專利名稱：：刺激腸內(nèi)菌群的方法刺激腸內(nèi)菌群的方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及喂養(yǎng)的方法及對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒施用的組合物。發(fā)明背景當(dāng)為嬰兒配制營養(yǎng)品時(shí)，使用母乳作為金標(biāo)準(zhǔn)。通常組合成分尤其是非人類來源的成分來模擬人母乳的組成特征和生理效應(yīng)。人乳的一個重要方面是它向嬰兒提供能量和液體。除了提供能量，人母乳包含許多額外的組分，其旨在維持所述嬰兒的健康。人母乳例如含有益生纖維，該益生纖維刺激健康的腸內(nèi)菌群的發(fā)展。健康的腸內(nèi)菌群對所述嬰兒有許多積極影響，例如減少受感染的幾率并增強(qiáng)免疫系統(tǒng)。幾種市售嬰兒奶粉配方含有旨在刺激腸內(nèi)菌群發(fā)展的成分。嬰兒配方例如可含有益生纖維或活益生生物。所述益生纖維通過上部胃腸道時(shí)通常未經(jīng)消化并選擇性刺激結(jié)腸內(nèi)有益細(xì)菌的生長。活益生生物增加腸內(nèi)特定細(xì)菌的數(shù)目。EP1105002描述了含有一種或多種可溶性寡糖和一種或多種可溶性多糖的益生碳水化合物混合物，其中每種的至少80wt.%為益生的。WO2005039319描述了為非母乳喂養(yǎng)或部分母乳喂養(yǎng)的嬰兒制備的含有短雙歧桿菌(B,y^fo^i"en'w附6"ve)和不可消化的碳水化合物混合物的制劑及其在非母乳喂養(yǎng)或部分母乳喂養(yǎng)的嬰兒中治療或預(yù)防免疫紊亂的用途。發(fā)明概述通常設(shè)計(jì)嬰兒配方來模擬接受人母乳的嬰兒腸內(nèi)菌群的發(fā)展，這暗示所有嬰兒對人母乳和嬰兒配方作出相似的反應(yīng)。然而，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)嬰兒的一個亞群體，即那些經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒，因?yàn)樗麄兂錾鷷r(shí)腸內(nèi)菌群完全不同于經(jīng)陰道出生的嬰兒的腸內(nèi)菌群，所以將會作出不同反應(yīng)。尤其是，經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒的雙歧桿菌種的分布型和含量不同于經(jīng)陰道途徑分娩的嬰兒的雙歧桿菌種的腸內(nèi)分布型和含量。內(nèi)菌群。驚奇地發(fā)現(xiàn)兩組新生兒在所述腸內(nèi)菌群組成上存在巨大差異。尤其是經(jīng)陰道途徑出生的嬰兒含有至少3種不同的雙歧桿菌種，而經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒缺少最重要的雙歧桿菌種。也發(fā)現(xiàn)經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒尤其缺少短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌(5《yrfo6tfCeWf/附,Vi/"w,/s)、兩歧雙歧桿菌(jBfyflfo6acfeWw附6《y7fifw附)、鏈狀雙歧桿菌(^,yMo6""en"附cafe"w/ff似附)、青春雙歧桿菌(^iyfifo6ffcteW"附fl^to/esrewris)和長雙歧桿菌(5/yflfo6ficten.M附/owgw附)。這些種存在于經(jīng)陰道途徑出生的絕大多數(shù)嬰兒的菌群中。因?yàn)樗瞿c內(nèi)菌群在嬰兒發(fā)育過程中，尤其是在刺激免疫系統(tǒng)和抵御感染中起至關(guān)重要的作用，所以刺激經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒腸內(nèi)菌群的健康發(fā)展是最重要的。此外，經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的新生兒腸內(nèi)菌群缺少生物多樣性。在經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒中只檢測到一種或兩種不同種的雙歧桿菌，而經(jīng)陰道途徑分娩的新生兒其腸內(nèi)菌群通常含有若千不同種的雙歧桿菌。本發(fā)明人樣性。所述生物多樣性對實(shí)現(xiàn)預(yù)期的生理效應(yīng)是非常重要的，并最適宜于刺激所述嬰兒的健康。Natren⑧生產(chǎn)專為嬰兒設(shè)計(jì)的益生產(chǎn)品LifeStart⑧并適用于經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒。LifeStart⑧由嬰兒雙歧桿菌制成。因?yàn)樗鯨ifeStart產(chǎn)品含有僅一種雙歧桿菌種，所以它對嬰兒的益處將非常有限。尤其預(yù)料不到的還有即使當(dāng)母乳喂養(yǎng)嬰兒時(shí)也會改善嬰兒的健康的觀察結(jié)果。