專利名稱：酵母變異株、富含谷胱甘肽的酵母的制備方法、其培養(yǎng)物、其級分物、酵母提取物和含有谷 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及假絲酵母屬(Candida)的酵母變異株。更詳細(xì)的是，涉及在菌體內(nèi)可以含有大量還原型或氧化型谷胱甘肽的產(chǎn)朊假絲酵母(Candidautilis)的變異株，由培養(yǎng)該變異株獲得的培養(yǎng)物，級分物，酵母提取物和利用這些物質(zhì)的飲食品。
背景技術(shù)：
谷胱甘肽是由谷氨酸、甘氨酸、半胱氨酸這3種氨基酸構(gòu)成的三肽，在酵母和動物的肝臟，肌肉等的組織中廣泛分布，其在生物體內(nèi)與解毒作用和氧化還原平衡作用相關(guān)?；趯@種生理活性的認(rèn)識，谷胱甘肽現(xiàn)在逐漸被廣泛用作醇性脂肪肝的治療藥物和肝臟疾病治療藥物。
另一方面，近年來，隨著從健康意圖的觀點出發(fā)健康功能性食品受到人們關(guān)注，即使在食品領(lǐng)域中基于谷胱甘肽的生理活性，含有同物質(zhì)的食品也倍受矚目。
作為谷胱甘肽的工業(yè)制造方法，一般的方法是從酵母中提取，此時，獲得谷胱甘肽含量高的酵母就成為必要條件。
作為以往已知的谷胱甘肽高含量酵母的制備方法，有在培養(yǎng)基中添加氨基酸的方法(專利文獻1)，限制鋅離子的方法(專利文獻2)，在比通常條件更低的培養(yǎng)溫度下培養(yǎng)的方法(專利文獻3)等。此外，還有用突變劑處理的乙基硫氨酸亞硫酸鹽抗性株(專利文獻4)，多烯類抗生素抗性株(專利文獻5)等。
不過，為了工業(yè)上廉價地獲得谷胱甘肽，希望獲得谷胱甘肽含量更高的酵母。
專利文獻1特開昭53-94089號公報專利文獻2特開平1-141591號公報專利文獻3特開昭60-156379號公報專利文獻4特開昭59-151894號公報專利文獻5特開2003-284547公報發(fā)明的公開發(fā)明欲解決的課題本發(fā)明在上述技術(shù)背景下，以提供菌體內(nèi)具有大量谷胱甘肽的酵母和利用這種酵母的含有谷胱甘肽的飲食品作為課題。
用于解決課題的方法本發(fā)明人為了解決上述課題進行了積極的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，具有鎘抗性或大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性的酵母變異株在菌體內(nèi)含有比一般的野生酵母更多的谷胱甘肽，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
(1)具有鎘抗性或大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性，可以含有高濃度谷胱甘肽的酵母變異株。
(2)根據(jù)(1)記載的酵母變異株，前述酵母變異株的谷胱甘肽的菌體內(nèi)含量在0.3wt％或以上。
(3)根據(jù)(1)記載的酵母變異株，前述具有鎘抗性的酵母變異株是產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1560(保藏號FERM P-20094)。
(4)根據(jù)(1)記載的酵母變異株，前述大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是雷帕霉素。
(5)根據(jù)(1)記載的酵母變異株，前述具有大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性的酵母變異株是產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1561(保藏號FERM P-20095)。
(6)谷胱甘肽高含量酵母的制備方法，其特征在于有氧培養(yǎng)(1)至(5)任一項中記載的酵母變異株，使谷胱甘肽在該酵母菌體內(nèi)累積成高濃度。
(7)通過在有氧條件下培養(yǎng)(1)至(5)任一項中記載的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物。
(8)通過在有氧條件下培養(yǎng)(1)至(5)任一項中記載的酵母變異株而獲得的含有谷胱甘肽的上述培養(yǎng)物的級分物。
(9)使用通過在有氧條件下培養(yǎng)(1)至(5)任一項中記載的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物制備的酵母提取物。
(10)使用通過在有氧條件下培養(yǎng)(1)至(5)任一項中記載的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物而制備的干燥酵母菌體。
(11)含有谷胱甘肽的飲食品，其特征在于其含有通過在有氧條件下培養(yǎng)(1)至(5)任一項中記載的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物、包含谷胱甘肽的前述培養(yǎng)物的級分物。
發(fā)明的效果本發(fā)明的新型酵母變異株可以在菌體內(nèi)以高濃度含有谷胱甘肽。通過有氧培養(yǎng)本發(fā)明的新型酵母變異株可以使谷胱甘肽在該酵母菌體內(nèi)累積成高濃度。
