專利名稱：一種采用酶法拆分制備D-酪氨酸-¹⁵N的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種外消旋化合物的拆分方法，是一種生化制品的制備方法， 尤其是一種采用酶法拆分制備D —酪氨酸-"N的方法。
背景技術(shù)：
D-酪氨酸雖然具有與L一酪氨酸幾乎相同的物理化學(xué)性質(zhì)，但卻不能象L-酪氨酸一樣直接作為醫(yī)藥原料、食品添加劑等。近二、三十年來，隨著科學(xué)研 究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)包括D-酪氨酸在內(nèi)的D型氨基酸在生命活動(dòng)和藥物制 備中具有L-氨基酸所不能替代的作用。在研究生物活性肽的結(jié)構(gòu)與功能時(shí)發(fā) 現(xiàn)，由D—型氨基酸生成的肽鍵不會被蛋白水解酶作用，從而延長了活性肽在 體內(nèi)的半衰期，因而提高了藥物的效價(jià)。以D-酪氨酸為前體，可以合成阿托西 班等多種藥物。目前這些藥物大多還處于藥理藥效的臨床試驗(yàn)階段，倘若這些 藥物能全面上市，D —酪氨酸的需求量定將急劇上升。"N-D-酪氨酸作為一種獨(dú) 特的示蹤劑在研究藥物在體內(nèi)的代謝中有著不可替代的作用。Chemistry of the amino acid，Vo13,1961報(bào)道了一種用粗羧肽酶拆分從氯一 乙酰一DL—酪氨酸中獲得D —酪氨酸的方法；J.Biol.chem.180， 473， (1949) 報(bào)道了一種用氨基?；笍穆取阴Ｒ籇L —酪氨酸中獲得D —酪氨酸的方法。 但這兩種方法獲得的D-酪氨酸均為天然豐度，且收率均不高，沒有化學(xué)純度的 報(bào)告。中國專利CN1569818A報(bào)道了一種非對應(yīng)體鹽拆分法制備D—酪氨酸的 方法，因?yàn)橛袏A帶析出現(xiàn)象使用該法獲得產(chǎn)品的光學(xué)純度不高，所得產(chǎn)品也為 天然豐度。采用氨基酰化酶拆分制備D —酪氨酸-"N目前國內(nèi)沒有報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處而提供一種產(chǎn) 品收率高、光學(xué)純度高、化學(xué)純度高、產(chǎn)物的同位素豐度與氮源原料的同位素 豐度相比沒有降低的采用酶法拆分制備D —酪氨酸-"N的方法。 本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn) 一種采用酶法拆分制備D —酪氨酸-"N的方法，其特征在于，該方法步驟如下(1) 酶反應(yīng)底物的配制取一定量的N—三氟乙?！狣L—酪氨酸一"N， 用磷酸鹽緩沖溶液溶解后，調(diào)節(jié)溶液的pH值為4.5 8.0，定容使溶液的濃度 為0.01 0.50mol/L作為酶反應(yīng)底物；(2) 保溫反應(yīng)按照每克底物加入l 10g游離米曲霉菌體細(xì)胞或0.01 0.5g氨基?；该阜鄣谋壤龑⒂坞x的米曲霉菌體細(xì)胞或氨基?；该阜奂尤?1)中配制好的酶反應(yīng)底物中，在30 50°C、 一定的搖床轉(zhuǎn)速下，保溫反應(yīng) 10 50小時(shí)；(3) 萃取保溫反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至1 3，用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取1 4次；(4) 萃取后的脂相經(jīng)減壓濃縮除去有機(jī)相，用磷酸鹽緩沖溶液溶解后， 調(diào)節(jié)溶液的pH值為4.5 8.0，定容使溶液的濃度為0.01 0.50mol/L作為底物， 按照每克底物加入1 10g游離米曲霉菌體細(xì)胞或0.01 0.5g氨基酰化酶酶粉 的比例加入游離的米曲霉菌體細(xì)胞或氨基?；该阜?；在30 4(TC， 一定的搖 床轉(zhuǎn)速下，保溫反應(yīng)10 40小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至1 3，等 體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取的水相中殘留的"N有待回收，萃取的酯 相經(jīng)減壓濃縮后用1 8mol/L鹽酸在80 160'C水解5 25小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值至 微酸性后加入適量的活性炭脫色；(5) 脫色液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，在 0 4'C下過夜，再用冰水洗去雜質(zhì)，過濾后烘干即得D-酪氨酸-"N產(chǎn)品。所述的底物濃度為0.02 0.30mol/L較佳。 所述的底物pH在5.0 7.0之間較佳。所述的游離米曲霉菌體細(xì)胞的加入量為每克底物1 8g較佳。 所述的氨基?；该阜鄣募尤肓繛槊靠说孜?.03 0.2g較佳。 所述的調(diào)節(jié)溶液的pH值采用稀NaOH、 LiOH、氨水中一種與鹽酸或醋酸 調(diào)節(jié)。
所述的保溫反應(yīng)溫度為30 4(TC較佳，反應(yīng)時(shí)間為10 40小時(shí)較佳。 所述的保溫反應(yīng)的搖床為水浴搖床，該搖床轉(zhuǎn)速為100 150轉(zhuǎn)/min。 所述的鹽酸水解的反應(yīng)溫度為100 15(TC較佳，反應(yīng)時(shí)間為10 20小時(shí) 較佳，鹽酸的濃度為3 6mol/L較佳。所述的水解液用5 10 mol/L的NaOH調(diào)pH至微酸性。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明從N—三氟乙酰一DL —酪氨酸一"N中獲得了 D 一酪氨酸一"N產(chǎn)品，通過兩次萃取有效的分離了酶反應(yīng)液中的N—三氟乙酰 —D—酪氨酸—"N和L —酪氨酸一"N,再酸水解N —三氟乙酰一D —酪氨酸一 "N獲得D —酪氨酸一^N產(chǎn)品，本發(fā)明方法簡練，設(shè)備易得，使用該方法獲得 的D—酪氨酸一"N產(chǎn)品收率高、光學(xué)純度高、化學(xué)純度高、豐度不下降。


