織的面積變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖11顯示了通過Azan染色(其是一種針對膠原質(zhì)的特定染色法)來觀察枝狀骨(其是骨膠原質(zhì)的指標(biāo))的情況，時(shí)間是在切除卵巢后服用礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)之后的4、8和12周；圖12顯示了動(dòng)物尸體解剖之后礦物質(zhì)生物活性溶液對骨質(zhì)溶解期間增加的破骨細(xì)胞數(shù)量變化的影響的曲線圖，時(shí)間是在切除卵巢后服用測試材料之后的4、8和12周；圖13顯示了觀察骨質(zhì)溶解期間增加的破骨細(xì)胞活動(dòng)程度的情況，時(shí)間是在切除卵巢后服用礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)之后的4周；圖14顯示了觀察骨質(zhì)溶解期間增加的破骨細(xì)胞活動(dòng)程度的情況，時(shí)間是在切除卵巢后服用礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)之后的8周；圖15顯示了觀察骨質(zhì)溶解期間增加的破骨細(xì)胞活動(dòng)程度的情況，時(shí)間是在切除卵巢后服用礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)之后的12周；圖16顯示了服用礦物質(zhì)生物活性溶液對切除卵巢的動(dòng)物的實(shí)質(zhì)性器官的影響。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的其他特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)將通過隨后的描述進(jìn)行闡釋和部分體現(xiàn)，也可以通過實(shí)踐本發(fā)明來加以了解。下文，除非另有說明，否則％表示重量百分比。
ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的制造將清洗干凈并干燥的魷魚骨和紅海藻壓碎成粉末并在1,100℃下燃燒1小時(shí)。將燃燒后的魷魚骨和海藻完全冷卻到室溫，并通過使用粉碎機(jī)制成微小的粉末。對于以上的紅海藻，紫菜、瓊脂、江蘺、海索面、紅毛菜、蜈蚣藻、線形杉藻、三叉仙菜和紅海藻淀粉均以相同的量混合和使用。
在500升水中，放入1.5kg燃燒后的魷魚骨的微小粉末和4kg燃燒后的紅海藻的微小粉末，攪拌，并溶解。通過水泵，在10個(gè)大氣壓的壓力下，利用高度差，將在上述溶液中的顆粒壓碎，時(shí)間持續(xù)2小時(shí)，以制造離子化的溶液。讓離子化的溶液靜止24小時(shí)之后，使用沉淀過濾器對反應(yīng)器中的上層清液進(jìn)行過濾，以制造礦物質(zhì)生物活性溶液。下表1中顯示了如此制造的礦物質(zhì)生物活性溶液的成分的分析結(jié)果表1.ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的成分分析


如上表1所示，可以看出，根據(jù)本發(fā)明的離子化溶液是pH值為12.85的堿性溶液，特別是富含鈣，并且含有大量的各種對人體有益的金屬離子。
ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的制造將魷魚骨清洗干凈并干燥之后，按照與優(yōu)選實(shí)施例1相同的方法來制造離子化的溶液。并且按照與優(yōu)選實(shí)施例1相同的方法來制造礦物質(zhì)生物活性溶液，但將5.5kg燃燒后的魷魚骨的微小粉末溶解于500升水中。下表2中顯示了如此制造的礦物質(zhì)生物活性溶液的成分的分析結(jié)果表2.ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的成分分析


如上表2所示，可以看出，根據(jù)本發(fā)明的離子化溶液是pH值為12.2的堿性溶液，特別是富含鈣，并且含有大量各種對人體有益的金屬離子。
使用堿性礦物質(zhì)生物活性溶液的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過使用在以上優(yōu)選實(shí)施例1中制造的堿性礦物質(zhì)生物活性溶液來執(zhí)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
