專(zhuān)利名稱(chēng)：通過(guò)XRCC1和ERCC2上的三個(gè)SNPs檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疾病易感性檢測(cè)用的試劑盒，尤其是一種檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒，通過(guò)同時(shí)檢測(cè)X 射線交錯(cuò)互補(bǔ)修復(fù)基因1 (X-ray repair cross- -complementing gene 1, XliCCl)的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNP) 和切除修復(fù)復(fù)合物2(Excision Repair Cross-complementing Rodent Repair Deficiency, Complementation Group 2, ERCC2)的兩個(gè)不同單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNPs)來(lái)預(yù)測(cè)個(gè)體對(duì)肺癌的易感性。
背景技術(shù)：
原發(fā)性支氣管肺癌，簡(jiǎn)稱(chēng)肺癌，為當(dāng)前世界各地最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和 生命的疾病。腫瘤細(xì)胞源于支氣管粘膜或腺體，常有區(qū)域性淋巴結(jié)和血行轉(zhuǎn)移，早期常有刺激性咳嗽、痰 中帶血等呼吸道癥狀，病情進(jìn)展速度與細(xì)胞的生物特性有關(guān)。
半個(gè)世紀(jì)以來(lái),世界各國(guó)肺癌的發(fā)病率和病死率都有明顯增高趨勢(shì)。世界衛(wèi)生組織(WHO)2000年報(bào)告 1997年全世界死于惡性腫瘤的共706.5萬(wàn)人，占死亡人數(shù)的12.6%，其中肺癌占惡性腫瘤死亡的19%,居 惡性腫瘤死因的第一位。我國(guó)19卯 1992年的抽樣調(diào)査顯示，在城市人口的腫瘤死亡中，肺癌由原來(lái)的 第4位上升為第1位，農(nóng)村上升最快的也是肺癌。云南錫礦的肺癌發(fā)病率在954 1959年間為28.02/10 萬(wàn)，1960 1969年間為197.87/10萬(wàn),1970 1979年間上升到219.10/10萬(wàn)，這在全世界也是罕見(jiàn)的。英國(guó) 著名腫瘤學(xué)家R.Peto預(yù)言如果我國(guó)不及時(shí)控制吸煙和空氣污染，到2025年我國(guó)每年肺癌將超過(guò)100萬(wàn)， 成為世界第一肺癌大國(guó)。
病因和發(fā)病機(jī)制迄今尚未明確。 一致認(rèn)為肺癌的發(fā)病與下列因素有關(guān)①吸煙(包括主動(dòng)吸煙和被動(dòng) 吸煙)②職業(yè)致癌因子，己被確認(rèn)的致人類(lèi)肺癌的職業(yè)因素包括石棉、無(wú)機(jī)砷化合物、二氯甲醚、鉻及 其化合物、鎳、氡、芥子氣、氯乙烯、煤煙、焦油和石油中的多環(huán)芳烴、煙草的加熱產(chǎn)物等；③空氣污染 (包括室內(nèi)小環(huán)境和室外大環(huán)境污染)； 電離輻射；⑤飲食與營(yíng)養(yǎng)，美國(guó)紐約和芝加哥開(kāi)展的前瞻性人 群觀察的結(jié)果說(shuō)明，食物中天然維生素A類(lèi)、e胡蘿卜素的攝入量與十幾年后癌癥的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，其中 最突出的是肺癌； 其他，美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)將結(jié)核列為肺癌的發(fā)病因素之一。有結(jié)核病者患肺癌的危險(xiǎn)性是 正常人群的10倍。其主要組織學(xué)類(lèi)型是腺癌。此外，病毒感染、真菌毒素(黃曲霉)、機(jī)體免疫功能低下、 內(nèi)分泌失調(diào)以及家族遺傳等因素，對(duì)肺癌的發(fā)生可能也起一定的綜合作用。
近年研究表明，肺癌的發(fā)生與某些癌基因的活化及抑癌基因的失活密切相關(guān)。已經(jīng)證明的幾個(gè)癌基因 家族包括引起突變的ras族、放大基因的myc族、C-erB2、機(jī)制不明的bcl-2、 Kit及由野生型變異的抗癌 基因p53、 pl6和RB等。大量研究表明C-myc、 L-myc、 N-myc和RAF在小細(xì)胞肺癌中均有過(guò)度表達(dá)。 非小細(xì)胞肺癌中則常可見(jiàn)ras族基因的過(guò)度表達(dá)。這些深入的研究將為基因預(yù)防和治療肺癌提供理論基礎(chǔ)。
SNP (single nucleotide polymorphism),即單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記，是一類(lèi)基于單堿基變異引起的DNA 多態(tài)性，被遺傳學(xué)界稱(chēng)為第三代遺傳標(biāo)記。主要是指由基因組核苷酸水平上的變異引起的DNA序列多態(tài)性， 包括單堿基轉(zhuǎn)換、顛換，以及單堿基的插入/缺失等。它是基因組中最為廣泛存在的一類(lèi)多態(tài)性標(biāo)記，占 大約90%。這些基因組序列變異可以導(dǎo)致個(gè)體間表型的差異以及不同個(gè)體對(duì)疾病，特別是復(fù)雜疾病的易感 性和對(duì)環(huán)境因素、藥物反應(yīng)的差異。
