專利名稱：：植物發(fā)育和形態(tài)學的修飾的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及修飾植物的發(fā)育和形態(tài)學的方法。本發(fā)明進一步涉及DNA序列調(diào)節(jié)植物組織中的外源基因表達的用途。本發(fā)明再進一步涉及用作啟動子的已鑒別DNA序列，所述啟動子有效引導在植物特定細胞中的表達。
背景技術(shù)：
：植物形態(tài)學控制在農(nóng)藝或園藝用途植物的商業(yè)生產(chǎn)中對提高生產(chǎn)能力和產(chǎn)量、提升耕作率和收獲率以及達到美學期望很重要。需要控制或修飾的特征可包括花、果實或塊莖的形態(tài)學；花、果實、種子或塊莖的品質(zhì)；初生根和側(cè)根的程度；地上枝或干的形式以及刺或螫毛的存在。期望能控制的其它特征包括葉、花或果實脫落的提前或延遲；種子釋放以及貯存器官或分泌腺的生產(chǎn)。由于環(huán)境對植物的影響，包括物理傷害、草食動物捕食、病原體感染、冷、熱和干旱，經(jīng)常發(fā)生形態(tài)學變化。它們經(jīng)?？捎幸獾赝ㄟ^物理(剪枝、曲枝、結(jié)捆、定標或切除特定器官或結(jié)構(gòu))或化學(施加農(nóng)用化學品和植物生長刺激素)的人為干預產(chǎn)生。無論哪個是致變因素，形態(tài)學改變都由植物自身細胞中的基因表達演繹。在變化發(fā)生時，在其中需要細胞生長、增殖、發(fā)育或壞死的具體組織中出現(xiàn)一個或多個基因的表達啟動，使總物理變化達到頂點?；虮磉_依靠其DNA序列，所述DNA序列通過RNA聚合酶作用轉(zhuǎn)錄為RNA。為實現(xiàn)此轉(zhuǎn)錄，RNA聚合酶必須識別并連接至位于基因編碼區(qū)上游(即5′)的DNA序列區(qū)，以便啟動轉(zhuǎn)錄。此區(qū)域稱為該基因的啟動子。啟動子序列的固有特征決定了基因表達的環(huán)境和方式。概括地講，在植物組織中存在4類啟動子組成型啟動子、組織特異型啟動子、發(fā)育調(diào)節(jié)型啟動子和誘導型/阻抑型啟動子，但應當理解，這些類型相互之間不一定是排它性的。組成型啟動子引導基因在植物發(fā)育過程中遍及植物各個部分連續(xù)表達，盡管所述基因在所有細胞類型中可能不以相同水平表達。已知組成型啟動子的實例包括與花椰菜花葉病毒35S轉(zhuǎn)錄物(Odell等，1985)、水稻肌動蛋白1基因(Zhang等，1991)和玉米泛素1基因(Cornejo等，1993)關(guān)聯(lián)的啟動子。組織特異型啟動子引導基因在植物的一個(或幾個)部分中表達，通常貫穿這些植物部分終生。組織特異型啟動子類別一般還包括其特異性不是絕對的啟動子，即其還可在非優(yōu)選組織的組織中以較低水平引導表達。本領(lǐng)域已知的組織特異型啟動子的實例包括與在馬鈴薯塊莖中表達的Patatin(馬鈴薯塊莖儲藏蛋白)基因和在小麥、大麥或玉米胚乳中表達的高分子量谷蛋白基因關(guān)聯(lián)的啟動子。發(fā)育調(diào)節(jié)型啟動子在植物的一個或多個部分中于植物發(fā)育過程中的特定時間引導基因表達改變。所述基因可在其它時間以不同(通常較低)的水平在該植物部分中表達，也可在其它植物部分中表達。誘導型啟動子能夠引導基因在誘導物作用下表達。在沒有誘導物時，基因不表達。誘導物可直接作用于啟動子序列，或者可通過抵消阻抑蛋白分子的作用起作用。誘導物可為化學物質(zhì)，例如代謝物、蛋白、生長調(diào)節(jié)物或毒性物質(zhì)、生理應力(如熱、傷害或滲透壓)，或者為病原體或害蟲作用的間接結(jié)果。發(fā)育調(diào)節(jié)型啟動子可描述為在植物生命周期中的特定時間點，對植物產(chǎn)生的內(nèi)源誘導物或環(huán)境刺激有反應的特定類型的誘導型啟動子。已知誘導型啟動子的實例包括如Warner等(1993)所述的與創(chuàng)傷反應關(guān)聯(lián)的啟動子、如Benfey和Chua(1989)公開的與溫度反應關(guān)聯(lián)的啟動子以及如Gatz(1995)所述的化學誘導啟動子。啟動子序列可包含眾多對其功能必須的限定結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)構(gòu)域中的第一個包含約70個堿基對，緊接著位于結(jié)構(gòu)基因上游(即5′)，形成核心啟動子。核心啟動子包含CAAT和TATA盒，確定基因的轉(zhuǎn)錄起始位點。核心啟動子上游的一系列調(diào)節(jié)序列構(gòu)成了啟動子序列的剩余部分，并決定了表達水平、表達的空間和時間模式以及對誘導物的響應。另外，某些啟動子含用于增強表達水平的序列元件，例如國際專利申請?zhí)朩O97/20056中描述的來源于豌豆質(zhì)體藍素啟動子的序列元件。植物的遺傳修飾依靠嵌合基因在植物細胞中的導入及其在啟動子引導之下的受控表達。啟動子可得自不同來源，包括動物、植物、真菌、細菌和病毒，不同的啟動子在不同組織中可以不同的效力起作用。啟動子還可以合成構(gòu)建。可能經(jīng)常期望在植物的眾多不同組織中表達導入的基因。例如，病原體或害蟲抗性或溫度極限耐受的表達最好能遍及植物中的所有組織。同樣可期望確保轉(zhuǎn)基因在植物整個發(fā)育過程總是表達。另外，以對誘導物或阻抑蛋白效應(起因于無法預料的環(huán)境刺激)免疫的方式表達的啟動子也可用于確保性狀的連續(xù)表達。對于這些用途，使用“組成型”啟動子應合乎需要。組成型啟動子的實例包括CaMV35S啟動子。對于谷類，泛素啟動子是組成型啟動子的一個選擇(Christensen和Quail，1996)。但是，在某些情況下，更期望控制基因表達在轉(zhuǎn)基因植物中的位置。這可通過確保在基因產(chǎn)物作用最有效的組織中優(yōu)先表達來增強基因表達的作用?；谕瑯佑^點，調(diào)節(jié)后的表達可通過限制植物資源流失而減少潛在產(chǎn)量損失。其它優(yōu)勢包括在基因產(chǎn)物必須限制在某些組織中或排除在某些組織外的情況下，通過局部化或區(qū)室化基因表達，將農(nóng)藝學上有用但一般有害的基因的表達限于特定組織中。例如，suc抑制基因的花藥特異性表達(Mariani等，1990)業(yè)已用于雄性不育系統(tǒng)，而在植物其它部分中的表達會產(chǎn)生毒性。在國際專利申請WO89/10396中描述了相似的細胞死亡系統(tǒng)，其中RNA酶蛋白和花藥特異性啟動子組合使用，以引起花藥細胞壞死，賦予植物雄性不育性。在國際專利申請WO02/33106和WO02/33107中描述了植物細胞死亡系統(tǒng)，其通過在線蟲取食位點特異性啟動子調(diào)節(jié)下表達核糖體失活蛋白(玉米核糖體失活蛋白，美洲商陸抗病毒蛋白)，提供了對線蟲感染的抗性。在這些情況下，通過既是組織特異性又對線蟲侵入有反應的啟動子增強有害基因表達的特異性。在某些情況下，可在植物中相似或不同的位置表達兩個或更多個轉(zhuǎn)基因。各轉(zhuǎn)基因均可在于一個以上植物區(qū)中表達的不同啟動子控制下表達。可選擇啟動子，以使其各自表達位點在一個或多個目標位置有重疊。此重疊位點使基因表達的特異性和靶向性增強。通過定向選擇各個轉(zhuǎn)基因編碼的基因產(chǎn)物，兩個轉(zhuǎn)基因的重疊表達可導致對靶組織的作用加合或增強，而轉(zhuǎn)基因中僅一個單獨在其它位置表達都可不對植物產(chǎn)生作用。例如，在國際專利申請WO02/33106中，來自玉米核糖體抑制蛋白(RIP)的兩個分離的肽結(jié)構(gòu)域在兩個不同組織特異性啟動子調(diào)節(jié)下表達，所述結(jié)構(gòu)域具有不同的表達譜，但仍然共有一個位點，導致在重疊部位產(chǎn)生活性蛋白。相反，兩個轉(zhuǎn)基因可編碼效應分子和激動劑分子或殺蟲劑。在此情況下，效應分子在其表達的所有位置都影響植物，除了表達位點與激動劑或殺蟲劑分子的表達位點重疊的位置。在NZ260511中提出了具有增加的組織特異性的植物細胞死亡系統(tǒng)。該系統(tǒng)含細胞毒性分子表達(處于第一個啟動子控制之下，所述第一個啟動子在特異性靶細胞中以及植物中的一個或多個其它部位引起表達)，連同保護性分子表達(處于第二個啟動子控制之下，所述第二個啟動子在第一個啟動子有活性的所有位點引起表達，特異性靶細胞除外)。合適的細胞毒性和保護性分子的實例分別為蛋白酶和蛋白酶抑制劑，或分別為核酸酶和核酸酶抑制劑。WO93/10251公開了細胞毒性核糖核酸酶分子Barnase連同保護性抑制劑分子Barstar的用途。國際專利申請?zhí)朩O98/44138中提供了雙組分轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)的另一個實例。該系統(tǒng)包含在啟動子控制下的基因產(chǎn)物表達，選擇所述啟動子和基因產(chǎn)物，以使其各自的表達和效應位點在目標位置有重疊。啟動子引導在植物特定細胞連同一個或多個其它位點中的表達，而基因產(chǎn)物的分子靶標存在于也包含特異性靶細胞在內(nèi)的第二個細胞范圍內(nèi)。此重疊位點使基因表達對目標位置細胞的特異性和靶向性增強。通過定向選擇由轉(zhuǎn)基因編碼的基因產(chǎn)物，非靶細胞中的表達對植物不產(chǎn)生作用。特定組織局部表達有害基因的主要應用在于修飾植物形態(tài)學，例如通過控制某些組織或器官的壞死或阻止某些組織或器官發(fā)育，所述組織或器官例如為開花結(jié)構(gòu)、子實體、貯藏組織、枝條、葉組織、根組織、離區(qū)、分泌腺、刺細胞、毛狀體或刺。局部表達有害基因以修飾植物形態(tài)學的具體用途可為防止葉腋分生組織的側(cè)枝側(cè)生長。腋分生組織和側(cè)芽的解剖學描述于Esau(1960)。當去除或降低頂枝優(yōu)勢度時，最經(jīng)常發(fā)生側(cè)枝側(cè)生長；例如當通過物理損傷或草食動物捕食偶然損傷或去除頂枝時，或者作為農(nóng)業(yè)實踐的一部分如矮林作業(yè)損傷或去除頂枝時。修飾例如內(nèi)源植物生長刺激物質(zhì)的生產(chǎn)、轉(zhuǎn)運、檢測或代謝的其它改變也可引起腋分生組織側(cè)生長。側(cè)枝或“側(cè)枝芽”可能由于純美學原因而不合需要，可產(chǎn)生具有無用形態(tài)學的植物，或者可通過用作各種代謝物或植物生長物質(zhì)的附加源或壑而對植物整體具有有害的代謝作用。發(fā)生側(cè)芽側(cè)生長的一個實例出現(xiàn)在市售煙草栽培物中，在該栽培物中含花序和頂葉的頂枝以一種稱為“切除尖端”的方法在植物生長過程中的特定時間被去除，以刺激保留葉的生長和發(fā)育、增強根生長以及促使代謝物和次生化合物再分配至植物葉。切除尖端法的缺點是其還刺激側(cè)枝側(cè)生長，由此抵消了期望的代謝物再分配。該作用通常通過高度勞力密集的物理去除側(cè)枝或施加化學枝條抑制劑如馬來酰肼克服，所述化學枝條抑制劑既在材料上昂貴，又可能導致在收獲的植物上存有化學殘余物。因此，通過特異性引導這些涉及側(cè)芽側(cè)生長的細胞裂解阻止這種“萌條”的系統(tǒng)為煙草栽培物提供了巨大利益。核糖體失活蛋白(RIP)是一組催化失活真核生物核糖體的毒性植物蛋白(Stirpe和Barbieri1986)。PIP用作N-糖苷酶，以去除大rRNA保守環(huán)中的特異性腺嘌呤，由此防止延長因子2結(jié)合，因此封閉細胞蛋白合成。業(yè)已描述了3種形式的RIP。1型RIP如美洲商陸抗病毒蛋白和大麥翻譯抑制劑各自均由單個多肽鏈組成，各自均具有約30,000的Mr值。2型RIP如蓖麻蛋白、相思豆毒蛋白和莫迪素(modeccin)各自均含兩條多肽鏈，一條具有RIP活性，通過二硫鍵連接至另一條結(jié)合半乳糖的凝集素鏈。3型RIP如玉米RIP含單個多肽鏈，其隨后經(jīng)歷蛋白酶剪切，以釋放兩個活性肽結(jié)構(gòu)域。美洲商陸(Phytolaccaamericana)產(chǎn)生3種不同的抗病毒蛋白，即分別出現(xiàn)在春季葉、夏季葉和種子中的PAP′、PAPII和PAP-S。業(yè)已觀測了這3種蛋白之間的氨基酸相似性。本文使用的‘PAP’涵蓋全部這3種抗病毒蛋白。US6015940公開了由美洲商陸春季葉制備的PAP′cDNA克隆制備物及其在組成型啟動子(或者是花椰菜花葉病毒35S啟動子，或者是玄參花葉病毒35S啟動子)控制下生產(chǎn)抗病毒PVX和PVY感染的轉(zhuǎn)基因煙草和馬鈴薯植物的用途。在WO99/60843中已描述了含秋季葉形式的PAP、PAP-II的轉(zhuǎn)基因植物。為了鑒別保留抗病毒活性但未表現(xiàn)出植物毒性的那些病毒PAP-II蛋白，篩選眾多全長和截短的PAP-II基因序列。轉(zhuǎn)基因植物同時表現(xiàn)出抗病毒和抗真菌活性。PAP基因首先在葉中體內(nèi)表達，以產(chǎn)生失活Pro-PAP蛋白。已知在翻譯后Pro-PAP′蛋白分子被靶向細胞壁。在此過程中的某些階段，Pro-PAP′分子的N-和C-末端突出端被裂解，產(chǎn)生活化的PAP′分子(成熟PAP′)。就PAP-S(在種子中表達)而言，細胞定位是未知的。但是，PAP-S的N-末端加工區(qū)似乎具有類似于用于靶向的信號序列的特性。