專利名稱：用離子液體提取分離蛋白質(zhì)和/或酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，特別是涉及一種用離子液體提取分離蛋白質(zhì)和/或酶的方法。
背景技術(shù)：
蛋白質(zhì)與酶是十分重要的生命物質(zhì)，其應(yīng)用范圍十分廣泛，包括醫(yī)藥、食品、化工、化妝品、日用品、農(nóng)業(yè)等各個(gè)領(lǐng)域。蛋白質(zhì)與酶的提取分離是人們一直以來都十分重視的課題，其提取分離方法很多，如有機(jī)分子溶劑萃取分離、膜分離、反膠束萃取、超臨界流體萃取分離、離子交換分離、沉淀分離等。傳統(tǒng)的方法是利用大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機(jī)溶劑中，因此，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。但是這些方法總是或多或少地存在著一些不足，見表1。
表1 蛋白質(zhì)(包括酶)傳統(tǒng)提取方法的不足

室溫離子液體(Room temperature ionic liquids，RTILs)，常被簡(jiǎn)稱為離子液體，又稱室溫熔融鹽。是指在室溫或室溫附近溫度下呈液態(tài)的僅由離子組成的物質(zhì)，它作為一種對(duì)環(huán)境友好的溶劑，正在被人們認(rèn)識(shí)和接受。組成離子液體的陽離子一般為有機(jī)陽離子(如烷基咪唑陽離子、烷基吡啶陽離子、烷基季銨離子、烷基季鏻離子等)，陰離子可為無機(jī)陰離子或有機(jī)陰離子(如[PF6]-、[BF4]-、[AlCl4]-、[CF3SO3]-等)。自1914年發(fā)現(xiàn)第一個(gè)離子液體—硝基乙胺以來，特別是在20世紀(jì)80年代中期至今的這段時(shí)間，離子液體在許多領(lǐng)域的研究都呈現(xiàn)出非?；钴S的態(tài)勢(shì)。離子液體的研究大體可分為兩個(gè)階段(1)1992年以前的研究主要集中于氯代鋁酸鹽類離子液體，這類離子液體對(duì)空氣、水分較為敏感，易于水解，需要無氧無水操作，使用條件較為苛刻，因而限制了它的開發(fā)和應(yīng)用；(2)近年來所進(jìn)行的研究主要集中在對(duì)空氣和水不敏感的非氯代鋁酸鹽類離子液體體系的研究和開發(fā)。
較傳統(tǒng)的液態(tài)物質(zhì)相比，離子液體具有以下幾個(gè)無與倫比的優(yōu)勢(shì)(1)一般不會(huì)成為蒸氣，不易揮發(fā)，從而在使用過程中不會(huì)給環(huán)境造成很大污染；(2)具有較大的穩(wěn)定溫度范圍(-100～200℃，部分學(xué)者認(rèn)為離子液體的液程可達(dá)400℃)，較好的化學(xué)穩(wěn)定性、較寬的電化學(xué)穩(wěn)定電位窗口、熱穩(wěn)定性和極好的抗氧化性；(3)離子液體的溶解性、液體狀態(tài)范圍等物化性能，取決于陰、陽離子的構(gòu)成和配對(duì)，可根據(jù)需要，定向設(shè)計(jì)離子液體體系，調(diào)節(jié)其對(duì)無機(jī)物、水、有機(jī)物及聚合物的溶解性，使許多化學(xué)反應(yīng)得以在均相中完成，且反應(yīng)器體積大為減小，并且其酸度可調(diào)至超酸性。(4)離子液體可以反復(fù)多次使用。(5)它還可用作新材料生產(chǎn)過程中的酶催化劑。威爾克斯最近還發(fā)現(xiàn)，離子液體還可以用于處理廢舊輪胎，回收其中的聚合物?？茖W(xué)家最近的研究成果還表明，用離子液體可有效地提取工業(yè)廢氣中的二氧化碳。(6)密度大，與許多溶劑不互溶。當(dāng)用另一溶劑萃取目標(biāo)物時(shí)，通過重力作用，就可實(shí)現(xiàn)溶劑和目標(biāo)物的分離，從而保證溶劑和催化劑的高效使用。目前應(yīng)用較多的一些領(lǐng)域主要有催化和有機(jī)合成領(lǐng)域、分離分析領(lǐng)域、電化學(xué)中的電鍍電沉積及導(dǎo)電材料和電化學(xué)器件、新型材料領(lǐng)域中的敏感材料及潤滑材料等、生命科學(xué)領(lǐng)域中的藥物合成與篩選等。
離子液體在萃取分離中的應(yīng)用分離提純回收產(chǎn)物一直是合成化學(xué)的難題。用水萃取分離只適用于親水性產(chǎn)物，蒸餾技術(shù)也不適用于揮發(fā)性差的產(chǎn)物，使用有機(jī)溶劑又會(huì)引起交叉污染。因此，設(shè)計(jì)安全的、環(huán)境友好的分離技術(shù)顯得越來越重要。離子液體由于具有獨(dú)特的理化性能，非常適合作為分離提純的溶劑。尤其是在液-液萃取分離上，離子液體能溶解某些有機(jī)化合物、無機(jī)化合物和有機(jī)金屬化合物，同時(shí)與多數(shù)有機(jī)溶劑不混溶，非常適合作為液-液萃取的新的介質(zhì)。目前的研究多數(shù)是用離子液體從水溶液中萃取有機(jī)或無機(jī)物，萃取物不同所選離子液體也不同。
