專利名稱：一種乳酸菌口服液的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種乳酸菌口服液的制備方法，屬于保健食品領域。
背景技術：
隨著相關科學研究的不斷深入，乳酸菌對于人體健康的益處被越來越多地揭示出來，如促進機體對營養(yǎng)成分的吸收利用、維持腸道菌群的微生態(tài)平衡、增強機體免疫功能等。
其主要功能如下1、調(diào)節(jié)腸道菌群乳酸菌通過產(chǎn)生大量有機酸、過氧化氫、酶、細菌素等，抑制了病原菌的繁殖和定植，促進了腸蠕動，維持腸道微生態(tài)和正常生理功能。乳酸菌是定居在腸道中的有益菌群，以乳酸菌為代表的專性厭氧菌是構(gòu)成定植抗力的主要力量。乳酸菌通過代謝產(chǎn)酸降低腸內(nèi)pH值也起到了抑制有害菌繁殖的作用。
2、增強免疫力乳酸菌能明顯激活巨噬細胞的吞噬作用，同時還能激活B淋巴細胞和NK細胞，增加腸道中IgA的產(chǎn)生，增加IL-1、IL-2、IL-5、IL-6、TNF-α等細胞因子的產(chǎn)生量，刺激人體產(chǎn)生非特異性免疫；另一方面由于它能在腸道內(nèi)定植，相當于天然自動免疫。加之它們還能刺激腹膜巨噬細胞，產(chǎn)生干擾素，促進細胞分裂，產(chǎn)生抗體及細胞免疫等，所以能增強機體的非特異性和特異性免疫反應，提高機體的抗病能力。當異物侵入機體時，被乳酸菌激活的免疫細胞，則有增強機體對異物產(chǎn)生抗體的作用。
因此，乳酸菌飲料具有很好的增強免疫力、調(diào)節(jié)腸道菌群的保健功能。
目前生產(chǎn)乳酸菌飲料主要是生產(chǎn)酸奶，用的原料是牛奶，菌種是植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、糞鏈球菌，迄今還沒有利用紅糖，葡萄糖為原料來制備乳酸菌口服液。

發(fā)明內(nèi)容針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供一種新的乳酸菌口服液的制備方法。
本發(fā)明的乳酸菌口服液的制備方法，概括地說是，本發(fā)明利用紅糖、葡萄糖等原料，菌種選自干酪乳桿菌干酪亞種Lactobacillus casei subsp.Casei(菌種編號CGMCC1.2435)，植物乳桿菌Lactobacillus plantarum(菌種編號CGMCC1.103)，嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus(菌種編號CGMCC 1.1854)，凝結(jié)芽孢桿菌Bacilluscoagulans(菌種編號CGMCC1.2009)四種益生菌之一或組合，通過微生物發(fā)酵來制備乳酸菌口服液。上述4種益生菌菌株均購自中國普通微生物菌種保藏管理中心。本產(chǎn)品的活性成分即為上述4種益生菌之一或組合。
本發(fā)明的乳酸菌口服液的制備方法，步驟如下(1)按重量份將食用糖1-10份、食用葡萄糖1-10份、蛋白胨0.1-2份、硫酸鎂0.01-0.2份、硫酸錳0.01-0.2份、磷酸氫二鉀0.01-1份、氯化鈉0.1-2份混合，加凈化的水75-98份溶解，熱處理方法進行滅菌，作為培養(yǎng)基；(2)在上述培養(yǎng)基上接入下列菌種之一或者其組合，接種量為0.5-2份，重量份干酪乳桿菌干酪亞種Lactobacillus casei subsp.Casei(菌種編號CGMCC1.2435)，植物乳桿菌Lactobacillus plantarum(菌種編號CGMCC1.103)，嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus(菌種編號CGMCC1.1854)，凝結(jié)芽孢桿菌Bacillus coagulans(菌種編號CGMCC1.2009)；(3)將步驟(2)接種后的混合液在37℃培養(yǎng)48小時，pH值降至3.4-4.0時即可；(4)將步驟(3)的產(chǎn)物無菌分裝，制得乳酸菌口服液。
