專利名稱：一株產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株及其在制備殼寡糖中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株腐皮鐮孢菌突變株及其應(yīng)用，具體地說，涉及一株產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107及其在制備殼寡糖中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
地球上存在的天然有機(jī)化合物中，數(shù)量最大的是纖維素，其次是甲殼素，而甲殼素同時(shí)也是地球上數(shù)量最大的含氮有機(jī)化合物，其次才是蛋白質(zhì)。甲殼素是由N-乙酰氨基葡萄糖以β-1，4糖苷鍵縮合而成，殼聚糖為甲殼素脫乙?；蟮漠a(chǎn)物，殼寡糖為殼聚糖的降解產(chǎn)物。
甲殼素以其加工方法的不同主要分為以下3個(gè)層次的系列衍生產(chǎn)品A.甲殼素(幾丁質(zhì))，分子量在100萬以上，其吸收能力強(qiáng)，適合工業(yè)和環(huán)保應(yīng)用，但不溶于酸堿，也不溶于水，很難被人體吸收。B.殼聚糖，分子量在10萬左右，一般僅溶于弱酸，不溶于水，可以被人體吸收，可以作為食品添加劑及保健品原料等。C.殼寡糖，分子量低于5000，具水溶性，非常容易被人體吸收，具有強(qiáng)化免疫、抑制癌細(xì)胞，調(diào)節(jié)膽固醇、降血壓、降血糖、調(diào)節(jié)生理機(jī)能等多種功能，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、食品、日化、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域，是甲殼素系列產(chǎn)品中應(yīng)用性能最好的產(chǎn)品。
目前，國內(nèi)外制備殼寡糖的方法主要有化學(xué)降解法和酶解法。酶解法具有反應(yīng)條件溫和、殼寡糖得率高、環(huán)境污染小等特點(diǎn)，具有較好的發(fā)展前景。殼寡糖的酶法制備又分為專一性酶法和非專一性酶法，非專一性酶法主要是混合利用各種水解酶類，包括纖維素酶、蛋白酶、脂肪酶等，降解殼聚糖產(chǎn)生不同聚合度的殼寡糖。但該方法用酶量大，成本高，且產(chǎn)物成分難以控制。殼聚糖酶是專一性水解酶，利用殼聚糖酶制備殼寡糖的方法，稱為殼寡糖的專一性酶法制備。目前已在多種微生物和植物中發(fā)現(xiàn)殼聚糖酶，但由于酶活較低，產(chǎn)酶量小等特點(diǎn)，還未有產(chǎn)業(yè)化的報(bào)道，特別是還未有適合產(chǎn)業(yè)化的殼聚糖酶生產(chǎn)菌株應(yīng)用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一株高酶活且適合產(chǎn)業(yè)化的產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株及其在制備殼寡糖中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的一株能夠生產(chǎn)殼聚糖酶的菌株，經(jīng)過鑒定確認(rèn)為腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107，該菌株于2006年05月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(中國科學(xué)院微生物研究所，中國，北京)，保藏中心編號(hào)為CGMCC No.1720。
上述腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107 CGMCC No.1720經(jīng)鑒定，具有如下生物學(xué)特征該菌在PDA(土豆培養(yǎng)基)平皿上4天的生長直徑約為4.2cm，氣生菌絲絨毛狀，褐白色、菌落反面淡褐色或淺紅色，分生孢子有大小兩型。大型分生孢子無色，鐮刀形，有3～4個(gè)隔膜，大小30～50μm×4.6μm；小型分生孢子長橢圓形或圓柱形，串生，無色有1-2個(gè)隔膜，很少或不產(chǎn)生；厚垣孢子球形或卵圓形，表面光滑或粗糙，頂生或間生，單生或雙生，大小8～10μm×7.0～9.5μm。
本發(fā)明涉及的產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107在制備殼寡糖中的應(yīng)用。
上述的產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107在制備殼寡糖中的應(yīng)用方法，主要涉及的步驟順序如下(1)菌種選擇腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107CGMCC No.1720；(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于土豆培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.5～2.0％的瓊脂，20～30℃條件下，靜止培養(yǎng)24～72小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于100～300ml含有質(zhì)量體積比1～3％的葡萄糖，0.05～0.15％蛋白胨，0.05～0.15％酵母粉，pH值為5.0～7.0的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，20～30℃條件下，振蕩培養(yǎng)24～72小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