在經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩嬰兒的情況下，母乳(絕大多數(shù)情況下)是對該嬰兒最好的營養(yǎng)品。然而，所述母乳同樣不能同時(shí)導(dǎo)致如在經(jīng)陰道分娩出生的嬰兒中獲得的相似的菌群。因此當(dāng)嬰兒接受人母乳時(shí)也可有利地使用本方法。因此，本發(fā)明尤其旨在a)增加經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒腸內(nèi)菌群的特定物種的發(fā)生；b)增加腸內(nèi)菌群的微生物的生物多樣性；和/或c)刺激有益微生物，尤其是雙歧桿菌的生長。因此，一方面本發(fā)明提供通過施用組合物刺激經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒腸內(nèi)菌群健康發(fā)展的方法，其中所施用的組合物含有-至少兩種不同的微生物；或-至少一種孩i生物和至少一種不消化的寡糖；或-至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林。所述^:生物將增加?jì)雰壕旱纳锒鄻有裕霾幌墓烟谴碳す逃械暮退┯玫奈⑸锏陌l(fā)展和生長。本方法中所施用的組合物優(yōu)選包含多種不同的細(xì)菌種類，優(yōu)選多種雙歧桿菌種。這導(dǎo)致對剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒腸內(nèi)菌群的最佳刺激。優(yōu)選實(shí)施方案詳述本發(fā)明提供喂養(yǎng)嬰兒的方法，所述方法包含對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒經(jīng)腸施用組合物，所述組合物包含a)至少兩種不同的微生物；或b)至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或c)至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林。另一方面，本發(fā)明提供刺激經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒的健康的方法，該方法包含對嬰兒施用并在其出生后100小時(shí)內(nèi)施用含有微生物和/或不消化的寡糖的組合物。另一方面，本發(fā)明提供了制備適合于經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒的嬰兒營養(yǎng)品的方法，該方法包含混合A)人母乳；和B)含有i)至少兩種不同的微生物；或ii)至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或iii)至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林的組合物。另一方面，本發(fā)明提供組合物，該組合物包含至少四種雙歧桿菌種、亞種和/或菌林，其選自短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嗜熱雙歧桿菌(AyMMfl"e〃ww溈c附o/7/i,7w附)、高盧雙歧桿菌(必折^6tfCfeW"附^////CM附)、動物雙歧扦菌(必^^fo6""e〃7l附""/附"/&)、角雙歧桿菌(J《y7flfo6flr"eWw附awgw/","/w)、4叚小鏈雙歧桿菌(丑'y^Atf"m.W附/75^M^C她"w/fl似附)、嗜熱嗜酸雙歧軒菌(說yf/o6acteWn/w^nMfl"V/o/^//Mm)和長雙歧軒菌。本發(fā)明也提供營養(yǎng)組合物，其包含5到25en。/。的蛋白質(zhì)；25到60en%的脂肪；30到70en。/。的碳水化合物；至少兩種不同種的雙歧桿菌和至少一種乳桿菌。本發(fā)明也提供液體體積為0.5到50ml的容器，該容器含有對嬰兒施用的組合物，該組合物包含至少兩種不同的微生物；或至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林。另一方面，本發(fā)明提供刺激嬰兒健康的腸內(nèi)菌群發(fā)展的方法，該方法包括步驟A)混合I)營養(yǎng)或藥學(xué)上可接受的液體；和II)干燥組合物，其中所述干燥組合物II包含至少兩種不同的微生物；或至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌株；及B)對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒施用步驟a)中獲得的組合物。本發(fā)明中使用的組合物優(yōu)選為營養(yǎng)和/或藥物組合物并適合對嬰兒施用。剖腹生產(chǎn)術(shù)物。剖腹生產(chǎn)術(shù)是手術(shù)操作，其中嬰兒通過母親腹壁上的切口，然后通過子宮壁分娩。