優(yōu)選的，步驟(1)所述的熱處理是在110-128℃的溫度下進行的，滅菌時間為25-180分鐘。
優(yōu)選的，步驟(1)所述的食用糖是紅糖。
本發(fā)明方法制備的乳酸菌口服液為棕色液體，味酸，活菌含量10億/mL左右。特別適用于改善消化不良、吸收不良、胃口不佳、腹瀉、便秘、腸脹氣等胃腸問題。
本發(fā)明首次選用紅糖、葡萄糖為原料來制備乳酸菌口服液。所用的干酪乳桿菌干酪亞種單獨發(fā)酵時，可以在48小時內(nèi)將pH值降到3.40，植物乳桿菌單獨發(fā)酵時，可以在48小時內(nèi)將pH值降到3.6，嗜酸乳桿菌單獨發(fā)酵時，可以在48小時內(nèi)將pH值降到3.9，凝結(jié)芽孢桿菌單獨發(fā)酵時，可以在48小時內(nèi)將pH值降到3.5。四株菌混合培養(yǎng)，可以在48小時內(nèi)將pH值降到3.6。本發(fā)明方法制備乳酸菌口服液，產(chǎn)酸快，益生菌含量理想。


圖1是干酪乳桿菌干酪亞種單菌株發(fā)酵產(chǎn)酸曲線，圖2是植物乳桿菌單菌株發(fā)酵產(chǎn)酸曲線，圖3是嗜酸乳桿菌單菌株發(fā)酵產(chǎn)酸曲線，圖4是凝結(jié)芽孢桿菌單菌株發(fā)酵產(chǎn)酸曲線，圖5干酪乳桿菌干酪亞種、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌和凝結(jié)芽孢桿菌四種菌株混合發(fā)酵產(chǎn)酸曲線。圖中橫坐標是發(fā)酵時間(單位小時)，縱坐標是pH值。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步說明，但不限于此。實施例1-5中各組分的用量單位均為重量份。
實施例1干酪乳桿菌干酪亞種單菌株發(fā)酵制備乳酸菌口服液本實施例選用干酪乳桿菌干酪業(yè)種單獨發(fā)酵，可以在48小時內(nèi)將pH值降到3.6左右。制備方法將紅糖2份，葡萄糖5份，蛋白胨0.2份、硫酸鎂0.01份、硫酸錳0.01份、磷酸氫二鉀0.01份、氯化鈉0.2份混合在一起，加經(jīng)過凈化的自來水溶解，116℃通蒸汽進行滅菌；然后接入干酪乳桿菌干酪亞種種子液1份，37℃培養(yǎng)48小時，pH降至3.6時收獲，裝瓶。產(chǎn)酸曲線見圖1。所得乳酸菌口服液為棕色液體，味酸，活菌含量10億/mL。
實施例2植物乳桿菌單菌株發(fā)酵制備乳酸菌口服液本實施例選用植物乳桿菌單獨發(fā)酵，可以在40小時內(nèi)將pH值降到3.7左右。制備方法將紅糖2份，葡萄糖5份，蛋白胨0.2份、硫酸鎂0.01份、硫酸錳0.01份、磷酸氫二鉀0.01份、氯化鈉0.2份混合在一起，加經(jīng)過凈化的自來水溶解，116℃通蒸汽進行滅菌；然后接入植物乳桿菌種子液1份，37℃培養(yǎng)48小時，pH降至3.6時收獲，裝瓶。產(chǎn)酸曲線見圖2。所得乳酸菌口服液為棕色液體，味酸，活菌含量10億/mL。
實施例3嗜酸乳桿菌單菌株發(fā)酵制備乳酸菌口服液本實施例選用嗜酸乳桿菌單獨發(fā)酵，可以在30小時內(nèi)將pH值降到3.9左右。制備方法將紅糖2份，葡萄糖3份，蛋白胨0.1份、硫酸鎂0.02份、硫酸錳0.02份、磷酸氫二鉀0.02份、氯化鈉0.1份混合在一起，加經(jīng)過凈化的自來水溶解，116℃通蒸汽進行滅菌；然后接入嗜酸乳桿菌種子液1份，37℃培養(yǎng)30小時，pH降至3.9時收獲，裝瓶。產(chǎn)酸曲線見圖3。所得乳酸菌口服液為棕色液體，味酸，活菌含量10億/mL。