以5～10％的體積比的接種量將種子液接種于含有質(zhì)量體積比為1～3％的葡萄糖，0.05～0.15％蛋白胨，0.05～0.15％酵母粉，0.05～0.15％干酪素，pH值為5.0～7.0的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，20～30℃條件下，振蕩培養(yǎng)48～96小時(shí)；(5)收集發(fā)酵粗酶液將步驟(4)所得的發(fā)酵液過濾除菌體，收集除菌體后的發(fā)酵液，即為殼聚糖酶粗酶液；(6)酶解底物將步驟(5)所得的殼聚糖酶粗酶液加水稀釋至酶活為50mu/ml，加入殼聚糖底物，使底物終濃度質(zhì)量體積比為0.5～4.5％，于40～60℃，pH值為5.0～7.0條件下，反應(yīng)4～10小時(shí)，制得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品；(7)分離產(chǎn)物將步驟(6)所得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品，于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)除去水分，烘干，得殼寡糖產(chǎn)物。
其中，步驟(2)、(3)、(4)中所述的菌體培養(yǎng)溫度優(yōu)選是23～27℃。
其中，步驟(3)、(4)中所述的葡萄糖的濃度優(yōu)選質(zhì)量體積比為1.5～2.5％，蛋白胨的濃度優(yōu)選質(zhì)量體積比為0.08～0.12％，酵母粉的濃度優(yōu)選質(zhì)量體積比為0.08～0.12％。
其中，步驟(3)中所述的菌體培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選是44～50小時(shí)。
其中，步驟(3)、(4)中所述的菌體培養(yǎng)pH值優(yōu)選是5.2～6.2。
其中，步驟(4)中所述的干酪素的濃度優(yōu)選質(zhì)量體積比為0.08～0.12％，菌體振蕩培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選是50～70小時(shí)。
其中，步驟(6)中所述的底物終濃度體積比優(yōu)選是0.8～2.2％；酶解溫度優(yōu)選是52～58℃；酶解pH值優(yōu)選是5.2～5.8；酶解時(shí)間優(yōu)選是5～8小時(shí)。
在上述利用產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.Hydrochitosans)Fs 107制備殼寡糖的方法中，步驟(2)、(3)、(4)中所述的菌體培養(yǎng)使用添加葡萄糖、蛋白胨和酵母粉的液體基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基(Basal Salts Medium，BSM)，配方為每1000ml蒸餾水中添加葡萄糖20g、蛋白胨1g、酵母粉1g、KCl 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaNO32g、FeSO4·7H2O 0.02g、K2HPO41g。
上述固體斜面培養(yǎng)基優(yōu)選為添加質(zhì)量體積比為1.6％瓊脂粉的土豆培養(yǎng)基。
上述步驟(2)、(3)、(4)中所述的菌體培養(yǎng)基于115℃條件下滅菌20分鐘后使用。
經(jīng)試驗(yàn)鑒定，本發(fā)明的產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107具有產(chǎn)殼聚糖酶的酶活較高，產(chǎn)酶量大，酶為組成型分泌等特點(diǎn)，且酶解時(shí)間較短，產(chǎn)物用有效成分高，不含單糖，適合產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。
利用本發(fā)明所述的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107CGMCC No.1720可以高產(chǎn)在醫(yī)藥、保健、食品、日化、農(nóng)業(yè)等許多領(lǐng)域具有重要用途的殼寡糖產(chǎn)品，產(chǎn)物中有效組分(二糖、三糖、四糖)含量高，具有極大的應(yīng)用前景。
發(fā)明人從2002年開始了殼聚糖酶產(chǎn)生菌的篩選，得到具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的殼聚糖酶產(chǎn)生菌兩株，其中本發(fā)明所述的此株腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107所產(chǎn)生的殼聚糖酶酶活(240mU/ml)比另外一株已經(jīng)報(bào)道的腐皮鐮孢菌的殼聚糖酶酶活(100mU/ml)高出很多，比日本報(bào)道的Fusarium solani f.sp.phaseoli SUF386也要高，而且本發(fā)明酶解底物殼聚糖后不產(chǎn)生單糖。


本發(fā)明提供的菌株腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosan)Fs107已于2006年05月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)，郵政編碼100080，其保藏編號(hào)為CGMCC No.1720。
圖1殼寡糖產(chǎn)物薄層層析圖其中1是氨基葡萄糖；2是殼聚糖；3、4、5是國內(nèi)益豐公司產(chǎn)品，6、7是實(shí)施例4所得殼寡糖產(chǎn)物具體實(shí)施方式
