專(zhuān)利名稱(chēng)：：植物內(nèi)淀粉合酶的過(guò)量表達(dá)的制作方法植物內(nèi)淀粉合酶的過(guò)量表達(dá)于增加遺傳^務(wù)飾的植物細(xì)胞內(nèi)淀粉的磷酸鹽含量的方法，其中植物細(xì)胞通過(guò)導(dǎo)入編碼可溶性淀粉合酶II的外來(lái)核酸分子受到遺傳1務(wù)飾，并且這種淀粉合酶II得到過(guò)量表達(dá)。此外，本發(fā)明涉及具有改良質(zhì)量特性的稻淀粉和米粉，涉及包含這種稻淀粉的稻粒和在其上長(zhǎng)有這些稻粒的稻植物。稻是對(duì)超過(guò)半數(shù)的世界人口最重要的食物。在某些國(guó)家，稻米占據(jù)食物總攝入量的約80%。世界范圍的年生產(chǎn)量是5.50億噸稻米。稻穎果由76%淀粉和約7-8%的蛋白質(zhì)組成。它僅含有1.3%的脂肪和多種痕量元素(0.6%)如磷、鐵和鎂。經(jīng)濟(jì)上最重要的稻物種是稻(Oryzasativa),其基本品種可以分成兩組"印度"組，該組僅包括長(zhǎng)粒米,和"日本，，組，該組包含中等粒米和短粒米。長(zhǎng)粒米(其米粒在烹煮時(shí)分散的稻品種)主要來(lái)自印度或爪哇；短粒米(如"短米"，即其谷粒在烹煮時(shí)粘稠的稻品種)主要來(lái)自日本。來(lái)自中國(guó)和東南亞的品種介于以上二者之間。而在所有品種內(nèi)，存在兩種主要類(lèi)型半透明米?；虿煌该髅琢！＿@些米粒主要在淀粉組成上不同半透明米的淀粉由約20%直鏈淀粉和多達(dá)80%的支鏈淀粉組成，而不透明米的淀粉則實(shí)際上僅由支鏈淀粉組成。支鏈淀粉具有特異性的蔟狀結(jié)構(gòu)并由四類(lèi)酶可溶性淀粉合酶(SS)、淀粉分支酶(SBE)、淀粉去分支酶(SDE)和ADP葡萄糖焦砩酸酶的多種亞基或同種型合成(Nakamura2002，PlantCellPhysiol.43(7):718-725)。烹煮特性和口感特性主要由稻胚乳的直鏈淀粉含量決定。具有低含量直鏈淀粉的品種在烹煮后潮濕且粘稠，而具有高含量直鏈淀粉的米粒在烹煮時(shí)變干蓬*>(11.tenHave,HoffmannMudraPlarre(HMP)1985:LehrbuchderZiicht肌glandw.Kulturpflanzen，第2巻，第110-123頁(yè))。谷粒質(zhì)量不僅對(duì)消費(fèi)者是重要的，而且也對(duì)制粉工業(yè)重要；谷粒特性如谷粒大小、谷粒形狀和谷粒質(zhì)量是重要特征，因?yàn)樗鼈冇绊懨追郛a(chǎn)量和破損谷粒百分?jǐn)?shù)(tenHave1985，同上)。米粉是味il^目對(duì)中性的并且因此非常適合作為用于淡味產(chǎn)品的基質(zhì)或作為摻合物。由于米粉的低致敏性，它還非常適用于嬰兒配方食品或作為過(guò)敏患者的膳食。除油、脂肪和蛋白質(zhì)之外，多糖是來(lái)自植物的最重要的可再生原料。除纖維素以外，作為高等植物內(nèi)最重要的貯藏物質(zhì)之一的淀粉在多糖中是極為重要的。多糖淀粉是化學(xué)均一的單元(葡萄糖分子)的聚合物。然而，多糖形成具有不同形式分子的高度復(fù)雜的混合物，其在聚合程度和葡萄糖鏈的分支發(fā)生率和鏈長(zhǎng)度方面不同，并且還可以受到衍生化，例如磷酸化。因此，淀粉不構(gòu)成均一的原料。尤其，直鏈淀粉與支鏈淀粉不同，其中直鏈淀粉是基本上不分支的oc-l,4-糖苷鍵連接的葡萄糖單元的聚合物，支鏈淀粉則是不同分支的葡萄糖鏈的復(fù)雜混合物。分支因額外的oc-l，6-糖苷鍵存在而形成。在用于工業(yè)淀粉生產(chǎn)的常見(jiàn)植物例如玉米、小麥或馬鈴薯內(nèi)，所合成的淀粉具有約20%-25%直鏈淀粉和約70%-75%支鏈淀粉。淀粉的功能性特性不僅極大地受直鏈淀粉/支鏈淀粉比和砩酸鹽含量的影響，還受分子量、側(cè)鏈分布樣式、離子含量、脂類(lèi)及蛋白質(zhì)含量、淀粉粒平均粒度、淀粉粒形態(tài)學(xué)等影響。本文中可以提到的重要功能特性是例如溶解度、退化性能、水結(jié)合能力、成膜特性、粘度、糊化特性、凍融穩(wěn)定性、酸穩(wěn)定性、凝膠強(qiáng)度等。僅大致知道引起淀粉合成的J^出生物化學(xué)合成途徑。然而，存在一系列這樣的步驟，在其中導(dǎo)致淀粉顆粒合成和淀粉合成的詳細(xì)機(jī)制迄今未被闡明并因此仍是研究的主題。量。一種對(duì)植物育種方法的替代是通過(guò)重組方法定向修飾產(chǎn)生淀粉的植物。然而，前提是鑒定并表征參與淀粉合成和/或參與淀粉修飾的酶并分離編碼這些酶的核酸分子，以及隨后在轉(zhuǎn)基因植物內(nèi)的功能分析。在植物細(xì)胞內(nèi)，淀粉合成在質(zhì)體內(nèi)發(fā)生，其中質(zhì)體在光合活性組織內(nèi)是葉綠體并且在非光合活性的淀粉貯藏組織內(nèi)是造粉體。在淀粉合成中發(fā)揮作用的重要酶是Rl蛋白質(zhì)(-a-葡聚糖水合二激酶，E.C.2.7.9.4;Lorberth等(1998)NatureBiotechnology16:473-477)、淀粉合酶和分支酶(=BE;見(jiàn)例如，Ponstein等，PlantPhysiol.29(19卯)，234-241;Kossmann等，1991，Mol.Gen.Genet.230，39-44;Safford等，1998，CarbohydratePolymers35，155-168;Jobling等1999，ThePlantJournal18(2):163-171)。分支酶催化a-l,6-分支導(dǎo)入線性a-l，4-葡聚糖。在淀粉合酶中，多種同種型已經(jīng)得到描述，它們均通過(guò)轉(zhuǎn)移來(lái)自ADP-葡萄糖的葡萄糖基殘基至a-l,4-葡聚糖而催化聚合化反應(yīng)。關(guān)于多種植物物種內(nèi)分離的天然淀粉的概述可以在Kossmann和Lloyd(2000,CriticalReviewsinPlantSciences19(3):171-226)內(nèi)找到，在所述植物物種中觀察到在淀粉生物合成內(nèi)發(fā)揮作用的酶的變異。淀粉合酶(EC2.4.1.21)可以分成兩類(lèi)淀粉顆粒結(jié)合的淀粉合酶("顆粒結(jié)合性淀粉合酶I";GBSSI)和可溶性淀粉合酶("可溶性淀粉合酶，，；SSS，也稱(chēng)作"SS")。這種區(qū)分在每種情況下不是界限分明的，因?yàn)槟承┑矸酆厦讣纫缘矸垲w粒結(jié)合形式存在又以可溶性形式存在(Denyer等，PlantJ.4(1993)，191-198;Mu等，Plant丄6(1994),151-159)。與導(dǎo)致直鏈淀粉合成的GBSSI不同，仍很少知道淀粉生物合成中多種類(lèi)型可溶性淀粉合酶的確切酶功能。生物化學(xué)表征導(dǎo)致鑒定分子量在約60至約180kDa之間的可溶性淀粉合酶蛋白質(zhì)?？寺【幋a淀粉合酶的cDNA有可能區(qū)分由于序列同源性和由于(可溶性)淀粉合酶的功能性特征而受到定義的不同類(lèi)型。迄今，8類(lèi)淀粉合酶已經(jīng)在高等植物內(nèi)得以鑒定(尤其由Li等(20(B)Funct.Intergr.Genomics3:76-85):-淀粉-顆粒結(jié)合性淀粉合酶I(顆粒結(jié)合性淀粉合酶I=GBSSI)(稻例如Okagaki(1992)PlantMolBiol.19:513-516;馬鈴薯vanderLeij等(1991)Mol.GenGenet.228:240-248;玉米例如Kloesgen等(1986)Mol.GenGenet.203:237-244);畫(huà)可溶性淀粉合酶I(=SSI;稻Baba等(1993)PlantPhysiol.103:565-573;馬鈴薯Kossmann等(1999)Planta208:503-511;玉米Knight等(1998)PlantJ.14:613-622);-可溶性淀粉合酶II(=SSII;豌豆Dry等(1992)PlantJ.2:193-202，馬鈴薯Edwards等(1995)PlantJ8:283-294，玉米Harn等,(1998)PlantMol.Biol.37(4):639-649;小麥Walter等(1996)Genbank登錄號(hào)U66377;稻Yamamoto和Sasaki(1997)PlantMol.Biol.35:135-144和大麥Li等(2003)，F(xiàn)imct.Integr.Genomics3:76-85);畫(huà)可溶性淀粉合酶III(=SSIII;馬鈴薯Abel等(1996)PlantJ10:981-991:飼用豌豆GenBank登錄號(hào)AJ225088);-可溶性淀粉合酶IV(=SSIV;小麥GenBank登錄號(hào)AY044844);-可溶性淀粉合酶V(=SSV;飼用豌豆GenBank登錄號(hào)VUN006752;擬南芥(Arabidopsis):GenBank登錄號(hào)AL021713;玉米WO97/26362)和國(guó)dull(Gao等(1998)PlantCell10:399-412;-可溶性淀粉合酶VI(=SSVI;玉米WO01/12826)。共價(jià)結(jié)合的淀粉磷酸的含量會(huì)取決于植物物種而變化。例如某些玉米突變體合成淀粉磷酸鹽含量增加的淀粉(蠟質(zhì)玉米為0.002%和高直鏈淀粉玉米為0.013%),而常規(guī)玉米品種僅含有痕量的淀粉磷酸鹽。在小麥中也找到少量淀粉磷酸鹽(0.001%),而在燕麥和粟內(nèi)未檢測(cè)到淀粉磷酸鹽。在稻突變體(蠟質(zhì)稻0.003%)中存在的淀粉磷酸鹽比傳統(tǒng)稻品種(0.013%)少。在合成塊莖貯藏淀粉或根部貯藏淀粉的植物中檢測(cè)到明顯量的淀粉磷酸鹽，如木薯(0.008%)、甜馬鈴薯(0.011%)、竹芋(arrowroot)(0.021。/。)或馬鈴薯(0.089%)。在每一情況下，淀粉磷酸鹽含量百分?jǐn)?shù)基于淀粉干重并已經(jīng)通過(guò)Jane等測(cè)定(1996,CerealFoodsWorld41(11)，827-832)。在SSI反義馬鈴薯上的研究表明其磷酸鹽含量增加高于野生型達(dá)30-70%(WO96/15248)。WO00/08184描述其中淀粉合酶III(-SSIII)活性及分支酶I(-BEI)活性均降低的植物。與來(lái)自野生型植物的淀粉相比，來(lái)自此類(lèi)植物的淀粉具有升高的磷酸鹽含量。在國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO02/34923內(nèi)描述了因來(lái)自馬鈴薯的RI基因過(guò)量表達(dá)而具有增加的Rl蛋白質(zhì)活性和增加的淀粉磷酸鹽含量的小麥植物。磷酸鹽在已經(jīng)由植物合成的淀粉(天然淀粉)內(nèi)的分布通常因如此事實(shí)得以區(qū)分，即約30%至40%的磷酸鹽殘基共價(jià)地在葡萄糖分子C3位置上結(jié)合并且約60%至70%的磷酸鹽殘基共價(jià)地在葡萄糖分子的C6位置上結(jié)合(Blennow等，2000，Int.J.ofBiologicalMacromolecules27:211-218)。相反，化學(xué)磷酸化的淀粉還具有在葡萄糖分子C2位置上結(jié)合的磷酸鹽殘基，因?yàn)榛瘜W(xué)反應(yīng)以非定向方式進(jìn)行。WO0M)23024公開(kāi)了具有高達(dá)69.5。C的DSCT-起始溫度和高達(dá)73.6°C的DSC峰值溫度的稻淀粉；分析了日本組及印度組的總計(jì)約400個(gè)稻品種的這些特征。Umemoto等(2002，Theor.Appl.Genet.104:1-8)描述了對(duì)日本品種(Nipponbare)與印度品種(Kasalath)之間回交雜交品系的分析。他們從其結(jié)果中得出結(jié)論負(fù)責(zé)日本品種與印度品種之間不同的凝膠化起始溫度(DSCT-起始)的基因座alk(t)、gel(t)和acl(t)可能是淀粉合酶同種型SSIIa。WO03/023024描述了已經(jīng)轉(zhuǎn)入來(lái)自印度形式IR36的淀粉合酶SSIIa(SSIIa)基因的日本品種(Kinmaze)的稻轉(zhuǎn)化體(幷78-l)。