實施例4凝結(jié)芽孢桿菌單菌株發(fā)酵制備乳酸菌口服液本實施例選用凝結(jié)芽孢桿菌單獨發(fā)酵，可以在37小時內(nèi)將pH值降到3.6左右。制備方法將紅糖3份，葡萄糖4份，蛋白胨0.2份、硫酸鎂0.02份、硫酸錳0.02份、磷酸氫二鉀0.02份、氯化鈉0.1份混合在一起，加經(jīng)過凈化的自來水溶解，116℃通蒸汽進行滅菌；然后接入凝結(jié)芽孢桿菌種子液1份，37℃培養(yǎng)37小時，pH降至3.6時收獲，裝瓶。產(chǎn)酸曲線見圖4。所得乳酸菌口服液為棕色液體，味酸，活菌含量10億/mL。
實施例5干酪乳桿菌干酪亞種、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌四種益生菌按1∶1∶1∶1體積比混合接種發(fā)酵制備乳酸菌口服液。
本實施例選用干酪乳桿菌干酪亞種、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌四種益生菌按1∶1∶1∶1體積比混合接種發(fā)酵，可以在28小時內(nèi)將pH值降到3.5左右。制備方法將紅糖5份，葡萄糖3份，蛋白胨0.2份、硫酸鎂0.02份、硫酸錳0.01份、磷酸氫二鉀0.02份、氯化鈉0.1份混合在一起，加經(jīng)過凈化的自來水溶解，116℃通蒸汽進行滅菌；然后接入干酪乳桿菌干酪亞種、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌四種益生菌按1∶1∶1∶1體積比混合種子液共1份，37℃培養(yǎng)28小時，pH降至3.5時收獲，裝瓶。產(chǎn)酸曲線見圖5。所得乳酸菌口服液為棕色液體，味酸，活菌含量10億/mL。
實施例6為了解乳酸菌口服液對嬰幼兒秋冬季腹瀉的療效，觀察了55例嬰幼兒秋冬季腹瀉臨床治療效果。本組資料均為山東某醫(yī)院住院的腹瀉病兒，年齡6月～2歲；急性起病，病程在3天以內(nèi)，臨床癥狀以發(fā)熱、腹瀉、腹脹、或伴輕度脫水，腹瀉次數(shù)每日4次以上；大便性狀呈蛋花湯樣或稀水樣，常規(guī)檢查有脂肪球或少許白細胞，無紅細胞，膿球，寄生蟲等，伴或不伴上呼吸道感染。
將本組資料隨機分為2組，治療組30例，男20例，女10例，年齡＜1歲16例；對照組25例，男15例、女10例，年齡＜1歲12例。兩組病例隨機抽樣，性別、年齡、病程、腹瀉次數(shù)、臨床癥狀經(jīng)統(tǒng)計學處理無顯著性差異。治療組給實施例5制備的乳酸菌口服液，劑量＜1歲每日1次，每次1瓶(10mL)；1～2歲每日2瓶，分2次口服。連服3d，不用抗生素。對照組給予慶大霉素和次碳酸鉍口服，慶大霉素按每日10mg/kg計算，分3～4次口服2％慶大霉素溶液；次碳酸鉍＜1歲0.15g/次，3次/日；1～2歲0.2g/次，3次/日；療程均為3天。凡服藥病情好轉(zhuǎn)但未愈，則再服藥2～3天。兩組同時根據(jù)病情加用口服補液鹽，高熱者給予物理降溫或藥物降溫。
療效評定標準顯效服藥24～48h，大便次數(shù)已減少至≤2次/日或恢復到正常次數(shù)，大便性狀恢復正常，臨床癥狀完全消失。有效服藥48～72h，大便次數(shù)才減少至2次/日，大便性狀好轉(zhuǎn)，臨床癥狀基本消失。無效服藥后72h腹瀉次數(shù)仍＞2次/日，或性狀無明顯好轉(zhuǎn)，甚至病情加重而換藥者。
臨床效果見表1。
表1兩組療效結(jié)果比較
經(jīng)x2檢驗兩組比較差異顯著(P＜0.01)結(jié)果表明治療組有效率達100％，可見服用乳酸菌口服液效果顯著。
