專利名稱:酶水解大豆異黃酮生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及由不同濃度的大豆異黃酮粉生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法。更具體地,本發(fā)明采用的是從東北大豆中自行提取純化的大豆β-葡萄糖苷酶及商品化的里氏木酶β-葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮,并應(yīng)用溶劑萃取、超濾及冷凍離心等分離純化方法,由大豆異黃酮粉生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法。
背景技術(shù):
大豆異黃酮是大豆生長(zhǎng)過程中形成的一類次生代謝產(chǎn)物。大豆中天然存在的大豆異黃酮總共有12種,可以分為3類,即黃豆苷(daidzin)類、染料木苷(genistin)類、黃豆黃素苷(glycitin)類,分別以游離型、葡萄糖苷型、乙酰基葡萄糖苷型、丙二酰基葡萄糖苷型等4種形式存在(Kudou et al.,1991a;Kudou et al.,1991b)。染料木黃酮和黃豆苷元的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
染料木黃酮(genistein)黃豆苷元(daidzein)大豆異黃酮葡萄糖苷化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
所有大豆異黃酮化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式列入表1表1大豆異黃酮化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式
美國(guó)等科技水平較高的國(guó)家研究表明,在大豆中存在的12種大豆異黃酮中,兩種游離形式的異黃酮即染料木黃酮(genistein)和黃豆苷元(daidzein)具有較高的生物活性,能有效地預(yù)防和抑制白血病、骨質(zhì)疏松、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌等多種疾病的發(fā)生(張永忠等,中國(guó)糧油學(xué)報(bào)2004,4)。但是這兩種苷元形式的異黃酮在大豆中其含量非常少,不足大豆異黃酮總量的3%。具有較高生理活性作用的大豆異黃酮深加工產(chǎn)品,目前在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)尚屬空白。在我國(guó)許多生產(chǎn)大豆異黃酮的廠家生產(chǎn)的多是純度為20%、40%、60%含量的大豆異黃酮產(chǎn)品,其中苷元含量極少。物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)決定著物質(zhì)的性質(zhì),也決定著物質(zhì)的生物活性。染料木黃酮和黃豆苷元的結(jié)構(gòu)與雌性激素結(jié)構(gòu)相似,具有較強(qiáng)的弱雌激素活性等生物活性。大豆異黃酮苷元是具有高生物活性的異黃酮第二代產(chǎn)品,具有強(qiáng)勁的發(fā)展勢(shì)頭,預(yù)計(jì)將成為未來天然植物制劑市場(chǎng)的主導(dǎo)。國(guó)外對(duì)異黃酮的研究很多,進(jìn)展也很快,對(duì)異黃酮苷元的制備已經(jīng)有專利報(bào)道,并已建立了工業(yè)化生產(chǎn)線,而我國(guó)對(duì)大豆異黃酮的生產(chǎn)多采取直接溶劑提取,再用樹脂純化。這樣制備出來的大豆異黃酮95%以上還是結(jié)合態(tài)形式,其中游離形式的染料木黃酮和黃豆苷元含量甚少,很難起到調(diào)節(jié)人體生理功能作用。我國(guó)也有人利用酸水解來獲得游離形式大豆異黃酮,但強(qiáng)酸條件不易進(jìn)行工業(yè)化。由于強(qiáng)酸水解副產(chǎn)物多,且水解產(chǎn)物主要應(yīng)用于食品或藥品,因此也存在潛在的不安全因素。國(guó)外主要研究酶水解。酶水解條件溫和,多采用弱酸性的緩沖溶液,大豆異黃酮苷元不易變性,是工業(yè)上制備富含大豆異黃酮苷元的保健食品或藥品的十分有前途的途徑。酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)。酶水解不會(huì)存在人體食用的潛在危險(xiǎn),是一種理想的水解途徑。目前國(guó)外高活性的大豆異黃酮糖苷水解酶還在研制階段,研究最多的大豆異黃酮糖苷水解酶就是β-葡萄糖苷酶(孫艷梅等,2002),能夠水解大豆異黃酮糖苷的酶還有葡萄糖酸酶、半乳糖苷酶、生物乳糖酶、真菌乳糖酶和乳糖酶F等(Shen,et al 1998;Bryan,BarbaraA et al 2002;Tsuruhami,Kazutakaet al 2003),它們都有很強(qiáng)的水解大豆異黃酮糖苷的能力。使用從東北大豆中自行提取純化的大豆β-葡萄糖苷酶可以克服微生物發(fā)酵制酶,食用安全性差的問題,可以使產(chǎn)品更加安全。使用商品化的酶,可以降低生產(chǎn)成本。
酶催化水解反應(yīng)的化學(xué)反應(yīng)方程式如下
染料木黃酮(genistein) 黃豆苷元(daidzein)蛋白質(zhì)技術(shù)國(guó)際公司中國(guó)專利ZL97120435.7公開了使用酶水解制備異黃酮苷元的方法。該專利使用可裂解1,4糖甘鍵的酶制備異黃酮苷元。所裂解1,4糖甘鍵的酶來源于黑曲霉、米曲霉、乳克魯威氏酵母和脆壁克黑曲霉。優(yōu)選的酶是α-半乳糖酶、β-半乳糖酶、葡糖淀粉酶和果膠酶。
金鳳燮申請(qǐng)的中國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)朇N03133637.X)公開了用微生物發(fā)酵的方法水解大豆異黃酮糖苷,以制備大豆異黃酮苷元。其中所使用的微生物包括細(xì)菌、霉菌、酵母菌和擔(dān)子菌。在其實(shí)施例中使用的微生物包括高溫耗氧霉菌Clostridium thermocopriea、黑曲霉(Asperillus niger)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、假絲酵母和大肥菇菌(Agaricus bitorguis)。酶解產(chǎn)物用乙醇沉淀或正丁醇萃取分離,可得到大豆異黃酮苷元。該方法的轉(zhuǎn)化率為50-80%。
王哲申請(qǐng)的中國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)朇N200410058379.8)公開了用β-葡萄糖苷酶和膜技術(shù)生產(chǎn)大豆異黃酮苷元的方法。該方法以大豆異黃酮粉為基本原料,以大豆蛋白和大豆異黃酮作誘導(dǎo)劑,用培養(yǎng)霉菌釋放的胞外酶β-葡萄糖苷酶水解大豆異黃酮,并利用選自超濾和透析的膜技術(shù)進(jìn)行酶水解液的后處理,得到大豆異黃酮苷元。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種適合于工業(yè)化生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的以不同純度的大豆異黃酮粉為原料,應(yīng)用里氏木酶β-葡萄糖苷酶或大豆β-葡萄糖苷酶中的一種進(jìn)行水解,再對(duì)水解液進(jìn)行溶劑萃取、超濾及冷凍離心分離純化,得到染料木黃酮和黃豆苷元。其水解條件是酶與底物比為6000~14000U/g,加pH為4.00~6.00緩沖溶液稀釋至使反應(yīng)溶液總體積為800mL/g底物,37~60℃水解1~12小時(shí);得水解液先通過超濾分離,再用1∶1~1∶2的乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯或與它們有相近特性的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取,蒸去有機(jī)溶劑,真空干燥,得富含染料木黃酮和黃豆苷元干粉產(chǎn)品;其中,染料木黃酮水解效率可達(dá)90%以上,黃豆苷元水解效率可達(dá)98%以上。
本發(fā)明還可以包括這樣一些特征1、所述的大豆β-葡萄糖苷酶是采用下述方法得到的