XRCC1位于第19號(hào)染色體19ql3.2-13.3位置，全長(zhǎng)32.3kb, mRNA全長(zhǎng)2087bp,共有17個(gè)外顯子， 編碼634個(gè)氨基酸的蛋白。XRCC1編碼的蛋白對(duì)因電離輻射和烷基化物引起的DNA單鏈斷裂能起到有效 的修復(fù)作用。XRCC1編碼的蛋白與DNA連接酶川、聚合酶e 、多聚ADP核糖轉(zhuǎn)移酶交互作用，參與DM 的堿基切除修復(fù)(Base Excision R印air, BER)通路。眾多研究顯示，XRCC1基因上部分位點(diǎn)的多態(tài)性，與 癌癥發(fā)生有密切的關(guān)系。與XRCC1相關(guān)的癌癥主要有乳腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、食管癌、胃癌、結(jié) 腸癌、胰腺癌、肺癌等。
rs25487是位于第19號(hào)染色體XRCC1基因上的一個(gè)G/A多態(tài)，引起XRCC1基因編碼的蛋白第399 個(gè)氨基酸由Arg變?yōu)镚ln。 Arg399Gln位于第10號(hào)外顯子，XRCC1蛋白BCRTI區(qū)域。在世界人群中的該 多態(tài)的頻率分布，G占0.72， A占0,28左右。中國(guó)人群中的分布G為0.68， A為0.32。分子生物學(xué)研究表
明，XRCC1基因上第399號(hào)氨基酸Ai -Gln的替代加強(qiáng)XRCC1蛋白與DNA-致癌物加合物的結(jié)合能力， 從而影響個(gè)體的腫瘤易感性。通過(guò)大量對(duì)于大規(guī)模人群的肺癌病例對(duì)照研究，XRCC1的399貧基酸突變 位點(diǎn)在做單因素分析時(shí)與肺癌發(fā)生相關(guān)。ERCC2,位于第19號(hào)染色體19ql3.3位置，共有23個(gè)外顯子，基因全長(zhǎng)19.0kb, mRNA全長(zhǎng)2355bp， 編碼含761個(gè)氨基酸的蛋白。由ERCC2編碼的蛋白參與轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)的核苷酸切除修復(fù)，它可識(shí)別與修復(fù)結(jié) 構(gòu)無(wú)關(guān)的大范圍的損傷，如大的加合物和胸腺嘧啶二聚體，并且是基本轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物BTF2/TFIIH的一 個(gè)組成成分。該蛋白具有ATP依賴性的DNA解旋活性，并且屬于RAD3/XPD解旋酶亞家族。ERCC2的 功能缺失導(dǎo)致基本轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物不能正確識(shí)別DNA損傷位點(diǎn)，從而使堿基切除修復(fù)無(wú)法正確進(jìn)行，導(dǎo) 致DNA上的致癌損傷積累。ERCC2基因的突變或者失活可能導(dǎo)致的疾病包括癌癥、著色性干皮病、毛 發(fā)硫營(yíng)養(yǎng)不良、柯凱因氏綜合癥。rsl3181是位于第19號(hào)染色體ERCC2基因第23號(hào)外顯子段Lys751Gln的T/G多態(tài)。世界人群中的頻 率約為T(mén):G =0.798: 0.202,雜合度0.322,中國(guó)人群中的頻率約為T(mén):G =0.91: 0.09。目前的多項(xiàng)研究表明， Lys751Gln的氣基酸替代位于ERCC2蛋白C-末端部，這個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性與肺癌、膀胱癌、乳腺癌、皮膚 癌等疾病有關(guān)。ERCC2 Lys751Gln位點(diǎn)的多態(tài)現(xiàn)象與肺癌特別是肺鱗癌的發(fā)生存在顯著關(guān)聯(lián)。rsl799793是位于第19號(hào)染色體ERCC2基因第10號(hào)外顯子段Asp312Asn的G/A多態(tài)。世界人群中 的頻率約為G:A=0.778:0.222,中國(guó)人群中的頻率約為G:A=0.94:0.06。目前的多項(xiàng)研究表明，該位點(diǎn)的多 態(tài)會(huì)導(dǎo)致ERCC2參與構(gòu)成的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物的性能發(fā)生弱化，從而使得對(duì)DNA損傷修復(fù)的能力下降，轉(zhuǎn) 錄因子的能力也同時(shí)發(fā)生下降，導(dǎo)致一系列諸如肺癌，前列腺癌等疾病的發(fā)生。ERCC2Asp312Asn多態(tài)性 與肺癌特別是肺鱗癌發(fā)生有顯著關(guān)聯(lián)，該位點(diǎn)的多態(tài)現(xiàn)象被認(rèn)為是中國(guó)人群中肺癌遺傳易感因素之一。國(guó)內(nèi)外的大量的關(guān)聯(lián)分析表明，XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)基因型為A時(shí)肺癌的發(fā)生幾率增 加；ERCC2基因上rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)基因型為G時(shí)肺癌的發(fā)生幾率增加；ERCC2基因上rsl799793號(hào)SNP 位點(diǎn)基因型為A時(shí)肺癌的發(fā)生幾率增加。這三個(gè)SNPs位點(diǎn)的多態(tài)性可用于評(píng)估個(gè)體對(duì)肺癌的易感性。