成熟PAP-S蛋白的結(jié)構(gòu)，即去除了N-和C-末端突出端的結(jié)構(gòu)，可以兩個單獨的結(jié)構(gòu)域描述，這兩個單獨的結(jié)構(gòu)域?qū)?型RIP的兩個結(jié)構(gòu)域或2型RIP的兩個多肽，即核糖體結(jié)合域和催化域。發(fā)明概述在本發(fā)明的一個方面，提供一種修飾植物形態(tài)學的方法，該方法包括將至少一種嵌合基因?qū)胫参镏?，所述嵌合基因包含與核酸序列有效連接的啟動子序列，所述啟動子序列有效引導植物特定細胞中的表達，所述核酸序列編碼至少一種能夠改變特定細胞和/或鄰近細胞代謝的基因產(chǎn)物。在一個實施方案中，所述基因產(chǎn)物能夠增強特定細胞和/或鄰近細胞的代謝或增進特定細胞和/或鄰近細胞的活力。在另一個優(yōu)選實施方案中，所述基因產(chǎn)物能夠破壞特定細胞和/或鄰近細胞的代謝或引起特定細胞和/或鄰近細胞的死亡。在又一方面，本發(fā)明提供一種修飾植物形態(tài)學的方法，該方法包括將至少一種嵌合基因?qū)胫参镏?，所述嵌合基因包含與核酸序列有效連接的啟動子序列，所述啟動子序列有效引導在側(cè)芽和/或側(cè)枝中顯著特異性地表達，優(yōu)選在側(cè)芽發(fā)端細胞中顯著特異性地表達，所述核酸編碼至少一種能夠改變側(cè)芽和/或側(cè)芽發(fā)端細胞和/或鄰近細胞代謝的基因產(chǎn)物。在一個實施方案中，基因產(chǎn)物能夠增強特定細胞和/或鄰近細胞的代謝或增進特定細胞和/或鄰近細胞的活力。在另一個優(yōu)選實施方案中，所述基因產(chǎn)物能夠破壞特定細胞和/或鄰近細胞的代謝或引起特定細胞和/或鄰近細胞的死亡。本文使用的術(shù)語“顯著特異性地”指本發(fā)明啟動子有效引導主要在側(cè)芽和/或側(cè)枝中的表達。本發(fā)明啟動子除了可有效引導在側(cè)芽和/或側(cè)枝中的表達以外，還可有效引導在植物中其它細胞類型或組織中的表達，前提是在側(cè)芽和/或側(cè)枝內(nèi)存在優(yōu)勢表達(即植物中整體(總)表達的至少51％以上)。本發(fā)明啟動子除了可有效引導在側(cè)芽和/或側(cè)枝中的表達以外，還可有效引導在植物中其它細胞類型或組織中的表達，前提是植物中的整體表達僅影響(或顯著影響)分生組織側(cè)生長。本發(fā)明啟動子除了可有效引導在側(cè)芽和/或側(cè)枝中的表達以外，還可有效引導在植物其它細胞類型或組織中的表達，前提是整體表達不致死植物。優(yōu)選地，本文使用的術(shù)語“顯著特異性地”指本發(fā)明啟動子有效引導主要在植物側(cè)芽和/或側(cè)枝中的表達，使得例如與所述啟動子有效連接的核酸序列主要在側(cè)芽和/或側(cè)枝中表達，所述核酸序列在植物的任意其它植物組織或細胞中的表達低于整體表達水平的50％，優(yōu)選低于25％，優(yōu)選低于10％，更優(yōu)選低于5％。例如，在本發(fā)明啟動子控制下表達的核酸序列主要可在側(cè)芽和/或側(cè)枝中表達，在任意其它組織中的表達低于整體表達水平的25％，優(yōu)選低于10％，更優(yōu)選低于5％。所述啟動子序列可包含SEQIDNo.1、SEQIDNo.7或SEQIDNo.4所示序列或其功能部分，或與其具有至少60％同一性的序列。優(yōu)選所述啟動子序列為SEQIDNo.1、SEQIDNo.7或SEQIDNo.4所示序列或其功能部分，或與其具有至少60％同一性的序列。優(yōu)選所述啟動子序列包含SEQIDNo.1所示序列或其功能部分，或與其至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％相同的序列。優(yōu)選所述啟動子序列包含SEQIDNo.7所示序列或其功能部分，或與其至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％相同的序列。在本發(fā)明的一個實施方案中，植物形態(tài)學受到一個或多個基因產(chǎn)物的影響，優(yōu)選受到一個基因產(chǎn)物的影響。在本發(fā)明的另一個實施方案中，植物形態(tài)學受到兩個或更多個基因產(chǎn)物的影響。優(yōu)選所述核酸序列編碼兩個或更多個基因產(chǎn)物。因此，僅作為實例，可將一個嵌合基因?qū)氲街参镏?，所述嵌合基因包含編碼兩個或更多個基因產(chǎn)物的核酸序列?；蛘呖蓪蓚€或更多個嵌合基因?qū)氲街参镏?，每個嵌合基因均含有編碼基因產(chǎn)物的核酸序列。僅作為實例，可將兩個或更多個嵌合基因?qū)氲街参镏?，每個嵌合基因均含有編碼一個或多個基因產(chǎn)物的核酸序列。因此，例如，一個嵌合基因可包含編碼一個基因產(chǎn)物的核酸序列，另一個嵌合基因可包含編碼多個基因產(chǎn)物(即2、3或4個基因產(chǎn)物)的核酸序列。或者，兩個嵌合基因可包含編碼多個基因產(chǎn)物的核酸序列。優(yōu)選所述兩個或更多個基因產(chǎn)物彼此獨立地起作用，以通過加合作用實現(xiàn)對細胞代謝的破壞。或者，所述兩個或更多個基因產(chǎn)物彼此相互作用，以通過協(xié)同作用或拮抗作用實現(xiàn)對細胞代謝的破壞。優(yōu)選修飾側(cè)枝側(cè)生長。側(cè)枝側(cè)生長可增強。適宜地，可防止或降低和/或延遲側(cè)枝側(cè)生長。優(yōu)選通過破壞參與側(cè)芽發(fā)育的細胞的代謝或引起該細胞的死亡來修飾側(cè)枝側(cè)生長。參與側(cè)芽發(fā)育的細胞可包括原分生組織細胞、原表皮層細胞、表皮層細胞、氣孔細胞、保衛(wèi)細胞、內(nèi)皮層細胞、周皮細胞、皮層薄壁組織細胞、刺細胞、儲藏細胞、胚珠內(nèi)胚乳細胞、花粉細胞、離區(qū)細胞、毛狀體細胞、分泌細胞、木栓細胞、木栓形成層細胞、栓內(nèi)層細胞、原形成層細胞、形成層細胞、原生木質(zhì)部細胞、木質(zhì)部細胞、射線細胞、原生韌皮部細胞、韌皮部細胞、厚角組織細胞、厚壁組織細胞、薄壁組織細胞、綠色組織細胞、原套細胞、原體細胞、皮層細胞、先出葉結(jié)構(gòu)細胞和葉結(jié)構(gòu)細胞。本文使用的術(shù)語“特定細胞”指其中啟動子優(yōu)勢表達的細胞，優(yōu)選其中啟動子顯著特異性表達的細胞。術(shù)語“植物特定細胞”包括側(cè)芽和/或側(cè)枝細胞，即參與側(cè)芽發(fā)端和/或發(fā)育的細胞。在一個實施方案中，“植物特定細胞”優(yōu)選為側(cè)芽和/或側(cè)枝細胞。在一個實施方案中，植物特定細胞可為以下的一種或多種細胞原分生組織細胞、原表皮層細胞、表皮層細胞、氣孔細胞、保衛(wèi)細胞、內(nèi)皮層細胞、周皮細胞、皮層薄壁組織細胞、刺細胞、儲藏細胞、胚珠內(nèi)胚乳細胞、花粉細胞、離區(qū)細胞、毛狀體細胞、分泌細胞、木栓細胞、木栓形成層細胞、栓內(nèi)層細胞、原形成層細胞、形成層細胞、原生木質(zhì)部細胞、木質(zhì)部細胞、射線細胞、原生韌皮部細胞、韌皮部細胞、厚角組織細胞、厚壁組織細胞、薄壁組織細胞、綠色組織細胞、原套細胞、原體細胞、皮層細胞、先出葉結(jié)構(gòu)細胞和葉結(jié)構(gòu)細胞。本文使用的術(shù)語“優(yōu)勢表達的”指本發(fā)明啟動子有效引導主要(即大于總表達的51％)在植物特定細胞(例如側(cè)芽和/或側(cè)枝細胞)中的表達，盡管在其它細胞類型或組織中可存在較低水平的表達。例如，業(yè)已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明啟動子有效引導主要在側(cè)芽和/或側(cè)枝中的表達，但在別的組織或細胞類型中也可有表達。例如，在創(chuàng)傷組織和/或莖和/或葉組織中也可有表達。適宜地，可防止或降低和/或延遲側(cè)芽或側(cè)枝的側(cè)生長。優(yōu)選通過破壞參與側(cè)芽和/或側(cè)枝發(fā)育的細胞代謝或引起參與側(cè)芽和/或側(cè)枝發(fā)育的細胞死亡來修飾側(cè)芽或側(cè)枝的側(cè)生長。本文使用的術(shù)語“側(cè)芽組織”包括側(cè)芽細胞和/或側(cè)枝細胞。優(yōu)選能夠破壞特定細胞和/或鄰近細胞代謝或引起特定細胞和/或鄰近細胞死亡的核酸序列的基因產(chǎn)物為有害產(chǎn)物，適宜地為細胞毒性分子。優(yōu)選能夠破壞特定細胞和/或鄰近細胞代謝或引起特定細胞和/或鄰近細胞死亡的核酸序列的基因產(chǎn)物為核糖體失活蛋白(RIP)或其變體或功能部分。例如，RIP可為1型RIP和/或2型RIP和/或3型RIP或其變體或功能部分。所述基因產(chǎn)物優(yōu)選為美洲商陸抗病毒蛋白(PAP)或其變體或功能部分。所述基因產(chǎn)物可為PAP′或PAPII或其變體或功能部分。更優(yōu)選所述基因產(chǎn)物為美洲商陸抗病毒蛋白S(PAP-S)或其變體或功能部分。本發(fā)明還提供核酸，所述核酸含如SEQIDNo.1所示的啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少65％同一性、更優(yōu)選與其具有至少75％同一性、更優(yōu)選與其具有至少85％同一性、更優(yōu)選與其具有至少95％同一性、更優(yōu)選與其具有至少97％同一性、更優(yōu)選與其具有至少98％同一性、最優(yōu)選與其具有至少99％同一性并能夠調(diào)節(jié)基因表達的序列。本發(fā)明還提供核酸，所述核酸含如SEQIDNo.7所示的啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少65％同一性、更優(yōu)選與其具有至少75％同一性、更優(yōu)選與其具有至少85％同一性、更優(yōu)選與其具有至少95％同一性、更優(yōu)選與其具有至少97％同一性、更優(yōu)選與其具有至少98％同一性、最優(yōu)選與其具有至少99％同一性并能夠調(diào)節(jié)基因表達的序列。本發(fā)明還提供嵌合基因，所述嵌合基因含與核酸序列有效連接、如SEQIDNo.1所示的啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少65％同一性、更優(yōu)選與其具有至少75％同一性、更優(yōu)選與其具有至少85％同一性、更優(yōu)選與其具有至少95％同一性、更優(yōu)選與其具有至少97％同一性、更優(yōu)選與其具有至少98％同一性、最優(yōu)選與其具有至少99％同一性并能夠調(diào)節(jié)基因表達的序列。本發(fā)明還提供嵌合基因，所述嵌合基因含與核酸序列有效連接、如SEQIDNo.7所示的啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少65％同一性、更優(yōu)選與其具有至少75％同一性、更優(yōu)選與其具有至少85％同一性、更優(yōu)選與其具有至少95％同一性、更優(yōu)選與其具有至少97％同一性、更優(yōu)選與其具有至少98％同一性、最優(yōu)選與其具有至少99％同一性并能夠調(diào)節(jié)基因表達的序列。本發(fā)明還提供嵌合基因，所述嵌合基因含與核酸序列有效連接、如SEQIDNo.4所示的啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少65％同一性并能夠調(diào)節(jié)基因表達的序列。優(yōu)選本發(fā)明的核酸序列和/或核酸和/或本發(fā)明的嵌合基因為DNA序列。在一個實施方案中，本發(fā)明的嵌合基因是可獲得的，優(yōu)選得自克隆pBNP085-0501-001(NCIMB41343)。優(yōu)選地，所述核酸序列能夠調(diào)節(jié)附加序列的表達。適宜地，所述附加序列編碼蛋白或RNA、共抑制序列、反義序列或dsRNA(雙鏈RNA)抑制序列。優(yōu)選地，所述附加序列是可獲得的，優(yōu)選得自植物。所述植物可為茄科家族一員。優(yōu)選地，所述植物可為夜香樹亞科(Cestroideae)亞家族一員。更優(yōu)選所述植物為以下的一種或多種番茄、馬鈴薯、茄子、碧冬茄屬或煙草。更優(yōu)選所述植物來自煙草(Nicotiana)屬。最優(yōu)選所述植物為普通煙草(Nicotianatabacum)。優(yōu)選所述附加序列能夠破壞特定細胞和/或鄰近細胞的代謝或引起特定細胞和/或鄰近細胞的死亡。優(yōu)選所述附加序列編碼美洲商陸抗病毒蛋白或其功能部分。本文提到的核酸序列和/或核酸和/或嵌合基因可為分離的序列，或者可為合成序列。本發(fā)明還提供含載體DNA和本發(fā)明核酸序列和/或本發(fā)明核酸和/或本發(fā)明啟動子序列和/或本發(fā)明嵌合基因的重組DNA。適宜地，所述重組DNA還可包含基因編碼序列。優(yōu)選地，所述載體DNA包括質(zhì)粒、粘粒、病毒或噬菌體。適宜地，所述重組DNA可包含引導選擇標記基因表達的啟動子。優(yōu)選地，所述重組DNA處于宿主細胞中。適宜地，所述宿主細胞可允許所述重組DNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯。本發(fā)明進一步提供按照本發(fā)明方法生產(chǎn)的植物。本發(fā)明進一步提供基因工程改造過的植物，其包含本發(fā)明的核酸序列和/或核酸和/或啟動子序列和/或嵌合基因。優(yōu)選地，所述核酸和/或啟動子序列與基因編碼序列有效連接。按照本發(fā)明的再一方面，提供含本發(fā)明重組DNA的植物。本發(fā)明植物可為園藝產(chǎn)業(yè)、花藝產(chǎn)業(yè)、林學產(chǎn)業(yè)和/或農(nóng)藝產(chǎn)業(yè)的目標。所述植物可以是為提供切花而培育的植物。所述植物可為番茄、黃瓜、碧冬茄屬、石竹、云杉、松屬、桉屬、楊屬、雙子葉植物物種，例如馬鈴薯、煙草、棉花、萵苣、茄子、甜瓜、南瓜、豌豆、卡諾拉、大豆、糖甜菜或向日葵，或單子葉植物物種，例如小麥、大麥、黑麥、稻或玉米。更優(yōu)選所述植物屬于茄科家族。更優(yōu)選所述植物屬于夜香樹亞科(Cestroideae)亞家族。更優(yōu)選所述植物為以下的一種或多種番茄、馬鈴薯、茄子、碧冬茄屬或煙草。更優(yōu)選所述植物屬于煙草(Nicotiana)屬。最優(yōu)選所述植物為普通煙草(Nicotianatabacum)。本發(fā)明再進一步提供按照本發(fā)明方法生產(chǎn)的植物的植物細胞，所述植物細胞具有改變的代謝。按照本發(fā)明方法生產(chǎn)的植物細胞可具有被改變得增強其代謝的代謝。優(yōu)選地，按照本發(fā)明生產(chǎn)的植物細胞具有被破壞的代謝。本發(fā)明還提供基因工程改造過的植物細胞，其包含本發(fā)明的核酸序列。優(yōu)選地，本發(fā)明的核酸和/或本發(fā)明的啟動子序列與基因編碼序列有效連接。在本發(fā)明的再另一方面，提供含本發(fā)明重組DNA的植物細胞。優(yōu)選地，本發(fā)明核酸和/或本發(fā)明啟動子序列與基因編碼序列有效連接。本發(fā)明還提供調(diào)節(jié)植物中的基因表達的方法，該方法包括將與基因編碼序列有效連接的本發(fā)明核酸和/或本發(fā)明啟動子序列導入植物中，所述基因的表達受到調(diào)節(jié)。本發(fā)明進一步提供修飾轉(zhuǎn)基因植物細胞中的代謝的方法，該方法包括將本發(fā)明核酸和/或本發(fā)明啟動子序列和/或本發(fā)明嵌合基因?qū)胫参镏?。?yōu)選地，該方法包括將本發(fā)明核酸和/或本發(fā)明啟動子序列和/或本發(fā)明嵌合基因?qū)爰毎?。?yōu)選地，本發(fā)明核酸或本發(fā)明啟動子序列與基因編碼序列有效連接。有利地，所述基因參與代謝途徑。優(yōu)選地，代謝產(chǎn)物在細胞中增加或減少。本發(fā)明再進一步提供改變植物細胞中的基因產(chǎn)物生產(chǎn)的方法，該方法包括導入與基因編碼序列有效連接的本發(fā)明核酸和/或本發(fā)明啟動子序列，改變所述基因的基因產(chǎn)物的生產(chǎn)。優(yōu)選地，基因產(chǎn)物生產(chǎn)增加。優(yōu)選地，所述基因產(chǎn)物為RNA分子，其可通過RNAi、反義或共抑制機制與基因表達過程相互作用，或者其可翻譯為蛋白基因產(chǎn)物。優(yōu)選地，所述蛋白基因產(chǎn)物為蛋白酶、限制性內(nèi)切核酸酶、膜轉(zhuǎn)運蛋白、核糖核酸酶或核糖體失活蛋白。優(yōu)選地，所述核糖體失活蛋白為美洲商陸抗病毒蛋白(PAP)。PAP可為PAP′或PAPII。更優(yōu)選所述美洲商陸抗病毒蛋白為PAP-S或其變體或其功能部分。本發(fā)明進一步提供核酸調(diào)節(jié)植物中的基因表達的用途，所述核酸含如SEQIDNo.1或SEQIDNo.7所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少60％同一性的序列。本發(fā)明還提供核酸調(diào)節(jié)植物中的基因表達的用途，所述核酸含如SEQIDNo.1所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％同一性的序列。本發(fā)明還提供核酸調(diào)節(jié)植物中的基因表達的用途，所述核酸含如SEQIDNo.7所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％同一性的序列。本發(fā)明還提供核酸改變植物細胞中的代謝的用途，所述核酸含如SEQIDNo.1或SEQIDNo.7或SEQIDNo.4所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少60％同一性的序列。本發(fā)明還提供核酸改變植物細胞中的代謝的用途，所述核酸含如SEQIDNo.1所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％同一性的序列。本發(fā)明還提供核酸改變植物細胞中的代謝的用途，所述核酸含如SEQIDNo.7所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％同一性的序列。本發(fā)明再進一步提供核酸改變植物細胞中基因產(chǎn)物生產(chǎn)的用途，所述核酸含如SEQIDNo.1或SEQIDNo.7或SEQIDNo.4所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少60％同一性的序列。本發(fā)明還提供核酸改變植物細胞中基因產(chǎn)物生產(chǎn)的用途，所述核酸含如SEQIDNo.1所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％同一性的序列。本發(fā)明還提供核酸改變植物細胞中基因產(chǎn)物生產(chǎn)的用途，所述核酸含如SEQIDNo.7所示啟動子序列或其功能部分，或與其具有至少75％、優(yōu)選至少80％、優(yōu)選至少90％、優(yōu)選至少97％同一性的序列。本發(fā)明還提供與本發(fā)明核酸序列選擇性雜交的寡核苷酸探針。本發(fā)明還可提供SEQIDNo.1的一部分，其中所述部分來自SEQIDNo.1的核苷酸1至核苷酸1321或其部分。所述核苷酸1至核苷酸1321的部分可為SEQIDNo.1的“功能部分”。本發(fā)明還可提供SEQIDNo.7的一部分，其中所述部分來自SEQIDNo.7的核苷酸1至核苷酸1309或其部分。所述核苷酸1至核苷酸1309的部分可為SEQIDNo.7的“功能部分”。所述“功能部分”我們指有效引導植物特定細胞中的表達的部分。本發(fā)明的任意方面均可涉及僅一個或一個以上的本文提及序列。本文使用的術(shù)語“嵌合基因”指在不同來源的核酸序列連接在一起時形成的任意雜合核酸分子。在本發(fā)明中，“鄰近細胞”是足夠接近特定細胞以至于受特定細胞中的表達影響的細胞，即可將“鄰近細胞”定義為可分化為側(cè)芽組織的細胞(即在側(cè)芽發(fā)端細胞已按照本發(fā)明改變的情況下)或支持側(cè)芽和/或側(cè)枝生長的細胞。序列標識符在序列表中SEQIDNo.1顯示了本發(fā)明的分離啟動子的DNA序列。SEQIDNo.2顯示了PCR寡核苷酸S2PCLOFWD。SEQIDNo.3顯示了PCR寡核苷酸S2PCLOREV。SEQIDNo.4顯示了本發(fā)明的另一個分離啟動子(本文稱為“ATC023啟動子”)的DNA序列。SEQIDNo.5顯示了PCR寡核苷酸AT4G29190L。SEQIDNo.6顯示了PCR寡核苷酸AT4G29190R。SEQIDNo.7顯示了本發(fā)明的分離啟動子(本文稱為“ATC085啟動子”)的DNA序列。附圖簡述為了能夠容易地實現(xiàn)本發(fā)明，作為示例，現(xiàn)在參考以下附圖，其中圖1顯示了SEQIDNo.1和Sar8.2b啟動子(Genbank檢索號U648116)的比對。圖2顯示了ATC023啟動子序列與基因座AT4g29190[染色體414396379-14392944，反向]附近的擬南芥(Arabidopsisthaliana)基因組的比對。AT4g29190基因的5′上游區(qū)以斜體顯示，5′和3′非翻譯區(qū)以小寫字母顯示。方框表示AT4g29190基因的起始密碼子和終止密碼子。用于克隆ATC023啟動子的引物位點標以下劃線。核苷酸改變以雙下劃線顯示。圖3顯示了由ATC085啟動子驅(qū)動的GUS報告基因表達在煙草莖切片中的位置。(a)-(c)顯示了在側(cè)芽發(fā)端區(qū)通過莖的切片；(d)顯示了通過同一側(cè)芽發(fā)端區(qū)的3個連續(xù)切片；和(e)顯示了通過葉腋的垂直切片。圖4a顯示了與對照(NCC)植物相比由ATC085啟動子驅(qū)動的美洲商陸抗病毒蛋白表達對切除尖端后煙草側(cè)芽17和18側(cè)生長的作用。圖4b顯示了與對照(NCC)植物相比由ATC085啟動子驅(qū)動的美洲商陸抗病毒蛋白表達對切除尖端后煙草側(cè)芽16側(cè)生長的作用。圖5顯示了切除尖端時煙草中的側(cè)枝側(cè)生長以及用ATC085-PAP轉(zhuǎn)化的作用；(a)顯示了未轉(zhuǎn)化的對照植物，表現(xiàn)出延長的側(cè)枝側(cè)生長；(b)顯示了ATC085-PAP轉(zhuǎn)基因植物，未表現(xiàn)出可見的芽側(cè)生長。圖6顯示了由ATC023啟動子驅(qū)動的GUS報告基因表達在切除尖端后的煙草莖切片中的位置，(a)顯示了在側(cè)芽發(fā)端區(qū)通過一棵植株莖的切片；(b)和(c)顯示了取自不同植株的通過兩個側(cè)芽發(fā)端區(qū)的連續(xù)切片；和(d)顯示了通過葉腋的垂直切片。圖7顯示了由ATC023啟動子驅(qū)動的GUS報告基因表達在擬南芥莖切片中的位置，(a)顯示了在芽發(fā)育早期芽側(cè)生長點的表達，(b)-(d)顯示了在發(fā)育中的芽和鄰近組織中的隨后表達。發(fā)明詳述適宜地，本發(fā)明的啟動子序列包含與SEQIDNo.1或SEQIDNo.7所示序列或其功能部分中的任一個具有至少65％、優(yōu)選至少70％、更優(yōu)選至少75％、更優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少85％、更優(yōu)選至少90％、更優(yōu)選至少95％、更優(yōu)選至少97％、更優(yōu)選至少98％、最優(yōu)選至少99％同一性的核苷酸序列。本文使用的術(shù)語“啟動子”以本領(lǐng)域的通常含義使用，例如RNA聚合酶結(jié)合位點。本文使用的“改變代謝”指以改變細胞正常功能代謝的方式影響細胞的代謝功能，導致細胞的正常功能被增強或抑制。本文使用的術(shù)語“破壞代謝”指以干擾細胞正常功能代謝的方式改變細胞的代謝功能，導致細胞死亡或細胞正常功能的抑制。本文使用的術(shù)語“增強代謝”指以增進細胞生長或活力的方式改變細胞的代謝功能。本文使用的“側(cè)芽發(fā)端細胞”指與側(cè)芽生長發(fā)端相關(guān)的細胞。本文使用的“修飾形態(tài)學”指改變植物的正常生長習性，其顯現(xiàn)為植株部分或整體的物理變化。例如，植物側(cè)枝生長可增強。優(yōu)選地，植物側(cè)枝生長被抑制或阻止。任一種方式都可改變植物的整體物理結(jié)構(gòu)和/或外觀。植物DNA序列可由天然宿主細胞回收，或者可直接體外合成。由天然宿主提取能夠從頭分離新序列，而體外DNA合成一般需要預先存在的序列信息。直接體外化學合成可通過順序人工合成或通過自動化步驟實現(xiàn)。DNA序列還可通過標準退火和連接片段技術(shù)或通過本領(lǐng)域已知的其它方法構(gòu)建。Sambrook等(1989)中給出了這種克隆方法的實例?？赏ㄟ^直接克隆植物基因組DNA節(jié)段分離本發(fā)明的DNA序列。使用限制性內(nèi)切核酸酶、超聲、物理剪切或本領(lǐng)域已知的其它方法，通過片段化可獲得合適的基因組DNA節(jié)段。通過使用克隆節(jié)段DNA序列的編碼序列存在情況的預測性篩選(Baxevanis，2001)，可發(fā)現(xiàn)此診斷序列上游的已知啟動子序列的基序特征?；蛘撸ㄟ^評價功能性，例如通過將克隆節(jié)段連接至來源于報告基因的編碼序列，并將嵌合構(gòu)建物導入到其中可評價報告基因的宿主細胞中或無細胞系統(tǒng)中，可實現(xiàn)作為啟動子序列的克隆節(jié)段的鑒別。該方法可構(gòu)成稱為啟動子捕獲的另一種序列分離策略的一部分，其中將基因組DNA片段直接克隆入含報告基因編碼區(qū)和在宿主細胞或無細胞系統(tǒng)中表達必需的其它序列的“表達載體”中。所述表達可需要或不需要將嵌合構(gòu)建物整合入宿主染色體DNA中。獲得本發(fā)明DNA序列的替代方法是通過鑒別和分離已知表達的DNA編碼序列，隨后使用該序列獲得鄰近的啟動子序列，根據(jù)定義所述啟動子序列引導編碼序列的表達?；蛘撸扇缦芦@得DNA序列鑒別已知在不同生物中表達的序列，然后由選定生物分離同源編碼序列和之后其連接的啟動子序列?？赏ㄟ^由植物組織分離信使RNA(mRNA或polyA+RNA)或分離蛋白，并實施其序列的“反向翻譯”獲得編碼序列。選擇用于RNA分離的組織，選擇基礎(chǔ)是一般相信合適的基因編碼序列在該組織中以對分離最佳的水平表達。