顯示了在支鏈淀粉側(cè)鏈圖譜上的所得變化，結(jié)果指示了從日本品種圖語(yǔ)至印度品種圖語(yǔ)的遷移(WO03/023024內(nèi)的圖22)。WO03/023024未描述稻淀粉或米粉的磷酸鹽含量、直鏈淀粉含量或流變特性。由SSIIa引起在支鏈淀粉側(cè)鏈圖鐠上的變化與淀粉的DSCT-起始溫度間的關(guān)系在最近出版的論文中再次得到證實(shí)(Nakamura等，(2005)PMB;58(2):213-27),參考對(duì)轉(zhuǎn)化體和對(duì)應(yīng)"受體，，及"供體"品系的值(圖6B)。圖6B顯示對(duì)于所產(chǎn)生SSIIa轉(zhuǎn)化體的淀粉的DSCT-起始的溫度。DSCT-起始溫度毫無(wú)例外地比70'C高。該文中詳述的最高T-起始值是69.5X:，還如WO03/023024(第21-24頁(yè))內(nèi)所述。因此，WO03/023024和Nakamura等(2005)均沒(méi)有教授借以可產(chǎn)生DSCT-起始溫度超過(guò)70n的稻淀粉的途徑。然而，較高的DSCT-起始溫度迄今為止是受歡迎的，因?yàn)樗歉牧嫉牡矸蹮岱€(wěn)定性的重要特征并且也是因熱效應(yīng)所致在結(jié)晶體結(jié)構(gòu)上的變化的重要特征。因此，本發(fā)明的目標(biāo)是提供具有新特性、尤其具有改良的熱穩(wěn)定性的稻淀粉和米粉以及制備它們的手段和方法。迄今不知道增加可溶性淀粉合酶II的基因表達(dá)怎樣影響植物內(nèi)的淀粉特性。高磷酸鹽含量是需要的，因?yàn)檫@產(chǎn)生淀粉的改良物理化學(xué)特征并且因此產(chǎn)生淀粉的新應(yīng)用。因此，本發(fā)明的又一個(gè)目標(biāo)是提供借以能夠在體內(nèi)增加植物淀粉的磷酸鹽含量的方法。這些目標(biāo)通過(guò)使用在專(zhuān)利權(quán)利要求書(shū)內(nèi)詳述的用途形式而實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明涉及與來(lái)自相應(yīng)未遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞的淀粉相比(100%),用于增加遺傳修飾的植物細(xì)胞的淀粉的磷酸鹽含量至150-500%的方法，其中a)植物細(xì)胞通過(guò)導(dǎo)入編碼可溶性淀粉合酶II的外來(lái)核酸分子而受到遺傳修飾，并且b)這種可溶性淀粉合酶II得到過(guò)量表達(dá)。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"淀粉的磷酸鹽含量，，理解為意指與淀粉的葡萄糖單體共價(jià)結(jié)合的磷酸基團(tuán)。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"淀粉的磷酸鹽含量增加"理解為意指與來(lái)自相應(yīng)野生型植物細(xì)胞的淀粉(100%)相比，在C6位置上磷酸鹽含量增加至150-500%,優(yōu)選地至160-400%并且尤其優(yōu)選地至170-380%。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"在C6位置上磷酸鹽含量"理解為意指如此磷酸基團(tuán)的含量，其中所述的磷酸基團(tuán)結(jié)合在淀粉的葡萄糖單體的碳原子位置"6"上。原則上，葡萄糖單元的位置C3和C6可以在淀粉內(nèi)被體內(nèi)磷酸化。在本發(fā)明的上下文中，位置C6上的磷酸鹽含量(-C-6-P含量)借助下文所述的目視酶測(cè)定法(Nielsen等，1994,PlantPhysiol.105，111-117)通過(guò)測(cè)定葡萄糖-6-磷酸而確定；(測(cè)定在位置C6上的磷酸鹽含量(C-6-P含量))。本發(fā)明中非常令人吃驚的是與野生型(100%)相比，有可能增加磷酸鹽含量至明顯大于150%。在本發(fā)明的上下文中，淀粉的磷酸鹽含量升高是在體內(nèi)實(shí)現(xiàn)，而不是在體外例如通過(guò)使預(yù)提取的淀粉化學(xué)磷酸化而實(shí)現(xiàn)。因此，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是可以省去用于化學(xué)磷酸化的化學(xué)劑。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"遺傳修飾的植物細(xì)胞"意指植物細(xì)胞受到遺傳修飾，所述的遺傳修飾導(dǎo)致與相應(yīng)未遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞的可溶性淀粉合酶II(-SSII)活性相比，SSII活性增加。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"野生型植物細(xì)胞，，意指充當(dāng)用于本發(fā)明方法的原材料的植物細(xì)胞，即除已經(jīng)導(dǎo)入并導(dǎo)致可溶性淀粉合酶II(=SSII)活性增加的遺傳修飾之外，它們的遺傳信息與遺傳修飾的植物細(xì)胞的遺傳信息相對(duì)應(yīng)。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"相對(duì)應(yīng)"意指當(dāng)比較多個(gè)對(duì)象時(shí)，彼此相互加以比較的所討論對(duì)象維持在相同條件下。在本發(fā)明的上下文中，在野生型植物細(xì)胞上下文中的術(shù)語(yǔ)"相對(duì)應(yīng)"意指彼此相互加以比較的植物細(xì)胞在相同條件下培養(yǎng)并且它們優(yōu)選地具有(在培養(yǎng)中的)相同年齡。術(shù)語(yǔ)"培養(yǎng)年齡"理解為意指(植物)生物在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)度過(guò)或生長(zhǎng)的時(shí)間段。這可以是例如從播種至收獲的時(shí)間段或植物細(xì)胞在組織培養(yǎng)基內(nèi)受到培養(yǎng)直至某個(gè)發(fā)育期期間的時(shí)間段。在本發(fā)明的上下文中，這意指彼此相互加以比較的植物細(xì)胞在相同培養(yǎng)條件下度it^目同的發(fā)育時(shí)間段。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"外來(lái)核酸分子"理解為意指這樣的分子，所述分子不天然地于相應(yīng)野生型植物細(xì)胞內(nèi)、或不天然地在相應(yīng)野生型植物細(xì)胞內(nèi)以具體空間排列而存在、或者該分子位于植物細(xì)胞基因組里此分子不天然存在于其中的位置內(nèi)。外來(lái)核酸分子/多核普酸優(yōu)選地是由如此不同元件組成的重組分子，其中所述不同元件的組合或具體空間排列不天然存在于植物細(xì)胞內(nèi)。這可以通過(guò)例如Southern印跡分析進(jìn)行驗(yàn)證。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"得到過(guò)量表達(dá)"意指與相應(yīng)的未遺傳修"飾的野生型植物細(xì)胞相比，遺傳修飾的植物細(xì)胞內(nèi)SSII蛋白質(zhì)的酶活性增加。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)"得到過(guò)量表達(dá)"還進(jìn)一步意指天然地沒(méi)有任何可檢測(cè)到的SSII活性的植物或植物細(xì)胞在根據(jù)本發(fā)明受到遺傳修飾(即其中將編碼可溶性淀粉合酶II的外來(lái)核酸分子導(dǎo)入植物細(xì)胞基因組)后，具有可通過(guò)酶鐠法檢測(cè)的SSII活性。細(xì)胞內(nèi)SSII蛋白質(zhì)的酶活性增加優(yōu)選地借助如下文所述的酶語(yǔ)法來(lái)測(cè)定("通過(guò)活性凝膠測(cè)定SSII活性，，)。在本上下文中，SSII活性增加意指與相應(yīng)未遺傳修飾的細(xì)胞相比，SSII活性增加到至少200%、特別地到350-2000%、優(yōu)選地到600-1500%并且尤其優(yōu)選地到700-1200%。在本發(fā)明的上下文中，"SSII活性增加"還意指沒(méi)有可檢測(cè)到的SSII活性的植物或植物細(xì)胞在根據(jù)本發(fā)明受到遺傳修飾(即其中將編碼可溶性淀粉合酶的外來(lái)核酸分子導(dǎo)入植物細(xì)胞基因組)后，具有可檢測(cè)到的SSII活性。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"可溶性淀粉合酶n"理解為意指n類(lèi)可溶性淀粉合酶蛋白質(zhì)(ADP-葡萄糖1，4-a-D-葡聚糖4-a-D-葡萄糖糖基轉(zhuǎn)移酶；EC2.4.1.21)。可溶性淀粉合酶催化其中底物ADP-葡萄糖的葡萄糖殘基轉(zhuǎn)移至a-l，4連接的葡聚糖鏈而形成a-l，4-鍵(ADP-葡萄糖+((l，4)-a-D-葡糖基KN)〈=〉A(chǔ)DP+((l,4)-a-D-葡糖基)(N+l))的糖基化反應(yīng)。ssn蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)顯示具有特異性結(jié)構(gòu)域的序列。在"N"末端，ssn蛋白質(zhì)具有用于轉(zhuǎn)運(yùn)至質(zhì)體的信號(hào)肽。在羧基末端后是氨基端區(qū)和催化結(jié)構(gòu)域(Li等，2000，PlantPhysiology123，613-624)?；诙喾NSSII蛋白質(zhì)的一級(jí)序列比較(http:/7hits.isb-sib.ch/cqi-bin/PFSCAN)的其它分析已經(jīng)揭示SSII蛋白質(zhì)具有三個(gè)特定結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)構(gòu)域包含由SeqIDNo.1內(nèi)所示的小麥SSII基因序列的核苷酸bpll90至1279(-區(qū)域l)、bpl493至1612(區(qū)域2)和bp2147至2350(區(qū)域3)編碼的氨基酸。在本發(fā)明的上下文中，SSII蛋白質(zhì)因此理解為意指這樣的可溶性淀粉合酶，它的^J^酸序列與SeqIDNo.3內(nèi)所示的區(qū)域l具有至少86%、優(yōu)選至少93%并且尤其優(yōu)選100%的同一性，以及與SeqIDNo.4內(nèi)所示的區(qū)域2具有至少83%、優(yōu)選至少86%并且尤其優(yōu)選100%的同一性，以及與SeqIDNo.5內(nèi)所示的區(qū)域3具有至少70%、優(yōu)選至少82%、優(yōu)選86%、特別優(yōu)選98%并且尤其優(yōu)選100%的同一性。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"同一性"理解為意指與其它蛋白質(zhì)的氨基酸相一致的氨基酸的百分?jǐn)?shù)(同一性)。同一性?xún)?yōu)選地借助計(jì)算機(jī)程序確定。當(dāng)彼此加以比較的序列具有不同長(zhǎng)度時(shí)，以如此方式確定同一性以至于較短序列與較長(zhǎng)序列共有的M酸數(shù)目決定同一性百分?jǐn)?shù)。同一性可以通過(guò)公共可獲得的已知計(jì)算機(jī)程序例如ClustalW(Thompson等，(1994)NucleicAcidsResearch22:4673-4680)常規(guī)地確定。ClustalW由歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室(Meyerhofstrasse1，D69117,海德堡)的JulieThompson(Thompson@EMBL-Heidelberg.DE)和TobyGibson(Gibson⑥EMBL-Heidelberg.DE)對(duì)公眾開(kāi)放。