(1)大豆β-葡萄糖苷酶的提取取東北大豆全豆,在20℃的水中浸泡20小時(shí),用冷水漂洗;在浸透的大豆中加入0.1mol·L-1,pH6.60的磷酸鹽緩沖溶液,研磨,勻漿;豆?jié){用4000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min;上清液用0.1mol·L-1的HCl酸化至pH5.0,后用自動(dòng)冷凍離心機(jī)8000r/min,4℃,離心10min;上清液即為粗提酶;(2)大豆β-葡萄糖苷酶的純化在上述粗提酶中加入硫酸銨使飽和度達(dá)到65~75%,靜置15~20小時(shí);8000×g,4℃,冷凍離心10~15min,收集沉淀蛋白,溶于0.05mol·L-1,pH5.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液中;該酶溶液倒入透析袋,在相同緩沖溶液中透析兩天,換透析用的緩沖溶液三次以上;酶液出現(xiàn)沉淀,再4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10min,清液即為部分純化酶液,上述過程在4~10℃下操作。大豆β-葡萄糖苷酶的純化也可以采用超濾法。
與已有技術(shù)相比,本發(fā)明的方法可以使用不同純度的大豆異黃酮粉。本發(fā)明使用的酶是可以直接購買的、可以應(yīng)用于食品或藥品的商品化酶;也可以自行制備。所采用的商品化的酶是里氏木酶β-葡萄糖苷酶。自行制備的酶是從東北大豆中自行提取純化的大豆β-葡萄糖苷酶。該大豆β-葡萄糖苷酶液在pH5.00時(shí),反應(yīng)的最佳溫度為45℃。該大豆3-葡萄糖苷酶在低于40℃時(shí)酶較穩(wěn)定,50℃加熱5min后酶活力減少23%,60℃加熱5min后酶活力僅剩了10%左右,到了70℃酶活性全部喪失。該大豆β-葡萄糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定性較差,pH值為3.00和4.00時(shí),于5℃放置24小時(shí),酶活力分別剩余10%和46%,在pH值為5.00~7.00時(shí)較穩(wěn)定。
本專利采用從東北大豆中自行提取純化的大豆β-葡萄糖苷酶。純化的大豆β-葡萄糖苷酶酶反應(yīng)的最佳溫度為45℃,酶反應(yīng)的最佳pH為5.00。在pH值為5.00~7.00時(shí)較穩(wěn)定。在低于40℃時(shí)較穩(wěn)定,70℃酶活性基本全部喪失。MMatsuura(Matsuura M.;Obata A.,β-Glucosidases from soybeans hydrolyze daidzinand genistin.J.Food Sci.,1993.58(1),144-147.Matsuura M.;Sasaki J.;Murao S.,Stuies on β-Glucosidases from soybeans that hydrolyze daidzin and genistinIsolation and characterization of an isozyme.Biosci.Biochem Biochem.,1995.59(9),1623-1627.)等研究了美國(guó)市售大豆中β-葡萄糖苷酶的性質(zhì),他們研究的大豆β-葡萄糖苷酶被純化了456倍,最佳反應(yīng)溫度45℃,與東農(nóng)42號(hào)大豆β-葡萄糖苷酶的相同。最佳pH值為4.50,與東農(nóng)42號(hào)大豆β-葡萄糖苷酶的最佳pH值相近。熱穩(wěn)定性(該酶在50℃加熱5min后,酶活力減少59%)比東農(nóng)42號(hào)大豆β-葡萄糖苷酶差得多,pH穩(wěn)定性(pH值為4.00時(shí),酶活力幾乎不減少)比東農(nóng)42號(hào)大豆β-葡萄糖苷酶好。該美國(guó)市售大豆中存在的β-葡萄糖苷酶,在45℃時(shí),水解大豆異黃酮糖苷3小時(shí),水解效率為22-29%。東農(nóng)42號(hào)大豆β-葡萄糖苷酶在45℃時(shí),水解大豆異黃酮糖苷3小時(shí),水解反應(yīng)效率為72%。盡管具體實(shí)驗(yàn)條件不同,由于水解效率差異較大,可說明東農(nóng)42號(hào)大豆β-葡萄糖苷酶有較高的水解大豆異黃酮糖苷能力,在加工高含量大豆異黃酮苷元產(chǎn)品中有較高的利用價(jià)值。應(yīng)用大豆β-葡萄糖苷酶進(jìn)行酶水解,條件溫和,節(jié)約能源,大豆異黃酮苷元不易變性,安全可靠,是工業(yè)上制備大豆異黃酮苷元的十分有前途的途徑。