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知各種由植物組織分離mRNA的方法，包括例如使用固定在惰性基質(zhì)上的寡聚脫氧胸苷寡核苷酸。通過使用酶逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)或具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的其它酶，分離的mRNA可用于生產(chǎn)其互補DNA序列(cDNA)。通過克隆入細菌或病毒載體中，或通過使用具有選定寡核苷酸引物的聚合酶鏈反應(PCR)，可實現(xiàn)由cDNA群中分離單個cDNA序列。通過在稱為RT-PCR的方法中組合逆轉(zhuǎn)錄和PCR步驟，可實現(xiàn)由mRNA生產(chǎn)和分離特定cDNA?？墒褂酶鞣N方法提升通過富集或選擇方法(包括mRNA(或產(chǎn)生的單鏈或雙鏈cDNA)的分離和對比)由一種以上來源分離目標序列的效率，以便鑒別那些主要在選定組織中表達的序列。差異篩選、雜交或克隆的眾多方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，包括cDNA-AFLP、級聯(lián)雜交和用于選擇或差異克隆的市售試劑盒。在本發(fā)明中，利用SAR8.2j蛋白的cDNA序列(EMBL檢索號U64812)分離新啟動子序列。在EMBL檢索號U64816、U64807、U64808、U64809、U64810、U64811、U64813、U64814、U6481中給出了其它SAR蛋白基因的實例。還利用鋅指轉(zhuǎn)錄因子的第二個cDNA序列(EMBL檢索號AL096692)分離啟動子序列。然后，選定的cDNA可通過在植物基因組DNA的DNA印跡中用作雜交探針，用于評價其源基因的基因組特征，以揭示基因組相對于該序列的復雜性?；蛘撸墒褂盟鯿DNA的序列信息設(shè)計寡核苷酸，這些寡核苷酸可以相同方式用作雜交探針；用作生產(chǎn)雜交探針的PCR引物或用作在直接基因組分析中使用的PCR引物。類似地，選定cDNA可通過在由各種植物組織或由發(fā)育或時間序列提取的RNA的RNA印跡中用作雜交探針，用于評價其源基因的表達譜。此外，所述cDNA序列信息可用于設(shè)計寡核苷酸，所述寡核苷酸可用作雜交探針、用于生產(chǎn)雜交探針或直接用于RT-PCR。然后，選定cDNA或設(shè)計的寡核苷酸可用作雜交探針，以攻擊克隆基因組DNA片段的文庫，并鑒別重疊的DNA序列。利用此方法可鑒別和分離鄰接啟動子。根據(jù)分離方法的特性，分離的cDNA通常含編碼區(qū)的3′末端，并向5′末端延伸。其可不含全長編碼序列。如果所述cDNA用于鑒別鄰接啟動子，則優(yōu)選確保存在5′末端序列。這可通過稱為5′RACE(cDNA末端快速擴增)的方法在5′方向延長克隆的cDNA序列來實現(xiàn)。如果克隆cDNA的序列分析鑒別出已在科學文獻中報告的同源序列，則該信息可提供適宜的5′末端候選序列。但是，有可能存在具有相似編碼區(qū)但內(nèi)含子區(qū)、啟動子序列和表達譜不同的相同基因家族的不同成員，這可導致選擇不正確和不適宜的啟動子序列。一旦已鑒別出編碼序列的5′末端，就可鑒別含啟動子的鄰接上游區(qū)，條件是其存在于公共核苷酸數(shù)據(jù)庫中?；蛘撸赏ㄟ^在5′方向進一步延伸分離啟動子。這可通過包括載體連接PCR、基因組步查、小載體PCR和其它方法在內(nèi)的方法實現(xiàn)。如果有必要，可用與第一個啟動子片段的5′末端互補的新引物重復該過程，以確保分離出啟動子的所有控制序列。本發(fā)明還提供如SEQ.ID.No4所示DNA序列的用途，所述序列編碼啟動子(本文稱為“ATC023”)，所述序列能夠控制鋅指轉(zhuǎn)錄因子蛋白的表達，可用作植物啟動子。在TAIR核苷酸序列數(shù)據(jù)庫中鑒別該序列位于基因座AT4g29190。本發(fā)明還包括控制其它鋅指轉(zhuǎn)錄因子蛋白基因表達的DNA序列，其具有與SEQ.ID.No4的DNA序列同源的某些區(qū)域?？梢詢蓚€DNA(或多肽)序列之間的同一性百分率為基礎(chǔ)測定同源性。一般來說，比對要比較的兩個序列，以獲得序列之間的最大相關(guān)性。檢查兩個序列的比對，確定兩個序列之間表現(xiàn)出精確核苷酸(或氨基酸)對應的位置數(shù)，除以比對總長度，乘以100，得到同一性百分率數(shù)字。此同一性百分率數(shù)字可在要比較序列的全長內(nèi)測定，這特別適合于長度相同或非常相似并高度同源的序列，或者可在較短的限定長度內(nèi)測定，這更適合于長度不等或具有較低同源性水平的序列。比較兩個或更多個序列同一性的方法在本領(lǐng)域眾所周知。因此，例如，可使用可在Wisconsin序列分析包9.1版(DevereuxJ.等，1984)(可得自GeneticsComputerGroup，Madison，Wisconsin，USA)中獲得的程序如程序BESTFIT和GAP，測定兩個多核苷酸之間的同一性百分率和兩個多肽序列之間的同一性百分率。BESTFIT使用Smith和Waterman(1981)的“局部同源性”算法，尋找兩個序列之間相似性最好的單個區(qū)域。BESTFIT更適合于比較長度不同的兩個多核苷酸或兩個多肽序列，該程序假定較短的序列代表較長序列的一部分。相比之下，GAP按照Needleman和Wunsch(1970)的算法比對兩個序列，尋找“最大相似性”。GAP更適合于比較大約相同長度的序列，比對要求在完整長度內(nèi)進行。優(yōu)選地，在各個程序中使用的參數(shù)“空位插入罰分(GapWeight)”和“空位延伸罰分(LengthWeight)”分別為50和3(對于多核苷酸序列)以及12和4(對于多肽序列)。優(yōu)選地，當要比較的兩個序列最優(yōu)比對時測定同一性和相似性百分率。測定序列間同一性和/或相似性的其它程序也是本領(lǐng)域已知的，例如BLAST家族程序(Karlin和Altschul，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA872264-2268，按照Karlin和Altschul，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA905873-5877修改，可得自美國國家生物技術(shù)信息中心(NCBI)，Bethesda，Maryland，USA，通過NCBI主頁www.ncbi.nlm.nih.gov獲取)。這些程序示例了用于比較兩個序列的數(shù)學算法的優(yōu)選非限制性實例。該算法并入到Altschul等，1997，J.Mol.Biol.215403-410的NBLAST和XBLAST程序中。可用NBLAST程序進行BLAST核苷酸檢索，以獲得與本發(fā)明核酸分子同源的核苷酸序列?？捎肵BLAST程序進行BLAST蛋白檢索，以獲得與本發(fā)明的蛋白分子同源的氨基酸序列。為獲得用于比較目的的空位比對，可如Altschul等，1997，NucleicAcidsRes.253389-3402所述使用GappedBLAST。或者，可使用PSI-Blast進行檢測分子間遠緣關(guān)系的迭代檢索(出處同上)。當使用BLAST、GappedBLAST和PSI-Blast程序時，可使用各程序(如XBLAST和NBLAST)的默認參數(shù)。參見http://www.ncbi.nlm.nih.gov。用于比較序列的另一種數(shù)學算法的優(yōu)選非限制性實例是Myers和Miller，1988，CABIOS411-17的算法。該算法并入到ALIGN程序(2.0版)中，ALIGN程序是GCG序列比對軟件包的組成部分。本領(lǐng)域已知用于測定序列間同一性和/或相似性的程序的另一個非限制性實例是FASTA(PearsonW.R.和LipmanDJ.，Proc.Nat.Acad.Sci，USA，852444-2448，1988，可作為Wisconsin序列分析軟件包的組成部分獲得)。優(yōu)選地，在多肽序列比較中使用BLOSUM62氨基酸置換矩陣(HenikoffS.和HenikoffJ.G.，Proc.Nat.Acad.Sci.，USA，8910915-10919，1992)，包括在比對前將核苷酸序列先翻譯成氨基酸序列的情況?？墒褂妙愃朴谏衔乃龅募夹g(shù)，在允許或不允許空位的情況下，測定兩個序列間的同一性百分率。在計算同一性百分率時，通常計算精確匹配。優(yōu)選使用程序BESTFIT測定查詢多核苷酸或多肽序列相對于本發(fā)明多核苷酸或多肽序列的同一性百分率，查詢序列和參比序列最優(yōu)比對，程序參數(shù)設(shè)為默認值。在本發(fā)明背景下，顯著同源序列是具有至少50％序列同一性的序列，優(yōu)選具有至少60％、65％或70％的序列同一性的序列，更優(yōu)選具有至少71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％或94％的序列同一性的序列，最優(yōu)選具有至少95％、96％、97％、98％或99％或以上的序列同一性的序列。本文使用的術(shù)語“同源物”指與對象氨基酸序列和對象核苷酸序列具有一定同源性的實體。在本文中，術(shù)語“同源”可與“同一性”等同。盡管也可依據(jù)相似性(即具有相似化學特性/功能的氨基酸殘基)考察同源性，但在本發(fā)明背景下，優(yōu)選以序列同一性表示同源性。在本發(fā)明背景下，術(shù)語利用尤其包括使用、導入和表達序列或基因。本發(fā)明還包括與以上啟動子的DNA序列(包括部分序列和互補序列)雜交的DNA序列?？梢猿Ｒ?guī)方式確定所述序列如此雜交的條件。雜交可在低、中或高嚴格條件下進行?？稍谄湎逻M行雜交和/或漂洗的條件可在42℃-68℃的范圍內(nèi)，漂洗緩沖液可由0.1×SSC、0.5％SDS至6×SSC、0.5％SDS組成。通常，雜交可于65℃(高嚴格條件)、60℃(中嚴格條件)或55℃(低嚴格條件)過夜進行。濾膜可用0.1×SSC、0.5％SDS于65℃漂洗2×15分鐘(高嚴格漂洗)。濾膜可用0.1×SSC、0.5％SDS于63℃漂洗2×15分鐘(中嚴格漂洗)。對于低嚴格漂洗，濾膜以2×SSC、0.5％SDS于60℃漂洗2×15分鐘。本發(fā)明還包括與寡核苷酸探針雜交的DNA序列。優(yōu)選所述DNA序列在嚴格條件下與寡核苷酸探針雜交。在其中核酸分子為寡核苷酸(“oligos”)的情況下，高嚴格條件例如可指以6×SSC/0.05％焦磷酸鈉于37℃(對于14個堿基的寡核苷酸)、48℃(對于17個堿基的寡核苷酸)、55℃(對于20個堿基的寡核苷酸)和60℃(對于23個堿基的寡核苷酸)漂洗。在針對EMBL核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(Release77)(Kulikova等，2004)的BLAST檢索中，ATC085啟動子在其最后220個堿基內(nèi)與其它SAR基因如8.2h和8.2k翻譯起始密碼子上游的已知序列具有90％以上的同一性。唯一在啟動子長度上顯示出任意其它同源區(qū)的序列是Sar8.2b啟動子區(qū)(SAR8.2b啟動子，Genbank檢索號U64816，堿基1至堿基1907)。圖1顯示了SEQIDNo.1(堿基1-1566)和具有同源性的SAR8.2b啟動子區(qū)(Genbank序列的堿基704-1907)之間的比對。比對序列之間的同一性以圓點顯示。由圖1可見，SEQIDNo.1與對應的SAR8.2b啟動子整體具有61％的同一性。圖2顯示了ATC023啟動子(堿基1-1904)和基因座AT4g29190(反向)附近的擬南芥(Arabidopsisthaliana)序列區(qū)之間的比對。由圖2可見，克隆的ATC023啟動子與報告的基因組序列具有99％以上的同一性。在所述啟動子控制下使用并用于實施本發(fā)明的基因編碼序列可在部分或全部植物組織中有活性。所使用的序列可編碼蛋白或RNA部分。通過重組DNA技術(shù)，所述序列可編碼蛋白或RNA的合成變體、部分序列或含一個或多個基因區(qū)域的復合序列。例如，嵌合基因可編碼多蛋白。所述序列還可包含重復的、截短的、反向的或互補的序列，以通過例如反義、共抑制或RNA抑制技術(shù)實現(xiàn)對一個或多個內(nèi)源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯的破壞。許多植物、細菌和病毒基因可在啟動子控制下活性表達。優(yōu)選地，所述基因編碼(i)可用作報告基因用于啟動子功能的GUS、GFP和螢光素酶。(ii)產(chǎn)生植物結(jié)構(gòu)組分如纖維素、半纖維素、膠質(zhì)和木質(zhì)素的酶基因。(iii)設(shè)計用于改變植物和植物細胞中的代謝的DNA序列。這種基因包括用于糖代謝、淀粉代謝、氨基酸和蛋白代謝、核酸代謝和脂質(zhì)代謝的基因。(iv)可對控制代謝或發(fā)育如開花或株型具有作用的調(diào)節(jié)DNA序列，包括參與植物生長物質(zhì)的代謝或轉(zhuǎn)運的基因。(v)編碼產(chǎn)物的DNA序列，所述產(chǎn)物例如為限制酶、蛋白酶、蛋白酶抑制劑和可用于有意削弱細胞功能的核糖體失活蛋白。