ClustalW還可從多個(gè)互聯(lián)網(wǎng)網(wǎng)頁(yè)中下載，尤其IGBMC(InstitutdeG紐6tiqueetdeBiologieMol&ulaireetCellulaire，B.P.163,67404IUkirchCedex,法國(guó)；ftp:〃ftp-igbmc.u-strasbg.fr/pub/)和EBI(ftp:〃ftp.ebi.ac.uk/pub/software/)，以及EBI的全部鏡像互聯(lián)網(wǎng)網(wǎng)頁(yè)(歐洲生物信息研究所，WellcomeTrustGemoneCampus，Hinxton，CambridgeCB101SD,UK)。優(yōu)選地^f吏用ClustalW計(jì)算機(jī)程序1.8版來(lái)確定本文中所述蛋白質(zhì)與其它蛋白質(zhì)之間的同一性。將設(shè)置如下參數(shù)KTUPLE-1、TOPDIAG=5、WINDOW=5、PAIRGAP=3、GAPOPEN-10、GAPEXTEND=0.05、GAPDIST=8、MAXDIV=40、MATRIX-GONNET、ENDGAPS(OFF)、NOPGAP、NOHGAP。優(yōu)選地使用ClustalW計(jì)算機(jī)程序1.8版來(lái)確定例如本文中所述核酸分子的核苷酸序列與其它核酸分子的核苷酸序列之間的同一性。將設(shè)置如下^t:KTUPLE=2、TOPDIAGS=4、PAIRGAP=5、DNAMATRIX:IUB、GAPOPEN-IO、GAPEXT=5、MAXDIV=40、TRANSITIONS:未加權(quán)。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"增加SSII活性，，意指與相應(yīng)未遺傳修飾的野生型稻植物或野生型稻植物細(xì)胞相比，增加SSII活性至少100%、特別是200%-2000%，優(yōu)選400%-1400%并且尤其優(yōu)選500%-900%。在本發(fā)明的上下文中，SSII活性使用下文所述方法("通過(guò)活性凝膠測(cè)定SSII活性，，)檢測(cè)。在本發(fā)明的上下文中，"增加SSII活性，，還意指沒(méi)有可檢測(cè)到的SSII活性的植物或植物細(xì)胞在根據(jù)本發(fā)明受到遺傳修飾(其中將編碼可溶性淀粉合酶的外來(lái)核酸分子導(dǎo)入植物細(xì)胞基因組)后，顯示可檢測(cè)到的SSII活性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還是其中外來(lái)核酸分子采取異源的可溶性淀粉合酶II的編碼區(qū)形式的一種方法。在本發(fā)明的上下文中，"異源的可溶性淀粉合酶n"理解為意指這樣的可溶性淀粉合酶II，它不天然存在于植物細(xì)胞內(nèi)，但是它的編碼性DNA序列通過(guò)重組方法(例如細(xì)胞的轉(zhuǎn)化)被導(dǎo)入細(xì)胞。在本上下文中，編碼性啟動(dòng)子的控制下。編碼性DNA序列優(yōu)選地源于除所轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞或植物以外的植物屬。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"植物屬，，理解為意指生物系統(tǒng)的分級(jí)水平。屬包含一個(gè)或多于一個(gè)的物種。屬的實(shí)例是小麥屬(TriticumL.(小麥))。屬內(nèi)的全部物種具有雙名名稱(chēng)，其除包含屬名以外，還含有種名。因此，，或不處在自身普通小麥(TriticumaestivumL.)(普通面包小麥)是小麥屬的一個(gè)種。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"SSII基因"理解為意指編碼"可溶性淀粉合酶II"的核酸分子或多核苷酸(DNA，cDNA)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，SSII基因源自單子葉植物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，SSII基因源自小麥。在又一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法是其中使用來(lái)自單子葉植物的可溶性淀粉合酶II的一種方法。在尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，SSII由SEQIDNo.l內(nèi)所示的核苷酸序列的編碼區(qū)編碼或具有SEQIDNo.2內(nèi)所示的氨基酸序列。其淀粉由本發(fā)明方法加以修飾的遺傳修飾植物可以屬于任何植物物種，即屬于單子葉植物和雙子葉植物。植物優(yōu)選地是農(nóng)用作物植物形式，即由人培育的用于營(yíng)養(yǎng)目的或用于技術(shù)、尤其工業(yè)目的植物或它們的細(xì)胞。本發(fā)明的方法優(yōu)選地在淀粉貯藏植物(例如豌豆、馬鈴薯、甜馬鈴薯、木薯、玉米和稻)內(nèi)應(yīng)用。在尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法在稻植物上實(shí)施。本發(fā)明還涉及DSCT-起始溫度在70n和80n之間的稻淀粉。稻胚乳淀粉的熱特征和米粉的熱特征可以通過(guò)差示掃描量熱法(-DSC)分析。這些熱特征顯示為具有值DSCT-起始(-最低凝膠化溫度)和DSCT-峰值(=最高凝膠化溫度)的凝膠化溫度。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"DSCT-起始溫度"因此理解為意指代表淀粉樣品或粉末樣品開(kāi)始相變的溫度。其特征在于基線的投射和在峰的上升側(cè)越過(guò)拐點(diǎn)的切線。令人驚訝地是本發(fā)明的稻植物合成DSCT-起始溫度在70"C和80。C之間、特別在77。C和80。C之間的淀粉。本發(fā)明的稻淀粉特別具有在72和79匸之間、優(yōu)選在74。C和79。C之間、極特別優(yōu)選在76"C和78。C之間DSCT-起始溫度。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的稻淀粉具有升高的DSC峰值溫度(DSCT-峰值)。令人驚訝地是本發(fā)明的稻植物合成DSCT-峰值溫度在80"C和87。C之間、優(yōu)選在81X:和86'C之間的淀粉。尤其優(yōu)選DSCT-峰值溫度在82t:和83'C之間的本發(fā)明稻淀粉。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"DSCT-峰值溫度"理解為意指這樣的溫度，在該溫度上DSC曲線已經(jīng)達(dá)到最大值并且曲線的一階微分是零。在本發(fā)明的上下文中，"DSCT-起始"和"DSCT-峰值，，溫度由下文所述方法("通過(guò)差示掃描量熱法對(duì)米粉/淀粉的熱分析")定義。本發(fā)明稻淀粉的DSCT-起始溫度升高到如此度數(shù)的事實(shí)令本領(lǐng)域技術(shù)人員非常驚訝，特別是因?yàn)榘l(fā)明稻淀粉的淀粉磷酸鹽含量同時(shí)升高。這是因?yàn)槠褚呀?jīng)推測(cè)增加的磷酸化程度導(dǎo)致淀粉顆粒內(nèi)的雙螺旋和晶序不穩(wěn)定，這將導(dǎo)致降低的DSCT-起始溫度(Safford等，(1998)CarbohydratePolymers35:155-168)。磷酸化程度高的天然淀粉通常在與可比較的低磷酸鹽含量淀粉相比的明顯較低溫度上喪失它們的結(jié)晶性。然而，在種類(lèi)眾多的熱加工步驟和應(yīng)用中需要使用粒狀稻淀粉。因此特別有利的是本發(fā)明稻淀粉令人吃驚的高DSCT-起始溫度或峰值溫度，也即在本發(fā)明米粉的RV分析期間令人吃驚的高成糊溫度，因此這種特性有可能在升高的加工溫度上保持淀粉顆粒的結(jié)構(gòu)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的稻淀粉具有在位置C6(C-6-P)上每毫克水解淀粉0.70nmo1與2.5nmo1磷酸鹽之間的磷酸鹽含量。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的稻淀粉具有在位置C6上每亳克淀粉0.9nmol與2.3nmol磷酸鹽之間的磷酸鹽含量。在尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，位置C6的磷酸鹽含量在每毫克淀粉1.5nmo1與2.0nmo1磷酸鹽之間。此外，本發(fā)明延伸至包含本發(fā)明稻淀粉的衍生的稻淀粉。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"衍生的稻淀粉，，意指其特性在從植物細(xì)胞中分離后例如借助熱加工、化學(xué)加工、酶加工或機(jī)械性加工而已經(jīng)改性的本發(fā)明稻淀粉。本發(fā)明的稻淀粉比常規(guī)淀粉更適合作為制備衍生的稻淀粉的原材料，原因在于它們因較高的淀粉砩酸鹽含量而含有更高比例的活性官能團(tuán)，并且因?yàn)楸景l(fā)明的稻淀粉比含有可比較的磷酸鹽含量的淀粉具有更高成糊溫度或更高熱穩(wěn)定性。本發(fā)明因此還涉及產(chǎn)生本發(fā)明的衍生的稻淀粉的方法，其中本發(fā)明的稻淀粉隨后受到改性。尤其，本發(fā)明的衍生的稻淀粉采取的形式是經(jīng)熱和/或用酸處理的淀粉。在又一個(gè)實(shí)施方案中，衍生的稻淀粉采取的形式是淀粉醚，尤其是淀粉烷醚、o-烯丙基醚、羥烷基醚、o-羧甲基醚、含氮的淀粉醚、含磷酸的淀粉醚或含硫的淀粉醚。在又一個(gè)實(shí)施方案中，衍生的稻淀粉采取的形式是交聯(lián)淀粉。在又一個(gè)實(shí)施方案中，衍生的稻淀粉采取的形式是淀粉接枝聚合物。在又一個(gè)實(shí)施方案中，衍生的稻淀粉采取的形式是氧化淀粉。在又一個(gè)實(shí)施方案中，衍生的稻淀粉采取的形式是淀粉酯，特別是通過(guò)使用有機(jī)酸引入淀粉的淀粉酯。這些淀粉酯尤其優(yōu)選地采取磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、黃原酸酯、乙酸酯或檸檬酸酯的形式。本發(fā)明的衍生的稻淀粉適用于制藥工業(yè)、食品領(lǐng)域和/或非食品領(lǐng)域內(nèi)多種應(yīng)用。用于制造本發(fā)明衍生淀粉的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且在一般文獻(xiàn)中被充分描述。對(duì)衍生淀粉制造的綜述可在Orthoefer(Corn，ChemistryandTechnology,1987年，編者Watson和Ramstad，第16章，第479-499頁(yè))內(nèi)找到。稻淀粉的衍生化作用還在例如Shih和Daigle(2003，Nahrung47(1):64-67)內(nèi)描述。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的稻淀粉用于制備衍生淀粉的用途。處于天然形式或衍生形式下的本發(fā)明稻淀粉適于食品領(lǐng)域或非食品領(lǐng)域內(nèi)的多種應(yīng)用。另一個(gè)實(shí)施方案包含本發(fā)明的衍生性稻淀粉在工業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的用途。由于本發(fā)明稻淀粉具有小的粒度，本發(fā)明的稻淀粉還特別適用于制造照相紙。本發(fā)明還延伸至包含本發(fā)明稻淀粉的組合物。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明延伸至包含本發(fā)明稻淀粉的米粉。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米粉具有在72。C和81。C之間、優(yōu)選在74。C和80X:之間、特別在77。C和80。C之間的DSCT-起始溫度的淀粉。