圖l為本發(fā)明工藝流程圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。本發(fā)明的采用游離米曲霉菌體細(xì)胞或氨基酰化酶酶粉拆分N—三氟乙酰一DL —酪氨酸J"N制備D-酪氨酸一"N的方法，以外消旋N—三氟乙?！狣L—酪氨 酸一"N (N—Tfa—DL—Tyr—"N)為原料，以游離米曲霉菌體細(xì)胞中的氨基?；?酶(EC.3,5，14)或氨基?；该阜蹫樗獯呋瘎?，將N—三氟乙酰一DL—酪氨酸 —15N按照0.02—0.3mol/L的濃度，每克底物加入l 8g游離米曲霉菌體細(xì)胞或 0.03 0.2g氨基?；该阜?，于30 4(fC， 一定的搖床轉(zhuǎn)速下，反應(yīng)10 40小時(shí)。 反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液經(jīng)乙酸乙脂萃取處理后，分離了酶反應(yīng)液中的N—三氟乙酰一 D—酪氨酸一"N和L一酪氨酸一"N，萃取的脂相經(jīng)濃縮后再次酶解除去其中未反 應(yīng)完全的N —三氟乙酰一L一酪氨酸一"N，然后再次萃取后脂相經(jīng)鹽酸水解， 最終獲得D —酪氨酸一"N產(chǎn)品。具體工藝路線如圖l所示。本發(fā)明方法簡練，設(shè)備易得，從N—三氟乙酰一DL—酪氨酸一'SN中獲得 了 D—酪氨酸一"N產(chǎn)品，通過兩次萃取有效的分離了酶反應(yīng)液中的N—三氟 乙酰一D—酪氨酸一"N和L一酪氨酸一"N，再酸水解N—三氟乙酰一D—酪氨
酸一15N獲得D —酪氨酸一"N產(chǎn)品，使用該方法獲得的D—酪氨酸一15N產(chǎn)品 收率高、光學(xué)純度高、化學(xué)純度高、豐度不下降。 實(shí)施例1稱取5gN—三氟乙酰一DL—酪氨酸一15N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖 溶液溶解后，再用稀NaOH與鹽酸調(diào)pH值為7.0，定容至500ml，稱取10g濕 的游離米曲霉菌體細(xì)胞混入配制的底物中，將裝有底物和酶的三角燒瓶放入水 浴搖床中35"C下，120轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)30小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào) pH至2，用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有 機(jī)相，用磷酸鹽緩沖溶液溶解后，再用稀氨水與鹽酸調(diào)pH值為4.5，定容至 300ml，加入8g游離米曲霉菌體細(xì)胞，35°C, 120轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)30小時(shí)，反 應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至2，等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取的水 相中殘留的"N有待回收，萃取的酯相經(jīng)減壓濃縮后用5mol/L鹽酸在IO(TC水 解20小時(shí)。水解液加入8M的NaOH至pH微酸性，加入適量的活性炭脫色。 脫色液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，0X:過夜，用 冰水洗去NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘干獲得D-酪氨酸-"N產(chǎn)品1.23 g，純度99.5%， 單程收率75.3%，豐度為99.1%，旋光度[a] D20= + l 1.0±5'° (c=4，HCl)。實(shí)施例2稱取5gN—三氟乙酰一DL—酪氨酸一"N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖 溶液溶解后，再用稀LiOH與醋酸調(diào)pH值為6.5，定容至300ml，稱取0.15g 氨基?；该阜刍烊肱渲频牡孜镏?，將裝有底物和酶的三角燒瓶放入水浴搖床 中37'C下，110轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)35小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至1， 用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取2次，萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有機(jī)相，用 磷酸鹽緩沖溶液溶解后，再用稀氨水與鹽酸調(diào)pH至8，定容至200ml，加入 0.10g氨基?；该阜?，37'C， 110轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)40小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng) 液用鹽酸調(diào)pH至1，等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取的水相中殘留的 "N有待回收。萃取的酯相經(jīng)減壓濃縮后用8mol/L鹽酸在8(TC水解15小時(shí)。 水解液加入10M的NaOH至pH微酸性，加入適量的活性炭脫色。