專利名稱：白花除蟲菊繁殖技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及能保持一種藥用植物白花除蟲菊優(yōu)良品種的快速繁殖技術(shù)。

背景技術(shù)：
白花除蟲菊(Pyrethrum cinerariifolium Trev.)為菊科小黃菊屬多年生宿根草本植物，以花或全草入藥。其花中提取的總除蟲菊酯含除蟲菊酯I、II，瓜菊酯I、II，茉莉菊酯I、II共6種有效殺蟲成分。這是迄今發(fā)現(xiàn)的不污染環(huán)境，對(duì)哺乳動(dòng)物及植物無毒無害，對(duì)昆蟲和蚊蠅等迅速擊倒，不易產(chǎn)生抗藥性的高效天然殺蟲劑。由于擬菊酯類農(nóng)藥在生產(chǎn)合成中造成污染，以及使用后有殘毒，易產(chǎn)生抗藥性等缺點(diǎn)，天然的除蟲菊就越來越受到重視。20世紀(jì)90年代，國(guó)際除蟲菊市場(chǎng)仍呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。近幾年，我國(guó)政府和社會(huì)大力倡導(dǎo)發(fā)展“綠色農(nóng)業(yè)”，除蟲菊已經(jīng)在我國(guó)云南省迅速發(fā)展。作為綠色農(nóng)藥，除蟲菊殺蟲產(chǎn)品已在我國(guó)問世，這必然會(huì)對(duì)我國(guó)綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展起積極的作用。
采用傳統(tǒng)的種子繁殖技術(shù)不能保持白花除蟲菊優(yōu)良品種的遺傳穩(wěn)定性。一個(gè)白花除蟲菊的優(yōu)良品種經(jīng)過幾代的繁殖，其產(chǎn)量、有效成份的含量都出現(xiàn)明顯的下降，不能保持其優(yōu)良的品質(zhì)，很快退化。采用組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效地保存除蟲菊的優(yōu)良品種。但是，由于培養(yǎng)技術(shù)不成熟，效率低，實(shí)用性差。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種組織培養(yǎng)技術(shù)，既能保持白花除蟲菊優(yōu)良品種的遺傳穩(wěn)定性又可快速繁殖出大量有母體優(yōu)良性狀的幼株，進(jìn)行優(yōu)良品種的快速繁殖，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的白花除蟲菊幼苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。
本發(fā)明提供的白花除蟲菊繁殖技術(shù)包括從選擇外植體到大田移栽試管苗要經(jīng)過四個(gè)步驟外植體選擇及消毒滅菌、快速繁殖叢生芽、叢生芽生根培養(yǎng)、練苗與移栽。
(1)、外植體選擇及消毒滅菌 選擇白花除蟲菊優(yōu)良品種的飽滿種子或者種子萌發(fā)后生長(zhǎng)8-12天左右的幼芽作為外植體。選擇好的外植體可以用以下三種方法進(jìn)行消毒處理 A.用次氯酸鈉溶液消毒將外植體用蒸餾水沖洗幾次，然后置于2％次氯酸鈉溶液中振搖20(10-30min)分鐘，取出，用無菌水沖洗3-5次。
B.用0.1％升汞溶液消毒將外植體用蒸餾水沖洗幾次，然后置于0.1％升汞溶液中振搖10(5-20min)分鐘，取出，用無菌水沖洗數(shù)次。
C.復(fù)合消毒法將外植體用蒸餾水沖洗幾次，先用2％次氯酸鈉溶液(加3-5滴吐溫-20)消毒8min(5-15min)，再用0.1％升汞溶液(加3-5滴吐溫-20)消毒5min(5-15min)，無菌水沖洗5次。
方法C對(duì)外植體傷害最小，消毒效果好。于無菌條件下，用單一消毒液消毒一定時(shí)間，并將消毒液沖洗干凈。或者用一種以上不同的消毒液對(duì)外植體進(jìn)行消毒。
將已消毒的除蟲菊外植體脫病毒，除蟲菊脫病毒方法將消毒后的外植體在解剖鏡下分離出包含生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞團(tuán)塊，大小約為0.2mm~0.5mm。是否脫毒，還要在材料建立以后進(jìn)行病毒檢測(cè)。