當(dāng)剖腹生產(chǎn)術(shù)比陰道分娩對母親或嬰兒更安全時(shí)通常實(shí)施剖腹生產(chǎn)術(shù)。其他時(shí)間，女人也可選擇剖腹生產(chǎn)術(shù)而不是陰道分娩她的嬰兒。多樣性本組合物含有至少兩種不同的微生物；或至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林。所述微生物優(yōu)選為細(xì)菌和/或酵母。本發(fā)明中使用的微生物優(yōu)選為益生的，即當(dāng)將其應(yīng)用到人或動物時(shí)，它可通過改善土著菌群的性質(zhì)來對宿主產(chǎn)生有益影響。上述組合通常旨在增加經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒腸內(nèi)的微生物的多樣性和/或數(shù)量。這對所述嬰兒具有有益影響，證明具有大量健康益處。本發(fā)明中使用的術(shù)語"不同的微生物"指屬于不同屬和/或種的微生物。所述不同的微生物優(yōu)選為不同的細(xì)菌。優(yōu)選地，所述不同的微生物為不同種。例如并優(yōu)選地，本組合物包含或由短雙歧桿菌和鏈狀雙歧桿菌組成。此處將短雙歧桿菌和鏈狀雙歧桿菌視為兩種不同的細(xì)菌種類。如果細(xì)菌為不同的亞種，則不認(rèn)為它們是不同的。例如，不認(rèn)為德氏乳桿菌德氏亞種和德氏乳桿菌保加利亞亞種是兩種不同的物種。本組合物含有至少兩種不同的微生物，優(yōu)選至少兩種不同的細(xì)菌種。本組合物優(yōu)選包含至少三種不同的種，更優(yōu)選至少四種不同的種。優(yōu)選地，所用的微生物或細(xì)菌種為益生的。在一個實(shí)施方案中，本組合物含有至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌抹。本組合物優(yōu)選包含至少一種，更優(yōu)選至少兩種，甚至更優(yōu)選至少三種，最優(yōu)選至少四種不同的雙歧桿菌菌株。本組合物優(yōu)選包含至少一種，更優(yōu)選至少兩種，甚至更優(yōu)選至少三種，最優(yōu)選至少四種不同的雙歧桿菌亞種。例如動物雙歧桿菌動物亞種和動物雙歧桿菌亞乳糖亞種為不同的亞種。短雙歧桿菌M16V與短雙歧桿菌R0070為不同的菌林。微生物本組合物優(yōu)選含有至少一種選自乳酸細(xì)菌、芽孢桿菌和酵母的微生物，優(yōu)選至少一種選自肉桿菌屬(CVw7io6tf"e/7'w附)、腸球菌屬(E"te/Ya7ccws)、乳桿菌屬(l""o^c"/附)、乳球菌屬(Z^ctococc附)、明串珠菌屬(丄eWCO"(W似C)、酒王求菌屬(6^/10COCC附)、片J求菌屬(尸^Z/oacc附)、鏈3求菌屬()、四聯(lián)球菌屬(rcrflgewococc附)、漫游球菌屬(F"^co"M;y)和魏斯氏菌屬(『e&se〃fl)和雙歧桿菌屬(^y《fo^"er/fl)的乳酸細(xì)菌。本組合物優(yōu)選含有至少兩種，更優(yōu)選至少三種，最優(yōu)選至少四種不同的孩i生物。本組合物優(yōu)選含有至少一種選自雙歧桿菌屬的種，更優(yōu)選至少兩種，甚至更優(yōu)選至少三種，更優(yōu)選至少四種，最優(yōu)選至少五種選自雙歧桿菌屬的種。雙歧桿菌為革蘭氏陽性、厭氧型棒狀細(xì)菌。當(dāng)與各個雙歧桿菌屬的模式抹比較時(shí)，本雙歧桿菌屬優(yōu)選具有與16SrRNA序列至少95%的同一性，更優(yōu)選具有至少97。/。的同一性，如在關(guān)于本主題的手冊例如Sambrook，J.，F(xiàn)ritsch，E.F.和Maniatis，T.(1989)，分子克隆，實(shí)驗(yàn)室手冊，第二版，冷泉港(N.Y.)實(shí)驗(yàn)室出版中定義。優(yōu)選使用的雙歧桿菌在Scardovi，V,GenusBifidobacterium,p.1418-p.1434.In:Bergey'smanualofsystematicBacteriology.Vol.2.Sneath，P.H.A.，N.S.Mair,M.E.SharpeandJ.G.Holt(ed.)，Baltimore:Williams&Wilkins.1986.635p中也有描述。本組合物優(yōu)選包含至少一種，更優(yōu)選至少兩種，甚至更優(yōu)選至少三種，最優(yōu)選至少四種優(yōu)選選自短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嗜熱雙歧桿菌、高盧雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、角雙歧桿菌、假小鏈雙歧桿菌、嗜熱嗜酸雙歧桿菌和長雙歧桿菌的雙歧桿菌種。更優(yōu)選地本組合物優(yōu)選包含至少一種，更優(yōu)選至少兩種，甚至更優(yōu)選至少三種，最優(yōu)選至少四種優(yōu)選選自短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、青春雙歧桿菌和長雙歧桿菌的雙歧桿菌種。最優(yōu)選地本組合物含有短雙歧桿菌和/或鏈狀雙歧桿菌。