發(fā)明內(nèi)容基于XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和ERCC2基因上的 rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)的多態(tài)性可用于評(píng)估個(gè)體對(duì)肺癌的易感性的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供一種檢測(cè)肺癌易感 性的試劑盒。該試劑盒包括:檢測(cè)XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)的特異性引物對(duì)及特異性炎光探針、檢測(cè)ERCC2 基岡上的rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針、檢測(cè)ERCC2基因上的rsl799793號(hào)SNP 位點(diǎn)的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、 去離子水。本試劑盒中所述的特異性引物對(duì)是指針對(duì)XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的 rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和ERCC2基因上的rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)而設(shè)計(jì)，能特異性擴(kuò)增出耙位點(diǎn)的DNA片段。 設(shè)計(jì)這類(lèi)引物對(duì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠輕易完成的。優(yōu)選地，試劑盒中包含具有SEQ ID NO: l和2所示 序列的引物對(duì)、具有SEQ ID NO: 3和4所示序列的引物對(duì)以及具有SEQ ID NO: 5和6所示序列的引物對(duì)。 特異性引物對(duì)可用常規(guī)的合成技術(shù)進(jìn)行合成。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠理解，本發(fā)明的引物不限于這三對(duì)引 物。本試劑盒中所述的特異性熒光探針是指針對(duì)XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的 rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和ERCC2基因上的rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)而設(shè)計(jì)，能通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)特異性檢 測(cè)出這三個(gè)SNPs位點(diǎn)肺癌易感基因型的探針。設(shè)計(jì)這類(lèi)探針是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠輕易完成的。優(yōu)選地， 試劑盒中包含具有SEQ ID NO: 7、 8和9所示序列的Taqman探針。特異性熒光探針可用常規(guī)的合成技術(shù) 進(jìn)行合成。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠理解，本發(fā)明的特異性熒光探針不限于這H條探針，所有可用于熒光定 PCR檢測(cè)XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和ERCC2基因上的 rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)的探針均在本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明試劑盒的組分和含量包括1M1 10 X熒光定霣PCR反應(yīng)緩沖液，0. 1^1 25raM dNTP混合液，0. 5nl 25mM MgCl2溶液，0.02nl (5units/nl) Taq DNA聚合酶，20nM特異性引物對(duì)(六條)各0.225^1,IO一特異性熒光探針(三條)各0.25^1，去離子水4.28nl。本試劑盒供一人份檢測(cè)應(yīng)用，試劑盒的保存溫度為-20'C。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī) 條件，或按照廠商所建議的條件。實(shí)施例l.檢測(cè)試劑盒的使用 步驟l: DNA模板的抽取 用硅膠吸附法抽提口腔上皮細(xì)胞的基因組DNA。 