實(shí)施例1腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107 CGMCC No.1720的篩選。
從德州、聊城、菏澤、棗莊等地的大豆農(nóng)田土壤中取樣，經(jīng)過平板透明圈法篩選得到八株產(chǎn)殼聚糖酶較高的菌株，接著進(jìn)行UV誘變，平板透明圈法篩選，得到兩株高產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株。隨后進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)和小型發(fā)酵罐培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為25℃，發(fā)酵培養(yǎng)基pH為5.6，轉(zhuǎn)速為150rpm，通氣量為2.0vvm的條件下進(jìn)行發(fā)酵。其中經(jīng)篩選后的本發(fā)明的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107 CGMCC No.1720具有很好的產(chǎn)酶活性，酶活達(dá)到240mU/ml。
上述平板透明圈法使用固體基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基，添加質(zhì)量體積比為2％的葡萄糖，0.1％的蛋白胨，0.1％的酵母粉，0.5％的殼聚糖和1.6％的瓊脂粉。
上述產(chǎn)殼聚糖酶的發(fā)酵培養(yǎng)基使用液體基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基，添加質(zhì)量體積比為2％的葡萄糖，0.1％的蛋白胨，0.1％的酵母粉和0.1％的干酪素。
上述基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基的配方為每1000ml蒸餾水中添加葡萄糖20g、蛋白胨1g、酵母粉1g、KCl 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaNO32g、FeSO4·7H2O 0.02g、K2HPO41g。
實(shí)施例2腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107 CGMCCNo.1720菌株的形態(tài)學(xué)特性。
經(jīng)過形態(tài)學(xué)觀察的特征為該菌在PDA平皿上4天的生長直徑約為4.2cm，氣生菌絲絨毛狀，褐白色、菌落反面淡褐色或淺紅色，分生孢子有大小兩型。大型分生孢子無色，鐮刀形，有3～4個(gè)隔膜，大小30～50μm×4.6μm；小型分生孢子長橢圓形或圓柱形，串生，無色有1-2個(gè)隔膜，很少或不產(chǎn)生；厚垣孢子球形或卵圓形，表面光滑或粗糙，頂生或間生，單生或雙生，大小8～10μm×7.0～9.5μm。
根據(jù)形態(tài)學(xué)觀察，篩選到的本發(fā)明所述產(chǎn)殼聚糖酶的菌株確定為鐮孢霉屬的菌株。
實(shí)驗(yàn)比較結(jié)果，其產(chǎn)酶活性比誘變前的出發(fā)菌株要高很多(約15mU/ml)，因而這種高產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌屬于腐皮鐮孢菌突變株。
實(shí)施例3利用腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107 CGMCCNo.1720制備殼寡糖。其中發(fā)酵溫度為20℃(1)菌種選擇腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107CGMCC No.1720；(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于土豆培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.6％的瓊脂，20℃條件下，靜止培養(yǎng)72小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于200ml含有質(zhì)量體積比2％的葡萄糖，0.1％蛋白胨，0.1％酵母粉，pH值為5.6的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，20℃條件下，振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以5％的體積比的接種量將種子液接種于400ml含有質(zhì)量體積比為2％的葡萄糖，0.1％蛋白胨，0.1％酵母粉，0.1％干酪素，pH值為5.6的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，20℃條件下，振蕩培養(yǎng)72小時(shí)；(5)收集發(fā)酵粗酶液將步驟(4)所得的發(fā)酵液過濾除菌體，收集除菌體后的發(fā)酵液，即為殼聚糖酶粗酶液；(6)酶解底物將步驟(5)所得的殼聚糖酶粗酶液加水適度稀釋至酶活為50mu/ml，加入殼聚糖底物，使底物終濃度質(zhì)量體積比為1％，于54℃，pH值為5.4條件下，反應(yīng)4小時(shí)，制得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品；(7)分離產(chǎn)物將步驟(6)所得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品，于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)除去水分，烘干，得殼寡糖產(chǎn)物。