尤其優(yōu)選DSCT-起始溫度在76C和79C之間的本發(fā)明米粉。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米粉具有在8ic和卯x:之間，優(yōu)選在82"C和86"之間的DSCT-峰值溫度的淀粉。尤其優(yōu)選DSCT-峰值溫度在82。C和85C之間的本發(fā)明米粉。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米粉在RVA(快速粘度分析儀)分析內(nèi)具有在75X:和90。C之間、優(yōu)選在78C和88"C之間、特別在83'C和86。C之間并且尤其優(yōu)選在80"C和85'C之間的RVAPT成糊溫度。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"成糊溫度"(RVAPT)意指根據(jù)RVA分析在粘度發(fā)展開(kāi)始時(shí)所測(cè)量的值是這樣的溫度，在該溫度上加熱過(guò)程期間的粘度曲線離開(kāi)基線并且粘度在0.1分鐘時(shí)間內(nèi)改變超過(guò)36cP。在本發(fā)明的上下文中，"RVAPT成糊溫度"以"通過(guò)快速粘度分析儀(RVA)分析米粉"的方法加以測(cè)定。與來(lái)自相應(yīng)野生型稻植物的米粉相比，本發(fā)明的米粉具有升高的成糊溫度(RVAPT)。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"升高的成糊溫度(RVAPT)"意指與來(lái)自相應(yīng)野生型稻植物的米粉的成糊溫度相比，成糊溫度(RVAPT)高5'C至15。C，特別是6'C至14C優(yōu)選8'C至12X:。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明米粉的特征是在達(dá)到成糊溫度與達(dá)到峰值粘度之間縮短的時(shí)間段。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"在達(dá)到成糊溫度與達(dá)到峰值粘度之間縮短的時(shí)間段"(峰時(shí)間-成糊時(shí)間)意指在根據(jù)如下文所述RVA分析的時(shí)間方面的差異等于40秒至130秒，尤其優(yōu)選50-100秒并且尤其優(yōu)選60-75秒。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及制備本發(fā)明米粉的方法，其中將本發(fā)明的稻米、優(yōu)選本發(fā)明的精米研磨。用于精制及研磨稻米的方法是技術(shù)人員已知的并例如在Fitzgerald等(2003，J.ofAgrocult.AndFoodChemistry51:2295-2299)或在Ramesh等(1999,CarbohydratePolymers38:337-347)內(nèi)描述。技術(shù)人員知道"稻米"意指稻植物成熟的受精的花。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明米粉的組合物。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明延伸至包含本發(fā)明稻淀粉的稻粒。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，稻粒的形式是加工的米粒。技術(shù)人員理解加工意指將粗稻(稻谷)轉(zhuǎn)換成糙米或精米；加工方法是技術(shù)人員已知的并且尤其在Fitzgerald等(20(B，J.ofAgrocult.andFoodChemistry51:2295畫(huà)2299)或在Ramesh等(1999，CarbohydratePolymers38:337-347)內(nèi)描述。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的稻?？梢杂糜谂胫?。在又一個(gè)實(shí)施方案中，稻米具有在烹煮后改變的特性。在本發(fā)明的上下文中，"在烹煮后改變的特性"理解為意指與質(zhì)量有關(guān)的米粒特征(例如烹煮后米粒、特別是已烹煮的米在冷卻后或在加熱后的質(zhì)構(gòu)或米粒硬度及粘度)的改變。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的米粒具有-10g至-200g，優(yōu)選地-12g至-150g，尤其優(yōu)選地-15g至-130g(以g張力度量)的粘度。技術(shù)人員理解術(shù)語(yǔ)"粘度，，意指在烹煮期間的水?dāng)z取及加熱效應(yīng)和米粒的均一性以及烹煮后必然伴有的米粒與其它米粒或其它表面(例如叉、筷子等)的黏附。在本發(fā)明的上下文中，粘度將理解為意指如方法"測(cè)定烹煮特征和烹煮的米粒的質(zhì)構(gòu)"內(nèi)所述，在事先壓縮最佳烹煮的米粒之后，通過(guò)質(zhì)構(gòu)儀測(cè)量的最大反向力(張力)。在本上下文中，高的負(fù)值意指高于較低負(fù)值的粘度。在本發(fā)明的上下文中，"最佳烹煮的米粒"理解為意指在達(dá)到最小烹煮時(shí)間(如由Juliano1984;J.ofTex.Studies15:357-376描述，當(dāng)90%的稻米不再具有白色中心時(shí))后再烹煮2分鐘的米粒。在本發(fā)明中，粘度在最佳烹煮的米粒，即已經(jīng)在4'C貯藏22小時(shí)并隨后加溫至室溫的米粒，或在4。C貯藏(22小時(shí))后已經(jīng)在烤箱內(nèi)于80。C再加熱5分鐘或在4'C貯藏(22小時(shí))后已經(jīng)借助微波爐再加熱5分鐘(600W/3分鐘)的米粒上測(cè)量。技術(shù)人員理解再加熱意指對(duì)已經(jīng)使用微波爐、烤箱、水浴或熱柜烹煮4次，并且在再加熱期間例如通過(guò)置于室溫而冷卻；優(yōu)選地，再加熱理解為意指單次再加熱途徑。由于"粘度"是稻米的重要品質(zhì)參數(shù)，故本發(fā)明的米粒提供有利的用途。這尤其包括在半成品應(yīng)用的領(lǐng)域，其中所述的半成品在生產(chǎn)時(shí)僅得到短暫烹煮，隨后再次被干燥并僅在它們最終消費(fèi)(例如在家用、或在流動(dòng)餐室內(nèi))之前才得到再加熱或煮沸，而對(duì)風(fēng)味和均一性無(wú)任何不利影響。在本上下文中的又一個(gè)品質(zhì)參數(shù)是在水中煮沸時(shí)米粒尺度在縱軸方向上的延伸。形狀上的這種變化是重要的視觀品質(zhì)參數(shù)，尤其在長(zhǎng)粒米的情況下。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米粒通過(guò)如此的事實(shí)區(qū)分，即它們具有從1.50至1.90、尤其優(yōu)選從1.55至1.80并特別優(yōu)選從1.60至1.70的延伸率(ER)。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米粒與相應(yīng)野生型稻植物的米粒相比具有增加的延伸率。在本發(fā)明的上下文中，增加的延伸率理解為意指增加5%至25%,優(yōu)選10%至20%，尤其優(yōu)選4%至18%的延伸率。在本上下文中，"延伸率，，理解為意指已烹煮米粒粒長(zhǎng)與未烹煮米粒粒長(zhǎng)的比率。粒長(zhǎng)如所述在方法"測(cè)量因烹煮所致的米粒尺度上的變化"內(nèi)以mm度量；測(cè)量?jī)?yōu)選地使用游標(biāo)卡尺實(shí)施。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米粒具有從2.8至6.2，優(yōu)選從3.5至5.5并且尤其優(yōu)選從4.0至5.0的CDC值。"CDC值，，(CDC-尺度變化系數(shù))理解為意指因烹煮所致沿長(zhǎng)度的尺度變化對(duì)沿寬度的尺度變化的比率，即烹煮狀態(tài)下的粒長(zhǎng)(Lc)對(duì)未烹煮狀態(tài)下粒長(zhǎng)(Lu)的比率相對(duì)于烹煮狀態(tài)下的粒寬(Wc)對(duì)未烹煮狀態(tài)下的粒寬(Wu)比率-(Lc/Lu)/(Wc/Wu)。本發(fā)明的又一個(gè)主題涉及包含至少一種本發(fā)明稻粒的組合物。本發(fā)明還包含其上長(zhǎng)有至少一種本發(fā)明稻粒的和/或包含本發(fā)明稻淀粉的稻植物。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包含遺傳修飾的稻植物細(xì)胞和稻植物，其中與相應(yīng)未遺傳修飾的野生型稻植物或野生型稻植物細(xì)胞相比，遺傳修飾導(dǎo)致增加的可溶性淀粉合酶II(SSII)活性。還令人驚訝的是與來(lái)自相應(yīng)的野生型植物細(xì)胞或野生型植物的稻淀粉相比，本發(fā)明的稻淀粉具有某些側(cè)鏈的改良分布。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，已經(jīng)顯示與來(lái)自相應(yīng)野生型稻植物的稻淀粉相比，具有從20至25dp—聚合程度)的支鏈淀粉側(cè)鏈的含量增加5-35%。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"有從20至25dp^聚合程度)的支鏈淀粉側(cè)鏈的含量"意指與來(lái)自相應(yīng)野生型稻植物細(xì)胞或野生型稻植物的支鏈淀粉的具有20-25DP的側(cè)鏈含量相比，增加具有20-25DP的支鏈淀粉的側(cè)鏈含量5%-35%,優(yōu)選6%-30%,尤其優(yōu)選8%-24%。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，具有從6至10的支鏈淀粉的側(cè)鏈含量降低。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"降低具有從6至10的支鏈淀粉的側(cè)鏈含量"意指與來(lái)自相應(yīng)野生型稻植物細(xì)胞或野生型稻植物的支鏈淀粉的具有6-10DP的側(cè)鏈含量相比，降低具有6-10DP的支鏈淀粉的側(cè)鏈含量20%-60%，優(yōu)選25%-55%，尤其優(yōu)選30%-55%。在本發(fā)明的上下文中，側(cè)鏈分布的測(cè)量通過(guò)下文所述的方法("加工米粉/淀粉以便通過(guò)高壓陰離子交換色鐠分析支鏈淀粉的側(cè)鏈分布")實(shí)施。短側(cè)鏈的百分?jǐn)?shù)通過(guò)測(cè)定全部側(cè)鏈總數(shù)內(nèi)特定側(cè)鏈的百分?jǐn)?shù)而測(cè)定。全部側(cè)鏈總數(shù)通過(guò)測(cè)定HPLC色鐠內(nèi)代表從聚合程度DP6-48的峰下總面積而鏈的峰下面積相對(duì)于總面積的比率而測(cè)定。為了測(cè)定峰面積，例如可以4吏用來(lái)自Dionex，USA的程序Chromelion6.60。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"野生型稻植物"意指充當(dāng)用于本發(fā)明稻植物的原材料的稻植物，即除所導(dǎo)入的導(dǎo)致可溶性淀粉合酶II(-SSII)活性增加的遺傳修飾之外，它們的遺傳信息與遺傳修飾的稻植物的遺傳信息相對(duì)應(yīng)。優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)"野生型稻植物"指品種M202,這是具有值為25.2%的S-型支鏈淀粉的稻品種，該品種的谷粒已經(jīng)在2005年11月17日保藏在NCIMBLtd.保藏單4立，F(xiàn)ergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn，Aberdeen,Scotland,AB219YA,UnitedKingdom,編號(hào)NCIMB41352。