里氏木霉β-葡萄糖苷酶(購買于上海)是淡黃色固體,將其溶解成水溶液,研究其酶學(xué)性質(zhì)。首先確定測(cè)定里氏木霉β-葡萄糖苷酶活力的試驗(yàn)條件底物濃度3mmol·L-1,反應(yīng)溫度50℃,pH值為5.0,反應(yīng)時(shí)間10分鐘。研究發(fā)現(xiàn)該酶的熱穩(wěn)定性較好,60℃加熱60分鐘后,酶活力下降29%;酶在pH 4.5-5左右時(shí)較穩(wěn)定。lmmol·L-1的Ba2+,Ca2+,Al3+,Mg2+和Fe2+對(duì)酶活無明顯的抑制作用,1mmol·L-1的Ag+對(duì)酶活有明顯的抑制作用,酶活力減少了64%。里氏木霉β-葡萄糖苷酶水解糖苷型大豆異黃酮的最佳條件為加酶量20單位、溫度50℃、pH4.5、水解時(shí)間90分鐘。對(duì)染料木苷水解率99.03%、黃豆苷水解率98.06%。
本發(fā)明易于操作,具有較高的轉(zhuǎn)化率(>85%),產(chǎn)品大豆異黃酮苷元總含量較高。本發(fā)明使用的酶是可以直接購買的商品化酶,也可以是自行制備的酶。所用的酶的緩沖溶液可以循環(huán)使用。使用從東北大豆中自行提取純化的大豆β-葡萄糖苷酶可以克服微生物發(fā)酵制酶,食用安全性差的問題,可以使產(chǎn)品更加安全。使用商品化的酶,可以降低生產(chǎn)成本。因此,本發(fā)明的方法更適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
(四)具體實(shí)施方案下面舉例對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的描述以下各實(shí)施例中酶水解苷元得率的確定為 異黃酮總量=糖苷型異黃酮含量+丙二?;彤慄S酮含量+乙?;蠖巩慄S酮含量大豆異黃酮含量測(cè)定采用高效液相色譜法。
實(shí)施例1 大豆β-葡萄糖苷酶的制備及水解大豆大豆異黃酮大豆(東農(nóng)42號(hào),由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大豆研究所的提供)全豆500.0g,在20℃的水中浸泡20小時(shí),用冷水漂洗。浸透的大豆中加入0.1mol·L-1,pH6.60的磷酸鹽緩沖溶液5000mL,電動(dòng)勻漿機(jī)勻漿。豆?jié){用4000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min。上清液用0.1mol·L-1的HCl酸化至pH5.0,后用自動(dòng)冷凍離心機(jī)8000r/min,4℃,離心10min。得上清液即為粗提酶。在粗提酶中加入硫酸銨使飽和度達(dá)到75%,靜置20小時(shí)。8000r/min,4℃,冷凍離心10min,收集沉淀蛋白,溶于0.05mol·L-1,pH5.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液中。該酶溶液倒入透析袋,在相同緩沖溶液中透析兩天,換透析用的緩沖溶液三次以上。酶液出現(xiàn)沉淀。再4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10min,清液即為部分純化酶液。
稱取100克40%的大豆異黃酮粉末作為水解底物,按6000U/g酶底物比加入大豆β-葡萄糖苷酶酶液,加緩沖溶液調(diào)整pH為5.00,在45℃下水解6hr。水解后,反應(yīng)液在80-90℃加熱5min,使大豆β-葡萄糖苷酶滅活。然后,用乙酸乙酯萃取三次,蒸出乙酸乙酯,真空干燥后得大豆異黃酮苷元粉20.3克,其中染料木黃酮含量為19.6%,黃豆苷元含量為17.2%。
實(shí)施例2 里氏木酶β-葡萄糖苷酶(商品酶由里氏木酶發(fā)酵得纖維素酶,從纖維素酶中提取純化得β-葡萄糖苷酶)水解大豆異黃酮粉制備染料木黃酮和黃豆苷元取100g 20%大豆異黃酮粉(黑龍江省糧食研究所提供),加磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液調(diào)pH至4.5,按酶-底物濃度比為5%加入β-葡萄糖苷酶(β一葡萄糖苷酶的比活力為23萬U/g),在50℃下水浴振蕩水解90min。然后離心過濾分離,分離后的大豆異黃酮苷元沉淀在70℃下用水(水體積為原來液體的4/5)洗30min,放置過夜。離心過濾分離,得到的沉淀再用70℃下用水(水體積為原來液體的4/5)洗15min,離心過濾分離,得到的沉淀用丙酮溶解(丙酮量為沉淀的5倍),離心分離,不溶于丙酮的沉淀(主要為大豆皂苷)回收。丙酮溶液旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去丙酮,得到的沉淀在50℃下真空干燥,得產(chǎn)品5g,收率為5%。產(chǎn)品中總苷元含量為10%,其中黃豆苷元2.5%,染料木黃酮含量為7.5%。