用離子液體萃取揮發(fā)性有機(jī)物時(shí)，因離子液體蒸氣壓低，熱穩(wěn)定性好，萃取完成后將萃取相加熱，即可把萃取物趕出，離子液體易于循環(huán)使用。Huddlestou等用與水不溶的離子液體1-甲基-3-丁基咪唑六氟磷酸鹽([BMIm][PF6])從水中萃取苯的衍生物如甲苯、苯胺、苯甲酸、氯苯等。結(jié)果顯示，不同pH下多種有機(jī)酸和堿的分配系數(shù)完全相反，這與溶液中溶質(zhì)的質(zhì)子化狀態(tài)直接相關(guān)的。分配系數(shù)的大小隨溶液的pH的變化在1.0上下波動(dòng)。通過調(diào)節(jié)溶液的pH，可以控制某種溶質(zhì)在兩相間的分配狀態(tài)，因而提高了萃取過程的可調(diào)節(jié)性。離子液體作為萃取劑也可應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)，如在生產(chǎn)生物燃料的重要方法丙酮-乙醇-丁醇發(fā)酵法中，產(chǎn)物中的乙醇通過蒸餾除去，丁醇由于沸點(diǎn)較高，常采用萃取分離的方法加以分離。常用的萃取劑包括三丁基膦、1-辛醇和乙醚，它們的分配系數(shù)分別為14.6、7.6和4.1。三丁基膦雖然有較高的分配系數(shù)，但對(duì)發(fā)酵微生物有較大毒性。Faddev等發(fā)現(xiàn)使用[BMIm][PF6]和[OMIm][PF6](1-甲基-3-辛基咪唑六氟磷酸鹽)作為丁醇的萃取劑時(shí)，分配系數(shù)分別可以達(dá)到25.7和55.3，而且萃取劑對(duì)發(fā)酵微生物幾乎沒有毒性。這些研究顯示了離子液體在有機(jī)物分離中的巨大優(yōu)勢(shì)，但目前利用離子液體提取分離蛋白質(zhì)和/或酶的報(bào)導(dǎo)尚不多見。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述技術(shù)問題提供一種用離子液體提取分離蛋白質(zhì)和/或酶的方法。
本發(fā)明的目的是通過下列技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，包括下列步驟a.原料預(yù)處理；b.加入適量含離子液體的萃取劑；c.萃取液離心、過濾，濾液經(jīng)純化，濃縮即可。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中原料預(yù)處理的方法為除雜、調(diào)節(jié)[H+]＝3～10-14mol/L、調(diào)節(jié)水分為0％～90％、控制溫度-5℃～85℃、環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中原料為含有蛋白質(zhì)和/或酶的生物體或其組織、化學(xué)制品、生物制品、生物化學(xué)制品、食品、藥物及其中間體。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中含離子液體的萃取劑是通過下列方法制備得到配制比例為按重量百分比計(jì)，在萃取劑中離子液體所占份額為15％～99％，輔助劑所占份額為1％～85％，且離子液體與輔助劑份額之和為100％；將離子液體、輔助劑混合均勻即可。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中離子液體采用非氯代鋁酸鹽類離子液體。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中離子液體是咪唑類離子液體、胍類離子液體、季鏻類離子液體、季銨類離子液體或吡啶類離子液體中的一種或多種。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中離子液體的密度為1.1～1.6g/cm3，密度與溫度之間為線性關(guān)系。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中輔助劑為中性溶劑、酸性溶劑、堿性溶劑或酸度調(diào)節(jié)劑中的一種或多種。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中輔助劑中中性溶劑是水、乙酸甲酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丁酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、己烷；酸性溶劑是磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸；堿性溶劑是乙胺、丙胺、吡啶、甲基吡啶；酸度調(diào)節(jié)劑是碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫鈉、硫酸氫銨、鹽酸、氫氧化鈉。
