專利名稱：用竹筍制備過(guò)氧化物酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物深加工的方法，特別涉及竹筍深加工方法，確切地說(shuō)是用竹筍制備過(guò)氧化物酶的方法。
背景技術(shù)：
竹筍是人們喜愛(ài)的一種食品。當(dāng)春筍上市時(shí)，所有加工企業(yè)都沿用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行加工，這就是將鮮筍直接水煮，然后脫殼，選其可食用部分繼續(xù)加工成筍絲、筍干、罐頭等食品。而占總量55wt％以上的非食用部分如筍殼、筍基、筍萚等因經(jīng)水煮而無(wú)法回收利用而被廢棄，不僅浪費(fèi)了能源、資源，而且污染環(huán)境。
過(guò)氧化物酶(peroxidase EC1.11.1)是一類每個(gè)分子含有一個(gè)正鐵血紅素IX、分子量為42KD的糖蛋白，在植物尤其是葉中分布較廣，能催化這一類型的反應(yīng)。理化性能穩(wěn)定，耐熱，短時(shí)間內(nèi)65℃或甲苯、二甲苯及酒精等有機(jī)溶劑處理也不失活，可用作酶標(biāo)，用于肝癌、乙型腦炎和早期寄生蟲感染的診斷，在蛋白質(zhì)、多肽、激素、病毒、神經(jīng)軸突傳遞研究上也有應(yīng)用，而且在進(jìn)出口及動(dòng)植物檢疫上都有應(yīng)用。目前已被廣泛的應(yīng)用于污水凈化和環(huán)境污染清潔劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明對(duì)竹筍傳統(tǒng)方法的粗放加工進(jìn)行改進(jìn)，對(duì)食用和非食用部分分別加工旨在綜合利用竹筍資源并保護(hù)環(huán)境。
本發(fā)明首先對(duì)鮮筍剔除分離，得到食用和非食用兩部分竹筍，前者按傳統(tǒng)方法加工食品，后者進(jìn)行深加工，得到包括過(guò)氧化物酶(BRP)在內(nèi)的諸多系列工業(yè)產(chǎn)品。
所述的深加工第一步是將鮮筍(非食用部分，食用部分也可以)加水經(jīng)破碎、粉碎后壓榨分離，得到固、液兩相，第二步，其液相加工提取過(guò)氧化物酶；其固相可用來(lái)經(jīng)木霉糖化、酵母發(fā)酵制備乙醇；或者先提取竹筍黃酮，最后經(jīng)粉碎作為培養(yǎng)基，用來(lái)栽培食用菌，如草菇、鳳尾姑、竹蓀等，栽培后的廢渣加氨水發(fā)酵制備復(fù)合肥，其氣體由管道輸送至發(fā)電機(jī)火花室或作鍋爐燃料。
液相即濾液，其加工方法首先用有機(jī)酸濾液調(diào)pH于4.5～6.5，靜置、分離，得到清液(I)和沉淀(I)；清液(I)加熱至50～60℃，并保溫，靜置、分離，得到清液(II)和沉淀(II)。沉淀(I)是在酸性條件下析出的蛋白質(zhì)，沉淀(II)對(duì)熱不穩(wěn)定而變性析出的蛋白質(zhì)，合并沉淀(I)和(II)，經(jīng)干燥后得到食品蛋白添加劑。
清液(II)經(jīng)超濾后加入等體積的丙酮、室溫下靜置、離心分離，得到清液(III)和沉淀(III)，清液(III)回收丙酮后排放，沉淀(III)用去離子水溶解，經(jīng)透析除去殘量丙酮，超濾濃縮，冷凍干燥便得到BRP粗品，紅棕色晶體。
BRP粗品經(jīng)精制后可得到RZ(純度)≥2.0以上的黃色晶體。RZ值表示該酶在其410nm特征波長(zhǎng)的吸收值與其蛋白280nm紫外波長(zhǎng)的吸收值之比，前者的值越大，酶活性、純度越高，反之亦然。
將粗品BRP溶于去離子水中，然后滴加0.8～1.2mol濃度的ZnSO4溶液直至沉淀不再析出，離心分離，收集沉淀，用去離子水復(fù)溶，經(jīng)透析除去ZnSO4，最后超濾濃縮、冷凍干燥得到RZ≥2.0的BRP黃色晶體。
本品經(jīng)復(fù)旦大學(xué)檢測(cè)結(jié)果如下竹筍過(guò)氧化物酶測(cè)試報(bào)告