對于實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物，使用了由Orient Company提供的Wistar組中的無特定病原(SPF)老鼠。將五只Wistar老鼠都放在聚碳酸酯養(yǎng)殖箱(240寬×390長×175高mm)中，所述養(yǎng)殖箱配有自動(dòng)調(diào)溫調(diào)濕器，將溫度設(shè)為22±3℃，相對濕度設(shè)為50±10％，并且照明時(shí)間為12小時(shí)(08:00打開，20:00關(guān)閉)，飼養(yǎng)并繁殖。對于飼料，通過輻射(13.2kGy)對用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的固體飼料(PMI NutritionInternational，地址505North 4thStreet，Richmond，IN 47374，USA)進(jìn)行消毒，并隨意取用。對于水，使用水瓶自由取用自來水。
作為飲用水以0.5％、5％和10％的濃度將優(yōu)選實(shí)施例1中制造的24L礦物質(zhì)生物活性溶液應(yīng)用于骨質(zhì)疏松癥的實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型中，時(shí)間持續(xù)12周，同時(shí)保持其冷凍，然后，通過血清中的骨質(zhì)疏松癥診斷指標(biāo)變化和大腿骨的組織病理學(xué)檢驗(yàn)來執(zhí)行骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防效果實(shí)驗(yàn)。將一般的自來水用于對照實(shí)驗(yàn)。
在Wistar老鼠中，選擇體重為200至230g的雌鼠，并且每一組都使用24只雌鼠。將每一組中的老鼠都放在聚碳酸酯養(yǎng)殖箱中。使用Rompun(0.04cc/100g)和克他命(0.14cc/100g)將老鼠麻醉之后，刮掉其腹部的毛并使用消毒劑徹底消毒，且切除老鼠的卵巢。通過使用手術(shù)刀切割腹部中線大約1cm、吸引韌帶子宮并暴露兩側(cè)的卵巢來完全切除兩側(cè)的卵巢。縫合每一塊肌肉和皮膚之后，通過對手術(shù)現(xiàn)場進(jìn)行徹底消毒來防止感染，并且通過在手術(shù)第二天測量體重來執(zhí)行品種分離。將老鼠分成四組之后，在整個(gè)測試期間，通過飲用來自由供應(yīng)測試材料，并且在服用測試材料4、8和12周之后，處死動(dòng)物。
表3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)每一組的服藥情況

a在整個(gè)測試期間通過飲用來自由供應(yīng)。
bENA(礦物質(zhì)生物活性溶液的名稱)下面說明了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果<老鼠體重變化觀察>
在整個(gè)測試期間，通過每周測量一次體重來觀察通過切除卵巢從雌鼠引入的骨質(zhì)疏松癥的動(dòng)物模型的體重變化。圖2和3顯示了所觀察到的動(dòng)物一般癥狀。據(jù)觀察，在切除卵巢之后，所有測試組的體重都增加。但與填料對照組相比，服用0.5％、5％和10％礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試溶液)的組中未觀察到任何統(tǒng)計(jì)上顯著的體重變化，并且整個(gè)測試期間，在觀察動(dòng)物一般癥狀的過程中，未觀察到任何異常的癥狀。
<觀察對血清指標(biāo)的影響>
對雌鼠進(jìn)行卵巢切除實(shí)驗(yàn)之后引入的骨質(zhì)疏松癥的動(dòng)物模型中，在定期處死的動(dòng)物中觀察雌二醇、骨鈣素、鈣、磷和堿性磷酸酶(其用作骨質(zhì)疏松癥中的血清指標(biāo))的濃度，以驗(yàn)證測試材料的功效。通過血液樣本的離心分離(3,000g，15分鐘)分離出血清之后，用放射性免疫測定方法(美國拜耳)測量雌二醇和骨鈣素，用OCPC端點(diǎn)法(美國拜耳)測量鈣，并且通過使用商業(yè)工具包(阿根廷布宜諾斯艾利斯Bio System S.A.)來形成磷鉬酸鹽復(fù)合物而根據(jù)分光光度測定法來測量磷的濃度。根據(jù)比色分析(德國拜耳)來測量血清總堿性磷酸酶的活性。圖4至8中顯示了各個(gè)成分。