(vi)對環(huán)境應力或病原體或害蟲的抗性。本發(fā)明啟動子優(yōu)選有效引導在側(cè)生和/或輔助分生組織中的表達。本發(fā)明啟動子除了可有效引導在側(cè)芽和/或側(cè)枝中的表達以外，還可有效引導在植物的其它組織和/或細胞中的表達。例如，在植物的創(chuàng)傷組織和/或莖和/或葉中可觀察到一些表達。但是，所述啟動子有效引導在側(cè)芽和/或側(cè)枝中顯著特異性(如本文所定義)的表達。本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用各種方法測定本發(fā)明啟動子的表達譜，所述方法優(yōu)選為(i)瞬時表達，其中所述啟動子連接至合適構(gòu)建物中的報告基因如GUS、GFP或螢光素酶，并通過鳥槍法轉(zhuǎn)化導入到植物組織中。根據(jù)不同植物組織中報告基因產(chǎn)物的存在與否檢測啟動子表達。(ii)瞬時表達，其中所述啟動子連接至合適二元構(gòu)建物中的報告基因如GUS、GFP或螢光素酶，并通過農(nóng)桿菌(Agrobacterium)導入植物組織中。根據(jù)不同植物組織中報告基因產(chǎn)物的存在與否檢測啟動子表達。可通過使用合適的底物作為染料或通過使用比色計或分光光度計視覺檢測GUS活性；螢光素酶和熒光標記蛋白可目測，或在膠片或數(shù)字媒介上照相檢測，或使用照度計或熒光計定量檢測。還可使用抗體型系統(tǒng)檢測標記基因。(iii)植物轉(zhuǎn)化和再生。根據(jù)不同植物組織中報告基因的存在與否檢測啟動子表達。(iv)植物轉(zhuǎn)化和再生。根據(jù)不同植物組織中效應基因產(chǎn)生的特定基因產(chǎn)物的存在與否檢測啟動子表達。本發(fā)明的基因產(chǎn)物可通過重組技術(shù)產(chǎn)生，其中用于DNA編碼序列的基因組DNA克隆或cDNA克隆被產(chǎn)生、分離、增殖和摻入到本發(fā)明的植物轉(zhuǎn)化載體中。本申請首次提供了能夠顯著特異性地在側(cè)芽和/或側(cè)枝中表達基因的啟動子。適宜地，本發(fā)明啟動子為“誘導的啟動子”，即在刺激物作用下啟動的啟動子。因此，同在植物特定細胞中有效引導表達的啟動子一樣，所述啟動子也可被看成誘導型啟動子。優(yōu)選地，本發(fā)明啟動子通過切除植物尖端誘導，即通過去除植物頂芽或頂枝誘導。非為理論所限，其中本發(fā)明啟動子可被“開啟”的一種可能方式是由可通過去除頂芽刺激的信號活化或誘導，因此在切除尖端后。例如，所述信號可為植物生長激素。僅作為實例，所述信號可為細胞分裂素?；蛘?，仍非為理論所限，有可能是頂芽釋放阻止側(cè)生分生組織側(cè)生長和/或本發(fā)明啟動子開啟的抑制信號。在此情況下，例如，去除頂芽(例如通過切除尖端)可導致抑制信號丟失，因此開啟了本發(fā)明啟動子。例如，僅作為實例，所述抑制信號可為植物生長素。分離的在一個方面，優(yōu)選所述序列為分離形式。術(shù)語“分離的”指所述序列至少基本上沒有至少一種與所述序列天然結(jié)合或天然存在的其它組分。純化的在一個方面，優(yōu)選所述序列為純化形式。術(shù)語“純化的”指所述序列為相對純的狀態(tài)-例如至少約90％純，或至少約95％純，或至少約98％純。核苷酸序列本文使用的術(shù)語“核苷酸序列”與“核酸序列”同義，指寡核苷酸序列或多核苷酸序列及其變體、同源物、片段和衍生物(例如其部分)。所述核苷酸序列可為基因組來源或合成來源或重組來源，可為雙鏈或單鏈，無論是指有義鏈還是反義鏈。本發(fā)明所涉及的術(shù)語“核苷酸序列”或“核酸”包括基因組DNA、cDNA、合成DNA和RNA。優(yōu)選其指DNA，更優(yōu)選指針對本發(fā)明編碼的cDNA序列。由于遺傳密碼簡并性，可容易地生產(chǎn)核苷酸序列，其中對于由原核苷酸序列編碼的部分或全部氨基酸，三聯(lián)體密碼子選擇已改變，由此產(chǎn)生與原核苷酸序列具有低同源性的核苷酸序列，但其編碼與原核苷酸序列編碼序列相同或變異的氨基酸序列。例如，對于大部分氨基酸來說，遺傳密碼簡并性位于三聯(lián)體密碼子中的第三個位置(搖擺位置)(參考文獻參見Stryer，Lubert，Biochemistry，第3版，F(xiàn)reemanPress，ISBN0-7167-1920-7)，因此，其中所有三聯(lián)體密碼子在第三個位置都已“搖擺”的核苷酸序列應與原核苷酸序列約66％相同，但是，改變過的核苷酸序列應編碼與原核苷酸序列編碼序列相同或變異的一級氨基酸序列。因此，本發(fā)明進一步涉及對至少一個氨基酸編碼三聯(lián)體密碼子具有替代三聯(lián)體密碼子選擇、但編碼與原核苷酸序列編碼的多肽序列相同或變異的多肽序列的任意核苷酸序列。而且，就用于編碼氨基酸的三聯(lián)體密碼子而言，具體生物通常具有偏倚。優(yōu)選密碼子選擇表可廣泛獲取，可用于制備密碼子優(yōu)化基因。這種密碼子優(yōu)化技術(shù)通常用于優(yōu)化異種宿主中的轉(zhuǎn)基因表達。通常，使用重組DNA技術(shù)制備編碼多肽的核苷酸序列(即重組DNA)，所述多肽具有如本文定義的特定特性。但是，在本發(fā)明的替代實施方案中，所述核苷酸序列可使用本領(lǐng)域眾所周知的化學方法完整或部分地合成(參見CaruthersMH等(1980)NucAcidsResSympSer215-23和HornT等(1980)NucAcidsResSympSer225-232)。分子進化一旦分離出編碼啟動子的核苷酸序列或鑒別出編碼推定啟動子的核苷酸序列，就可能期望對選定核苷酸序列進行修飾，例如可能期望突變所述序列，以便制備本發(fā)明的基因產(chǎn)物。突變可使用合成寡核苷酸導入。這些寡核苷酸包含位于目標突變位點側(cè)翼的核苷酸序列。合適的方法公開于Morinaga等(Biotechnology(1984)2，646-649頁)。將突變導入核苷酸序列中的另一種方法述于Nelson和Long(AnalyticalBiochemistry(1989)，180，147-151頁)。人們例如可使用市售試劑盒如Stratagene的GeneMorphPCR誘變試劑盒或Clontech的DiversifyPCR隨機誘變試劑盒，隨機導入突變，而不是如上所述的定點誘變。EP0583265提到了優(yōu)化PCR型誘變的方法，該方法還可與例如描述于EP0866796的誘變DNA類似物的應用組合。獲得新序列的第三種方法是通過使用一些限制酶或例如脫氧核糖核酸酶I的酶片段化不相同的核苷酸序列，并再組裝成編碼功能蛋白的完整核苷酸序列?；蛘撸藗兛墒褂靡粋€或多個不相同核苷酸序列，并在組裝完整核苷酸序列的過程中導入突變。實施‘改組(shuffling)’的適宜方法可見于EP0752008、EP1138763、EP1103606。改組還可與如US6,180,406和WO01/34835所述的其它形式的DNA誘變組合。因此，有可能體內(nèi)或體外在核苷酸序列中產(chǎn)生眾多定點或隨機突變，隨后通過各種方法篩選編碼多肽的改進功能性。例如，使用計算機模擬和外部介導的重組方法(參見WO00/58517、US6,344,328、US6,361,974)可進行分子進化，其中產(chǎn)生的變體保留了與已知蛋白的極低同源性。由此獲得的這種變體可與已知蛋白具有顯著的結(jié)構(gòu)類似性，但具有非常低的氨基酸序列同源性。另外，作為非限制性實例，多核苷酸序列的突變或天然變體可與野生型或其它突變或天然變體重組，以產(chǎn)生新變體。還可篩選這種新變體的編碼多肽的改進功能性。植物轉(zhuǎn)化載體本發(fā)明的植物轉(zhuǎn)化載體含“表達盒”，其在5′-3′轉(zhuǎn)錄方向上包含如本發(fā)明所述的啟動子序列、如上文所論述的基因編碼序列、任選的3′非翻譯序列、含RNA聚合酶終止信號的終止子序列以及聚腺苷酸化酶(polyadenylase)的聚腺苷酸化信號。啟動子序列可以一個或多個拷貝存在，所述拷貝可與如上文所述的啟動子序列相同或為其變體。所述拷貝還可為完整或部分的上文所述序列。終止子序列可得自植物、細菌或病毒基因。合適的終止子序列例如為豌豆rbcSE9終止子序列、得自根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)胭脂堿合酶基因的nos終止子序列以及花椰菜花葉病毒的35S終止子序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易了解其它合適的終止子序列。所述表達盒還可包含基因表達增強機制，以增加啟動子強度。這種增強子元件的實例是源自豌豆質(zhì)體藍素基因的部分啟動子的增強子元件，其是國際專利申請?zhí)朩O97/20056的主題。這些調(diào)節(jié)區(qū)可來源于與本發(fā)明的啟動子DNA序列相同的基因，或者可來源于不同基因、來源于普通煙草(Nicotianatabacum)或其它生物，例如來源于茄科家族植物，或來源于夜香樹亞科(Cestroideae)亞家族植物。所有的調(diào)節(jié)區(qū)都應在待轉(zhuǎn)化的組織細胞中能夠起作用。基因編碼序列可來源于與本發(fā)明的啟動子DNA序列相同的基因，或者可來源于不同基因、來源于普通煙草(Nicotianatabacum)或另一種生物，例如來源于茄科家族植物，或來源于夜香樹亞科(Cestroideae)亞家族植物。表達盒可摻入到基礎(chǔ)植物轉(zhuǎn)化載體如pBIN19Plus、pBI101中，或摻入到本領(lǐng)域已知的其它合適的植物轉(zhuǎn)化載體中。除了表達盒以外，所述植物轉(zhuǎn)化載體還含例如轉(zhuǎn)化過程必需的序列。這些序列可包括農(nóng)桿菌(Agrobacterium)vir基因、一個或多個T-DNA邊界序列和鑒別轉(zhuǎn)基因植物細胞的選擇標記或其它工具。術(shù)語“植物轉(zhuǎn)化載體”指能夠體內(nèi)或體外表達的構(gòu)建物。優(yōu)選地，將表達載體摻入到生物基因組中。術(shù)語“摻入”優(yōu)選涵蓋穩(wěn)定摻入到基因組中。本發(fā)明載體可如下所述轉(zhuǎn)化入合適的宿主細胞中，以提供具有本文定義特定特性的多肽的表達。載體(例如質(zhì)粒、粘粒、病毒或噬菌體載體)的選擇經(jīng)常依賴于載體要導入其中的宿主細胞。載體可包含一個或多個選擇標記基因一例如賦予抗生素抗性如氨芐青霉素抗性、卡那霉素抗性、氯霉素抗性或四環(huán)素抗性的基因?；蛘撸鲞x擇可通過共轉(zhuǎn)化完成(如WO91/17243所述)。載體可體外使用，例如用于生產(chǎn)RNA或用于轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化宿主細胞。術(shù)語“有效連接的”指一種并列，其中所述組分所處的關(guān)系允許它們以其目標方式起作用?！坝行нB接”至編碼序列的調(diào)節(jié)序列以在與對照序列相配的條件下實現(xiàn)編碼序列表達的方式連接。宿主細胞本發(fā)明涉及的術(shù)語“宿主細胞”包括含本發(fā)明的核酸、啟動子序列或嵌合基因或含上述表達載體的任意細胞。因此，本發(fā)明的另一個實施方案提供用本發(fā)明的核酸、啟動子序列或嵌合基因轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細胞。選擇與所述載體相容的細胞，其例如可為原核細胞(例如細菌)、真核細胞、酵母細胞或植物細胞。優(yōu)選所述宿主細胞不是人細胞。合適的細菌宿主生物的實例為革蘭氏陰性細菌或革蘭氏陽性細菌。在一個實施方案中，可優(yōu)選真核細胞，例如酵母或其它真菌。一般而言，酵母細胞優(yōu)于真菌細胞，因為其更易于操作。使用合適的宿主細胞，例如酵母、真菌和植物宿主細胞，可提供翻譯后修飾(例如十四烷基化、糖基化、截短、脂化(lapidation)以及酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸磷酸化)，可能需要這些修飾賦予本發(fā)明重組表達產(chǎn)物優(yōu)化的生物活性。所述宿主細胞可為蛋白酶缺陷株或蛋白酶負變株。本發(fā)明涉及的術(shù)語“轉(zhuǎn)基因植物”包括含本發(fā)明的核酸、啟動子序列或嵌合基因的任意植物。優(yōu)選將所述核酸、啟動子序列或嵌合基因摻入到植物基因組中。術(shù)語“轉(zhuǎn)基因植物”不包括在其天然環(huán)境中的天然核苷酸編碼序列，此時所述天然核苷酸編碼序列處于其天然啟動子控制之下，所述天然啟動子也在其天然環(huán)境中。本發(fā)明還包括與本文所述序列或其任意衍生物、片段或變體互補的核苷酸序列的用途。如果所述序列與其片段互補，則該序列可用作探針，以鑒別在其它生物等中的相似編碼序列。本文使用的術(shù)語“變體”指由非內(nèi)源遺傳密碼表達的蛋白，其與天然或野生型序列相比，在成熟蛋白序列中產(chǎn)生一個或多個氨基酸變化(即氨基酸缺失、添加或置換)。植物轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化植物的技術(shù)在本領(lǐng)域眾所周知，包括例如農(nóng)桿菌(Agrobacterium)介導的轉(zhuǎn)化。