所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其中純化的方法采用電泳法或柱層析法。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用了新型綠色萃取分離劑——離子液體，該物質(zhì)具有一系列突出優(yōu)越性①無色、無臭、幾乎無毒，不揮發(fā)，幾乎無蒸氣壓。②有良好的熱穩(wěn)定性，熱穩(wěn)定溫度范圍寬。不易燃，粘度不大，流動(dòng)性好。起始分解溫度一般在400℃左右，呈液態(tài)時(shí)穩(wěn)定溫度區(qū)間約300℃，是一般分子溶劑不可比擬的。③離子液體可溶解的物質(zhì)范圍廣，可溶解許多無機(jī)、有機(jī)、有機(jī)金屬、合成或天然高分子材料、生物活性物質(zhì)，且溶解度相對(duì)較大。④離子液體具有較大的極性可調(diào)控性，粘度比一般有機(jī)溶劑或水的粘度高1～2個(gè)數(shù)量級(jí)，但仍具有良好的流動(dòng)性，可形成二相或多相體系，適合作分離溶劑或構(gòu)成反應(yīng)-分離耦合新體系。⑤離子液體的密度一般為1.1～1.6g/cm3，密度與溫度之間為線性關(guān)系。⑥常溫下離子液體的導(dǎo)電系數(shù)為10-1Ω-1·m-1左右，通常離子小，粘度低，密度大，則導(dǎo)電性好。其電化學(xué)穩(wěn)定電位窗口之寬(4V左右)是一般溶劑不具備的。⑦離子液體作為一種綠色環(huán)保溶劑或催化劑不僅是在溶劑或催化劑性能上具有環(huán)境安全性，而且自身可生物降解是環(huán)境安全物質(zhì)。⑧離子液體與某些離子等還有較強(qiáng)的配位活性。
本發(fā)明提供的用離子液體提取分離蛋白質(zhì)和/或酶的方法，既克服了傳統(tǒng)萃取的不安全、萃取劑回收重復(fù)利用率低和?；钚圆畹娜秉c(diǎn)，也避免了超臨界萃取方法的苛刻條件和不安全隱患。本發(fā)明提取分離高效、快捷，萃取劑安全，可以多次反復(fù)使用，提取分離的蛋白質(zhì)(酶)能夠保持活性，并且具有將提取與分離合二為一，操作簡(jiǎn)捷方便等優(yōu)點(diǎn)。


圖1是本發(fā)明工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的描述。所述的提取分離工藝流程和萃取劑制備方法僅供參考，但不意味著對(duì)本發(fā)明的限制。
以下實(shí)施例中的萃取劑(離子液體+輔助劑)可以反復(fù)使用10次以上。制備萃取劑時(shí)采用攪拌機(jī)、乳化機(jī)或超聲波將各組分混合均勻即可。實(shí)施中未注明具體條件和步驟的破碎、分離、過濾、純化、超聲波震蕩、蛋白質(zhì)純度測(cè)定等方法均為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)。
實(shí)施例1提取植物蛋白質(zhì)。以1000g大豆粕為原料，進(jìn)行原料預(yù)處理，包括破碎、過篩、除雜，用蒸餾水調(diào)節(jié)原料含水量為1.0％～3.0％(w/w)、控制溫度在15℃～45℃、用碳酸氫鈉調(diào)pH6.5～9.5，注意環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射，以免對(duì)蛋白質(zhì)活性造成影響。加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量88.5％的六烷基胍氟硼酸鹽、4％丁酸乙酯、5％乙醇以及2.5％醋酸組成，使用前混合均勻備用)5000g(分3次進(jìn)行萃取，第一次萃取劑的用量為總量的40％，第二、三次均為30％)，在振蕩器振蕩下提取3～5h，然后于離心機(jī)上在5000r/min下進(jìn)行10min左右的離心分離，過濾，并對(duì)濾液再次進(jìn)行調(diào)節(jié)水分至5±0.5％、pH3.5～5.5，然后再離心、過濾，濾液為粗品，再用電泳法進(jìn)行純化(純化的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法，以下同)，純化料用真空冷凍干燥法濃縮制得大豆蛋白質(zhì)產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)85.6％以上，蛋白質(zhì)產(chǎn)品的純度(以GB/T5009.5-1996國標(biāo)規(guī)定的凱氏定氮法測(cè)定)達(dá)到97.8％以上。