1)鈣如圖4所示，在整個(gè)測試期間，與填料對照組相比，服用了0.5％、5％和10％礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)的組中沒有觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著的血清鈣濃度變化。我們認(rèn)為服用礦物質(zhì)生物活性溶液對血液中的鈣濃度沒有影響。
2)磷如圖5所示，在整個(gè)測試期間，與填料對照組相比，服用了0.5％、5％和10％礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)的組中沒有觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著的血清磷濃度變化。我們認(rèn)為服用礦物質(zhì)生物活性溶液對血液中的磷濃度沒有影響。
3)雌二醇如圖6所示，據(jù)觀察，與填料對照組相比，服用5％和10％礦物質(zhì)生物活性溶液的組在服用后12周出現(xiàn)了統(tǒng)計(jì)上顯著(p＜0.05)的血清雌二醇濃度增加。我們確定血液中這種增加的雌二醇濃度是來自具有天然成分的測試材料。并且我們認(rèn)為，在因?yàn)槿狈に匾鸬墓琴|(zhì)疏松癥的動(dòng)物模型中，可以通過切除卵巢來防止骨質(zhì)溶解。
4)骨鈣素如圖7所示，據(jù)觀察，與填料對照組相比，分別服用5％和10％礦物質(zhì)生物活性溶液的組在服用后12周出現(xiàn)了統(tǒng)計(jì)上顯著(p＜0.05和p＜0.001)的血清骨鈣素濃度降低。還觀察到，與填料對照組相比，服用礦物質(zhì)生物活性溶液的組在服用后4和8周，血清骨鈣素的濃度趨低。我們認(rèn)為，盡管礦物質(zhì)生物活性溶液對骨鈣素(骨生成的指標(biāo))沒有重大的影響，但長期服用測試材料可以通過降低骨鈣素的濃度而將骨生成降低到原來的水平。
5)堿性磷酸酶如圖8所示，在整個(gè)測試期間，與填料對照組相比，服用了0.5％、5％和10％礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)的組中沒有觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著的血清堿性磷酸酶濃度變化。
<觀察對血清吡啶啉的影響>
骨質(zhì)疏松癥期間，由于骨頭膠原質(zhì)的減少，吡啶啉(PYD)(I型膠原質(zhì)交聯(lián)分子)被隔離到循環(huán)的血液和尿中。通過測量PYD(其是一種針對骨頭的指標(biāo))可以觀察到骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展情況。在測量PYD的過程中，盡管使用傳統(tǒng)HPLC或免疫測定來測量被隔離到尿中的PYD的方法存在缺點(diǎn)，即其靈敏度和特異度低，但它是早期診斷骨質(zhì)疏松癥的有用的血清指標(biāo)，因?yàn)榧词沟?0倍的PYD濃度也可以測量，而本實(shí)驗(yàn)中通過應(yīng)用酶聯(lián)免疫測定(ELISA)來測量尿中和血清中的PYD。圖9顯示了測量結(jié)果。
通過在骨質(zhì)溶解期間觀察礦物質(zhì)活性溶液對隔離到血清中的吡啶啉(PYD)(其是一種I型膠原質(zhì)交聯(lián)分子)的影響，如表9所示，與填料對照組相比，服用10％測試材料的組在服用測試材料之后4和12周，觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著(p＜0.01)的血清PYD濃度降低。服用測試材料之后8周，在服用5％和10％測試材料的組中觀察到了顯著(p＜0.05)的血清PYD濃度降低。
<觀察對骨頭和其他器官的影響>
為了在組織病理學(xué)上觀察實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型的大腿骨，從定期處死的每只動(dòng)物中取出大腿骨，并且使用圖像分析程序(Visus圖像分析，美國加利福尼亞州Foresthill的Foresthill Products)，通過Azan染色(其是一種針對膠原質(zhì)的特定染色法)來分析枝狀骨的面積(其是骨質(zhì)疏松癥指標(biāo))，以便針對組織樣本根據(jù)骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展來觀察大腿骨膠原質(zhì)的變化，其中，這些組織樣本是通過使用蟻酸的脫鈣方法以及使用10％中性福爾馬林的組織固定方法制造的。并且通過蘇木精-伊紅染色確認(rèn)了破骨細(xì)胞(其是與骨質(zhì)溶解有關(guān)的細(xì)胞)的數(shù)量。