步驟2:熒光定量PCR反應(yīng)使用可檢測(cè)肺癌易感性的熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒，其中，含有下列引物對(duì)和熒光探針:有義引物l:5'-TMCTGGCATCnCACTTCT -3'卿IDNO:1)Tm值為反義引物l:5，- TCCAGATTCCTGGCATTGC -3'(SEQIDNO:2)Tm值為58'C有義引物2:5,- ACTCAGGAGTCACCAGGAA -3'(SEQIDNO:3)Tm值為58'C反義引物2:5'-TCTGTTCTCTGCAGGAGGA -3'(SEQIDNO:4)Tm值為58*C有義引物3:5'- ATCAAAGAGACAGACGAGCA -3，(SEQIDNO:5)Tm值為58'C反義引物3:5'-TCAGGAAGCCCAGGAAAT -3'(SEQIDNO:6)Tm值為5化炎光探針1:5'-CGGCTGCCCTCCCAGAGG -3'(SEQIDNO:7)Tm值為64,C炎光探針2:5'- AATCTGCTCTATCCTCTGCAGC -3'(SEQIDNO:8)Tm值為66'C炎光探針3:5，- TGCCCMCGAAGTGCTGCAG -3'(SEQIDNO:9)Tm值為64'C有義引物1，反義引物1和熒光探針1特異地針對(duì)檢測(cè)XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)多態(tài)性； 有義引物2,反義引物2和熒光探針2特異地針對(duì)檢測(cè)ERCC2基因上的rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)多態(tài)性；有義 引物3,反義引物3和熒光探針3特異地針對(duì)檢測(cè)ERCC2基因上rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)多態(tài)性。熒光定量PCR反應(yīng)體系為總體積10^1，包含濃度為20ngAxl的DNA模板2pl、 1^1 10 X熒光定量PCR 反應(yīng)緩沖液、0. 1^1 25mM dNTP混合液、0. 5pl 25mM MgCl2溶液、0.02^1 (5units/nl) Taq DNA聚合酶、 20一的有義引物1、 2和3各0.225nl、 20nM的反義引物l、 2和l 3各0. 225^1、 10nM的熒光探針l、 2和 3各0.25nl，去離子水4.28nl。在ABI9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件為50'C、 2分鐘，95'C、 IO分鐘，進(jìn)行60個(gè)循環(huán)的 95'C、 30秒，6(TC、 l分鐘。反應(yīng)結(jié)束后在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟3: SNP基因型分析將熒光定量PCR儀上顯示的最終樣品熒光量和正常對(duì)照相對(duì)比,炎光探針1最終的炎光信號(hào)明顯高于 正常對(duì)照，說(shuō)明被檢測(cè)DNA的XRCCl基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)基因型攜帶有A型，為肺癌易感型炎
光探針2最終的熒光信號(hào)明顯高于正常對(duì)照，說(shuō)明被檢測(cè)DNA的ERCC2基因上rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)基因型 攜帶有G型，為肺癌易感型熒光探針3最終的熒光信號(hào)明顯高于正常對(duì)照，說(shuō)明被檢測(cè)DNA的ERCC2基 因上rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)基因型攜帶有A型，為肺癌易感型。實(shí)施例2.指導(dǎo)人們主動(dòng)預(yù)防肺癌的服務(wù)目前在上海主健生物工程有限公司已經(jīng)開(kāi)展了這項(xiàng)服務(wù)。 步驟l: DNA提取對(duì)被檢測(cè)者進(jìn)行服務(wù)前咨詢，由被檢測(cè)者簽署知情同意書(shū)，填寫(xiě)生活飲食習(xí)慣問(wèn)巻調(diào)査表。依照取樣 盒中的指示使用口腔采樣拭進(jìn)行口腔上皮細(xì)胞取樣，采用硅膠吸附法進(jìn)行口腔上皮細(xì)胞的DNA抽提。 步驟2:基因分型檢測(cè)使用本發(fā)明提供的試劑盒，對(duì)被檢測(cè)者DNA的XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上 rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和ERCC2基因上rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，確定這三個(gè)SNPs 位點(diǎn)的基因型。步驟3:指導(dǎo)人們主動(dòng)預(yù)防肺癌通過(guò)對(duì)被檢測(cè)者SNPs基因型的分析，出具基因分型檢測(cè)報(bào)告和被檢測(cè)者個(gè)體化健康指導(dǎo)報(bào)告?；?檢測(cè)報(bào)告詳細(xì)說(shuō)明了被檢測(cè)者肺癌易感程度的髙低以及患病的概率大小。個(gè)體化健康指導(dǎo)報(bào)告以被檢測(cè)者 的基閃分型檢測(cè)結(jié)果為基礎(chǔ)，結(jié)合其生活飲食習(xí)慣問(wèn)巻調(diào)査結(jié)果，評(píng)估被檢測(cè)者肺痛遺傳易感的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)。 同時(shí)制定出針對(duì)于被檢測(cè)者的個(gè):性化健康行動(dòng)方案，方案包括在飲食習(xí)慣、生活方式上的改進(jìn)建議等，并 為被檢測(cè)者普及預(yù)防肺癌的健康知識(shí)。