脫色液濃縮 至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，0'C過夜，用冰水洗去 NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘干獲得D-酪氨酸-"N產(chǎn)品1.16 g，純度99.5%,單程 收率71.0%，豐度為99.1%，旋光度[a] D20= + 11.0±5'。(c=4，HCl)。 實(shí)施例3稱取5gN—三氟乙酰一DL—酪氨酸一"N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖溶液溶 解后，再用稀氨水醋酸調(diào)pH至6.0,定容至350ml。稱取30g濕的游離米曲霉菌體 細(xì)胞混入配制的底物中，將裝有底物和酶的三角燒瓶放入水浴搖床中36。C下，115 轉(zhuǎn)/min，保溫反應(yīng)20小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至3，用等體積的乙酸 乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有機(jī)相，用磷酸鹽緩沖溶液溶解 后，再用稀LiOH與鹽酸調(diào)pH至8，定容至200ml，加入0.8g氨基?；该阜?。 36'C， 115轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)15小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至3，等體積 的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取的水相中殘留的"N有待回收。萃取的酯相經(jīng)減壓 濃縮后用7mol/L鹽酸在12(TC水解20小時(shí)。水解液加入9M的NaOH至pH微酸 性，加入適量的活性炭脫色。脫色液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào) pH至等電點(diǎn)，4'C過夜，用冰水洗去NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘干獲得D-酪氨酸-"N 產(chǎn)品1.27 g，純度99.5%，單程收率77.7%，豐度為99.1%,旋光度[a ] D 20= +11.0±5'°(c=4,HCl)。實(shí)施例4稱取5gN —三氟乙?！狣L—酪氨酸一15N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖 溶液溶解后，再用稀NaOH與醋酸調(diào)pH值為5.5，定容至400ml，稱取40g濕 的游離米曲霉菌體細(xì)胞混入配制的底物中，將裝有底物和酶的三角燒瓶放入水 浴搖床中38'C下，120轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)15小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào) pH至2，用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有 機(jī)相，用磷酸鹽緩沖溶液溶解后，再用稀氨水與鹽酸調(diào)pH值為7，定容至250ml， 加入20g游離米曲霉菌體細(xì)胞，38°C， 120轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)20小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束 后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至2，等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取的水相中殘 留的15N有待回收，萃取的酯相經(jīng)減壓濃縮后用6mol/L鹽酸在ll(TC水解15 小時(shí)。水解液加入6M的NaOH至pH微酸性，加入適量的活性炭脫色。脫色 液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，0'C過夜，用冰水 洗去NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘千獲得D-酪氨酸-"N產(chǎn)品1.13 g，純度99.5%， 單程收率69.2%，豐度為99.1%，旋光度[a] D20=+11.0±5. ° (c=4，HCl)。
稱取5gN—三氟乙酰一DL—酪氨酸一15N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖 溶液溶解后，再用稀LiOH與醋酸調(diào)pH值為5.0，定容至450ml，稱取0.25g 氨基?；该阜刍烊肱渲频牡孜镏校瑢⒀b有底物和酶的三角燒瓶放入水浴搖床 中37'C下，150轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)40小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至3， 用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有機(jī)相，用 磷酸鹽緩沖溶液溶解后，再用稀氨水與鹽酸調(diào)pH至5，定容至300ml，加入 0.15g氨基?；该阜郏?7°C， 150轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)30小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng) 液用鹽酸調(diào)pH至1，等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取的水相中殘留的 "N有待回收。萃取的酯相經(jīng)減壓濃縮后用4mol/L鹽酸在10(TC水解25小時(shí)。 水解液加入5M的NaOH至pH微酸性，加入適量的活性炭脫色。