在本發(fā)明方法的上下文中，遺傳修飾優(yōu)選地包含導(dǎo)入至少一種編碼可溶性淀粉合酶II(SSII)的外來(lái)核酸分子至植物細(xì)胞的基因組內(nèi)，所述的導(dǎo)入至少一種外來(lái)核酸分子引起如此事實(shí)，即從遺傳修飾的植物細(xì)胞中及從該植物細(xì)胞內(nèi)再生的植物里可得到的淀粉因?yàn)橐呀?jīng)導(dǎo)入的SSII表達(dá)而與來(lái)自相應(yīng)未遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞內(nèi)的淀粉相比，具有在C6位置上增加的磷酸鹽含量。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種外來(lái)核酸分子的導(dǎo)入導(dǎo)致本發(fā)明的稻淀粉合成。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的稻植物和稻植物細(xì)胞是其中外來(lái)核酸分子是異源可溶性淀粉合酶II的編碼區(qū)的那些稻植物和稻植物細(xì)胞。多種技術(shù)是可獲得用于導(dǎo)入DNA至植物宿主細(xì)胞的。這些技術(shù)包含使用才艮癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)或發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacteriumrhizogenes)作為轉(zhuǎn)化介質(zhì)以T-DNA轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞、原生質(zhì)體融合、注射、DNA的電穿孔、通過(guò)生物射彈法導(dǎo)入DNA和其它可能技術(shù)。通過(guò)基于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的載體對(duì)單子葉植物的轉(zhuǎn)化已經(jīng)例如在Chan等，1993，PlantMol.Biol.22:491-506;Hiei等，1994，PlantJ.6:271-282;Deng等，1990，ScienceinChina33:28-34;Wilmink等，1992，PlantCellReports11:76-80;May等，1995，Bio/Technology13:486-492;Conner和Domisse，1992，Int.J.PlantSci.153:550-555并在Ritchie等，1993，TransgenicRes.2:252-265內(nèi)描述。用于轉(zhuǎn)化單子葉植物的備選系統(tǒng)是通過(guò)生物射彈法的轉(zhuǎn)化(Wan和Lemaux，1994，PlantPhysiol.104:37-48;Vasil等，1993，Bio/Technology11:1553-1558;Ritala等，1994，PlantMol.Biol.24:317-325;Spencer等，l朔，Theor.Appl.Genet.79:625-631)、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、電穿孔部分透化的細(xì)胞以及通過(guò)玻璃纖維導(dǎo)入DNA。已對(duì)多種禾谷類(lèi)物種的成功轉(zhuǎn)化已經(jīng)例如對(duì)大麥(Wan和Lemaux，同上；Ritala等，同上；Krens等，1982，Nature296:72-74)、對(duì)小麥(Nehra等，1994，PlantJ.5:285-297)、稻(Ishida等，1996，NatureBiotechnology14(6):745畫(huà)750)和玉米(Koziel等(1993)，Biotechnology11:194-200)作了描述，飾的植物，其中所述植物的遺傳信息與相應(yīng)非遺傳修飾的野生型植物的遺傳信息對(duì)應(yīng)并且該植物含有導(dǎo)入的用于增加可溶性淀粉合酶II的活性的相同遺傳修飾，其中所述的可溶性淀粉合酶II已經(jīng)存在于本發(fā)明方法所產(chǎn)生的遺傳修飾的植物細(xì)胞內(nèi)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及來(lái)自日本組(粳稻)的稻植物，所述的日本組包含短粒稻品種和中粒稻品種，例如糯稻(glutinousrice)、短粒稻、曰本標(biāo)稻(mochirice)、nishiki稻、ribe稻、紅稻(redrice)、黑稻(blackrice)、壽司稻(sushirice)。在本發(fā)明尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，來(lái)自日本組的稻野生型植物用作產(chǎn)生本發(fā)明稻植物的原材料。在又一個(gè)更尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及具有S-型支鏈淀粉的稻植物。在稻支鏈淀粉中，可區(qū)分L型和S型。L型支鏈淀粉主要存在于來(lái)自印度組的稻中，而相反，S-型支鏈淀粉則主要存在于來(lái)自日本組的稻內(nèi)。在本發(fā)明的上下文中，通過(guò)如此事實(shí)區(qū)分S-型支鏈淀粉，即與L型相比，短oc-1,4-葡聚糖鏈(DP〈40)的量超過(guò)20%的總oc-1,4-葡聚糖鏈(DP<=24)(Nakamura2002，Starch54:117-131)。在甚至尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明包含遺傳修飾的稻植物(粳稻(Oryzasativavar.japonica))即轉(zhuǎn)4匕體GAOS0353國(guó)02301，GAOS0353-01301和GAOS0353國(guó)01502。轉(zhuǎn)化體M202GAOS0353-01502的種子于2005年11月17日以編號(hào)NCIMB41353保藏在NCIMBLtd.,FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn,Aberdeen,Scotland,AB219YA,UnitedKingdom。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米粉比來(lái)自相應(yīng)野生型稻植物的米粉具有更低的表觀直鏈淀粉含量。在本發(fā)明的上下文中，表觀直鏈淀粉含量?jī)?yōu)選地由下文所述的方法"測(cè)定表觀直鏈淀粉含量"測(cè)定。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明米粉的表觀直鏈淀粉含量與來(lái)自相應(yīng)野生型稻植物的米粉內(nèi)的表觀直鏈淀粉含量相比，降低10%至20%,尤其優(yōu)選12%至18%并且甚至尤其優(yōu)選13%至15%。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，所導(dǎo)入的編碼可溶性淀粉合酶II的外來(lái)核酸分子處在胚乳特異性啟動(dòng)子控制下。與相應(yīng)野生型植物的胚乳相比，胚乳特異性啟動(dòng)子有可能增加本發(fā)明植物的胚乳內(nèi)編碼可溶性淀粉合酶II的外來(lái)核酸分子轉(zhuǎn)錄物的量。優(yōu)選4吏用用于胚乳特異性表達(dá)的啟動(dòng)子，例如來(lái)自稻的谷蛋白啟動(dòng)子(Leisy等(1990)PlantMol.Biol.14:41-50;Zheng等(1993)PlantJ.4:357-366)、來(lái)自小麥的HMWG啟動(dòng)子(Anderson等(1989)NucleicAcidRes17:461-462)、來(lái)自小麥的GBSSII啟動(dòng)子(WO02/02785)、USP啟動(dòng)子(Baumlein等(1991)Mol.GenGenetics225:121-128)、來(lái)自豆的茱豆蛋白啟動(dòng)子(Kawagoe和Murai(1992)PlantJ2(6):927-36)、來(lái)自玉米的玉米醇溶蛋白基因的啟動(dòng)子(Pedersen等，(1982)Cell29:1015-1026;Quatroccio等，(1990)PlantMol.Biol.15:81-93)、來(lái)自玉米的皺縮-1啟動(dòng)子(sh-l)(Werr等(1985)EMBOJ.4:1373-1380)或來(lái)自稻的谷醇溶蛋白啟動(dòng)子(Qu和Takaiwa(2004)PlantBiotechnologyJournal,2:113-125)。尤其優(yōu)選使用來(lái)自稻的球蛋白啟動(dòng)子(Nakase等(1996)Gene170(2):223-226)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及產(chǎn)生本發(fā)明的稻植物的方法，其中本發(fā)明的稻植物從本發(fā)明的稻植物細(xì)胞中再生，并且其中于再生后，選擇其中可溶性淀粉合酶II的過(guò)量表達(dá)導(dǎo)致SSII活性增加的那些稻植物。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"選擇"意指在群體內(nèi)，主觀選擇的性狀是這樣的標(biāo)準(zhǔn)，其中根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，培育表現(xiàn)這種性狀的植物，而棄去未表現(xiàn)所需性狀的那些植物。在本發(fā)明的上下文中，受到選擇的植物是具有SSII活性增加的性狀的那些植物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明遺傳修飾的稻植物的繁殖材料，其含有本發(fā)明的稻植物細(xì)胞。在該上下文中，術(shù)語(yǔ)"繁殖材料"包含適用于通過(guò)營(yíng)養(yǎng)途徑或有性途徑產(chǎn)生子代的植物的那些部分。通過(guò)營(yíng)養(yǎng)繁殖的那些部分例如是插枝或愈傷組織培養(yǎng)物。繁殖材料包含例如果實(shí)、種子、幼苗、原生質(zhì)體、細(xì)胞培養(yǎng)物等。繁殖材料優(yōu)選地是含有胚乳的谷粒。包含遺傳修飾的植物細(xì)胞的本發(fā)明稻植物的稻粒是本發(fā)明的又一個(gè)主題。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包含產(chǎn)生本發(fā)明的改性稻淀粉的方法，淀粉。提取方法是技術(shù)人員已知的并例如在Wang和Wang(2004，JournalofCereal.Science39:291-296)或Patindol和Wang(2003，J.AgricFoodChem.51:2777-2784)內(nèi)描述。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及抗性淀粉，其中與來(lái)自野生型植物內(nèi)的淀粉的可消化性相比，所述抗性淀粉的可消化性降低。食物的可消化性尤其由食物包含的淀粉類(lèi)型決定。很多食物成分甚至在抵達(dá)胃和小腸的途中就被降解，并在胃和小腸內(nèi)被降解。然而，一些淀粉僅在大腸內(nèi)降解并且因此稱(chēng)作抗性淀粉(-RS)。這些淀粉可以分成四種類(lèi)型。第一類(lèi)型(RS1)包括封閉在完整細(xì)胞內(nèi)的淀粉。因此這種淀粉很少接觸到消化酶。這適用于例如完整谷物穎果或粗磨的谷物穎果內(nèi)的淀粉和豆類(lèi)內(nèi)的部分淀粉。第二類(lèi)型(RS2)包括在小腸內(nèi)不以天然形式被消化的淀粉。在這種情況下其原因在于淀粉粒的結(jié)構(gòu)和淀粉粒內(nèi)淀粉分子的排列所致。第二類(lèi)型包括例如生馬鈴薯、綠色香蕉或直鏈淀粉豐富的玉米品種(直鏈淀粉玉米(amylomaize))內(nèi)的淀粉。第三類(lèi)型(RS3)包括所謂的回生淀粉。這種類(lèi)型的淀粉在已加熱的含淀粉食物如面包和烹煮的馬鈴薯冷卻后產(chǎn)生。