構(gòu)建遺傳修飾植物的基本原則是在植物基因組中插入遺傳信息，以便獲得所插入遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定維持。一般技術(shù)的綜述可見于論文Potrykus(AnnuRevPlantPhysiolPlantMolBiol42205-225)和Christou(Agro-Food-IndustryHi-Tech3月/4月199417-27)。通常，在農(nóng)桿菌(Agrobacterium)介導的轉(zhuǎn)化中，通過將農(nóng)桿菌(Agrobacterium)與靶植物外植體共同培養(yǎng)，將攜帶目標外源DNA的二元載體即嵌合基因由合適的農(nóng)桿菌(Agrobacterium)菌株轉(zhuǎn)移至靶植物。然后轉(zhuǎn)化的植物組織在選擇培養(yǎng)基上再生，所述選擇培養(yǎng)基含選擇標記和植物生長激素。替代方法是花序浸泡法(Clough和Bent，1998)，借助該方法，使完整植株的花芽與含嵌合基因的農(nóng)桿菌(Agrobacterium)菌株懸浮液接觸，在結(jié)實后，使轉(zhuǎn)化個體種子發(fā)芽，通過在選擇培養(yǎng)基上生長鑒別。農(nóng)桿菌(Agrobacterium)直接感染植物組織是一種業(yè)已廣泛使用的簡單技術(shù)，描述于ButcherD.N.等，(1980)，TissueCultureMethodsforPlantPathologists，編輯D.S.Ingrams和J.P.Helgeson，203-208。其它合適的轉(zhuǎn)化方法包括使用聚乙二醇或電穿孔技術(shù)、粒子轟擊、微注射和使用例如碳化硅纖維，將基因直接轉(zhuǎn)移入原生質(zhì)體中。使用基因槍轉(zhuǎn)化法(包括碳化硅晶須技術(shù))轉(zhuǎn)化植物教導于FrameBR，DraytonPR，BagnaallSV，LewnauCJ，BullockWP，WilsonHM，DunwellJM，ThompsonJA和WangK(1994)。通過碳化硅晶須介導的轉(zhuǎn)化生產(chǎn)多產(chǎn)轉(zhuǎn)基因玉米作物教導于ThePlantJournal6941-948，病毒轉(zhuǎn)化技術(shù)教導于例如MeyerP，HeidmannI&NiedenhofI(1992)。使用木薯花葉病毒作為植物載體系統(tǒng)教導于Gene110213-217。關(guān)于植物轉(zhuǎn)化的其它技術(shù)可見于EP-A-0449375。在又一方面，本發(fā)明涉及攜帶本發(fā)明的核苷酸序列或構(gòu)建物的載體系統(tǒng)，其能夠?qū)⑺龊塑账嵝蛄谢驑?gòu)建物導入到生物如植物的基因組中。所述載體系統(tǒng)可包含一個載體，但其可包含兩個載體。在兩個載體的情況下，載體系統(tǒng)一般稱為二元載體系統(tǒng)。二元載體系統(tǒng)更詳細地描述于GynheungAn等，(1980)，BinaryVectors，PlantMolecularBiologyManualA3，1-19。一種廣泛使用的植物細胞轉(zhuǎn)化系統(tǒng)使用根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)的Ti質(zhì)?；虬l(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacteriumrhizogenes)的Ri質(zhì)粒，An等，(1986)，PlantPhysiol.81，301-305和ButcherD.N.等，(1980)，TissueCultureMethodsforPlantPathologists，編輯D.S.Ingrams和J.P.Helgeson，203-208。植物中在本發(fā)明的目標啟動子或構(gòu)建物或核苷酸序列的各種導入方法之后，可能必須存在和/或插入其它DNA序列。例如，如果將Ti-或Ri-質(zhì)粒用于植物細胞轉(zhuǎn)化，則可連接至少Ti-和Ri質(zhì)粒T-DNA的右邊界，但經(jīng)常可連接右邊界和左邊界，作為導入基因的側(cè)翼區(qū)域。使用T-DNA轉(zhuǎn)化植物細胞已被深入研究，描述于EP-A-120516；Hoekema，載于TheBinaryPlantVectorSystemOffset-drukkerijRantersB.B.，Alblasserdam，1985，章節(jié)V；Fraley等，Crit.Rev.PlantSci，41-46；和An等，EMBOJ.(1985)4277-284?？砂凑毡娝苤慕M織培養(yǎng)方法，例如通過在補加必需生長因子(如氨基酸、植物激素、維生素等)的合適培養(yǎng)基中培養(yǎng)植物細胞，生長和保持所述細胞。培養(yǎng)和生產(chǎn)用本發(fā)明的核酸、啟動子序列或嵌合基因轉(zhuǎn)化的宿主細胞可在有益于所述宿主生長的條件下培養(yǎng)。用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基可為適于培養(yǎng)所述宿主細胞的任何常規(guī)培養(yǎng)基?；虍a(chǎn)物的生產(chǎn)DNA編碼序列或核酸序列在植物宿主細胞中表達將產(chǎn)生RNA轉(zhuǎn)錄物。此轉(zhuǎn)錄物可為RNA分子，其隨后不翻譯成蛋白產(chǎn)物，但其可通過RNAi、反義或共抑制機制與基因表達過程相互作用。如果所述編碼序列來源于結(jié)構(gòu)基因，則所述RNA轉(zhuǎn)錄物隨后可被翻譯為蛋白基因產(chǎn)物。如果有需要，可通過由生物系統(tǒng)分離蛋白的標準技術(shù)，例如鹽沉淀、柱層析、免疫親和技術(shù)、電泳、重結(jié)晶、離心等，分離基因產(chǎn)物。對植物細胞有害的基因產(chǎn)物的表達如果DNA編碼序列或核酸序列翻譯成對植物宿主細胞具有有害作用的蛋白基因產(chǎn)物，則其可通過使用引導在特定植物細胞中表達的本發(fā)明啟動子用于植物細胞死亡系統(tǒng)。具有有害作用的合適蛋白可包括蛋白酶、限制性內(nèi)切核酸酶、膜轉(zhuǎn)運蛋白和核糖核酸酶如Barnase。其它實例包括核糖體失活蛋白(RIP)，例如玉米REPb-32蛋白、蓖麻蛋白、相思豆毒蛋白、莫迪素(modeccin)、大麥翻譯抑制劑和美洲商陸抗病毒蛋白(PAP)。美洲商陸(Phytolaccaamericana)產(chǎn)生3種不同的抗病毒蛋白，即PAP′、PAPII和PAP-S。國際專利申請?zhí)朩O02/33107說明了PAP-S蛋白截短變體在細胞死亡系統(tǒng)中的用途。因此，使用核糖體失活蛋白(RIP)如美洲商陸抗病毒蛋白(PAP)或其變體可提供植物細胞死亡系統(tǒng)。僅作為實例，現(xiàn)在參照以下實施例描述本發(fā)明。實施例1ATC085啟動子(SEQIDNO.7)區(qū)的分離和轉(zhuǎn)化構(gòu)建物的產(chǎn)生。使用DNAeasy植物小型制備試劑盒(Qiagen)按照生產(chǎn)商的說明由K326煙草葉材料分離煙草葉組織的基因組DNA。將1μL等份的基因組DNA的1∶10稀釋制備物用于起始PCR，起始PCR在25μL反應中使用1μLPCR引物S2PCLOFWD(SEQIDNo.2)10pM/μL和1μLPCR引物S2PCLOREV(SEQIDNo.3)10pM/μL，所述反應液含0.5μL延長酶TaqDNA聚合酶(GibcoBRL)、1μL延長酶緩沖液A、4μL延長酶緩沖液B、各1μL的5mMdNTP、15.5μL重蒸水。PCR反應條件為首循環(huán)94℃2分鐘，接著為94℃30秒、60℃30秒和68℃4分鐘，35個循環(huán)，之后為終循環(huán)68℃10分鐘。PCR反應物在含痕量溴化乙錠的1.2％瓊脂糖TBE凝膠上以4V/cm電泳2小時。發(fā)現(xiàn)兩個PCR產(chǎn)物。由凝膠上切下約1600bp的較大產(chǎn)物，使用QiaQuick凝膠提取試劑盒(Qiagen)按照生產(chǎn)商的說明純化DNA。將純化的PCR產(chǎn)物克隆入TOPO載體(Invitrogen)中，并按照生產(chǎn)商的說明轉(zhuǎn)化入TOP10化學感受態(tài)大腸桿菌(Invitrogen)中。將等份的反應物平板接種在含卡那霉素的無菌LB瓊脂上，將平板于37℃過夜溫育。使用以上條件通過PCR篩選菌落，以鑒別含啟動子的克隆。通過測序進一步證實序列。由TOPO載體上切下為HindIII-BamHI片段的ATC085啟動子，并克隆入植物轉(zhuǎn)化載體pBin19Plus載體(其基于源自pBIN19(Bevan等，1984)的pGPTV-Kan(Becker等，1992))中3個不同報告基因的前面，產(chǎn)生構(gòu)建物GUS(ATC載體pBNP085-0040-001)、GFP(ATC載體PBNPO85-0003-001)和螢光素酶(ATC載體pBNP085-0017-001)。還將啟動子克隆在效應基因-美洲商陸(Phytolaccaamericana)的活性形式美洲商陸抗病毒蛋白S的前面(ATC載體pBNP085-0501-001)。pBNP085-0501-001已按照國際承認用于專利程序的微生物保藏布達佩斯條約于2005年9月20日由AdvancedTechnologies(Cambridge)Ltd，210CambridgeSciencePark，CambridgeCB40WA保藏于國立工業(yè)、海洋和食品微生物保藏中心(NCIMB)23St.MacharStreet，AberdeenScotland，GB，保藏號NCIMB41343。實施例2ATC023啟動子區(qū)的分離和轉(zhuǎn)化構(gòu)建物的產(chǎn)生。使用PfuTurboDNA聚合酶(Stratagene)以及分別含HindIII和BamHI限制位點的引物AT4G29190L(SEQ.ID.No.5)和AT4g29190R(SEQ.ID.No.6)，于63℃的退火溫度，通過PCR由擬南芥(Arabidopsisthaliana)(Columbia生態(tài)型)基因組DNA分離ATC023啟動子。然后使用限制位點將分離的片段克隆入植物轉(zhuǎn)化載體pBI101中GUS報告基因的前面，獲得構(gòu)建物pBI101023-0101-001。然后將所述構(gòu)建物轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5α中。實施例3轉(zhuǎn)化煙草植物的生產(chǎn)。將以上產(chǎn)生的構(gòu)建物轉(zhuǎn)移入根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)菌株LBA4404中，使用Horsch等(1985)的共同培養(yǎng)法通過體外轉(zhuǎn)化葉圓片獲得轉(zhuǎn)基因煙草變種K326植株。在含100μg/ml卡那霉素的MS瓊脂培養(yǎng)基上選擇轉(zhuǎn)化的愈傷組織和再生枝條，并在凱福隆(Claforan)存在下培養(yǎng)，以去除農(nóng)桿菌(Agrobacterium)細胞。然后將植株在沒有凱福隆(Claforan)的培養(yǎng)基上體外保持和繁殖，以證實沒有農(nóng)桿菌(Agrobacterium)。將植株轉(zhuǎn)移至溫室土壤進行表征。植株顯示出的生長特征與溫室中的野生型煙草植株無法區(qū)分。進行PCR分析，以鑒別轉(zhuǎn)基因植物。為生產(chǎn)后代，可自交植物，由成熟種球收集種子并儲存于6℃?？墒褂米越晦D(zhuǎn)基因植物后代的分離比基于3∶1比率選擇含單個插入位點的種子批。還可通過DNA雜交測定插入數(shù)。可通過基因組步查表征煙草基因組中的插入。實施例4轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的生產(chǎn)。將上述構(gòu)建物轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)菌株LBA4404和GV3103中，并通過Clough和Bent(1998)的花序浸泡法用其轉(zhuǎn)化擬南芥(Arabidopsisthaliana)。在由浸泡的植株收集種子后，使用對ATS/PhytagelTM上的40μg/ml卡那霉素或MS/瓊脂培養(yǎng)基上的50μg/ml卡那霉素進行的選擇篩選T1轉(zhuǎn)化體。以此方式分離獨立的轉(zhuǎn)化體，并將其轉(zhuǎn)移至土壤，在長日照條件下培育。使植物自花傳粉，以產(chǎn)生T2種子。再對卡那霉素篩選來自獨立品系的約60個T2種子，使用卡方測驗測定所觀測的分離比是否與轉(zhuǎn)基因插入的單個位點一致(3抗性∶1敏感)。鑒別出比率與單個插入位點一致的多個獨立品系，剩余的品系廢棄。實施例5煙草植物中ATC085啟動子-GUS表達的特征使用載體pBNP085-0040-001轉(zhuǎn)化的60株植株進行GUS分析。在于溫室生長約6-8周(此時頂芽已達到“花扣(floralbutton)”期)后，使用手術(shù)刀在第18葉(由底部計起)之上的節(jié)間對植物切除尖端，或通過切除葉16、17和18葉片的一半使植物受傷，或保持未處理。