同時(shí)，為了觀察長期接觸測試材料對每個(gè)器官的影響，處死動(dòng)物時(shí)，將肺、心臟、肝、脾、胰腺、腎、甲狀腺、腎上腺等實(shí)質(zhì)性器官連同大腿骨一起取出，并且根據(jù)一般的組織處理方法，通過10％中性福爾馬林固定方法，使用蘇木精-伊紅染色來進(jìn)行觀察。圖10至16顯示了觀察結(jié)果。
1)枝狀骨的面積通過Azan染色(其是一種針對組織中的膠原質(zhì)的特定染色法)來檢查切除卵巢之后礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)對骨頭膠原質(zhì)的影響。如圖10和11所示，據(jù)觀察，在填料對照組中，由于卵巢切除，產(chǎn)生了缺乏激素引起的骨質(zhì)疏松癥，并且枝狀骨的面積隨著測試期的過去逐漸縮小，因?yàn)楣穷^膠原質(zhì)的數(shù)量減少了。盡管在切除卵巢之后的4周，服用測試材料未觀察到任何統(tǒng)計(jì)上顯著的變化，但觀察到，與填料對照組相比，枝狀骨面積(其是骨膠原質(zhì)形成的指標(biāo))在服用0.5％、5％和10％測試材料的組中偏高。盡管在8周服藥組的比較中觀察到，與服藥后4周相比，在服用測試材料后8周，所有測試組的骨膠原質(zhì)都減少了，但與填料對照組相比，分別服用5％和10％測試材料的組中觀察到了統(tǒng)計(jì)上顯著(p＜0.05和p＜0.001)的枝狀骨面積增加。同時(shí)，在12周服藥組中，與4周和8周服藥組相比，在填料對照組和服用0.5％測試材料的組中，骨膠原質(zhì)的數(shù)量減少了。并且在12周服藥組中，像8周服藥組中一樣，在服用5％和10％測試材料的兩個(gè)組中都觀察到了枝狀骨面積的顯著增加(p＜0.01)。
2)破骨細(xì)胞數(shù)量的變化通過觀察破骨細(xì)胞(其是用于骨質(zhì)溶解指標(biāo)的細(xì)胞)的數(shù)量變化，如圖12至15所示，在整個(gè)測試期間觀察到了統(tǒng)計(jì)上顯著的變化。在切除卵巢之后的4周，服用礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)之后觀察大腿骨骨干部分中的破骨細(xì)胞數(shù)量變化。在服用10％測試材料的組中觀察到了統(tǒng)計(jì)上顯著(p＜0.01)的破骨細(xì)胞數(shù)量減少。并且與填料對照組相比，在服用8周各種濃度的測試材料的組中，觀察到了破骨細(xì)胞數(shù)量的顯著降低。同時(shí)，盡管在對照組的情況下，與8周服藥組相比，12周服藥組中顯示了一樣高的破骨細(xì)胞數(shù)量，但觀察到，在服用測試材料的組的情況下，與填料對照組相比，服用各種濃度的測試材料的組中的破骨細(xì)胞數(shù)量顯著(p＜0.01)減少。
3)觀察對實(shí)質(zhì)性器官的影響不僅觀察了礦物質(zhì)生物活性溶液(其是測試材料)對實(shí)質(zhì)性器官的影響，而且觀察了長期供應(yīng)飲用水對實(shí)質(zhì)性器官的影響。結(jié)果顯示，其對肺、心臟、肝、脾、胰腺、腎、甲狀腺和腎上腺?zèng)]有影響。如圖16所示。
對所獲得的材料執(zhí)行多重比較測試。對于平均值，執(zhí)行Dunnett t檢驗(yàn)(其是一種多重比較方法)，以便在Battlett測試中有同質(zhì)性的情況下，檢查填料對照組和服藥組之間是否有差異。如果Battlett測試的結(jié)果未發(fā)現(xiàn)同質(zhì)性，則執(zhí)行Kruskal-Wallis H測試(其是一種使用有序數(shù)據(jù)的非參數(shù)法)，并且在p＜0.05的情況下，通過使用Dunnett檢驗(yàn)來研究各個(gè)組之間的顯著差異。通過使用GraphPadInStat(3.05版，GraphPad Software公司)(其是一種統(tǒng)計(jì)程序)來執(zhí)行這種分析。將驗(yàn)證的危險(xiǎn)率確定為5％和1％。
工業(yè)適用性長期服用根據(jù)本發(fā)明的礦物質(zhì)生物活性溶液可以增加血清中的雌二醇濃度，而降低骨鈣素的濃度；通過增加枝狀骨的面積，而減少大腿骨的破骨細(xì)胞數(shù)量來防止骨質(zhì)疏松癥；但對其他器官未顯示任何毒性。
雖然已經(jīng)顯示和說明本發(fā)明的某些優(yōu)選實(shí)施例，但應(yīng)清楚了解，本發(fā)明不限于此，而是可以在以下權(quán)利要求書的范圍內(nèi)以各種其他方式實(shí)施。