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本組合物包含至少一種，更優(yōu)選至少兩種，甚至更優(yōu)選至少三種，最優(yōu)選至少四種雙歧桿菌亞種。在更進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本組合物包含至少一種，更優(yōu)選至少兩種，甚至更優(yōu)選至少三種，最優(yōu)選至少四種雙歧桿菌菌林。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本組合物包含乳酸細(xì)菌，優(yōu)選至少選自乳桿菌、乳球菌和鏈球菌的細(xì)菌。更優(yōu)選地，本組合物包含至少一種選自才直凈勿乳才干菌(Z""o6"c/〃W51/7/""似/7/附)、路氏乳軒菌(1""06"7/附)、約氏乳軒菌(i^"o6""7/ws^/r"5Ym//)、干酷專'L桿菌(/^""oAadZ/wscase/)、鼠李糖乳桿菌(丄fl"o6fl"7/附Wfl附"oms)、嗜酸乳桿菌(jLd"o6鏡7Zns"ciV/o^/ri7ws)、發(fā)酵乳桿菌(Zfl"o6flc,7/附/e/7wew似w)、乳乳桿菌(丄""oAfl"7/"51/a"is)、嗜熱鏈球菌(iS^ptococc"s1,/rer附o/;/t""s)和類干酪乳桿菌(Ltfc似^i"7/附/7rflcaye/)的細(xì)菌。進(jìn)一步增加的生物多樣性將對新生兒的健康有刺激作用。本組合物優(yōu)選含有每克本組合物干重101至1013菌落形成單位(cfu)的微生物，優(yōu)選102至1012，更優(yōu)選103至101()。優(yōu)選地，本組合物含有每克本組合物干重10〗至1013菌落形成單位(cfu)的雙歧桿菌，更優(yōu)選102至1012，最優(yōu)選103至1012。本方法優(yōu)選包含施用的每份含有1(^至1013cfu的微生物，更優(yōu)選102至1011，最優(yōu)選103至101G。本方法優(yōu)選包含施用的每份含有10'至1013cfu的雙歧桿菌，更優(yōu)選102至1012,最優(yōu)選1()S至1011。券^"本發(fā)明中使用的術(shù)語"不消化的寡糖"指寡糖/碳水化合物，其在腸中不能或只能部分通過人類上消化道(小腸和胃)中存在的酸或消化酶被消化，但可通過人類腸內(nèi)菌群發(fā)酵。優(yōu)選地不消化的寡糖具有2到100的聚合度(DP)，優(yōu)選2到50的聚合度。該不消化的寡糖優(yōu)選為益生纖維。術(shù)語"益生纖維"指不消化的纖維，其通過選擇性刺激結(jié)腸內(nèi)一種或有限數(shù)目的細(xì)菌的生長和/或活性對所述宿主產(chǎn)生有益影響。該不消化的寡糖優(yōu)選為可溶性的。當(dāng)提及多糖、纖維或寡糖時(shí)，此處所用的術(shù)語"可溶性的，，指根據(jù)L.Prosky等人，J.Assoc.Off.Anal.Chem.71，1017-1023(1988)描述的方法，該物質(zhì)至少50%為可溶的。本組合物優(yōu)選包含至少一種選自半乳寡糖、不消化糊精、木寡糖、阿拉伯寡糖、葡寡糖、甘露寡糖、異麥芽寡糖和果多糖的寡糖。此處所用的術(shù)語"果多糖"涉及多糖碳水化合物，其包含至少3個p-連接果糖的單元鏈，其DP在3到300之間，優(yōu)選在20到150之間。優(yōu)選使用菊粉。菊粉可以商標(biāo)名"RaftilinHP",(Orafti)獲得。所述果多糖的平均DP優(yōu)選至少為15,更優(yōu)選至少為20或更高，高達(dá)300。菊粉中所述果糖單元通過p(2—l)鍵連接。不消化的多聚糊精指抗消化(麥芽)糊精或抗消化聚葡萄糖，該抗消化(麥芽)糊精或抗消化聚葡萄糖具有10到50,優(yōu)選10到20之間的DP。所述不消化的多聚糊精包含a(1—4)、a(1—6)糖苷鍵及1—2和1—3鍵。不消化的多聚糊精例如在可從MatsutamiInductries商標(biāo)名"Fibersol2⑧"或Danisco商標(biāo)名Litesse⑧下獲得。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)半乳寡糖可有利地用于本組合物，因?yàn)檫@些寡糖在刺激雙歧桿菌生長上尤其有效。因此，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本組合物含有半乳寡糖。此處所用的術(shù)語"半乳寡糖，，指不消化的的糖類，其中至少30%的糖單元為半乳糖單元，優(yōu)選至少50%，更優(yōu)選至少60%。優(yōu)選地，所述半乳寡糖的糖為(5-連接，與在人乳中的情況一樣。本組合物優(yōu)選含有選自反式半乳寡糖、乳-N-四糖(LNT)和乳-N-新四糖(neo-LNT)的半乳寡糖。在尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，本方法包含施用反式半乳寡糖(半乳糖n-葡萄糖；其中n為1到60之間的整數(shù)，即2、3、4、5、6…、59、60;優(yōu)選地n選自2、3、4、5、6、7、8、9或10)。