實(shí)施例3 制備高含量染料木黃酮和黃豆苷元方法如果需要制備高含量染料木黃酮和黃豆苷元,可以應(yīng)用高純度大豆異黃酮粉為底物進(jìn)行水解。水解前對(duì)大豆異黃酮粉進(jìn)一步進(jìn)行純化,再進(jìn)行水解。具體方法如下準(zhǔn)確稱取大豆異黃酮粉,按1∶20加入浸取劑丙酮,在60℃下加熱攪拌回流萃取3h,提取液在4000r/min條件下離心20min,取上層液體。沉淀用1∶10丙酮再次在60℃下于磁力加熱攪拌回流萃取1h,離心分離,合并兩次提取液。減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮。純化后的大豆異黃酮用于酶水解底物,按上述酶最佳水解條件水解后,將水解液在4℃時(shí)放置過夜。第2日在4000r/min的條件下離心30min,將沉淀溶于50-60℃溫水,再4℃時(shí)放置過夜。次日再在4000r/min的條件下離心,沉淀放入真空干燥箱中干燥。將干燥后的固體沉淀研磨成粉末狀,制備成相應(yīng)純度產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.一種酶水解大豆異黃酮生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法,其特征是以不同純度的大豆異黃酮粉為原料,應(yīng)用里氏木酶β-葡萄糖苷酶或大豆β-葡萄糖苷酶中的一種進(jìn)行水解,再對(duì)水解液進(jìn)行溶劑萃取、超濾及冷凍離心分離純化,得到染料木黃酮和黃豆苷元;其水解條件是酶與底物比為6000~14000U/g,加pH為4.00~6.00緩沖溶液稀釋至使反應(yīng)溶液總體積為800mL/g底物,37~60℃水解1~12小時(shí);所得水解液先通過超濾分離,再用1∶1~1∶2的乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯或與它們有相近特性的有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取,蒸去有機(jī)溶劑,真空干燥,得富含染料木黃酮和黃豆苷元干粉產(chǎn)品;其中,染料木黃酮水解效率可達(dá)85%以上,黃豆苷元水解效率可達(dá)90%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶水解大豆異黃酮生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法,其特征是所述的大豆β-葡萄糖苷酶是采用下述方法得到的(1)大豆β-葡萄糖苷酶的提取取東北大豆全豆,在20℃的水中浸泡20小時(shí),用冷水漂洗;在浸透的大豆中加入0.1mol·L-1,pH6.60的磷酸鹽緩沖溶液,研磨,勻漿;豆?jié){用4000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min;上清液用0.1mol·L-1的HCl酸化至pH5.0,后用自動(dòng)冷凍離心機(jī)8000r/min,4℃,離心10min;上清液即為粗提酶;(2)大豆β-葡萄糖苷酶的純化在上述粗提酶中加入硫酸銨使飽和度達(dá)到65%~75%,靜置15~20hr;8000×g,約4℃,冷凍離心10~15min,收集沉淀蛋白,溶于0.05mol·L-1,pH5.0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液中;該酶溶液倒入透析袋,在相同緩沖溶液中透析兩天,換透析用的緩沖溶液三次以上;酶液出現(xiàn)沉淀,再4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10min,清液即為部分純化酶液,上述過程在4~10℃下操作;大豆β-葡萄糖苷酶的純化也可以采用超濾法。