權(quán)利要求
1.一種制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其包括以下步驟清洗和壓碎魷魚骨和紅海藻；通過燃燒壓碎的材料來制造無機(jī)礦物質(zhì)；將所述無機(jī)礦物質(zhì)冷卻到室溫并將所述無機(jī)礦物質(zhì)制成微小的粉末；用水離子化所述微小的粉末；以及通過沉淀和過濾所述微小的粉末而獲得堿性水溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其特征在于，制造所述無機(jī)礦物質(zhì)的所述步驟是在1,000至2,000℃下燃燒所述壓碎的材料。
3.如權(quán)利要求1所述的制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其特征在于，用水離子化所述微小的粉末的所述步驟是采用壓碎方法在80至100℃的溫度和10個(gè)大氣壓或更大的壓力下利用高度差通過水泵完成的。
4.如權(quán)利要求3所述的制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其特征在于，用水離子化所述微小的粉末的所述步驟持續(xù)1小時(shí)或更長。
5.如權(quán)利要求1所述的制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其特征在于，所述沉淀步驟的完成時(shí)間是15至35小時(shí)。
6.一種根據(jù)權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)制造的ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液。
7.如權(quán)利要求6所述的ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液，其特征在于，所述ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液對預(yù)防骨質(zhì)疏松癥有效。
8.一種制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其包括以下步驟清洗和壓碎魷魚骨和紅海藻；通過在1,000至2,000℃下燃燒壓碎的材料來制造無機(jī)礦物質(zhì)；將所述無機(jī)礦物質(zhì)冷卻到室溫并將所述無機(jī)礦物質(zhì)制成微小的粉末；采用壓碎方法在80至100℃的水中和10個(gè)大氣壓或更大的壓力下利用高度差通過水泵離子化所述微小的粉末；以及通過沉淀和過濾所述微小的粉末獲得堿性水溶液。
9.如權(quán)利要求8所述的制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其特征在于，用80至100℃水離子化所述微小的粉末的所述步驟持續(xù)1小時(shí)或更長。
10.如權(quán)利要求9所述的制造ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液的方法，其特征在于，所述沉淀步驟的完成時(shí)間是15至35小時(shí)。
11.一種根據(jù)權(quán)利要求8至10中任何一項(xiàng)制造的ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液，其特征在于，所述ENA礦物質(zhì)A生物活性溶液對預(yù)防骨質(zhì)疏松癥有效。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制造堿性礦物質(zhì)生物活性溶液的方法，所述溶液的原材料是在高溫下燃燒的魷魚骨以及壓碎的紅海藻粉末，并且涉及對預(yù)防骨質(zhì)疏松癥有功效的組合物和保健食品?？蓪⒈景l(fā)明的富含礦物質(zhì)的堿性水溶液用于對預(yù)防和改善包括人類在內(nèi)的哺乳動(dòng)物中的骨質(zhì)溶解和骨質(zhì)疏松癥等骨疾病有功效的生物活性溶液。
文檔編號A23L2/38GK1968612SQ200580019967
公開日2007年5月23日 申請日期2005年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月30日
發(fā)明者化成龍, 鄭圭植, 都先姬, 鄭元一, 鄭多喜, 李起喜, 趙恩美, 池勛 申請人:化成龍