實(shí)施例2提取植物蛋白質(zhì)。以1000g小麥為原料，進(jìn)行預(yù)處理，包括粉碎、過篩、用蒸餾水調(diào)節(jié)原料含水量為60±5％(w/w)、控制溫度為40±5℃、用磷酸氫鈉調(diào)pH6.5～9.5，注意環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射。加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量88.5％的六烷基胍氟磷酸鹽離子液體、10％丙酸甲酯、1％己烷以及0.5％丁酸組成，使用前混合均勻備用)4000g(分3次進(jìn)行萃取，第一次萃取劑的用量為總量的40％，第二、三次均為30％)，在振蕩器振蕩下提取3～5h，然后于離心機(jī)上在5000r/min下離心10min，過濾，并對(duì)濾液調(diào)節(jié)水分至5±1％、pH4.5±1，然后離心過濾，濾液為粗品，再用柱層析法進(jìn)行純化(純化的方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的方法，以下同)，純化料用真空冷凍干燥法濃縮制得大豆蛋白質(zhì)產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)87％以上，蛋白質(zhì)產(chǎn)品的純度(以GB/T5009.5-1996國標(biāo)規(guī)定的凱氏定氮法測(cè)定)達(dá)到98.1％以上。
實(shí)施例3提取動(dòng)物蛋白質(zhì)。以500g豬血粉為原料，先除去雜質(zhì)、再超聲破碎、碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH7.5～9.0、調(diào)節(jié)水分0.1％～2.0％(w/w)、溫度10℃～15℃，注意環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射。加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量25％的1-甲基-3-丁基咪唑四氟硼酸鹽和55％的1-甲基-3-辛基咪唑六氟磷酸鹽組成的離子液體、3％磷酸二氫鈉、7％硫酸氫銨、1％甲酸乙酯、9％丙酮組成，使用前混合均勻備用)，萃取劑的用量為原料質(zhì)量的10倍(分3次進(jìn)行提取，第一次萃取劑的用量為總量的40％，第二、三次均為30％)，在超聲振蕩下提取20min，然后于離心機(jī)上在6000r/min下進(jìn)行10min左右的離心分離，過濾，并對(duì)濾液調(diào)節(jié)水分至10±2％、pH4.5～6.0，5％石英粉助沉淀，然后再離心過濾，濾液為粗品，再用電泳法進(jìn)行純化，純化料用真空冷凍干燥法濃縮制得大豆蛋白質(zhì)產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)90.2％以上，蛋白質(zhì)產(chǎn)品的純度(以GB/T5009.5-1996國標(biāo)規(guī)定的凱氏定氮法測(cè)定)達(dá)到98.3％以上。
實(shí)施例4提取動(dòng)物蛋白質(zhì)。以500g豬血粉為原料，先除去雜質(zhì)、再超聲破碎、磷酸氫鈉和磷酸鈉調(diào)節(jié)pH8.5～9.0、水分0.1％～2.0％(w/w)、溫度10℃～15℃，注意環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射。加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量65％的1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽和15％的N-丁基吡啶四氟硼酸鹽組成的離子液體、5％磷酸氫鈉、5％硫酸氫銨、3％乙酸甲酯、7％丙酮組成，使用前混合均勻備用)，萃取劑的用量為原料質(zhì)量的5倍(分3次進(jìn)行提取，第一次萃取劑的用量為總量的40％，第二、三次均為30％)，在超聲振蕩下提取80min，然后于離心機(jī)上在4000r/min下進(jìn)行10min左右的離心分離，過濾，并對(duì)濾液進(jìn)行調(diào)節(jié)水分至8±3％、酸度pH4.5～5.5、3％石英粉助沉淀，然后再離心過濾，濾液為粗品，再用柱層析法進(jìn)行純化，純化料用真空冷凍干燥法制得蛋白質(zhì)產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)91.2％以上，蛋白質(zhì)產(chǎn)品的純度(以GB/T5009.5-1996國標(biāo)規(guī)定的凱氏定氮法測(cè)定)達(dá)到98.5％以上。