實(shí)施例4利用腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107 CGMCCNo.1720制備殼寡糖。其中發(fā)酵溫度為25℃(1)菌種選擇腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107CGMCC No.1720；(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于土豆培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.6％的瓊脂，25℃條件下，靜止培養(yǎng)72小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于200ml含有質(zhì)量體積比2％的葡萄糖，0.1％蛋白胨，0.1％酵母粉，pH值為5.6的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，25℃條件下，振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以7％的體積比的接種量將種子液接種于1000ml含有質(zhì)量體積比為2％的葡萄糖，0.1％蛋白胨，0.1％酵母粉，0.1％干酪素，pH值為5.6的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，25℃條件下，振蕩培養(yǎng)72小時(shí)；(5)收集發(fā)酵粗酶液將步驟(4)所得的發(fā)酵液過濾除菌體，收集除菌體后的發(fā)酵液，即為殼聚糖酶粗酶液；(6)酶解底物將步驟(5)所得的殼聚糖酶粗酶液加水適度稀釋至酶活為50mu/ml，加入殼聚糖底物，使底物終濃度質(zhì)量體積比為1.5％，于54℃，pH值為5.4條件下，反應(yīng)6小時(shí)，制得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品；(7)分離產(chǎn)物將步驟(6)所得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品，于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)除去水分，烘干，得殼寡糖產(chǎn)物。所得殼寡糖產(chǎn)物的薄層層析圖如圖1所示。
實(shí)施例5利用腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107 CGMCCNo.1720制備殼寡糖。其中發(fā)酵溫度為30℃(1)菌種選擇腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.hydrochitosans)Fs107CGMCC No.1720；(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于土豆培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.6％的瓊脂，30℃條件下，靜止培養(yǎng)72小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于200ml含有質(zhì)量體積比2％的葡萄糖，0.1％蛋白胨，0.1％酵母粉，pH值為5.6的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，30℃條件下，振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以5％的體積比的接種量將種子液接種于3000ml含有質(zhì)量體積比為2％的葡萄糖，0.1％蛋白胨，0.1％酵母粉，0.1％干酪素，pH值為5.6的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度30℃，通氣量2.0vvm條件下，攪拌培養(yǎng)72小時(shí)；(5)收集發(fā)酵粗酶液將步驟(4)所得的發(fā)酵液過濾除菌體，收集除菌體后的發(fā)酵液，即為殼聚糖酶粗酶液；(6)酶解底物將步驟(5)所得的殼聚糖酶粗酶液加水適度稀釋至酶活為50mu/ml，加入殼聚糖底物，使底物終濃度質(zhì)量體積比為2.0％，于56℃，pH值為5.6條件下，反應(yīng)8小時(shí)，制得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品；(7)分離產(chǎn)物將步驟(6)所得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品，于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)除去水分，烘干，得殼寡糖產(chǎn)物。
權(quán)利要求
1.一株產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株，其特征在于該菌名為腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.Hydrochitosans)Fs107，已于2006年05月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏編號(hào)為CGMCC No.1720。
2.如權(quán)利要求1所述的產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株，其特征是該菌在PDA平皿上4天的生長直徑約為4.2cm，氣生菌絲絨毛狀，褐白色、菌落反面淡褐色或淺紅色，分生孢子有大小兩型；大型分生孢子無色，鐮刀形，有3～4個(gè)隔膜，大小30～50μm×4.6μm；小型分生孢子長橢圓形或圓柱形，串生，無色有1-2個(gè)隔膜，很少或不產(chǎn)生；厚垣孢子球形或卵圓形，表面光滑或粗糙，頂生或間生，單生或雙生，大小8～10μm×7.0～9.5μm。