24小時后，取出不同組織樣品，包括在側(cè)芽14、15、16、17和18根部的莖切片、節(jié)間莖切片、頂端花枝條(在存在的情況下)、葉的葉片和葉柄以及初生根和次生根。收集的所有組織都立即浸泡在含0.1％β-巰基乙醇的0.1M磷酸鉀緩沖液pH7.0中，以防止棕化。如下制備染色溶液將300mgX-gluc粉溶解在玻璃容器中的3mlDMSO中，用含0.5mM鐵氰化鉀、0.5mM亞鐵氰化鉀、10mMEDTA、0.1％Triton-X和0.067％Sarcosyl的0.1M磷酸鉀緩沖液補償至1L。將該溶液儲存于4℃黑暗處。為染色組織樣品，用新鮮染色溶液替換磷酸鉀/β-巰基乙醇緩沖液，確保組織被完全浸沒，樣品在黑暗處于37℃過夜溫育。然后用70％乙醇替換染色溶液，將組織儲存于室溫黑暗處，直至其透明為止。對于葉材料有時必須更換乙醇至少一次。一旦組織已透明，就用酸化甘油替換乙醇。在顯微鏡下觀察樣品并照相。在全部3種處理(切除尖端、受傷或未處理)后檢測植物中的GUS表達，在每種情況下，GUS表達都在側(cè)芽根部和/或接近側(cè)芽發(fā)端點的莖中局部化(圖3)。大部分植株在取樣的每個芽位置都具有表達。檢測側(cè)芽處的表達，與預處理(切除尖端、受傷或未處理)無關(guān)。在大部分植株中，在任何其它組織中未檢測到表達-僅在一些特殊植株中觀察到一些其它位點的表達，主要在受傷葉的割傷邊緣。因此表明ATC085啟動子為引導在側(cè)芽發(fā)端點或其附近顯著特異性表達的啟動子。實施例6植物中ATC085啟動子-GFP表達的特征使用載體pBNP085-0003-001轉(zhuǎn)化的植株進行GFP表達分析。用藍光照射全株或植株部分、植物切片或植物組織，通過目測或通過顯微鏡檢查綠色熒光蛋白。實施例7植物中ATC085啟動子-螢光素酶表達的特征使用載體pBNP085-0017-001轉(zhuǎn)化的植物進行螢光素酶表達分析。用1mM螢光素(Sigma)潤濕或噴霧全株、植株部分或植物切片或植物組織，并在黑暗處溫育15分鐘。然后可通過在X-射線膠片上放射自顯影或通過使用具有長曝光時間的數(shù)碼相機照相或通過使用光子捕獲裝置如連接照相系統(tǒng)的圖象增強器顯現(xiàn)螢光素酶表達。實施例8植物中ATC085啟動子-PAP表達的特征將21株轉(zhuǎn)基因植株和5株對照未轉(zhuǎn)化(非共同培養(yǎng)或NCC)植株在溫室中培育，在6-8周后，使用手術(shù)刀在第18葉以上的節(jié)間切除植株尖端，以如上所述去除頂端花序和頂葉。每天監(jiān)測第16、17和18葉腋的側(cè)枝側(cè)生長，監(jiān)測29天，按照以下大小分類系統(tǒng)記錄0＝與主莖鄰接的側(cè)芽1＝在延長的側(cè)莖(即1節(jié)間)上的側(cè)芽2＝2節(jié)間具有側(cè)枝3＝3節(jié)間具有側(cè)枝等等。由這些數(shù)據(jù)計算轉(zhuǎn)基因植株和未轉(zhuǎn)化植株每天3個側(cè)芽位置的平均側(cè)生長。這些數(shù)據(jù)在圖4中作圖。顯然，ATC085啟動子引導的美洲商陸抗病毒蛋白局部表達使側(cè)枝側(cè)生長的發(fā)生在切除尖端刺激下顯著延遲，到第29天時與對照植株相比側(cè)生長的量減少。該作用在兩個頂芽17和18特別顯著(參見圖4a)。側(cè)芽16在切除尖端時顯示出低于芽17和18的側(cè)生長(圖4b)，但其被ATC085-PAP構(gòu)建物的表達進一步降低。圖5表明，ATC085-PAP轉(zhuǎn)基因植株中側(cè)枝的側(cè)生長比對照植株下降。實施例9擬南芥植物中ATC085啟動子-GUS表達的特征使用構(gòu)建物pBNP085-0040-001轉(zhuǎn)化擬南芥(Arabidopsisthaliana)植株。使用40株T1植株進行GUS分析。在長日照條件下于土壤中培育植株3-4周，直至花轉(zhuǎn)移后，此時初生軸已‘抽苔’至20-40mm長度。然后通過在距蓮座上部約10mm的點去除主莖斬斷植株。接著使其繼續(xù)培育24小時，之后由土壤中取出，用蒸餾水徹底清洗，檢測GUS活性。如上文對煙草植株的描述進行GUS染色，只是使用全株。通過在植物底部側(cè)芽形成位置和莖附近高強度染色，檢測植物中的GUS表達。但是，還在若干植株的其它組織中觀察到表達，包括葉組織和葉脈、葉柄、莖和初生根。實施例10煙草植物中ATC023啟動子-GUS表達的特征將用構(gòu)建物pBH101023-0101-001轉(zhuǎn)化的42株煙草植株在溫室中培育，如上文對GUS分析的描述進行處理。在85％植株的側(cè)芽中檢測到GUS表達，與處理(切除尖端、受傷或未處理)無關(guān)，大部分植株在取樣的每個芽位置都有表達。在許多情況下，還在接近側(cè)芽發(fā)端點的莖中觀察到局部表達。還在某些植株的其它組織中檢測到表達，主要是在花組織中，但偶爾在根、莖、葉或葉柄中。在17％植株中觀測到側(cè)芽和莖附近的特異性局部表達(圖6)。因此，ATC023啟動子可單獨使用，以提供組織特異性表達。其還可與另一個側(cè)芽表達啟動子如ATC085組合使用，以在側(cè)芽組織提供具有重復活性位點的互補表達譜。實施例11擬南芥植物中ATC023啟動子-GUS表達的特征如上所述將攜帶單個023-0101-001表達盒插入片段的5個獨立轉(zhuǎn)基因T2系在土壤中培育、斬斷、染色，用于GUS分析。在腋芽和鄰接莖以及花組織中觀測到GUS表達(圖7)。與較小芽相關(guān)的表達最強，并隨著芽的生長而穩(wěn)步下降。這表明ATC023啟動子與側(cè)芽發(fā)端相關(guān)。還在某些植株的其它組織中檢測到一些表達，包括花組織。以上說明書中提及的所有出版物都在此引入作為參考。本發(fā)明所述方法和系統(tǒng)的各種修飾和變化對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，不偏離本發(fā)明的范圍。盡管已聯(lián)系特定的優(yōu)選實施方案描述了本發(fā)明，但應當理解的是，要求保護的本發(fā)明不應被過度不當?shù)叵抻谶@些特定的實施方案。實際上，所述本發(fā)明實施方式各種修飾對生物化學和生物技術(shù)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的，屬于以下權(quán)利要求的范圍。參考文獻Altschul，S.F.，Madden，T.L.，Schaffer，A.A.，Zhang，J.，Zhang，Z.，Miller，W.和Lipman，DJ.(1997)GappedBLAST和PSI-BLASTanewgenerationofproteindatabasesearchprograms(GappedBLAST和PSI-BLAST新一代蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索程序).NucleicAcidsRes.253389-3402Ausubel，F(xiàn).M.Bent，R.Kingston，R.E.Moore，D.D.Seideman，J.G.SmithJ.A.和StruhlK.(1989).Currentprotocolsinmolecularbiology(分子生物學的流行工具).NewYorkGreeneandWillyInterscienceBaxevanis，A.D.(2001).PredictiveMethodsusingDNASequences(使用DNA序列的預測方法).In“BioinformaticsAPracticalGuidetotheAnalysisofGenes和Proteins.”編輯A.D.Baxevanis和B.F.Ouellette.JohnWileyandSonsInc.，NewYork.233-252頁Becker等，(1992)PlantMolec.Biol.201195-1197Benfey，P.N.和Chua，N-H.(1989)Regulatedgenesintransgenicplants(轉(zhuǎn)基因植物中的調(diào)節(jié)基因).Science244174-181Bevan，M.(1984)BinaryAgrobacteriumVectorsforPlantTransformation(用于植物轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌載體).NucleicAcidsResearch128711-8721Christensen，A.H.和Quail，P.H.(1996).Ubiquitinpromoter-basedvectorsforhichlevelexpressionofselectableand/orscreenablemarkergenesinmonocotyledenousplants(單子葉植物中用于高水平表達可選擇和/或可篩選標記基因的泛素啟動子型載體).TransgenicResearch5213-218Clough，SJ.和Bent，A.F.(1998).FloraldipasimplifiedmethodforAgrobacterium-mediatedtransformationofArabidopsisthaliana(花序浸泡法用于擬南芥的農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化的簡單方法).PlantJournal16735-743CornejoMJ，LuthD，BlankenshipKM，AndersonOD，BlechlAE.(1993).Activityofamaizeubiquitinpromoterintransgenicrice(轉(zhuǎn)基因稻中玉米泛素啟動子的活性).PlantMolec.Biol.23567-81Delaporta，S.L.WoodJ.R.和Hicks，J.B.(1983).AplantDNAminipreparation(植物DNA的微量制備)第2版.PlantMolecularBiologyReporter119-22.DevereuxJ，HaeberliP，SmithiesO.(1984).AcomprehensivesetofsequenceanalysisprogramsfortheVAX(用于VAX的序列分析程序綜合組).NucleicAcidsRes.12387-95EsanK.(1960)Anatomyofseedplants(種子植物的解剖).NewYork&London.JohnWiley&SonsInc.Gatz，C.(1995)Novelinducible/repressiblegeneexpressionsystems(新型可誘導/可阻遏基因表達系統(tǒng)).MethodsinCellBiol.50411-424Horsch，R.B.，F(xiàn)ry，J.E.，Hoffman，NX.，Eichholtz，D.，Rogers，S.G.和Fraley，R.T.(1985)Asimpleandgeneralmethodfortransferringgenesintoplants(將基因轉(zhuǎn)入植物的簡單和通用方法).Science2271229-1231Jefferson，R.A.(1987)AssayingChimericGenesinPlantsTheGUSGeneFusionSystem(在植物中檢測嵌合基因GUS基因融合系統(tǒng)).PlantMolec.Biol.Reptr.5387-405KulikovaT.，AldebertP.，AlthorpeN.，BakerW.，BatesK.，BrowneP.，vandenBroekA.，CochraneG.，DugganK.，EberhardtR.，F(xiàn)aruqueN.，Garcia-PastorM.，HarteN.，KanzC，LeinonenR.，LinQ.，LombardV.，LopezR.，MancusoR.，McHaIeM.，NardoneF.，SilventoinenV.，StoehrP.，StoesserG.，TuIiM.A.，TzouvaraK.，VaughanR，WuD.，ZhuW.和ApweilerR.(2004)TheEMBLNucleotideSequenceDatabase(EMBL核苷酸序列數(shù)據(jù)庫).NucleicAcidsRes.32D27-30MarianiC，DeBeuckeleerM，TruettnerJ，LeemansJ，GoldbergRB(1990).Inductionofmalesterilityinplantsbyachimaricribonucleasegene(通過嵌合核糖核酸酶基因在植物中誘導雄性不育).Nature347737-741NeedlemanSB，WunschCD.(1970)Ageneralmethodapplicabletothesearchforsimilaritiesintheaminoacidsequenceoftwoproteins(用于檢索兩種蛋白質(zhì)的氨基酸序列的類似性的通用方法).J.Molec.Biol.48443-53OdellJT，NagyF，ChuaNH.