實施例7乳酸菌口服液經(jīng)口急性毒性試驗本試驗由山東醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院毒理學研究室進行。將本發(fā)明乳酸菌口服液原液飼喂昆明種小鼠60只，體重18-22g，雌雄各半。將小鼠隨機分為6組，每組10只，雌雄各半，禁食12h后，經(jīng)口灌胃，劑量分別為40mL/kg，32mL/kg，25.6mL/kg，20.5mL/kg，16.4mL/kg，13.1mL/kg(r＝0.8)。小鼠給藥后連續(xù)觀察14天，記錄小鼠中毒癥狀和死亡數(shù)，根據(jù)各組小鼠死亡率，用Bliss法計算LD50和95％可信限。結(jié)果見表2。
表2乳酸菌口服液小鼠急性毒性試驗結(jié)果
小鼠急性毒性反應經(jīng)口給受試動物后小鼠無異常現(xiàn)象。
結(jié)果表明小鼠一次經(jīng)口給予乳酸菌口服液半數(shù)致死劑量LD50大于40mL/kg。
權(quán)利要求
1.乳酸菌口服液的制備方法，步驟如下(1)按重量份將食用糖1-10份、食用葡萄糖1-10份、蛋白胨0.1-2份、硫酸鎂0.01-0.2份、硫酸錳0.01-0.2份、磷酸氫二鉀0.01-1份、氯化鈉0.1-2份混合，加凈化的水71.6-97.8份溶解，熱處理方法進行滅菌，作為培養(yǎng)基；(2)在上述培養(yǎng)基上接入下列菌種之一或者其組合，接種量為0.5-2份，重量份干酪乳桿菌干酪亞種Lactobacillus casei subsp.Casei，菌種編號CGMCC1.2435，植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，菌種編號CGMCC1.103，嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus，菌種編號CGMCC1.1854，凝結(jié)芽孢桿菌Bacillus coagulans，菌種編號CGMCC1.2009；(3)將步驟(2)接種后的混合液在37℃培養(yǎng)48小時，pH值降至3.4-4.0時即可；(4)將步驟(3)的產(chǎn)物無菌分裝，制得乳酸菌口服液。
2.如權(quán)利要求1所述的乳酸菌口服液的制備方法，其特征在于步驟(1)所述的熱處理是在110-128℃的溫度下進行的，滅菌時間為25-180分鐘。
3.如權(quán)利要求1所述的乳酸菌口服液的制備方法，其特征在于步驟(1)所述的糖是紅糖。
全文摘要
一種乳酸菌口服液的制備方法，屬于保健食品領域。將食用紅糖、食用葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、硫酸錳、磷酸氫二鉀、氯化鈉按照比例混合，加水溶解，熱處理滅菌；然后接入干酪乳桿菌干酪亞種Lactobacillus casei subsp.Casei，植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus，凝結(jié)芽孢桿菌Bacillus coagulans之一或組合，37℃培養(yǎng)48小時，pH值降至3.6左右時收獲，無菌分裝。本發(fā)明方法制備的乳酸菌口服液為棕色液體，味酸，活菌含量達10億/mL。特別適用于改善消化不良、吸收不良、胃口不佳、腹瀉、便秘、腸脹氣等胃腸問題。
文檔編號A23L1/29GK1899314SQ20061004529
公開日2007年1月24日 申請日期2006年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月7日
發(fā)明者岳壽松, 游銀偉, 尤升波, 王翠萍 申請人:山東省農(nóng)業(yè)科學院高新技術研究中心