3.權(quán)利要求1或2所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其涉及的步驟順序如下(1)菌種選擇腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solanimut.Hydrochitosans)Fs107CGMCC No.1720；(2)斜面培養(yǎng)將菌種接種于土豆培養(yǎng)基，其中添加質(zhì)量體積比為1.5～2.0％的瓊脂，20～30℃條件下，靜止培養(yǎng)24～72小時(shí)；(3)種子培養(yǎng)將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，在無菌條件下用接種環(huán)接1～2環(huán)于100～300ml含有質(zhì)量體積比1～3％的葡萄糖，0.05～0.15％蛋白胨，0.05～0.15％酵母粉，pH值為5.0～7.0的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，20～30℃條件下，振蕩培養(yǎng)24～72小時(shí)，制得種子液；(4)擴(kuò)大培養(yǎng)以5～10％的體積比的接種量將種子液接種于含有質(zhì)量體積比為1～3％的葡萄糖，0.05～0.15％蛋白胨，0.05～0.15％酵母粉，0.05～0.15％干酪素，pH值為5.0～7.0的基本無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，20～30℃條件下，振蕩培養(yǎng)48～96小時(shí)；(5)收集發(fā)酵粗酶液將步驟(4)所得的發(fā)酵液過濾除菌體，收集除菌體后的發(fā)酵液，即為殼聚糖酶粗酶液；(6)酶解底物將步驟(5)所得的殼聚糖酶粗酶液加水稀釋至酶活為50mu/ml，加入殼聚糖底物，使底物終濃度質(zhì)量體積比為0.5～4.5％，于40～60℃，pH值為5.0～7.0條件下，酶解反應(yīng)4～10小時(shí)，制得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品；(7)分離產(chǎn)物將步驟(6)所得殼寡糖溶液粗產(chǎn)品，于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)除去水分，烘干，得殼寡糖產(chǎn)物。
5.如權(quán)利要求4所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(2)、(3)、(4)中所述的菌體培養(yǎng)溫度是23～27℃。
6.如權(quán)利要求4所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(3)、(4)中所述的葡萄糖的質(zhì)量體積比為1.5～2.5％，蛋白胨的質(zhì)量體積比為0.08～0.12％，酵母粉的質(zhì)量體積比為0.08～0.12％。
7.如權(quán)利要求4所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(3)中所述的菌體振蕩培養(yǎng)時(shí)間是44～50小時(shí)。
8.如權(quán)利要求4所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(3)、(4)中所述pH值為5.2～6.2。
9.如權(quán)利要求4所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(4)中所述的干酪素的質(zhì)量體積比為0.08～0.12％，所述菌體振蕩培養(yǎng)時(shí)間為50～70小時(shí)。
10.如權(quán)利要求4所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其特征在于，步驟(6)中所述的底物終濃度質(zhì)量體積比為0.8～2.2％；酶解溫度是52～58℃；酶解pH值是5.2～5.8；酶解時(shí)間為5～8小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株產(chǎn)殼聚糖酶的腐皮鐮孢菌突變株(Fusarium solani mut.Hydrochitosans)Fs107，該菌株于2006年05月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(中國科學(xué)院微生物研究所，中國，北京)，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.1720；本發(fā)明還公開了所述的腐皮鐮孢菌突變株在制備殼寡糖中的應(yīng)用，其制備方法包括(1)斜面培養(yǎng)，(2)種子培養(yǎng)，(3)擴(kuò)大培養(yǎng)，(4)收集發(fā)酵粗酶液，(5)酶解底物，(6)分離產(chǎn)物等步驟；該方法具有產(chǎn)酶效率高，酶對底物的專一性作用強(qiáng)，產(chǎn)物中有效組分(二糖、三糖、四糖)含量高，不產(chǎn)生單糖等特點(diǎn)，在殼寡糖的生產(chǎn)方面具有很大的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C12P19/00GK1884477SQ20061004529
公開日2006年12月27日 申請日期2006年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月7日
發(fā)明者鮑曉明 申請人:山東大學(xué)