因此，通過在有氧條件下培養(yǎng)本發(fā)明的新型的酵母變異株可以獲得含有高濃度谷胱甘肽的培養(yǎng)物或級分物。
此外，通過在有氧條件下培養(yǎng)本發(fā)明的新型的酵母變異株可以獲得含有高濃度谷胱甘肽的酵母提取物。
進而，通過使飲食品含有在有氧條件下培養(yǎng)本發(fā)明的新型的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物、包含谷胱甘肽的前述培養(yǎng)物的級分物或經(jīng)加熱處理的前述培養(yǎng)物或級分物，可以成為含有谷胱甘肽的飲食品。
用于實施發(fā)明的最佳方式以下，對發(fā)明進行詳細(xì)的說明。
本發(fā)明的新型的酵母變異株是具有鎘抗性或大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性、可以含有高濃度谷胱甘肽的酵母變異株。
此外，本發(fā)明的具有鎘抗性的酵母變異株是以產(chǎn)朊假絲酵母15-10株等作為親本株，通過突變處理，選擇與親本株相比重金屬抗性能力提高的變異株而獲得。
具體的是，用紫外線，電離輻射，亞硝酸，亞硝基胍，甲磺酸乙酯(以下簡稱為“EMS”)等變異原進行突變處理，選擇在含有鎘等重金屬的培養(yǎng)基上確認(rèn)了生長的變異株。
測定被選擇的變異株的菌體中含有的谷胱甘肽量，再選擇谷胱甘肽量增強的變異株，尋找可含有高濃度谷胱甘肽的變異株。作為此時使用的重金屬，可以使用鎘，水銀等。這樣一來，在本發(fā)明中，獲得了新型的變異株產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1560。
本發(fā)明的變異株產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1560在菌體中積累了相當(dāng)于干燥重量的0.3wt％或以上的谷胱甘肽。在本發(fā)明中的谷胱甘肽是指還原型和氧化型谷胱甘肽的谷胱甘肽總量。
此外，本發(fā)明的新型變異株產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1560的一般的菌學(xué)性質(zhì)除了鎘抗性外，與產(chǎn)朊假絲酵母的一般菌學(xué)性質(zhì)完全相同。本發(fā)明的新型變異株產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1560以“保藏號FERM P-20094”保藏。
此外，本發(fā)明的酵母變異株只要是具有大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性，進而在菌體內(nèi)可以含有大量氧化型和還原型谷胱甘肽的酵母，可以是任意一種。具體的是，可例舉有以產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1560株作為親本株，通過突變處理獲得的產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1561等。
所謂大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是具有大環(huán)狀內(nèi)酯的抗生素，作為本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，可以例舉有例如雷帕霉素、羊毛霉素(Renamycin)、蘭卡殺菌素C等。
為了獲得本發(fā)明的具有大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性的酵母變異株，具體的是，使用紫外線，電離輻射，亞硝酸，亞硝基胍，EMS等變異原，選擇在含有大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的培養(yǎng)基上確認(rèn)了生長的變異株。測定被選擇的變異株的菌體中含有的谷胱甘肽量，再選擇谷胱甘肽量增強的變異株，尋找可含有高濃度谷胱甘肽的變異株。這樣一來，在本發(fā)明中，獲得了新型的變異株產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1561。
本發(fā)明的具有大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性的變異株ABYC1561在菌體中積累了相當(dāng)于干燥重量的0.5wt％或以上的谷胱甘肽。在本發(fā)明中的谷胱甘肽是指還原型和氧化型谷胱甘肽的谷胱甘肽總量。
進而，本發(fā)明的新型變異株產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1561的一般的菌學(xué)性質(zhì)除了大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性外，與產(chǎn)朊假絲酵母的一般菌學(xué)性質(zhì)完全相同。本發(fā)明的新型變異株產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1561以“保藏號FERMP-20095”保藏。
本發(fā)明中，進而還提供了有氧培養(yǎng)變異株的谷胱甘肽高含量酵母的制備方法。