實(shí)施例5提取酶。以100g活力≥100U/g的纖維素酶液為原料，粗濾除雜、用濃度為10％的磷酸調(diào)節(jié)pH3.5～4.5、水分60±5％(w/w)、溫度25℃～30℃、注意環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射。加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量由50％的1-甲基-3-丁基咪唑六氟硼酸鹽離子液體、7％磷酸二氫鈉、8％硫酸氫銨、5％甲酸和30％甲醇，使用前混合均勻備用)500g，在超聲振蕩器振蕩下提取，提取時(shí)間60min，然后于離心機(jī)上在5000r/min下進(jìn)行10min的離心分離，過濾，濾液再次調(diào)節(jié)水分至20±5％、酸度pH4.5～5.0，然后離心過濾，濾液為粗品，再用柱層析法進(jìn)行純化，純化料用真空冷凍干燥法濃縮制得纖維素酶產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)84.4％以上，纖維素酶產(chǎn)品的純度(以濾紙?zhí)菫V紙法測(cè)定纖維素酶活力的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行表示)達(dá)到95.0％以上。
實(shí)施例6提取大腸桿菌蛋白質(zhì)。以100g發(fā)酵后的大腸桿菌(E.coli)MC1061發(fā)酵液(OD260為0.5～0.6)為原料，預(yù)處理(包括除雜、調(diào)節(jié)pH7～8、水分80±5％、溫度15℃～20℃，注意環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射)后，加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量由65％的1-乙基-3-甲基咪唑三氟醋酸鹽離子液體、10％碳酸鈉、15％乙酸乙酯、10％乙醇，使用前混合均勻備用)300g，在超聲振蕩器振蕩下提取，提取時(shí)間50min，然后于離心機(jī)上在5000r/min下進(jìn)行20min的離心分離，過濾，濾液再次調(diào)節(jié)水分至65±5％、酸度pH7.5～8.0，然后離心、過濾，濾液為粗品，再用柱層析法進(jìn)行純化，純化料用真空冷凍干燥法濃縮制得大腸桿菌蛋白質(zhì)產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)91.2％以上，大腸桿菌蛋白質(zhì)產(chǎn)品的純度(以GB/T5009.5-1996國標(biāo)規(guī)定的凱氏定氮法測(cè)定)達(dá)到92.4％以上。
實(shí)施例7提取土霉素。以100g發(fā)酵后的土霉素發(fā)酵液為原料，預(yù)處理(包括除雜、調(diào)節(jié)pH2.5～4、水分70±5％、溫度-5℃～5℃，注意環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射)后，加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量由60％的1-乙基-3-甲基咪唑乙基磺酸鹽離子液體、5％碳酸鈉、15％乙酸乙酯、20％乙醇，使用前混合均勻備用)300g，在超聲振蕩器振蕩下提取，提取時(shí)間50min，然后于離心機(jī)上在6000r/min下進(jìn)行15min的離心分離，過濾，濾液再次調(diào)節(jié)水分至35±5％、酸度pH5.5～6.0，然后離心、過濾，濾液為粗品，再用柱層析法進(jìn)行純化，純化料用真空冷凍干燥法濃縮制得土霉素產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)92.2％以上，土霉素產(chǎn)品的純度(以國標(biāo)法GB/T14931.01-1996高效液相色譜(HLPC)法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行表示)達(dá)到93.6％以上。
實(shí)施例8提取酵母菌蛋白質(zhì)。以100g發(fā)酵后的啤酒酵母菌短小芽桿菌的a—乙酸乳酸脫羧酶(aldc)發(fā)酵液(OD260為0.6～0.7)為原料，預(yù)處理(包括除雜、調(diào)節(jié)pH5.5～6.5、水分70±5％、溫度-5℃～5℃、控制環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避光)后，加入萃取劑(按重量百分比計(jì)，萃取劑由占萃取劑總重量由70％的四乙銨磺酸鹽離子液體、8％碳酸氫鈉、15％乙酸甲酯，7％甲基吡啶，使用前混合均勻備用)300g，在超聲振蕩器振蕩下提取，提取時(shí)間60min，然后于離心機(jī)上在6000r/min下進(jìn)行15min的離心分離，過濾，濾液再次調(diào)節(jié)水分至35±5％、酸度pH5.5～6.0，然后離心、過濾，濾液為粗品，再用柱層析法進(jìn)行純化，純化料用真空冷凍干燥法濃縮制得酵母菌蛋白質(zhì)產(chǎn)品。經(jīng)測(cè)定，該法提取率達(dá)92.2％以上，酵母菌蛋白質(zhì)產(chǎn)品的純度(以GB/T5009.5-1996國標(biāo)規(guī)定的凱氏定氮法測(cè)定)達(dá)到93.6％以上。