例如在商標(biāo)VivinalTM(BorculoDomoIngredients,荷蘭)下出售反式半乳寡泮唐(TOS)。優(yōu)選地，所述反式半乳寡糖的糖為p-連接。本組合物每100克干重優(yōu)選含有0.5至75克的不消化的可溶寡糖，優(yōu)選0.5到50克。本組合物每100克干重優(yōu)選包含0.1至95克半乳寡糖，優(yōu)選O.l到50克。本方法優(yōu)選包括施用含有0.05到25克的不消化的寡糖，優(yōu)選0.1到5克的一份。本方法優(yōu)選包括施用含有0.05到25克的半乳寡糖，優(yōu)選0.1到5克半乳寡糖的一份。本發(fā)明人也已發(fā)現(xiàn)長鏈的不消化的寡糖和短鏈的不消化的寡糖的混合物協(xié)同刺激健康的腸內(nèi)菌群，尤其是雙歧桿菌的生長。因此本組合物優(yōu)選含有至少兩種具有不同平均聚合度(DP)的寡糖。優(yōu)選地，所述重量比值a.(DP為2到5的不消化的寡糖)(DP為6、7、8和/或9的不消化的寡糖)>1;并且b.(DP為10到60的不消化的寡糖)(DP為6、7、8和/或9的不消化的寡糖)〉1優(yōu)選地，兩個重量比值都大于2，甚至更優(yōu)選大于5。為進(jìn)一步改進(jìn)，所述寡糖優(yōu)選含有相對高含量的短鏈寡糖，因?yàn)檫@些短鏈寡糖可強(qiáng)烈刺激雙歧桿菌的生長。因此，在本組合物中優(yōu)選至少10wt.0/。的寡糖具有2至5的DP(即2、3、4和/或5)并且至少5wt.y。具有10到60的DP。優(yōu)選至少50wt.%，更優(yōu)選至少75wt.M的所述寡糖具有2到9的DP(即2、3、4、5、6、7、8和/或9)。為提高多數(shù)腸內(nèi)生物的生物多樣性并刺激其生長，本組合物優(yōu)選包含兩種具有不同結(jié)構(gòu)的寡糖。本組合物包含至少兩種不同的寡糖，其中所述寡糖的糖單元的同源性低于約卯％，優(yōu)選低于50%，甚至更優(yōu)選低于25%，甚至更優(yōu)選低于5%。本發(fā)明中所用的術(shù)語"同源性"指在不同寡糖中相同糖單元的百分率的累加。例如，寡糖l(OL1)具有果糖-果糖-葡萄糖-半乳糖的結(jié)構(gòu)，因此含有50%的果糖，250/o的半乳糖和25%的葡萄糖。寡糖2(OL2)具有果糖-果糖-葡萄糖的結(jié)構(gòu)，因此含有66%的果糖，33%的葡萄糖。所迷不同的寡糖因此具有75%的同源性(50%果糖+25%的葡萄糖)。本組合物優(yōu)選含有半乳寡糖和果多糖。應(yīng)用本組合物優(yōu)選經(jīng)腸施用，更優(yōu)選口服施用。本組合物因此優(yōu)選為液體。此處所用的術(shù)語"經(jīng)腸的"也包括直腸或肛門給藥。當(dāng)嬰兒接受嬰兒奶粉配方時(shí)，在營養(yǎng)配方中優(yōu)選包括本組合物，其含有微生物及任選地含有至少一種不消化的寡糖。可分別將益生菌和/或益生素加入該嬰兒配方中。當(dāng)新生兒通過導(dǎo)管接受營養(yǎng)品時(shí)，經(jīng)導(dǎo)管施用的營養(yǎng)品中可適當(dāng)包舍所述微生物。刺激多樣性是很重要的，因此本發(fā)明也提供了營養(yǎng)組合物，該營養(yǎng)組合物包含5到25en。/。的蛋白質(zhì)；25到60en0/。的脂肪；30到70en。/。的碳7]C化合物；至少兩種不同種的雙歧桿菌和至少一種乳桿菌。當(dāng)嬰兒接受人母乳時(shí)，本組合物可適當(dāng)?shù)嘏c人母乳混合。本發(fā)明因而也提供制備適合經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒的嬰兒營養(yǎng)品的方法，該方法包括混合A)人母乳；和B)包含(i)至少兩種不同的微生物；或(ii)至少一種微生物和至少一種不消化的的寡糖；或(iii)至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林的組合物。組合物B)的優(yōu)選特征如上文提供。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本組合物以非常小的體積對所述嬰兒施用，例如通過"接種"所述嬰兒。優(yōu)選地，用注射器、移液器或?qū)Ч軐λ鰦雰菏┯帽窘M合物，優(yōu)選在其出生后直接施用。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，經(jīng)直腸或肛門對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的所述嬰兒施用本組合物，該組合物優(yōu)選為栓劑、丸劑或片劑的形式。因此，本發(fā)明也提供適于對年齡低于1歲的嬰兒直腸施用的栓劑、丸劑或片劑，其中所述栓劑、丸劑或片劑含有微生物和/或不消化的寡糖，優(yōu)選地如上文所述的本組合物。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了刺激嬰兒腸內(nèi)菌群的方法，該方法包括對年齡低于3歲的嬰兒直腸施用包含微生物和/或不消化的寡糖的組合物。