序列表<110>上海主健生物工程有限公司<120〉通過(guò)XRCC1和ERCC2上的三個(gè)SNPs檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒 <歸9〈210> <211> 〈212〉 〈213>120 DNA人工序列<220><223>引物 ■〉 1taactggcat cttcacttct<210> 2 <211> 19 <212> DNA <213〉人工序列<220><223>引物 <■ 2tccagattcc tggcattgc<210> 3 <211> 19 〈212> DNA <213>人工序列〈220〉〈223〉引物 <400〉 3aCtC3gg8gt C3CC3gga3201919200610116663. 5〈210〉 4 <211> 19 <212〉 DNA <213〉人工序列<220><223>引物 <400> 4tctgttctct gcagg鄉(xiāng)a<210> 5 <211> 20 <212〉 DNA <213〉人工序列<220〉<223>引物 〈德5atC犯3g柳C8g3Cg3gC3<210> 6 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列<220><223〉引物 < 6tcetgg卿cc C3ggaast<210> 7 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列<220〉<223>探針
〈400〉 7cggctgccct cccag鄉(xiāng) 18<210〉 <211〉 <212〉 <213>822 DNA人工序列〈220〉〈223〉探針 ■〉 8aatctgctct atcctctgca gc 22<210〉 〈211〉 <212> <213>920 DNA人工序列<220><223>探針 <400> 9tgcccaacga agtgctgcag 20
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒，包括同時(shí)檢測(cè)XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的rs13181號(hào)SNP位點(diǎn)和rs1799793號(hào)SNP位點(diǎn)的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、去離子水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于:所述的特異性引物對(duì)是指針對(duì)XRCC1基因上的rs25487 號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)而設(shè)計(jì)，能特異性擴(kuò)增出包含 XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)的引 物對(duì)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性熒光探針是指針對(duì)XRCC1基因上的 rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的rsl3181號(hào)SNP位點(diǎn)和rsl799793號(hào)SNP位點(diǎn)而設(shè)計(jì)，能通過(guò)熒光 定量PCR技術(shù)特異性檢測(cè)出這三個(gè)SNPs位點(diǎn)肺癌易感基因型的探針。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所含的特異性引物對(duì)選自具有SEQ ID N0: l和2所 示序列的引物對(duì)、具有SEQ ID NO: 3和4所示序列的引物對(duì)以及具有SEQ ID NO: 5和6所示序列的引物 對(duì)。
5. 根據(jù)權(quán)利耍求1所述的試劑盒，其特征在于所含的特異性熒光探針選自具有SEQ ID NO: 7、 8 和9所示序列的Taqman探針。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于試劑盒的組分和含量包括ljil IOX熒光定量PCR反 應(yīng)緩沖液，0. lpl 25mM dNTP混合液，0.5^1 25mM MgCl2溶液，0, 02pl (5units/nl) Taq DM聚合酶， 20nM特異性引物對(duì)(六條)各0.225^1， 10nM特異性熒光探針(三條)各0.25nl，去離子水4.28nl。本 試劑盒供一人份檢測(cè)應(yīng)用，試劑盒的保存溫度為-20'C 。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)肺癌易感性的試劑盒。該試劑盒包括同時(shí)檢測(cè)XRCC1基因上的rs25487號(hào)SNP位點(diǎn)、ERCC2基因上的rs13181號(hào)SNP位點(diǎn)和rs1799793號(hào)SNP位點(diǎn)的特異性引物對(duì)及特異性熒光探針、用于熒光定量PCR檢測(cè)的常規(guī)組件等。本發(fā)明的試劑盒通過(guò)同時(shí)檢測(cè)分析個(gè)體的XRCC1基因和ERCC2基因上的SNPs位點(diǎn)基因攜帶型來(lái)預(yù)測(cè)個(gè)體對(duì)肺癌的易感性。
文檔編號(hào)C12R1/68GK101153345SQ20061011666
公開(kāi)日2008年4月2日 申請(qǐng)日期2006年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月28日
發(fā)明者馮哲民, 鄒祖燁 申請(qǐng)人:上海主健生物工程有限公司