(1985).IdentificationofDNAsequencesrequiredforactivityofthecauliflowermosaicvirus35Spromoter(花椰菜花葉病毒35S啟動子活性所需的DNA序列的鑒定).Nature.313810-2.Sambrook，J.，F(xiàn)risch，E.F.和Maniatis，T.(Eds.)(1989)MolecularCloningALaboratoryManual(分子克隆實驗室指南)，第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress，NewYorkSmith，T.和Waterman，M.S.(1981).Comparisonofbiosequences(生物序列的比較).AdvancesinAppliedMathematics，2482-489Stirpe，F(xiàn).和Barbieri.T.(1986)Ribosome-inactivatingproteinsuptodate(迄今為止的核糖體失活蛋白).FEBSLett.1951-8WarnerSA，ScottR，DraperJ.(1993).IsolationofanasparagusintracellularPRgene(AoPRl)wound-responsivepromoterbytheinversepolymerasechainreactionanditscharacterizationintransgenictobacco(轉(zhuǎn)基因煙草中通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應分離的蘆筍胞內(nèi)PR基因(AoPRl)創(chuàng)傷應答啟動子及其特征).PlantJ.3191-201.ZhangW，McElroyD.WuR.(1991).AnalysisofriceActl5′regionactivityintransgenicriceplants(轉(zhuǎn)基因稻植物中稻Actl5′區(qū)活性的分析).PlantCell31155-65序列表<110>AdvancedTechnologies(Cambridge)Limited<120>ModificationofPlantDevelopmentandMorphology<130>p022825WO<150>GB0421598.4<151>2004-09-29<160>7<170>PatentInversion3.3<210>1<211>1566<212>DNA<213>普通煙草啟動子<400>1gctatcaagctttattaaagtgtccaataagtgcaagcctattagttgaaatgtcaaaag60ttggtatcaaatttagggagttatttatgctcccgtttggccagatttcggttactattt120tttaagtttaatttgttttttcaagtttcaagatttatgacagtttttgagtgatatttt180tccatttactcacaaaactttaacttttttttttcaaataaaatacatgtacaaatacaa240ttttaattttcaaatattattttccaacataacttcaaaaactcttttttcaagtgttaa300ttaaatatatgtttaactatgtattcatttgtgcttatgttttatcatgcattttcataa360gtgaatttcatactcatcttcatgcaaacacttatactataaaagatatattattcctat420atacaacatgtttatacgagatcattacattgtaagtgtaccttattattggtaaatttt480ggacttcaccaaaaataattaaggaagtaatgatatgcaataaataaataaataaataaa540gttaaaaatattatacttgactcaagacacattatggggaacacgwttctttcacgatcc600atcttatcctttcatcgatagaagttagcaatagcattattctcatattagcggaattat660ggttgtttgtctctttatatggtcatagactctcgagataattcatatttcaagactagt720tattttttagagctgaattaagtttaaaatttatttcttcgttcgagcgtgcaagggtgt780taagcaggggctgaggaagagcattagtcgcgggttcgaacgaactcagcttaattctta840tatttgtattagaaaatacataaaatatgtataaatatctaattacgaacataataacta900agataaactatgagttcctgataaattgaaaatctataaacaccaaatcctagctagtct960ctggtgttaaggtgtcccacatttgttgagggatgggttgttatatggtcttgggcaaga1020gttggagtcactcggccaccaattatctatatttggcccattgtttcccattaaaacaat1080tcctcccaagttgatctagttactgttctcatttataatccaagttgatactatttgtca1140tgtggctggctatacgacattgtttttgtttttttttggaaaatttctaggaaaccgtag1200ccgcttccattcgggtgtgcatttgataactaactcactgtgcaattgctcgcaaatcac1260acagaagatataaatcgcattaggcacgcccggtacgactagggggagactactggtgag1320gagaatcgatctcagatctcccatatgataaaccactcacccaactaactcaatcaaccc1380cggcggcgggygtgacttcacagtaagtctttgtgaaggctttctttttgtcattttctc1440ccttgtttagaacaagttgttcttgcacgagaaactattaagtyatataaataggggaga1500racattgttttcctttttacagcaaaaaattgraactccaaatagctcatcaaaggatcc1560tactcg1566<210>2<211>36<212>DNA<213>人工<220><223>PCR寡核苷酸S2CLOFWD<400>2gctatcaagctttattaaagtgtccaagctcaagcc36<210>3<211>39<212>DNA<213>人工<220><223>PCR寡核苷酸S2CLOREV<400>3cgagtaggatcctttgatgagctatttggagtttcaatt39<210>4<211>1904<212>DNA<213>普通煙草ATC023啟動子<400>4cgaagacattgtgtcgtaatcgtgtgtaatttcactatcttccaaataaagaaatataat60aattgcttcttgaatcggatgagctacacgtttttagatatttcgcaacctgtcttcttc120gttagatctaggaaacattgatttatagaaatatgtttctattatttctctattattcat180tcaacatgttaatatcgccaccactcaaatatattgaccatgtcaattgtttgattgaac240tataagtttgataaacaattgtcaaatttataaaaatttaaaagagaaaatacatttata300tgaaagaaaagaaaagtgcaaaaaagaaagaacaaaggataaatgagaggtcgattttgt360ttaggaggatatggaattgcttccaaatttagcaaagaaacataaatgtttttgccccta420taaagtctttaaacgttattccaaatctgttccaacatgtcctcttcatccgacacattt480cttatcctcttctctaattttttttgctaaaattaaatcgaaaattgaaaacgaattttt540gagaactatgtaagatattttttttcttccaataacaacaaattaccaaacaactttttg600tcgttttgttactaaataagtggtacaatgaaattataagtgatacaataaaatcatttg660acttagatataataatattcaaattaaaatgacaacaatacacaataaaattatgagaat720tcttcgaatcatatcaaaaattaatttttttttttcgataacaataaattattaaacaac780tttttgtcgtaagattattttttcctgataacaataaattattaaataattttcgatcgt840tttgttgttagataaatgatacaatgaattcatttcaacaacttagatacaacaatattt900ggatcaaaatgaaaattataaacaaagtatcatatatctttgtatcatatcaaaaacaag960atcattttttccgataacaataaattattaaacaactttttgtcgttttgttgctagata1020agtgaaacaataaaatcattttgacgaattagatataacaatattaagatcacaatgaac1080aatagtaaacaacaaattatcagatattttggtattaaaaataagattatttttccgata1140ataacaaattattaaacaatttttttatagttttgatgctaaataagtgatataatgaaa1200ttgttttgacgatttagatacaataatattaggttcaaaatgacaatactaaacaacaaa1260ttatcagatcatatcaaaaataaaattatttttttcgataacagcaaattattaaacaac1320tttttttttattgctagataaatgatacaataacctcattcgatatatataataatattc1380aaatcaaaatgacaataataaacaataaattattatattgaatcatataaaaaataagag1440atacatgcaacgaataattaaacaaacaaattaagtaataaggcaatggatagactaatt1500aatgaaactaaaactgtggattatctattttgtcgtctttcggagaatctaaacttcgac1560cgacttcaacgtatctaataatcctaaagtaaccttacgctcacagttcggttactttaa1620acttcgtcaaagtcattttgataaacgtccacatcacgaaacggtccacgtacgtctatc1680tcgtggataagtctccagccgctgtttcacatgcttatctcacagctttgttacgataac1740ctagtcctatgctaatatctttaaccatagttaaataattttaaccaaaccacggttaag1800tgtttcaactacataagtagctttgccggtgtattacaaacaaacaacacaaacaaaaaa1860aaagaactctttcgtcgactaatgtgatttattgttcaccggat1904<210>5<211>31<212>DNA<213>人工<220><223>PCR寡核苷酸AT4G29190L<400>5ggcaagcttcgaagacattgtgtcgtaatcg31<210>6<211>32<212>DNA<213>人工<220><223>PCR寡核苷酸AT4G29190R<400>6gcggatccggtgaacaataaatcacattagtc32<210>7<211>1541<212>DNA<213>普通煙草ATC085啟動子<400>7tattaaagtgtccaataagtgcaagcctattagttgaaatgtcaaaagttggtatcaaat60ttagggagttatttatgctcccgtttggccagatttcggttactattttttaagtttaat120ttgttttttcaagtttcaagatttatgacagtttttgagtgatatttttccatttactca180caaaactttaactttttttttcaaataaaatacatgtacaaatacaattttaattttcaa240atattattttccaacataacttcaaaaactcttttttcaagtgttaattaaatatatgtt300taactatgtattcatttgtgcttatgttttatcatgcattttcataagtgaatttcatac360tcatcttcatgcaaacacttatactataaaagatatattattcctatatacaacatgttt420atacgagatcattacattgtaagtgtaccttattattggtaaa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