優(yōu)選地，所述嬰兒年齡低于l歲，更優(yōu)選地低于2周。優(yōu)選地所述嬰兒經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩。優(yōu)選地直腸施用的該組合物包含上述組合物。該方法具有不干擾正常的人乳喂養(yǎng)活動的優(yōu)點(diǎn)并與出生過程中發(fā)生的陰道接種有很高的相似性。本發(fā)明也提供增強(qiáng)經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒的健康的方法，該方法包括對出生后IOO小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選出生后72小時(shí)內(nèi)，最優(yōu)選出生后48小時(shí)內(nèi)的嬰兒施用含有微生物和/或不消化的寡糖的組合物。所述組合物優(yōu)選適于出生后直接施用。因此，在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供含有體積為0.5至50ml的液體組合物的容器，其含有本組合物。所述液體與本微生物，任選地與不消化的寡糖組合，可適用于本方法。優(yōu)選地所述液體具有0.5到25ml的體積。該體積優(yōu)選為小體積，因?yàn)榉駝t它將干擾所述嬰兒的食欲和飲水行為。本發(fā)明類似地包含具有可重構(gòu)的干燥組合物的容器，所述組合物含有本組合物，，其中所述容器具有0.5到50ml的容積。該容器優(yōu)選附帶說明書以用小體積液體，例如水重構(gòu)所述粉末。本發(fā)明因此也提供刺激嬰兒健康的腸內(nèi)菌群發(fā)展的方法，該方法包括步驟A:混合I)尤其是營養(yǎng)或藥學(xué)上可接受的液體；和II)千燥組合物，其中所述干燥組合物II中包含至少兩種不同的微生物；或至少一種微生物和至少一種不消化的的寡糖；或至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林；及步驟B)對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒施用步驟a)中得到的組合物。本組合物優(yōu)選對出生后1年內(nèi)的嬰兒施用，優(yōu)選在其出生后兩周內(nèi)，甚至更優(yōu)選在其出生后一周內(nèi)，最優(yōu)選在其出生后48小時(shí)內(nèi)施用。實(shí)施例實(shí)施例1:陰道分娩出生的嬰兒對比剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩出生的嬰兒腸內(nèi)小型生物群的分子表征在本研究中，通過使用PCR變性梯度凝膠電泳(DGGE)和PCR溫度梯度凝膠電泳(TGGE)研究分娩方式(剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩對陰道分娩)在出生后第三天對腸內(nèi)微生物組成的影響。使用DGGE和TGGE分析以及10種雙歧桿菌種特異性擴(kuò)增。在獲得父母的書面知情同意書后，剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩和陰道分娩后的23個新生兒參與了此項(xiàng)研究。在他們出生后第三天取得其糞便樣品。提取微生物DNA并根據(jù)Favier等人，EnvironMicrobiol2002;68:219-226和Satokari等人，ApplEnvironMicrobiol2001;67:504-513;Satorkari等人SystemApplMicrobiol2003;26:572-584的方法分析。表1給出的是對剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的新生兒出生后第三天的糞便樣品中雙歧桿菌的檢測結(jié)果。表2給出的是在經(jīng)陰道分娩的新生兒出生后第三天的糞便樣品中檢測的雙歧桿菌的結(jié)果?？梢钥闯鼋?jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒的菌群與經(jīng)陰道途徑出生的嬰兒的菌群存在巨大差異。認(rèn)識這些物種水平上的差異使本發(fā)明人能夠設(shè)計(jì)本組合物和方法。這些結(jié)果表明根據(jù)本發(fā)明的組合物和方法的有利用途，例如喂養(yǎng)經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒、刺激健康的腸內(nèi)菌群并因而預(yù)防感染及刺激健康的免疫系統(tǒng)的方法。表l:剖腹生產(chǎn)術(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(-)=無擴(kuò)增(+/-)=弱擴(kuò)增(+)=陽性擴(kuò)增(++)=強(qiáng)擴(kuò)增表2:正常生產(chǎn)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)施例2:通過嬰兒糞便進(jìn)行半乳寡糖的體外發(fā)酵目標(biāo)通過體外半動力分批發(fā)酵系統(tǒng)使用嬰兒糞便來評價(jià)半乳寡糖(GOS)及GOS和菊粉的組合提高乳酸細(xì)菌活性的能力。