權(quán)利要求
1.一種蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于包括下列步驟a.原料預(yù)處理；b.加入適量含離子液體的萃取劑；c.萃取液離心、過濾，濾液經(jīng)純化，濃縮即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于原料預(yù)處理的方法為除雜、調(diào)節(jié)[H+]＝3～10-14mol/L、調(diào)節(jié)水分為0％～90％、控制溫度-5℃～85℃、環(huán)境中不含有毒有害物質(zhì)和避免陽光照射。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于原料為含有蛋白質(zhì)和/或酶的生物體或其組織、化學(xué)制品、生物制品、生物化學(xué)制品、食品、藥物及其中間體。
4.根據(jù)權(quán)利1所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于含離子液體的萃取劑是通過下列方法制備得到配制比例為按重量百分比計(jì)，在萃取劑中離子液體所占份額為15％～99％，輔助劑所占份額為1％～85％，且離子液體與輔助劑份額之和為100％；將離子液體、輔助劑混合均勻即可。
5.根據(jù)權(quán)利1或4所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于離子液體是非氯代鋁酸鹽類離子液體。
6.根據(jù)權(quán)利5所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于離子液體是咪唑類離子液體、胍類離子液體、季鏻類離子液體、季銨類離子液體或吡啶類離子液體中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于離子液體的密度為1.1～1.6g/cm3，密度與溫度之間為線性關(guān)系。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于輔助劑為中性溶劑、酸性溶劑、堿性溶劑或酸度調(diào)節(jié)劑中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于輔助劑中中性溶劑是水、乙酸甲酯、乙酸乙酯、甲酸乙酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丁酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、己烷；酸性溶劑是磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸；堿性溶劑是乙胺、丙胺、吡啶、甲基吡啶；酸度調(diào)節(jié)劑是碳酸鈉、碳酸氫鈉、磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫鈉、硫酸氫銨、鹽酸、氫氧化鈉。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白質(zhì)和/或酶提取分離的方法，其特征在于純化的方法采用電泳法或柱層析法。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用離子液體提取分離蛋白質(zhì)和/或酶的方法。該方法包括下列步驟原料預(yù)處理，加入含離子液體的萃取劑，萃取液離心、過濾、純化、濃縮即可。該方法采用離子液體為萃取劑主要成分，提取分離高效、快捷，萃取劑安全，可以多次反復(fù)使用，提取分離的蛋白質(zhì)與酶能夠保持活性，并且提取與分離步驟合二為一，操作簡(jiǎn)捷方便。
文檔編號(hào)C12N9/00GK1807446SQ20061003851
公開日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2006年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月27日
發(fā)明者劉曉庚, 鞠興榮, 劉長(zhǎng)鵬, 陳梅梅, 汪峰, 孫明, 汪海峰 申請(qǐng)人:南京財(cái)經(jīng)大學(xué)