在此期間，一些淀粉分子重排，并且晶態(tài)帶形成以及不能夠接觸消化酶(例如直鏈淀粉)。第四類(lèi)型(RS4)包括例如通過(guò)交聯(lián)或酯化(乙?；?所產(chǎn)生的不可消化的化學(xué)改性淀粉。抗性淀粉的促健康效應(yīng)克其由其發(fā)酵影響細(xì)菌反應(yīng)、增加糞便重量并導(dǎo)致產(chǎn)生代表大腸粘膜細(xì)胞的主要能源供應(yīng)者的短鏈脂肪酸組成。此外，在腫瘤抑制中的作用歸因于丁酸(進(jìn)一步細(xì)節(jié)將尤其在Wisker(2001)，UGB-Forum01:75-77內(nèi)找到)。例如在含有高比例全谷粒(及因此RS1)的面包的消費(fèi)者內(nèi)葡萄糖和/或胰島素水平低于由精制谷物組成的面包的消費(fèi)者內(nèi)葡萄糖和/或胰島素水平。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)血液葡萄糖的較少增加似乎與眾多豆類(lèi)有關(guān)。這顯示l型抗性淀粉影響食物對(duì)血液葡萄糖具有的效應(yīng)。除血液葡萄糖和胰島素之外，糖類(lèi)對(duì)消耗脂肪也非常重要。持續(xù)波動(dòng)的胰島素水平干擾脂肪的消耗并且還引起增加的饑餓感。為此，可消化性低或下降并且因此僅導(dǎo)致胰島素水平輕微上升的糖類(lèi)是有利的。因此在合適產(chǎn)品內(nèi)的此類(lèi)淀粉有可能滿(mǎn)足有關(guān)吸收少量糖類(lèi)("低糖")的膳食的全部要求。已經(jīng)預(yù)計(jì)與野生型淀粉相比，根據(jù)本發(fā)明方法產(chǎn)生的淀粉顯示明顯減少的可消化性。當(dāng)研究分離的淀粉時(shí)，這顯而易見(jiàn)(圖3)。因此，根據(jù)本發(fā)明方法產(chǎn)生的淀粉表現(xiàn)出有可能在纖維增加的膳食中及"低糖，，領(lǐng)域內(nèi)及其它領(lǐng)域內(nèi)利用的高營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)消化所需要的時(shí)間區(qū)分淀粉用20分鐘消化的淀粉稱(chēng)作"快速消化淀粉(RDS)"，用60分鐘的淀粉稱(chēng)作"緩慢可消化淀粉(SDS)"并且在120分鐘后剩下的淀粉稱(chēng)作"抗性淀粉(RS)"。令人驚訝的是，分離的淀粉的可消化性減少。優(yōu)選可消化性與野生型相比減少10至65%的淀粉，特別優(yōu)選可消化性減少10至55%，極特別優(yōu)選可消化性減少12至45%并且最特別優(yōu)選可消化性減少15至30%。這意指與野生型淀粉相比，本發(fā)明的淀粉內(nèi)抗性淀粉RS百分?jǐn)?shù)增加。RS含量測(cè)定為從總淀粉干重(100%)中減去120分鐘后自總淀粉中所釋放的葡萄糖的百分?jǐn)?shù)的差異(如下文方法15內(nèi)所述)。在該上下文中，增加意指RS含量增加到100-750%、優(yōu)選地到150-700%并且尤其優(yōu)選到200-600%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的稻淀粉顯示15%-45%、優(yōu)選17%-40%并最優(yōu)選20%-38°/。的RS含量。本發(fā)明還包括包含如此淀粉的植物和植物細(xì)胞，其中所述的淀粉已經(jīng)比，減少的可消化性。材料和方法在實(shí)施例中使用如下方法。這些方法可以用于實(shí)施本發(fā)明的方法；它們代表本發(fā)明的具體實(shí)施方案，但是不使本發(fā)明限于這些方法。技術(shù)人員方法學(xué)部分而等效實(shí)施本發(fā)明。僅一個(gè)例外是"測(cè)定淀粉結(jié)合性葡萄糖-6-磷酸含量"的方法，在本發(fā)明的上下文中，該方法僅以下文在14下所述的方式實(shí)施。1)植物材料和栽培稻植物粳稻，品種M202。種子在2005年11月17日保藏于NCIMBLtd.(NationalCollectionofIndustrialBacteria,FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn;Aberdeen,AB219YA，UK)。品種M202-野生型的種子給予保藏號(hào)NCIMB41352;轉(zhuǎn)化體M202-GAOS0353-01502的種子給予保藏號(hào)NCIMB41353。稻植物在溫室內(nèi)在如下方案條件下培育播種基質(zhì)在1.61玫瑰花盆(制造商H.Meyer，德國(guó))內(nèi)100%水蘚泥炭和1001砂/qm與粘土:180kg/qm的混合物。pH:5.4-6.2;谷物肥料Hakaphos(Compo,德國(guó))14%N-16%P-18%K+2%Mg;2kg/qm;施肥3.5g/植物直至開(kāi)花NH4N03(1.75g)和Flory2Basis(制造商:Euflor，德國(guó))1.75g;3%N-16%P-15%K+5%Mg。溫度白晝28"C/夜晚24°C(16小時(shí)/8小時(shí))；相對(duì)空氣濕度85-95%;光照16小時(shí)，350jLi愛(ài)因斯坦/平方米秒。2)序列的來(lái)源和用于轉(zhuǎn)化的構(gòu)建體使用來(lái)自小麥的序列Ta_SSIIa以轉(zhuǎn)化稻。分離及克隆如WO97-45545內(nèi)所述實(shí)施(此后稱(chēng)為"pTaSSl")。所用的轉(zhuǎn)化載體AH32-191在實(shí)施例1內(nèi)描述。3)稻植物的轉(zhuǎn)化及再生稻植物通過(guò)Ishida等(1996，NatureBioTechnology，14(6):745-750)所述的方法得以轉(zhuǎn)化及再生。4)稻豐立的加工為產(chǎn)生足夠量的研究材料，稻植物在室溫條件下培育并在充分成熟時(shí)收獲。為進(jìn)一步干燥，成熟(即充分發(fā)育的)稻粒在37'C貯藏3-7日。此后，通過(guò)脫殼機(jī)(LaboratoryPaddysheller，Grai腿an，Miami,Florida,USA)從谷殼中釋放米粒，并且通過(guò)碾制1分鐘(PearlestRicePolisher,Kett，VillaPark,CA)加工得到的糙米以產(chǎn)生精制米。精制米用于完整谷粒的分析(例如堿消值、米粒尺度、粒重等)的原材料。為研究谷粒組成以及淀粉和米粉的特征，精米通過(guò)實(shí)驗(yàn)?zāi)シ蹤C(jī)(Cyclotec，Samplemill,Foss，丹麥)磨碎以產(chǎn)生米粉。實(shí)驗(yàn)?zāi)シ蹤C(jī)的原理是磨料僅當(dāng)達(dá)到小于0.5mm粒度時(shí)才離開(kāi)。磨粉過(guò)程在全部樣品材料離開(kāi)磨腔時(shí)結(jié)束。5)通過(guò)Northern印跡分析淀粉合酶II的表達(dá)水平通過(guò)Northern印跡分析稻內(nèi)來(lái)自小麥的淀粉合酶II的表達(dá)。為此目的，對(duì)于每種獨(dú)立轉(zhuǎn)基因事件，研究三粒未成熟的稻粒(開(kāi)花后約15日)。通過(guò)勻漿方式，將冷凍的稻粒在Retsch磨粉機(jī)(型號(hào)MM300)內(nèi)在具有4.5mm鋼球的96孔平板內(nèi)以頻率30赫茲振搖30秒。此后，通過(guò)96孔規(guī)模的PromegaRNA提取試劑盒，按制造商說(shuō)明分離RNA(SV96總RNA分離系統(tǒng)，定貨號(hào)Z3505,Promega，Mannheim)。每樣品2pgRNA形成相同體積并用相等體積的RNA樣品緩沖液(65Y。(v/v)甲酰胺、8%曱醛、13。/。(v/v)凝膠緩沖液(見(jiàn)上文)、50Pg/ml溴化乙咬)處理。加熱(10分鐘，65'C)并立即在冰上冷卻后，使用RNA運(yùn)行緩沖液(20mMMOPSpH8.0、5mM乙酸鈉、lmMEDTA),使RNA在恒定電流50-80mA在1.2。/。濃度(w/v)瓊脂糖凝膠(20mMMOPSpH8.0、5mM乙酸鈉、1mMEDTA、6%~)甲醛)上分離2小時(shí)。此后，將RNA使用10xSSC(1.5MNaCl，150mM種檬酸鈉pH7.0)通過(guò)擴(kuò)散印跡法轉(zhuǎn)移至HybondN膜上并通過(guò)紫外線照射固定在該膜上。質(zhì)粒AH32-191(Bp4568-5686)內(nèi)構(gòu)成SSIIcDNA的5'區(qū)域的約lkbSpel/BspHI片段用于雜交Northern印跡膜。該DNA片段借助來(lái)自Roche的隨機(jī)引發(fā)DNA標(biāo)記試劑盒(訂貨編號(hào)1004760),使用32P-oc-dCTP,根據(jù)制造商說(shuō)明進(jìn)行放射標(biāo)記。在添加放射標(biāo)記的DNA用于雜交之前，將Northern印跡膜在水浴內(nèi)與雜交緩沖液(250mM磷酸鈉緩沖液pH7.2、1mMEDTA、6%(w/v)SDS、l%(w/v)BSA)在60X:預(yù)溫育4小時(shí)，溫和振搖。在溫育16小時(shí)后，移走雜交溶液，并將膜在水浴內(nèi)依次與3xSSC和2xSSC(見(jiàn)上文)在60。C洗滌并溫和振搖，以除去非特異性結(jié)合的DNA分子。為檢測(cè)標(biāo)記的RNA，將膜在X射線膠片上在-70C放射自顯影1至3曰。6)通過(guò)活性凝膠法測(cè)定SSII活性不成熟稻粒內(nèi)的不同淀粉合酶活性通過(guò)活性凝膠(酶鐠)法檢測(cè)，其中蛋白質(zhì)提取物在聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)于天然條件下分離并隨后與合適的底物溫育。形成的反應(yīng)產(chǎn)物(淀粉)在凝膠內(nèi)通過(guò)Lugol's溶液(2。/。(w/v)KI;0.2。/。(w/v)l2)染色。單個(gè)不成熟的稻粒(開(kāi)花后約15日，從開(kāi)花期開(kāi)始日起測(cè)量)在液氮內(nèi)速凍并在150-200jul冷的提取緩沖液(50mMTris/HClpH7.6、2.5mMEDTA、2mMDTT、4mMPMSF、0.1%(\￥)糖原、10。/0(v/v)甘油)內(nèi)勻漿。在離心(15分鐘，13000g,4'C)后，將清亮的上清液轉(zhuǎn)移至新鮮反應(yīng)容器內(nèi)并將一個(gè)等分試樣的提取液用于通過(guò)Bradford的方法(1976，AnalBiochem72:248-254)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。蛋白質(zhì)提取物通過(guò)7.5%濃度的連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠(7.5%AA/BAA37.5:1;25mMTris/HClpH7.6、192mM甘氨酸、0.1%(w/v)APS、0.05%(v/v)TEMED)，使用工作濃度的運(yùn)行緩沖液(25mMTris/HCl、192mM甘氨酸)加以分離。凝膠在上樣前，在8mA并在4'C實(shí)施預(yù)電泳30分鐘以便除去游離基。對(duì)每個(gè)樣品，施加15pg蛋白質(zhì)并在4。C電泳2-2.5小時(shí)。此后，凝膠在室溫在15ml溫育緩沖液(0.5M檸檬酸鈉pH7.0、25mM乙酸鉀、2mMEDTA、2mMDTT、0.1。/。(w/v)支鏈淀粉、50mM三(羥甲基)甲基甘氨^/NaOHpH8.5、1mMADP-葡萄糖)內(nèi)溫育過(guò)夜并持續(xù)振搖。形成的淀粉借助Lugol，s溶液染色。為通過(guò)酶?jìng)鞣y(cè)定SSII活性增加的程度，將遺傳修飾的抹系的蛋白質(zhì)提取物進(jìn)行逐步稀釋并根據(jù)以上所述方法使用。用Lugol's溶液染色酶語(yǔ)后，活性增加的程度通過(guò)目視比較不同稀釋物與未稀釋野生型的SSII帶的密度而確定。7)從米粉中提取稻淀粉從米粉中提取稻淀粉由類(lèi)似于Wang和Wang(2004;JournalofCerealScience39:291-296)所述的方法實(shí)施。