(2)、快速繁殖叢生芽 在MS培養(yǎng)基中適當(dāng)添加植物分裂激素6-卞基腺嘌呤(6-BA)，它可以促進(jìn)叢生芽的分化。添加植物生長(zhǎng)激素吲哚乙酸(IAA)，它可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。多效唑(PP333)也是一種植物激素，它可以縮短植物節(jié)間長(zhǎng)度，使植物矮壯，利于植物的生根繁殖和移栽。在MS培養(yǎng)基中添加不同種類和濃度激素，直接誘導(dǎo)外植體生長(zhǎng)叢生芽，可使叢生芽生長(zhǎng)數(shù)量和質(zhì)量極大提高。最佳的白花除蟲菊快速繁殖叢生芽培養(yǎng)基為 MS+6-BA(0.1-2.0mg/L)+IAA(0-0.5mg/L)+PP333(0.1-2.0mg/L)+糖(30g/L)+瓊脂(3.0-4.0g/L)。pH值調(diào)整為5.8。
(3)、叢生芽生根培養(yǎng) 在1/2MS培養(yǎng)基中適當(dāng)添加吲哚乙酸(IAA)，濃度為0.1-0.5mg/L和生根粉(ABT)，濃度為0.05-0.5mg/L能促進(jìn)試管苗生根，并且有利于初生根的生長(zhǎng)。在1/2MS培養(yǎng)基中單獨(dú)添加ABT，效果不佳。兩種生長(zhǎng)激素配合使用，生根效果優(yōu)于兩種激素單獨(dú)使用。最佳的叢生芽生根培養(yǎng)培養(yǎng)基為 1/2MS+IAA(0.1-0.5mg/L)+ABT(0.05-0.5mg/L)+糖(30g/L)+瓊脂(3.0-4.0g/L)，pH值調(diào)整為5.8。
培養(yǎng)條件室溫18-28℃，光照強(qiáng)度1800-2000Lux，光照時(shí)間12-20h/d。培養(yǎng)10天的試管苗生根率在98％以上，初生根健壯，生長(zhǎng)1周左右根長(zhǎng)可達(dá)3-5cm。20天左右即可開瓶練苗。
(4)、練苗與移栽 獲得生長(zhǎng)健壯的完整除蟲菊試管苗以后，在室溫為18-28℃的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，練苗2-4天，待葉片顏色加深，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部的培養(yǎng)基。立即移栽到苗床中(苗床的營(yíng)養(yǎng)土配比為珍珠巖∶堿性營(yíng)養(yǎng)土∶酸性營(yíng)養(yǎng)土1∶1∶1)，于5-10月移栽，應(yīng)每2小時(shí)噴霧15min，并搭遮陽(yáng)布。于1-4月移栽，應(yīng)每天(早6點(diǎn)到晚6點(diǎn))噴霧1-3次，每次10min，早晚覆蓋塑料薄膜。試管苗于苗床生長(zhǎng)1-3個(gè)月后即可移栽大田。最佳的移栽時(shí)間是每年的3-5月和9-11月，移栽天氣最好為陰天。移栽后的1-2個(gè)星期，需要早晚澆水。
本發(fā)明的積極效果使用本發(fā)明提供的技術(shù)可使白花除蟲菊快速繁殖，同時(shí)有效地保存除蟲菊的優(yōu)良品種。于擴(kuò)大繁殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)25天，單芽的增殖系數(shù)約為10-20倍。在無菌條件下，將生長(zhǎng)的叢生芽分離成單芽，接種于生根培養(yǎng)基中8天左右根即生長(zhǎng)，生根率可達(dá)95％以上。20天左右即可開瓶練苗，練苗2天即可移栽苗床，如果氣候適宜，移栽成活率可高達(dá)98％以上。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1 選擇白花除蟲菊優(yōu)良品種種子萌發(fā)后生長(zhǎng)10天左右的幼芽作為外植體。外植體消毒滅菌用復(fù)合消毒法將外植體用蒸餾水沖洗五次，先用2％次氯酸鈉溶液(加4滴吐溫-20)消毒8分鐘，再用0.1％升汞溶液(加4滴吐溫-20)消毒5分鐘，無菌水沖洗5次。