脫色液濃縮 至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，0。C過夜，用冰水洗去 NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘干獲得D-酪氨酸-"N產(chǎn)品1.2 g，純度99.5%，單程收 率73.4%,豐度為99.1%，旋光度[a] D20=+l 1.0±5. 。 (c=4,HCl)。實(shí)施例6稱取5gN—三氟乙酰一DL—酪氨酸一"N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖溶液溶 解后，再用稀氨水鹽酸調(diào)pH至7.5，定容至750ml。稱取35g濕的游離米曲霉菌體 細(xì)胞混入配制的底物中，將裝有底物和酶的三角燒瓶放入水浴搖床中36r下，100 轉(zhuǎn)/min,保溫反應(yīng)10小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至l，用等體積的乙酸 乙酯錯(cuò)流萃取2次，萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有機(jī)相，用磷酸鹽緩沖溶液溶解 后，再用稀LiOH與鹽酸調(diào)pH至7，定容至450ml，加入0.25g氨基酰化酶酶粉。 36'C， 一定的搖床轉(zhuǎn)速下，保溫反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至3， 等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取的水相中殘留的"N有待回收。萃取的酯相 經(jīng)減壓濃縮后用8mol/L鹽酸在160°C水解5小時(shí)。水解液加入4M的NaOH至pH 微酸性，加入適量的活性炭脫色。脫色液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH 調(diào)pH至等電點(diǎn)，4'C過夜，用冰水洗去NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘干獲得D-酪氨酸 "N產(chǎn)品1.30 g，純度99.5%，單程收率79.6%，豐度為99.1%，旋光度[a ] D2Q =+11.0±5'°(c=4,HCl)。實(shí)施例7 稱取5gN —三氟乙酰一DL —酪氨酸一"N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖 溶液溶解后，再用稀NaOH與鹽酸調(diào)pH值為8.0，定容至750ml，稱取35g濕 的游離米曲霉菌體細(xì)胞混入配制的底物中，將裝有底物和酶的三角燒瓶放入水 浴搖床中35'C下，130轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)25小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào) pH至3，用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有 機(jī)相，用磷酸鹽緩沖溶液溶解后，再用稀氨水與鹽酸調(diào)pH值為6，定容至400ml, 加入20g游離米曲霉菌體細(xì)胞，35°C， 130轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)30小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束 后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至3，等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取的水相中殘 留的15N有待回收，萃取的酯相經(jīng)減壓濃縮后用3mol/L鹽酸在15(TC水解20 小時(shí)。水解液加入7M的NaOH至pH微酸性，加入適量的活性炭脫色。脫色 液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，0"C過夜，用冰水 洗去NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘干獲得D-酪氨酸-"N產(chǎn)品1.08 g，純度99.5%， 單程收率66.1%，豐度為99.1%，旋光度[a] D20=+11.0±5'°(c=4,HCl)。實(shí)施例8稱取5gN—三氟乙酰一DL-酪氨酸一"N (豐度99.1%)，用磷酸鹽緩沖 溶液溶解后，再用稀LiOH與醋酸調(diào)pH值為4.5，定容至600ml，稱取0.5g氨 基?；该阜刍烊肱渲频牡孜镏校瑢⒀b有底物和酶的三角燒瓶放入水浴搖床中 38t:下，140轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)30小時(shí)后停止反應(yīng)，反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至2， 用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取后的酯相經(jīng)減壓濃縮除去有機(jī)相，用 磷酸鹽緩沖溶液溶解后，再用稀氨水與鹽酸調(diào)pH至6.5，定容至350ml，加入 0.45g氨基?；该阜郏?8°C， 140轉(zhuǎn)/min保溫反應(yīng)20小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng) 液用鹽酸調(diào)pH至1，等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次。萃取的水相中殘留的 "N有待回收。萃取的酯相經(jīng)減壓濃縮后用lmol/L鹽酸在160'C水解25小時(shí)。 水解液加入8M的NaOH至pH微酸性，加入適量的活性炭脫色。脫色液濃縮 至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，Ot:過夜，用冰水洗去 NaCl等雜質(zhì)，過濾后烘干獲得D-酪氨酸-"N產(chǎn)品1.06 g，純度99.5%，單程 收率64.9%，豐度為99.1%，旋光度[a] D 20=+11.0土5'。 (c=4，HCl)。