10g米粉與40ml0.05%(w/v)NaOH在振蕩器上室溫溫育16-18小時(shí)。此后，將混懸液轉(zhuǎn)移至Warring攪拌器以完成消化，并低速混合15秒然后高速45秒。為除去較粗糙的成分(例如細(xì)胞壁)，使混懸液通過(guò)125|um篩目的篩子和隨后通過(guò)63jnm篩目的篩子。在1500轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘后(Microfuge3,OR;Heraeus)，傾析上清液并使用伊子移走位于沉淀表面的蛋白質(zhì)層。沉淀的剩余部分在0.05。/。(w/v)NaOH內(nèi)重懸，并且重復(fù)上文所述方法。此后，沉淀重懸于水中，并且4吏用HCl調(diào)整混懸液的pH至6.5-7。用水(總共3次)洗滌獲得的稻淀粉，每個(gè)洗滌步驟包含離心沉淀(1500轉(zhuǎn)/分鐘，15分鐘，室溫)、棄去上清液并重懸于新鮮水內(nèi)。在最后洗滌步驟之前，再次檢查pH并根據(jù)需要用HCl調(diào)整至pH7。將最后洗滌步驟后的稻淀粉沉淀重懸于丙酮內(nèi)并進(jìn)行離心沉淀，并且棄去上清液。在將沉淀再次重懸于丙酮內(nèi)后，將混懸液傾入培一并在通風(fēng)拒內(nèi)室溫干燥至少18小時(shí)。在最后步驟中，在研缽內(nèi)研磨稻淀粉以產(chǎn)生直接用于全部后續(xù)分析的精細(xì)粉末。8)加工米粉/淀粉用于通過(guò)高壓陰離子交換色鐠而研究支鏈淀粉側(cè)鏈分布對(duì)于每種樣品，將10mg米粉或稻淀粉在2mlEppendorf杯內(nèi)稱(chēng)重并用250in190%(v/v)DMSO處理。樣品在60。C振搖溶解后，添加375jn1水并將混合物在95C溫育1小時(shí)。300iu1的16.7mM乙酸鈉，pH3.5和0.5U來(lái)自假單胞菌(Pseudomonassp.)的異淀粉酶(Megazyme;Bray，愛(ài)爾蘭)添加至200jnl反應(yīng)混合物內(nèi)。在37"C溫育24小時(shí)后，再添加0.5U異淀粉酶，并且再繼續(xù)溫育24小時(shí)。對(duì)于色鐠，將100ji1反應(yīng)混合物用水1:5稀釋并隨后經(jīng)Ultrafree-MC濾管(Millipore)過(guò)濾。注射約90ja1的濾液。色譜方法HPLC系統(tǒng)GP50Dionex梯度泵ED50Dionex電化學(xué)檢測(cè)器/PADAS50自動(dòng)進(jìn)樣器柱溫箱柱DionexCarboPacPA1004x250mm(P/N046110),具有保護(hù)柱PA1004x50mm(P/N046115)設(shè)備設(shè)置<image>imageseeoriginaldocumentpage30</image>HPAEC程序壓力.4氐限=so壓力.高限=3500%A.Equate-"NaOH0.15M"%B.Equate="醋酸鈉1.0M"%C.Equate="在NaOH0.15M內(nèi)的酸酸鈉1.0M%D.Equate-"Millipore水"ECD.數(shù)據(jù)收集速率=1.0波形時(shí)間=0.00,電位=0.05波形時(shí)間=0.20,電位=0.05，積分=開(kāi)始波形時(shí)間=0.40，電位=0.05,積分-結(jié)束波形時(shí)間=0.41,電位-0.75波形時(shí)間=0.60,電位=0.75波形時(shí)間=0.61,電位=-0.15波形時(shí)間=1.00'電位=-0.15池=開(kāi)洗液體積=500等待沖洗狀態(tài)針高度=2CutSegmentVolume=10注射速度=4循環(huán)=0等待溫度=否等待樣品準(zhǔn)備完畢0.000流速=1.00%B=0.0%C=0.0%D=0.0曲線=5上栽進(jìn)樣等待ECD自動(dòng)為零ECD_1.AcqOn流速=1.00%B=0.0%C=0.0%D=0.0曲線=5132.000=1.00%B=11.00.0%D=0.0曲線5流速=1.00%B=".0%C=0.0%D=曲線0,041.00%B=35.0%C=0.0%D=0.0曲線=4流速=1.00%B=0,0%C=■0%D=0.0曲線=5133.000流速=1.00%B-0.0%C=100.0%D=0.0曲線=5142.000流速=1.00%B=0.0%C=0.0%D=0.0曲線=5143.000流速=1.00%B=0,0%C=0.0%D=95.0曲線=5152.000流速=1.00%B=0.0%C=0.0%D=95.0曲線=5ECDJ.AcqOff結(jié)束數(shù)據(jù)評(píng)4古4吏用DionexChromeleonv6.60(DionexCorporation,Sunnyvale,California,USA)執(zhí)行。"2004年3月的6.60版"指導(dǎo)及用戶(hù)手冊(cè)，，可以從Dionex獲得或從主頁(yè)(http:〃www.dionex.com)下載。為了相互比較圖傳，將已鑒定的不同麥芽M的峰對(duì)每一圖i普進(jìn)行均值歸一化(全部峰面積的總和-l)。評(píng)估基于如DionexChromeleonv.6.60內(nèi)所述用于"對(duì)數(shù)基線"的"力共同基線"。為如此評(píng)估，將對(duì)數(shù)基線緊挨第一側(cè)鏈峰之前并直達(dá)測(cè)量路徑的最短圖語(yǔ)的最末可估值峰放置；這形成用于對(duì)全部圖i普計(jì)算最末可估值峰的格式。9)測(cè)定已烹煮米粒的烹煮特征和質(zhì)構(gòu)使用已經(jīng)如在4)"米粒的加工，，下所述加工的精制米粒以便測(cè)定烹煮特征。在烹煮之前，測(cè)定米粒尺度和粒重。烹煮以20:1的水-米比率進(jìn)行。將水煮至沸騰，加入米，并減少熱輸入量以至于水輕微沸騰(在此期間，每隔3分鐘攪動(dòng)米)。最短烹煮時(shí)間通過(guò)如Juliano(1984;J.ofTex.Studies15:357-376)所述的玻璃板試驗(yàn)測(cè)定。為了測(cè)定，在每一例子中，將10粒米以l分鐘間隔夾在兩片玻璃板之間。在90%的米粒不再顯示白色中心的時(shí)間點(diǎn)上達(dá)到最短烹煮時(shí)間。通過(guò)再延長(zhǎng)烹煮過(guò)程2分鐘而達(dá)到最佳烹煮時(shí)間。米粒通過(guò)篩子得到粗濾并在室溫冷卻。此后，再次測(cè)定已烹煮米粒的米粒尺度及重量。用新烹煮的米粒(烹煮后約1小時(shí))，在已于4X:貯藏22小時(shí)并隨后再加熱至室溫的米粒，或在4。C貯藏(22小時(shí))并隨后使用烤箱或微波爐再加熱的米粒上測(cè)定質(zhì)構(gòu)。為在烤箱內(nèi)再加熱烹煮的米粒，將烹煮的米粒》文入已經(jīng)用鋁箔密封的鋁盤(pán)內(nèi)以避免水分喪失。鋁盤(pán)在烤箱內(nèi)在80。C溫育20分鐘。米粒在微波爐內(nèi)的再加熱于合適的微波爐容器內(nèi)在360瓦上實(shí)施3分鐘。在兩種再加熱過(guò)程后，將米粒在室溫貯藏30分鐘以確保測(cè)量期間米粒的均一溫度。使用直徑2.5cm的圓環(huán)狀探頭的質(zhì)構(gòu)儀TAXT2(StableMicroSystems,Godalming，UK)和(從Champagne等(1998)CerealChem.75(2):181-186中改良)雙壓縮試驗(yàn)作為測(cè)量方法，測(cè)量來(lái)自以上所述實(shí)驗(yàn)中的已烹煮稻米的質(zhì)構(gòu)。為了測(cè)量，稻米在第一輪中被壓縮，隨后解壓縮并再次壓縮，連續(xù)記錄米粒施加至探頭的力(壓力或拉力)。在每一例子中待分析的每種樣品在3粒米上測(cè)量10次，米粒以如此方式放在纟笨頭下以至于米粒既不相互接觸，也不超過(guò)探頭的邊緣。記錄的參數(shù)是已烹煮米粒的硬度(H)(在第一壓縮步驟期間的最大力)和粘度(-H)(在第一壓縮步驟期間的最小力)，見(jiàn)圖2。單獨(dú)評(píng)估一個(gè)樣品的全部量值并隨后建立所討論參數(shù)的平均值。10)測(cè)量因烹煮所致的米粒尺度的變化使用來(lái)自Systat(Erkrath，德國(guó))的軟件"SigmaScanPro"版本5.0.0測(cè)量米粒尺度(長(zhǎng)度、寬度和面積)。為了測(cè)量，在每一例子中，掃描30顆(未烹煮和烹煮的)米并且形成的圖像通過(guò)該軟件評(píng)估。記錄或計(jì)算如下參數(shù)U-未烹煮米的粒長(zhǎng)Wu-未烹煮米的粒寬Lc-烹煮米的粒長(zhǎng)We烹煮米的粒寬L/W比-Lu/Wu或L/WcER-延伸率=LCLUCDC-尺度變化系數(shù)=(LC-LU)/(WC-WU)11)通過(guò)差示掃描量熱法(-DSC)對(duì)米粉/淀粉的熱分析約10mg(干重)的米粉或稻淀粉在不銹鋼盤(pán)(PerkinElmer，"大體積不銹鋼盤(pán)"=100x釋放的葡萄糖(mg)/淀粉干重(mg)實(shí)施例實(shí)施例1:IIa用于在稻內(nèi)表達(dá)小麥淀粉合酶Il的載體使用稻轉(zhuǎn)化載體IR103-123(在WO05/030941內(nèi)描述)和質(zhì)粒CF31-191(在WO97/45545內(nèi)以pTaSSl名稱(chēng)描述)。稻轉(zhuǎn)化載體IR103-123的作用是通過(guò)來(lái)自稻的球蛋白啟動(dòng)子使靶基因胚乳特異性表達(dá)。在第一步驟a)中，載體IR103-123用限制酶EcoRV和Xhol進(jìn)行線性化。質(zhì)粒CF31-191含有來(lái)自普通小麥的淀粉合酶II(SSII)的cDNA。在第二步驟a)中，使用限制酶Ecll36H和Xhol從質(zhì)粒CF31-191中切下SSII的cDNA。連接在步驟a)內(nèi)已線性化的載體IR103-123與在步驟a)內(nèi)獲得的質(zhì)粒CF31-191的片段，產(chǎn)生載體AH32-191。實(shí)施例2:產(chǎn)生具有增加的SSII活性的遺傳修飾的稻植物為產(chǎn)生具有增加的SSII活性(SSII)的遺傳修飾的稻植物，質(zhì)粒AH32-191的T國(guó)DNA如Ishida所述(1996，NatureBiotechnology14(6):745-750)通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)移至稻植物內(nèi)。SSII活性增加通過(guò)酶i脊法測(cè)定。圖l顯示與野生型相比，三種用于測(cè)定SSII活性的遺傳1務(wù)飾的稻品系的酶鐠。所用的材料是從野生型和相應(yīng)遺傳修飾系的不成熟谷粒(開(kāi)始開(kāi)花后15日)中提取的量相同的總蛋白質(zhì)。將來(lái)自遺傳修飾系的蛋白質(zhì)提取物逐步稀釋?zhuān)⑶一钚栽黾拥某潭韧ㄟ^(guò)目視比較這些泳道內(nèi)與野生型泳道內(nèi)SSII帶的密度而確定。系GAOS0353-01502的SSII活性高達(dá)野生型的谷粒內(nèi)SSII活性的10倍，而系GAOS0353-01301的SSII活性高達(dá)野生型的谷粒內(nèi)SSII活性的6倍并且系GAOS0353-02301的SSII活性高達(dá)野生型的谷粒內(nèi)SSII活性的2倍。實(shí)施例3:來(lái)自具有不同SSII活性水平的不同轉(zhuǎn)基因系的稻淀粉的特征稻粒從如實(shí)施例2內(nèi)所產(chǎn)生的植物內(nèi)收獲并隨后通過(guò)上述方法("4)加工稻粒")加工以產(chǎn)生米粉。米粉內(nèi)的淀粉成分隨后通過(guò)上述方法("7)測(cè)定C6位置上磷酸鹽含量(C6-P含量)")對(duì)C6位置上的磷酸鹽含量進(jìn)行分析。表1:<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表1:與野生型(wt)相比，SSII活性增加的稻淀粉的特征。所示數(shù)據(jù)顯示SSII活性(作為野生型的倍數(shù))和淀粉結(jié)合性葡萄糖-6-磷酸(C-6-P)的含量?？梢钥吹降矸酆厦窱I的活性水平與C6位置上的磷酸鹽含量相關(guān)。