在本發(fā)明中，進而還提供了有氧培養(yǎng)上述酵母變異株制備谷胱甘肽高含量的酵母的方法。為了實施本發(fā)明，可以在含有碳源，氮源和無機鹽等的培養(yǎng)基中有氧培養(yǎng)前述方法獲得的鎘抗性變異株或大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性變異株。
作為這些菌株的培養(yǎng)基的組成，可以使用選自于通常的微生物培養(yǎng)中利用的葡萄糖，蔗糖，醋酸，乙醇，糖蜜和亞硫酸鹽紙漿廢液等中的1種或2種或以上物質(zhì)作為碳源，使用選自于尿素，氨，硫酸銨，氯化銨或磷酸銨等無機鹽和玉米漿(CSL)，酪蛋白，酵母提取物或蛋白胨等含氮有機物等中的1種或2種或以上物質(zhì)作為氮源。進而，還可以在培養(yǎng)基中添加磷酸成分，鉀成分，鎂成分，作為這些成分，可以是過磷酸鈣，磷銨(リン安)，氯化鉀，氫氧化鉀，硫酸鎂，鹽酸鎂等常規(guī)的工業(yè)用原料。此外，也可以添加鋅，銅，錳，鐵離子等無機鹽。此外，還可以添加維生素，核酸相關(guān)物質(zhì)等。
作為培養(yǎng)形式，可以是分批培養(yǎng)、流加培養(yǎng)或連續(xù)培養(yǎng)的任一種，但是工業(yè)中采用流加培養(yǎng)或連續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)溫度可以按照一般的酵母的培養(yǎng)條件，理想的是，例如20-40℃，優(yōu)選25-35℃，pH3.5-8.0，尤其是4.0-6.0。
由本發(fā)明的方法獲得了在酵母菌體中含有高濃度谷胱甘肽的培養(yǎng)物，但是也可以從培養(yǎng)物中獲得含有谷胱甘肽的級分物。作為從培養(yǎng)物中分級含有谷胱甘肽的級分物的方法，可以是常規(guī)進行的方法的任一種，但是可以列舉有通過熱水提取，通過菌體破碎提取等。此外，通過使獲得的提取物吸附在載體中，可以濃縮為含有高濃度谷胱甘肽的級分。
此外，還可以從經(jīng)上述方法培養(yǎng)的培養(yǎng)物中制備酵母提取物。作為制備酵母提取物的方法，可以是常規(guī)進行的方法的任一種方法，但是工業(yè)中采用自溶法，酶分解法或堿提取法等。
此外，也可以從經(jīng)上述方法培養(yǎng)的培養(yǎng)物中制備干燥酵母菌體。作為制備干燥酵母菌體的方法，可以是常規(guī)進行的方法的任一種方法，但是工業(yè)中采用冷凍干燥法，噴霧干燥法法或轉(zhuǎn)鼓式干燥法等。
進而，本發(fā)明還涉及含有通過在有氧條件下培養(yǎng)上述酵母變異株獲得的培養(yǎng)物、包含谷胱甘肽的前述培養(yǎng)物的級分物的飲食品。
作為這種飲食品，只要是可添加常規(guī)干燥酵母、酵母提取物的飲食品即可，可例舉有酒精飲料，清涼飲料，發(fā)酵食品調(diào)味料，湯類，一般食品，糕點等。
為了制備本發(fā)明的飲食品，可以在飲食品的制造過程中添加在好氧條件下培養(yǎng)上述酵母變異株獲得的培養(yǎng)物、包含谷胱甘肽的前述培養(yǎng)物的級分物。
因此，通過本發(fā)明可以有效制造含有高濃度谷胱甘肽的飲食品。
以下，通過列舉實施例來說明本發(fā)明。本發(fā)明并不受這些實施例的限定。
另外，菌體重量的測定是在用離心分離機2次水洗培養(yǎng)液后，使之在105℃干燥5小時后的重量求得。合并還原型和氧化型谷胱甘肽的總谷胱甘肽的定量按照Titze等人的方法(“Analytical Biochemistry”第27卷，第502頁，1969年)測定。干燥菌體中的總谷胱甘肽量(％(w/w))是獲得的總谷胱甘肽量與干燥菌體重量的比例計算獲得的百分率。
實施例1在含有YPD培養(yǎng)基(2％葡萄糖，2％蛋白胨，1％酵母提取物)的試管中培養(yǎng)產(chǎn)朊假絲酵母直至對數(shù)生長期。然后，回收菌體，按照常規(guī)方法用EMS進行變異處理。變異處理在死亡率成為約70％的條件下進行。
將如上所述實施了變異處理的15-10株接種于含有0.2mg/ml鎘的YPD培養(yǎng)基中，30℃下靜置培養(yǎng)48小時。其結(jié)果，分離了200株鎘抗性變異株。對于這些鎘抗性變異株，按照上述方法進行總谷胱甘肽量測定，獲得了菌體內(nèi)谷胱甘肽量增強的產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1560(保藏號FERM P-20094)。
實施例2在YPD培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)獲得鎘抗性的ABYC1560株(保藏號FERMP-20094)及其親本株15-10株18小時后，接種于YPD培養(yǎng)基中，30℃下進行本培養(yǎng)18小時。通過離心分離回收培養(yǎng)后的菌體，水洗2次后，在沸水浴中煮沸5分鐘，提取菌體內(nèi)的谷胱甘肽，按照上述方法實施總谷胱甘肽量的測定。干燥菌體中的總谷胱甘肽量，親本株(15-10)是0.52wt％，與之相對，鎘抗性株(ABYC1560株(保藏號FERM P-20094))為1wt％。
實施例3在含有YPD培養(yǎng)基(2％葡萄糖，2％蛋白胨，1％酵母提取物)的試管中培養(yǎng)產(chǎn)朊假絲酵母直至對數(shù)生長期。然后，回收菌體，按照常規(guī)方法用EMS進行變異處理。變異處理在死亡率成為約70％的條件下進行。