權(quán)利要求
1.一種采用酶法拆分制備D-酪氨酸-15N的方法，其特征在于，該方法步驟如下(1)酶反應(yīng)底物的配制取一定量的N-三氟乙酰-DL-酪氨酸-15N，用磷酸鹽緩沖溶液溶解后，調(diào)節(jié)溶液的pH值為4.5～8.0，定容使溶液的濃度為0.01～0.50mol/L作為酶反應(yīng)底物；(2)保溫反應(yīng)按照每克底物加入1～10g游離米曲霉菌體細(xì)胞或0.01～0.5g氨基?；该阜鄣谋壤龑⒂坞x的米曲霉菌體細(xì)胞或氨基?；该阜奂尤?1)中配制好的酶反應(yīng)底物中，在30～50℃、一定的搖床轉(zhuǎn)速下，保溫反應(yīng)10～50小時(shí)；(3)萃取保溫反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至1～3，用等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取1～4次；(4)萃取后的脂相經(jīng)減壓濃縮除去有機(jī)相，用磷酸鹽緩沖溶液溶解后，調(diào)節(jié)溶液的pH值為4.5～8.0，定容使溶液的濃度為0.01～0.50mol/L作為底物，按照每克底物加入1～10g游離米曲霉菌體細(xì)胞或0.01～0.5g氨基酰化酶酶粉的比例加入游離的米曲霉菌體細(xì)胞或氨基?；该阜?；在30～40℃，一定的搖床轉(zhuǎn)速下，保溫反應(yīng)10～40小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液用鹽酸調(diào)pH至1～3，等體積的乙酸乙酯錯(cuò)流萃取3次，萃取的水相中殘留的15N有待回收，萃取的酯相經(jīng)減壓濃縮后用1～8mol/L鹽酸在80～160℃水解5～25小時(shí)，調(diào)節(jié)pH值至微酸性后加入適量的活性炭脫色；(5)脫色液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，在0～4℃下過夜，再用冰水洗去雜質(zhì)，過濾后烘干即得D-酪氨酸-15N產(chǎn)品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的底物濃度為0.02 0.30mol/L較佳。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用酶法拆分制備D—酪氨酸-^N 的方法，其特征在于，所述的底物pH在5.0 7.0之間較佳。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種釆用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的游離米曲霉菌體細(xì)胞的加入量為每克底物l 8g較佳。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種釆用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的氨基酰化酶酶粉的加入量為每克底物0.03 0.2g較佳。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的調(diào)節(jié)溶液的pH值采用稀NaOH、 LiOH、氨水 中一種與鹽酸或醋酸調(diào)節(jié)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的保溫反應(yīng)溫度為30 4(TC較佳，反應(yīng)時(shí)間為10 40小時(shí)較佳。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的保溫反應(yīng)的搖床為水浴搖床，該搖床轉(zhuǎn)速為100 150轉(zhuǎn)/min。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的鹽酸水解的反應(yīng)溫度為100 15(TC較佳，反應(yīng) 時(shí)間為10 20小時(shí)較佳，鹽酸的濃度為3 6mol/L較佳。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用酶法拆分制備D—酪氨酸-"N 的方法，其特征在于，所述的水解液用5 10 mol/L的NaOH調(diào)pH至微酸性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種采用酶法拆分制備D-酪氨酸-¹⁵N的方法，該方法步驟如下(1)酶反應(yīng)底物的配制；(2)保溫反應(yīng)；(3)萃??；(4)濃縮、再次酶水解、萃?。?5)濃縮、水解、脫色；(6)脫色液濃縮至一定體積后，用稀鹽酸和稀NaOH調(diào)pH至等電點(diǎn)，在0～4℃下過夜，再用冰水洗去雜質(zhì)，過濾后烘干即得D-酪氨酸-¹⁵N產(chǎn)品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法簡練，設(shè)備易得，使用該方法獲得的D-酪氨酸-¹⁵N產(chǎn)品收率高、光學(xué)純度高、化學(xué)純度高、豐度不下降。
文檔編號C12P13/00GK101153300SQ200610116468
公開日2008年4月2日 申請日期2006年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月25日
發(fā)明者征 任, 呂志賢, 徐建飛, 李良君, 杜曉寧 申請人:上海化工研究院