系GAOS0353-01301的SSII表達(dá)表達(dá)增加6倍，而C-6-P含量與野生型相比幾乎加倍。最明顯的效應(yīng)由系GAOS0353-02501顯示，它的SSII表達(dá)增加10倍，而C-6-P含量與野生型(100。/。)相比增加超過(guò)350。/0。實(shí)施例4:具有不同SSII表達(dá)水平的不同遺傳修飾系的稻粒、稻淀粉和米粉的特性列表表2:與野生型相比，來(lái)自具有改良SSII表達(dá)的稻粒內(nèi)稻淀粉的特性:<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>-01301GAOS0353-015021012-316-101.8077.682.5121119給出的數(shù)據(jù)是不成熟稻粒內(nèi)的SSII活性(作為野生型的倍數(shù))、顯現(xiàn)超過(guò)野生型的改性淀粉內(nèi)的支鏈淀粉側(cè)鏈淀粉的范圍(AP-SC)、磷酸鹽含量(C6P)和以。C和。/。為單位的稻淀粉DSC值(與野生型相比)。(n.d.=未檢測(cè))。與野生型相比，作為SSII活性水平函數(shù)的來(lái)自遺傳修飾系的淀粉的C6位置礴酸鹽含量顯著增加。表3:與野生型相比，來(lái)自具有改良SSII表達(dá)的稻粒中的米粉的特性<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>給出的數(shù)據(jù)是不成熟稻粒內(nèi)的SSII表達(dá)(作為野生型的倍數(shù))、以'c和以野生型百分?jǐn)?shù)(％)為單位的米粉DSC值的變化。遺傳修飾系的^J^見(jiàn)直鏈淀粉含量?jī)H顯示輕微的改變；它們均比野生型的表觀直鏈淀粉含量略低。作為SSII活性函數(shù)的米粉的熱穩(wěn)定性和從米粉中分離的淀粉的熱穩(wěn)定性在不同遺傳修飾系內(nèi)逐漸增加(比較圖1和表l和2)。SSII活性增加IO倍的系顯示最大程度的DSCT-起始和DSCT-峰值增加。以野生型為基礎(chǔ)，數(shù)據(jù)在每種情況下是約120%。實(shí)施例5:與野生型(WT)相比，不同遺傳修飾的稻系在活性水平和支鏈淀粉側(cè)鏈方面的比較。表4顯示與野生型相比的不同遺傳修飾的稻的支鏈淀粉側(cè)鏈分布。所示的曲線是已分析葡聚糖的鏈長(zhǎng)度(單位DP-聚合程度)對(duì)全部已測(cè)試DP總數(shù)內(nèi)特定DP的百分?jǐn)?shù)作圖的結(jié)果。表4:與野生型(WT)米粉相比，遺傳修飾系的支鏈淀粉的側(cè)鏈曲線分布，以不同聚合程度分成四組。聚合程度(dp)%基于野生型米粉GAOS0353-2301GAOS0253-1301GAOS0253-1502dp6-1081.466.347.0dp20-25108.7115.7123.8可以看到增加SSII活性伴隨著支鏈淀粉側(cè)鏈分布上不相關(guān)聯(lián)的變化。SSII活性的增加導(dǎo)致DP6-10之間的側(cè)鏈逐步不同程度地減少以及DP20-25的側(cè)鏈增加。實(shí)施例6:已烹煮米粒的質(zhì)構(gòu)不同遺傳修飾系的米粒和相對(duì)應(yīng)野生型的米粒烹煮持續(xù)至多到所討論的最佳烹煮時(shí)間(見(jiàn)方法"測(cè)定已烹煮米粒的特征")。質(zhì)構(gòu)在烹煮后已于4'C貯藏22小時(shí)(表5a,所示數(shù)據(jù)是每份樣品10個(gè)量值(在每種情況下3粒米)的平均值)的米粒上或在新鮮烹煮的米粒(烹煮后約l小時(shí))上或已經(jīng)在冷卻下貯藏(4"C,22小時(shí))并隨后在烤箱或微波爐內(nèi)再加熱的米粒(表5b)上進(jìn)行測(cè)定。表5a:烹煮后4匸貯藏22小時(shí)的米粒的質(zhì)構(gòu)樣品力2(單位為g的粘度)力l(單位為g的米粒硬度)平均野生型M202-239.51164.6平均GAOS0353-02301-137.01393.0平均GAOS0353-01301-82.01775.4平均GAOS0353-01502-18.31735.3已烹煮米粒的粘度隨著SSII活性的增加而下降(表5a)。在GAOS0353-02301系內(nèi)粘度減少約一半，在GAOS0353-01301系內(nèi)粘度減少約3倍，并且在GAOS0353-01502系內(nèi)粘度減少約13倍。表5b:新鮮烹煮或再加熱的米粒的質(zhì)構(gòu)試驗(yàn)米粒的加工樣品粘度(g)粘度(％)新鮮烹煮野生型M202-235.8100.0GAOS0353-01502-121.451.5烤箱內(nèi)再加熱80。C/5分鐘野生型M202-230.5風(fēng)0GAOS0353-01502-95.041.2微波爐內(nèi)再加熱600W/3分鐘野生型M202-182.2100.0GAOS0353-01502-85.346.8匯總在烹煮及(4。C貯藏22小時(shí)后)在烤箱或孩支波爐內(nèi)再加熱之后測(cè)定已烹煮米粒的粘度的數(shù)據(jù)。在每種加工變例中，GAOS0353-01502的粘度明顯低于野生型的粘度。實(shí)施例7:測(cè)定未烹煮米粒和已烹煮米粒的米粒尺度遺傳〗奮飾系和相對(duì)應(yīng)野生型的未烹煮米粒和已烹煮米粒的米粒尺度使用SigmScan軟件測(cè)定。結(jié)果和從所述結(jié)果中衍生的參數(shù)示于表6a和6b內(nèi)。表6a:測(cè)定未烹煮米粒和已烹煮米粒的米粒尺度的數(shù)據(jù)匯總野生型GAOS0353曙GAOS0353-GAOS0353-<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>所示數(shù)據(jù)是30個(gè)獨(dú)立量值的平均值(L-粒長(zhǎng)；W-粒寬；u-未烹煮;c-烹煮；ER-延伸率(Lc/Lu):CDC=尺度變化系數(shù)(1^/1^)/(\\^/\￥11))。表6b:與野生型相比的米粒尺度的相對(duì)變化<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>全部數(shù)據(jù)均為百分?jǐn)?shù)％變化=(樣品-野生型)/野生型*100)。在已烹煮米粒的米粒尺度方面，稻內(nèi)增加的SSII活性導(dǎo)致米粒在烹煮期間沿縱軸顯著較高地延伸。從增加的延伸率(ER)和增加的長(zhǎng)度/寬度比(Lc/Wc)中，這是顯而易見(jiàn)的?；钚栽黾?倍的系(GAOS0353-02301)在上述參數(shù)上再次顯示較少程度的變化，而SSII活性增加6倍(GAOS0353-01301)或10倍(GAOS0353-01502)的系具有更明顯的表現(xiàn)。實(shí)施例8:通過(guò)快速粘度分析儀(RVA)分析米粉的物理化學(xué)特征如方法"通過(guò)RVA分析米粉"內(nèi)所述，對(duì)來(lái)自不同遺傳修飾系的米粉和來(lái)自相應(yīng)野生型的米粉分析它們的物理化學(xué)特征。在定義的溫度和剪切程序內(nèi)記錄米粉/水混懸液的粘度。不同系的曲線和分析數(shù)據(jù)在表7a+b內(nèi)顯示。表7a:在測(cè)定米粉的粘度特征中所得數(shù)據(jù)的匯總，其中所述的米粉由來(lái)自具有不同SSII活性的稻粒制成。<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>表7b:與野生型相比的RVA的相對(duì)變化<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>(全部數(shù)據(jù)均為百分?jǐn)?shù))％變化=(樣品-野生型)/野生型*100來(lái)自野生型和遺傳修飾系的米粉的粘度曲線在多個(gè)參數(shù)上不同。遺傳修飾的樣品在明顯較晚的時(shí)間點(diǎn)上開(kāi)始成糊，這可以從增加的"成糊溫度"中看出。隨后粘度發(fā)展進(jìn)行得非常迅速直至峰值粘度，如可以從遺傳修飾的樣品的較短"峰值時(shí)間"中看出。全部其它粘度參數(shù)(峰值、低谷、終點(diǎn))在遺傳修飾的樣品的例子中比野生型的例子內(nèi)低。必須提到的是超過(guò)野生型的變化的程度與ssn活性的水平相關(guān)。具有最高ssn活性的系(GAOS0353-1502)顯示最低的峰粘度、低谷粘度和終粘度，具有超過(guò)10'C的值，這是成糊溫度上的最高差異。另一個(gè)非常明顯的方面是遺傳修飾的樣品的粘度快速發(fā)展，這在成糊起始時(shí)間與峰值粘度時(shí)間間極其短暫的間隔上反映。這個(gè)參數(shù)再次顯示對(duì)SSII活性增加程度影響的明顯依賴(lài)性。實(shí)施例9:分離的淀粉的可消化性與野生型相比，轉(zhuǎn)化體GAOS353-2501和GAOS353-1301的淀粉顯示明顯減少的可消化性。相對(duì)于野生型，在轉(zhuǎn)化體GAOS353-1301的例子中分離的淀粉的酶降解在20分鐘后是53%,在60分鐘后是67%并且在120分鐘后是84%。相對(duì)于野生型，在轉(zhuǎn)化體GAOS353-2501的例子中分離的淀粉的酶降解在20分鐘后是39%，在60分鐘后是49%并且在120分鐘后是68%(圖3)。表8:稻淀粉的RS含量<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>權(quán)利要求1.一種用于與來(lái)自相應(yīng)未遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞的淀粉(100％)相比，增加遺傳修飾的植物細(xì)胞的淀粉磷酸鹽含量至150至500％的方法，其中a)植物細(xì)胞通過(guò)導(dǎo)入編碼可溶性淀粉合酶II的外來(lái)核酸分子而受到遺傳修飾，并且b)這種可溶性淀粉合酶II得到過(guò)量表達(dá)。2.權(quán)利要求1所述的方法，其中外來(lái)核酸分子是異源可溶性淀粉合酶II的編碼區(qū)。3.權(quán)利要求l所述的方法，其中可溶性淀粉合酶II是來(lái)自單子葉植物的可溶性淀粉合酶II。4.權(quán)利要求l所述的方法，其中可溶性淀粉合酶II是來(lái)自小麥的可溶性淀粉合酶II。5.權(quán)利要求1所述的方法，其中可溶性淀粉合酶II具有SEQIDNo.l內(nèi)所示的核苷酸序列。6.權(quán)利要求1至5中任意項(xiàng)所述的方法，其中遺傳修飾的植物細(xì)胞是馬鈴薯植物細(xì)胞、玉米植物細(xì)胞或稻植物細(xì)胞。7.—種稻淀粉，具有在70。C和80。C之間的DSCT-起始溫度。8.權(quán)利要求7所述的稻淀粉，其中DSCT-起始溫度在72。C和79。C之間。9.衍生的稻淀粉，包含權(quán)利要求7或8所述的稻淀粉。10.—種組合物，包含權(quán)利要求7至9所述的稻淀粉。11.一種米粉，包含權(quán)利要求7或8所述的稻淀粉。12.—種組合物，包含權(quán)利要求10所述的米粉。13.—種稻粒，包含權(quán)利要求7或8所述的稻淀粉。14.一種組合物，包含至少一種權(quán)利要求13所述的稻粒。15.—種稻植物，其長(zhǎng)有至少一種權(quán)利要求13所述的稻粒和/或包含權(quán)利要求7或8所述的稻淀粉。全文摘要本發(fā)明涉及與來(lái)自相應(yīng)未遺傳修飾的野生型植物細(xì)胞的淀粉相比，用于通過(guò)導(dǎo)入編碼可溶性淀粉合酶II的外來(lái)核酸分子而增加遺傳修飾的植物細(xì)胞內(nèi)淀粉的磷酸鹽含量的方法。本發(fā)明還涉及這種淀粉合酶II在遺傳修飾的植物細(xì)胞內(nèi)的過(guò)量表達(dá)。此外，本發(fā)明涉及具有改良質(zhì)量特性的稻淀粉和米粉，涉及包含這種稻淀粉的稻粒和在其上長(zhǎng)有這些稻粒的稻植物。文檔編號(hào)C12N15/82GK101228280SQ200680026762公開(kāi)日2008年7月23日申請(qǐng)日期2006年7月24日優(yōu)先權(quán)日2005年7月22日發(fā)明者C·弗羅貝格,R·C·施密特申請(qǐng)人:拜爾作物科學(xué)股份公司