將如上所述實施了變異處理的ABYC1560株接種于含有1μg/ml的雷帕霉素的YPD瓊脂培養(yǎng)基中，30℃下靜置培養(yǎng)48小時。其結(jié)果，分離了745株雷帕霉素抗性變異株。對于這些抗性株，按照上述方法進行總谷胱甘肽量測定，獲得了菌體內(nèi)谷胱甘肽量增強的產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1561(保藏號FERM P-20095)。
實施例4在YPD培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)獲得雷帕霉素抗性的ABYC1561株及其親本株ABYC1560株18小時后，接種于YPD培養(yǎng)基中，30℃下進行本培養(yǎng)18小時。通過離心分離回收培養(yǎng)后的菌體，水洗2次后，在沸水浴中煮沸5分鐘，提取菌體內(nèi)的谷胱甘肽，按照上述方法實施總谷胱甘肽量的測定。干燥菌體中的總谷胱甘肽量，親本株(ABYC1560)是1.00％，與之相對，雷帕霉素抗性株(ABYC1561株(保藏號FERM P-20095))為1.82％。
工業(yè)上的利用可能性本發(fā)明在以下方面存在工業(yè)上的利用可能性。
本發(fā)明的新型酵母變異株可以在菌體內(nèi)含有高濃度谷胱甘肽，通過有氧培養(yǎng)本發(fā)明的新型酵母變異株可以使谷胱甘肽在該酵母菌體內(nèi)積累成高濃度。
因此，通過在有氧條件下培養(yǎng)本發(fā)明的新型的酵母變異株可以獲得含有高濃度谷胱甘肽的培養(yǎng)物或級分物。
此外，通過在有氧條件下培養(yǎng)本發(fā)明的新型的酵母變異株可以獲得含有高濃度谷胱甘肽的酵母提取物。
進而，通過使飲食品含有通過在有氧條件下培養(yǎng)本發(fā)明的新型的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物、包含谷胱甘肽的前述培養(yǎng)物的級分物或經(jīng)加熱處理的前述培養(yǎng)物或級分物，可以成為含有谷胱甘肽的飲食品。
權(quán)利要求
1.具有鎘抗性或大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性、可以含有高濃度谷胱甘肽的酵母變異株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1記載的酵母變異株，前述酵母變異株的谷胱甘肽的菌體內(nèi)含量在0.3wt％或以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1記載的酵母變異株，前述具有鎘抗性的酵母變異株是產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)ABYC1560(保藏號FERM P-20094)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1記載的酵母變異株，前述大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是雷帕霉素。
5.根據(jù)權(quán)利要求1記載的酵母變異株，前述具有大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性的酵母變異株是產(chǎn)朊假絲酵母ABYC1561(保藏號FERM P-20095)。
6.谷胱甘肽高含量酵母的制備方法，其特征在于有氧培養(yǎng)權(quán)利要求1至5任一項中記載的酵母變異株，使谷胱甘肽在該酵母菌體內(nèi)累積成高濃度。
7.培養(yǎng)物，其是通過在有氧條件下培養(yǎng)權(quán)利要求1至5任一項中記載的酵母變異株而獲得的。
8.通過在有氧條件下培養(yǎng)權(quán)利要求1至5任一項中記載的酵母變異株而獲得的含有谷胱甘肽的上述培養(yǎng)物的級分物。
9.酵母提取物，其是使用通過在有氧條件下培養(yǎng)權(quán)利要求1至5任一項中記載的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物制備的。
10.干燥酵母菌體，其是使用通過在有氧條件下培養(yǎng)權(quán)利要求1至5任一項中記載的酵母變異株獲得的培養(yǎng)物而制備的。
11.含有谷胱甘肽的飲食品，其特征在于其含有通過在有氧條件下培養(yǎng)權(quán)利要求1至5任一項中記載的酵母變異株而獲得的培養(yǎng)物、包含谷胱甘肽的前述培養(yǎng)物的級分物。
全文摘要
提供了在菌體內(nèi)具有大量谷胱甘肽的酵母。具有鎘抗性或大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗性、可以含有大量谷胱甘肽的酵母變異株。
文檔編號A23L1/305GK1977039SQ20058002212
公開日2007年6月6日 申請日期2005年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月2日
發(fā)明者山本佳津惠, 吉村香 申請人:朝日啤酒股份有限公司