測定乳酸鹽的量，因?yàn)樗侨樗峒?xì)菌包括雙歧桿菌的發(fā)酵產(chǎn)物。方法從健康的人工喂養(yǎng)的嬰兒中得到新鮮糞便。將從1至4個月大的嬰兒得到的新鮮糞便材料在1小時(shí)內(nèi)合并并放進(jìn)防腐培養(yǎng)基中(緩沖蛋白胨20.0g/l，L-半胱氨酸-鹽酸0.5g/l,巰基乙酸鈉0.5g/l，刃天青片劑1/1，pH6.7)并且在發(fā)酵實(shí)驗(yàn)開始前于4。C最多保存2小時(shí)。將保存的糞便溶液在13，000rpm(轉(zhuǎn)/分鐘)下離心15分鐘。去除所述上清液并將所述糞便與McBain&MacFarlane培養(yǎng)基(緩沖蛋白胨7jC3.0g/l，酵母提取物2.5g/1，粘蛋白(刷狀緣)0.8g/1，胰蛋白胨3.0g/1，L國半胱氨酸鹽酸0,4g/l，膽鹽0.05g/1，K2HP04.3H202.6g/1,NaHC030.2g/l，NaCl4.5g/1,MgS04.7H200.5g/l，CaCl20.228g/l，F(xiàn)eS040.005g/1)以1:5的重量比混合，該培養(yǎng)基代表腸內(nèi)環(huán)境。在t=0時(shí)，將15ml所述糞便懸浮液與500mg益生菌在瓶中組合并徹底混合。將不加入益生菌的作為對照。加入的益生菌如下培養(yǎng)基123GOS:0500500菊粉0050作為GOS來源，使用VivinalGOS(BorculoDomo)。作為菊粉來源，使用RaftilinHP(Orafti)。將15ml轉(zhuǎn)移到透析管中，該透析管在一個充滿250ml緩沖培養(yǎng)基(K2HP04.3H202,6g/l,NaHC030.2g/1,NaC14.5g/1，MgS04.7H200.5g/1,CaCl20.228g/1，F(xiàn)eS04.7H200.005g/1，pH6.3())的250ml瓶中。封閉所述瓶子并在37。C下溫育。3小時(shí)后用皮下注射器從透析管并從透析緩沖液取出lml樣品并在-18。C下保存。以一式兩份(duplo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。使用L-乳酸檢測試劑盒及D-和L-乳酸脫氬斷BoehringerMannheim,Mannheim，德國)通過酶法測定乳酸。結(jié)果與結(jié)論所述結(jié)果用每g加入的益生菌形成的乳酸的量來表示。所述結(jié)果表明當(dāng)嬰兒的菌群使GOS或GOS和菊粉的混合物發(fā)酵時(shí)，乳酸的量會增加。當(dāng)不加入益生菌時(shí)，觀察不到乳酸的產(chǎn)生。只有GOS時(shí)會產(chǎn)生每g益生菌0.1801毫mol乳酸。當(dāng)加入GOS與菊粉的組合時(shí)產(chǎn)生每g益生菌0.2119毫mol乳酸。所述結(jié)果表明所述寡糖刺激嬰兒乳酸細(xì)菌，包括雙歧桿菌的生長和/或活性。這些結(jié)果表明了所述不消化的寡糖，尤其是半乳寡糖在本組合物途。實(shí)施例3:喂養(yǎng)經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒的方法在所述嬰兒經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生后的兩天內(nèi)，對其施用營養(yǎng)組合物，該組合物每100ml含有現(xiàn)成喂養(yǎng)配方1.6克蛋白質(zhì)，3.6克脂肪，6.4克可消化性碳水化合物(主要是乳糖)，0.8克不消化的碳水化合物(其中有0.60克反式半乳寡糖，0.07克菊粉，lxlO、fu短雙歧桿菌，lxlO、fu鏈狀雙歧桿菌，lxlO、fu長雙歧桿菌和lxlO、fu類干酪乳桿菌)。實(shí)施例4:包裝組合物包裝組合物中所述包裝指出產(chǎn)品尤其適于口服喂養(yǎng)經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒，所述組合物包含短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、長雙歧桿菌、半乳寡糖和菊粉。實(shí)施例5:包裝組合物如實(shí)施例4中的組合物，其中所述組合物具有10ml的體積并且包裝于注射器中。實(shí)施例6:直腸給藥適合對出生后兩周內(nèi)的嬰兒直腸給藥的PII，其包含半乳寡糖和短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌。權(quán)利要求1.a)至少兩種不同的微生物；或b)至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或c)至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌株在制備對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒經(jīng)腸施用的組合物中的用途。