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶水解大豆異黃酮生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法,其特征是稱取100克40%的大豆異黃酮粉末作為水解底物,按6000U/g酶底物比加入大豆β-葡萄糖苷酶酶液,加緩沖溶液調(diào)整pH為5.00,在45℃下水解6hr;水解后,反應(yīng)液在80~90℃加熱5min,使大豆β-葡萄糖苷酶滅活,然后,用乙酸乙酯萃取三次,蒸出乙酸乙酯,真空干燥后得大豆異黃酮苷元粉20.3克,其中染料木黃酮含量為19.6%,黃豆苷元含量為17.2%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶水解大豆異黃酮生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法,其特征是取100g 20%大豆異黃酮粉,加磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液調(diào)pH至4.5,按酶-底物濃度比為5%加入里氏木酶β-葡萄糖苷酶,在50℃下水浴振蕩水解90min,然后離心過濾分離,分離后的大豆異黃酮苷元沉淀在70℃下用水,水體積為原來液體的4/5,洗30min,放置過夜,離心過濾分離,得到的沉淀再用70℃下用水,水體積為原來液體的4/5,洗15min,離心過濾分離,得到的沉淀用丙酮溶解,丙酮量為沉淀的5倍,離心分離,不溶于丙酮的沉淀回收,丙酮溶液旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去丙酮,得到的沉淀在50℃下真空干燥,得產(chǎn)品5g,收率為5%;產(chǎn)品中總苷元含量為10%,其中黃豆苷元2.5%,染料木黃酮含量為7.5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的酶水解大豆異黃酮生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法,其特征是準(zhǔn)確稱取大豆異黃酮粉,按1∶20加入浸取劑丙酮,在60℃下加熱攪拌回流萃取3h,提取液在4000r/min條件下離心20min,取上層液體,沉淀用1∶10丙酮再次在60℃下于磁力加熱攪拌回流萃取1h,離心分離,合并兩次提取液,減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮,純化后的大豆異黃酮用于酶水解底物,按上述酶最佳水解條件水解后,將水解液在4℃時(shí)放置過夜,第2日在4000r/min的條件下離心30min,將沉淀溶于50-60℃溫水,再4℃時(shí)放置過夜,次日再在4000r/min的條件下離心,沉淀放入真空干燥箱中干燥,將干燥后的固體沉淀研磨成粉末狀,制備成相應(yīng)純度產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明提供的是一種酶水解大豆異黃酮生產(chǎn)染料木黃酮和黃豆苷元的方法。以不同純度的大豆異黃酮粉為原料,應(yīng)用里氏木酶β-葡萄糖苷酶或大豆β-葡萄糖苷酶中的一種進(jìn)行水解,再對(duì)水解液進(jìn)行溶劑萃取、超濾及冷凍離心分離純化,得到染料木黃酮和黃豆苷元。本發(fā)明的方法可以使用不同純度的水解原料。本發(fā)明使用的酶是可以直接購買的商品化酶,也可以是自行制備的酶。所用的酶的緩沖溶液可以循環(huán)使用。本發(fā)明易于操作,轉(zhuǎn)化率較高(>85%),產(chǎn)品大豆異黃酮苷元總含量較高。使用從東北大豆中自行提取純化的大豆β-葡萄糖苷酶可以克服微生物發(fā)酵制酶,食用安全性差的問題,可以使產(chǎn)品更加安全。使用商品化的酶,可以降低生產(chǎn)成本。因此,本發(fā)明的方法更適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P17/06GK1884568SQ200610010079
公開日2006年12月27日 申請(qǐng)日期2006年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月24日
發(fā)明者張永忠, 孫艷梅, 徐晶, 井樂剛, 李冬梅 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)