本發(fā)明利用BRP對(duì)酸和熱穩(wěn)定的物理性質(zhì)使之與大部分蛋白質(zhì)分離，得到粗品BRP。利用BRP與Zn2+形成不穩(wěn)定沉淀物的化學(xué)性質(zhì)實(shí)現(xiàn)BRP的純化，每千克鮮筍可以得到100～120mg的BRP晶體。若使用可食用部分則可以得到200mg以上的BRP晶體。在本發(fā)明中鮮筍中的非食用部分全部被利用，得到了一系列綠色產(chǎn)品，與傳統(tǒng)方法相比，竹筍加工的增值使企業(yè)效益大幅度提高；本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，對(duì)環(huán)境友好。
具體實(shí)施例方式
取鮮筍剔出非食用部分如筍殼、筍基、筍萚等，先加1倍量的水絞碎，然后用膠體磨粉碎，最后用螺旋壓榨機(jī)或油壓壓榨機(jī)壓榨分離得到固、液兩相。
液相即濾液，經(jīng)自然澄清，虹吸分離，澄清液待提取BRP，沉淀與固相餅粕混合粉碎，或發(fā)酵生產(chǎn)工業(yè)乙醇，或CO2超臨界萃取分離出竹筍黃酮作原料藥，最后作為培養(yǎng)基栽培食用菌。
澄清液用檸檬酸(或草酸或醋酸等)調(diào)pH至5.0～6.0，室溫下靜置，至析出的沉淀物沉降完全，分離得到清液(I)和沉淀(I)。
將清液(I)加熱至55℃，保溫，至析出的沉淀物沉降完全，分離得到清液(II)和沉淀(II)。沉淀(II)和沉淀(I)合并，經(jīng)干燥后得到食品蛋白添加劑。
清液(II)經(jīng)超濾濃縮后加入等體積的丙酮，室溫下靜置，至析出的沉淀沉降完全，4000r離心分離得到清液(III)和沉淀(III)。清液(III)蒸餾回收丙酮后排放。
沉淀(III)加入去離子水溶解，經(jīng)透析、超濾濃縮和冷凍干燥便得到BRP粗品。紅棕色晶體。
BRP粗品加去離水溶解，然后用1mol濃度的ZnSO4溶液滴定，直至沉淀析出并不再析出，5000r離心分離，收集沉淀加去離子水復(fù)溶，用分子量為20000道爾頓的超濾膜超濾濃縮，冷凍干燥，得到BRP黃色晶體，純度≥2.0。
權(quán)利要求
1.一種用竹筍制備過(guò)氧化物酶的方法，將鮮筍加水經(jīng)破碎、粉碎后壓榨分離，得到固、液兩相物質(zhì)，其特征在于自液相中提取過(guò)氧化物酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于液相用有機(jī)酸調(diào)pH4.5～6.5，靜置，分離，得到清液(I)和沉淀(I)；清液(I)于50～60℃條件下保溫，靜置、分離，得到清液(II)和沉淀(II)；清液(II)經(jīng)超濾后加入等體積的丙酮，靜置、分離，得到清液(III)和沉淀(III)；將沉淀(III)溶于去離子水中，經(jīng)透析、超濾濃縮，冷凍干燥后便可得到過(guò)氧化物酶粗品。
3.由權(quán)利要求2制備得到的過(guò)氧化物酶粗品的精制方法，其特征在于將粗品溶于去離子水中，然后滴加0.8～1.2mol濃度的硫酸鋅溶液，經(jīng)分離收集沉淀，將沉淀用去離子復(fù)溶，經(jīng)透析、超濾濃縮和冷凍干燥后得到過(guò)氧化物酶黃色晶體，RZ≥2.0。
全文摘要
一種用竹筍制備過(guò)氧化物酶的方法，將鮮筍加水經(jīng)破碎、粉碎后壓榨分離，自濾液中提取過(guò)氧化物酶(BRP)。提取過(guò)程利用BRP對(duì)酸和熱穩(wěn)定的物理性質(zhì)使之與蛋白質(zhì)等其他物質(zhì)分離得到粗品BRP，利用BRP與Zn
文檔編號(hào)C12N9/08GK1916169SQ20061008629
公開(kāi)日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2006年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月30日
發(fā)明者蔣立科, 魏練平, 江麗 申請(qǐng)人:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)