選擇快速繁殖叢生芽培養(yǎng)基為 MS+6-BA(0.2mg/L)+IAA(0.05mg/L)+PP333(0.2mg/L)+糖(30g/L)+瓊脂(3.5g/L)。
叢生芽生根培養(yǎng)培養(yǎng)基為 1/2MS+IAA(0.2mg/L)+ABT(0.05mg/L)+糖(30g/L)+瓊脂(3.5g/L) 培養(yǎng)條件室溫20℃，光照強(qiáng)度1800Lux，光照時(shí)間15h/天。20天左右開瓶練苗。
獲得生長(zhǎng)健壯的完整除蟲菊試管苗以后，在室溫為20℃的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，練苗4天后將苗取出，洗凈根部的培養(yǎng)基。立即移栽到苗床中，于5月移栽，每2小時(shí)噴霧15min，并搭遮陽(yáng)布。試管苗于苗床生長(zhǎng)2個(gè)月后即可移栽大田。
權(quán)利要求
1.一種白花除蟲菊繁殖技術(shù)，其特征在于從選擇外植體到大田移栽試管苗要經(jīng)過外植體選擇及消毒滅菌、快速繁殖叢生芽、叢生芽生根培養(yǎng)、練苗與移栽四個(gè)步驟
(1)、外植體選擇及消毒滅菌
用白花除蟲菊優(yōu)良品種的飽滿種子或者種子萌發(fā)后生長(zhǎng)8-12天左右的幼芽作為外植體。選擇好的外植體用以下三種方法之一進(jìn)行消毒滅菌處理
a.用次氯酸鈉溶液消毒將外植體用蒸餾水沖洗幾次，然后置于2％次氯酸鈉溶液中振搖10-30分鐘，取出，用無菌水沖洗3-5次；
b.用0.1％升汞溶液消毒將外植體用蒸餾水沖洗數(shù)次，然后置于0.1％升汞溶液中振搖5-20分鐘，取出，用無菌水沖洗數(shù)次；
c.復(fù)合消毒法將外植體用蒸餾水沖洗幾次，先用2％次氯酸鈉溶液(加3-5滴吐溫-20)消毒5-15分鐘，再用0.1％升汞溶液(加3-5滴吐溫-20)消毒5-15分鐘，無菌水沖洗3-5次；
(2)、快速繁殖叢生芽的培養(yǎng)基為
MS+6-BA(0.1-2.0mg/L)+IAA(0-0.5mg/L)+PP333(0.1-2.0mg/L)+糖(30g/L)+瓊脂(3.0-4.0g/L)，pH值為5.8；
(3)、叢生芽生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為
1/2MS+IAA(0.1-0.5mg/L)+ABT(0.05-0.5mg/L)+糖(30g/L)+瓊脂(3.0-4.0g/L)，pH值為5.8；
(4)、練苗與移栽
獲得生長(zhǎng)健壯的完整除蟲菊試管苗以后，在室溫為18-28℃的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，練苗2-4天，待葉片顏色加深，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，立即移栽到苗床中，苗床的營(yíng)養(yǎng)土配比為珍珠巖∶堿性營(yíng)養(yǎng)土∶酸性營(yíng)養(yǎng)土1∶1∶1，試管苗于苗床生長(zhǎng)1-3個(gè)月后移栽大田。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藥用植物白花除蟲菊優(yōu)良品種的快速繁殖技術(shù)。本發(fā)明提供了一種組織培養(yǎng)技術(shù)，包括從選擇外植體到大田移栽試管苗要經(jīng)過四個(gè)步驟外植體選擇及消毒滅菌、快速繁殖叢生芽、叢生芽生根培養(yǎng)、練苗與移栽。本發(fā)明提供了三種進(jìn)行消毒處理的方法，提供了最佳的快速繁殖叢生芽的和叢生芽生根培養(yǎng)培養(yǎng)基的成分，最佳的移栽條件。
文檔編號(hào)C12N5/04GK1915001SQ200610086120
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2006年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月31日
發(fā)明者劉蓁, 高山林, 岳磊, 曾楊 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)