2.權(quán)利要求l所述的用途，其中所述組合物包含至少一種雙歧桿菌。3.權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述組合物包含至少一種選自短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嗜熱雙歧桿菌、高盧雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、角雙歧桿菌、假小鏈雙歧桿菌、嗜熱嗜酸雙歧桿菌和長雙歧桿菌的雙歧桿菌。4.權(quán)利要求3所述的用途，其中所述組合物包含至少兩種選自權(quán)利要求3中提及的雙歧桿菌種。5.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物包含至少一種微生物和至少一種不消化的的寡糖。6.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物包含選自半乳寡糖、不消化的糊精、木寡糖、阿拉伯寡糖、葡寡糖、甘露寡糖、異麥芽寡糖和果多糖的不消化的f^唐。7.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其中所述組合物包含5到25en%的蛋白質(zhì)，25到60en%的脂肪和30到70en%的碳水化合物。8.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其中對接受人母乳的嬰兒施用所述組合物。9.前面權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用途，其中在嬰兒出生后一周內(nèi)對其施用所述組合物。10.營養(yǎng)或藥物組合物，其包含選自短雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、鏈狀雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嗜熱雙歧桿菌、高盧雙歧桿菌、動物雙歧桿菌、角雙歧桿菌、假小鏈雙歧桿菌、嗜熱嗜酸雙歧桿菌和長雙歧桿菌的至少4種雙歧桿菌種、亞種或和/或菌株。11.營養(yǎng)組合物，其包含5到25en。/o的蛋白質(zhì)；25到60en%的月旨肪；30到70en。/。的碳水化合物；至少兩種不同種的雙歧桿菌和至少一種乳桿菌。12.制備適合經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒的嬰兒營養(yǎng)品的方法，該方法包括混合a.人母乳；和b.包含i.至少兩種不同的微生物；或ii.至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或iii.至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌^^的組合物。13.液體體積為0.5至25ml的容器，其含有對嬰兒施用的組合物，該組合物包含至少兩種不同的微生物；或至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌抹14.刺激經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)出生的嬰兒健康的腸內(nèi)菌群發(fā)展的方法，該方法包括步驟a)混合I)營養(yǎng)或藥學(xué)上可接受的液體；和II)干燥組合物，其中所述干燥組合物II包含至少兩種不同的微生物；或至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌林，b)對嬰兒施用步驟a)中獲得的所述組合物。15.刺激經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒腸內(nèi)菌群的方法，該方法包括對所述嬰兒并在其出生后100小時(shí)內(nèi)施用含有微生物和/或不消化的寡糖的組合物。16.刺激嬰兒腸內(nèi)菌群的方法，該方法包括對3歲以下的嬰兒經(jīng)直腸施用包含微生物和/或不消化的寡糖的組合物。全文摘要本發(fā)明涉及喂養(yǎng)的方法及對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒施用的組合物及尤其是a)至少兩種不同的微生物；或b)至少一種微生物和至少一種不消化的寡糖；或c)至少兩種不同的雙歧桿菌種、亞種或菌株在制備對經(jīng)剖腹生產(chǎn)術(shù)分娩的嬰兒經(jīng)腸施用的組合物中的用途。因此可以刺激所述嬰兒腸內(nèi)菌群的健康發(fā)展。文檔編號A23L1/29GK101272701SQ200680035474公開日2008年9月24日申請日期2006年10月20日優(yōu)先權(quán)日2005年10月21日發(fā)明者B·斯塔爾,G·伯姆,J·諾爾申請人:努特里希亞公司