專利名稱：(2s,5s)-2,5-己二醇的生物不對稱合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種(2S， 5S)-2， 5-己二醇的生物不對稱合成方法。
背景技術(shù)：
(2S, 5S)-2,5-己二醇常溫下為白色固體，溶于水、乙醇、乙酸乙酯、和 三氯曱烷，不溶于乙醚和苯。(2S, 5S)-2，5-己二醇是合成手性藥物和其它 手性化學(xué)品的重要中.間體，主要作為制備精細(xì)化學(xué)品特別是手性藥物和農(nóng) 用化學(xué)品重要的前體，也可以作為降壓藥卡托普利、地爾硫卓的中間體， 同時也是合成手性氨基酸、離子液體、手性醇等多種手性化合物的催化劑 Duphos的重*商己*。
目前國外(2S， 5S)-2， 5-己二醇的合成主要還停留在對外消旋體的拆分 上，該技術(shù)難度大，收率低；需要價格昂貴的手性拆分劑，投資大，排出 的廢料對環(huán)境污染嚴(yán)重，且造成資源浪費(fèi)，產(chǎn)品的生產(chǎn)成本高。
另有文獻(xiàn)報道采用脂肪酶催化拆分的外消旋體來制取手性2， 5-己二醇， 得到的產(chǎn)物中(2S，5S)型和(2R，5R)型比值為1: 3，雖然可以制得手性 醇，但是后續(xù)工作繁瑣，造價很高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種(2S, 5S)-2， 5-己二醇的生物不對稱合成 方法，本發(fā)明通過篩選馴化得到對底物2, 5-己二酮具有高還原活性的酵母 菌，將其應(yīng)用于底物2， 5-己二酮的生物不對稱還原，得到產(chǎn)物(2S, 5S)-2, 5-己二醇。本發(fā)明具有生產(chǎn)成本低，高效，條件溫和，底物轉(zhuǎn)化率高，產(chǎn)物 得率高，目標(biāo)產(chǎn)物光學(xué)純度(e. e.值)高，對環(huán)境無污染的特點(diǎn)。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種(2S, 5S)-2， 5-己二醇的生物不對稱合成方法，包括如下步驟
(1 )菌種的確定選取對2， 5-己二酮的羰基具有高還原活性的HD-5酵 母菌抹進(jìn)行保存，其中HD-5酵母菌抹用于生物轉(zhuǎn)化時的培養(yǎng)方式分為游離 酵母細(xì)胞和固定化酵母細(xì)胞；
(2)細(xì)胞制備首先進(jìn)行種子培養(yǎng)挑取斜面保存菌種的培養(yǎng)物，接種 于含有葡萄糖、蛋白胨的種子培養(yǎng)基中，pH值為6. 5, !30。C，搖瓶培養(yǎng)， 振蕩轉(zhuǎn)速ZSOr'min-1,培養(yǎng)36h,取含酵母細(xì)胞的培養(yǎng)液離心(6, 000 r.mirf1, 15min),培養(yǎng)方式為游離酵母細(xì)胞時，取濕菌體，4'C保存?zhèn)溆茫?當(dāng)培養(yǎng)方式為固定化酵母細(xì)胞時，需將含酵母細(xì)胞的培養(yǎng)液離心后，用0. 9% 的生理鹽水洗滌兩次，稱其濕重，然后按一定比例加入到海藻酸鈉溶液中， 充分?jǐn)噭蚝?，滴入到?. 0% CaCh的溶液中，待形成球狀顆粒穩(wěn)定后，收 集顆粒，4'C保存?zhèn)溆茫?br> (3)酵母細(xì)胞的生物轉(zhuǎn)化將濕菌體或固定化細(xì)胞接種于培養(yǎng)基中， 振蕩培養(yǎng)，通過流加4 mol I/1 NaOH維持pH值恒定，活化2h后，加入底 物2, 5-己二酮，使終濃度為10-60誦o1 L—1,在一定溫度、pH值、攪拌轉(zhuǎn) 速、葡萄糖濃度和反應(yīng)時間下，進(jìn)行底物2, 5-己二酮的生物還原反應(yīng)。
所述步驟3的培養(yǎng)基采用有機(jī)培養(yǎng)基、無機(jī)培養(yǎng)基、蒸餾水、磷酸鹽 緩沖溶液、Tris-鹽酸緩沖液中的一種。
所述的有機(jī)培養(yǎng)基組成包括葡萄糖10. 0g'1/1，蛋白胨5.0g*L—、 K2HP04 1. 0g L—1， ZnS04 0. Olg L—1, KC1 0. 5g L—、 Fe2(S04) 3 0. Olg L—1， MgS04 7H20 0. 5g L—1。
所述的無機(jī)培養(yǎng)基組成包括葡萄糖5. 0g I/1 ， (NH4) 2S04 5. 0 g'L-1, K風(fēng)1.0g'L-1， ZnS04 0. Olg L—1， KC1 0. 5g L—、 Fe2 (S04) 0. Olg L—1， MgS04 7H20 0. 5g L-1。
所述的蒸餾水培養(yǎng)基組成為含葡萄糖5. 0g L-'的蒸餾水。 所述的磷酸鹽緩沖培養(yǎng)基組成為磷酸鹽0.2 mol.L-1,葡萄糖5. 0g L-1。
所述培養(yǎng)基Tris-鹽酸緩沖培養(yǎng)基組成為Tris-鹽酸0. 05 mol L—、 葡萄糖5. Og'L—'。
所述步驟3中的菌體接種量為2-10% (wt°/。，按菌體干重計算)，溫度恒 定在28-35。C, pH值為5.0-7.0,攪拌轉(zhuǎn)速為150-300r min—1，葡萄糖濃 度控制在0. Ol—O. 3 g 1/1，生物還原反應(yīng)時間為48-72h。
所述步驟3中的底物投加采用一次性投加法或分批補(bǔ)料法。
本發(fā)明的合成方法中底物、中間產(chǎn)物和產(chǎn)物濃度以及目的產(chǎn)物的對映 體過量值(e. e.值)可以通過如下的分析方法來測定
(1) 底物、中間產(chǎn)物和產(chǎn)物的測定方法
以氣相色i普測定，條件色譜柱為毛細(xì)管柱I麗OWAX(30mX0. 25 mmX0.25um) (Agilent),才主長30m,內(nèi)徑0.25mm，'液月莫厚度0. 25 ix m; 進(jìn)樣口為SPL,溫度為250°C;采用FID檢測器，溫度為250°C;柱箱溫度 為140°C;載氣為氮?dú)猓€速度為3.0 cm.min—、采用分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量 1. 0u L,分流比為40 : 1。
產(chǎn)物得率(％)=(產(chǎn)物濃度/初始底物濃度)X100%
(2) 產(chǎn)物(2S，5S)-2，5-己二醇對映體過量值(e.e.值)的測定方法 使用手性衍生化試劑S-(-)-苯乙基異氰酸酯(S-(-)-PEIC)與2，5-己
二醇反應(yīng)后形成一對非對映異構(gòu)體，爾后以氣相色i普測定。
條件毛細(xì)管柱(SE-30 25mX0.33mmX0.50Mm)汽化室溫度270。C, 檢測器溫度290。C,載氣氮?dú)?純度大于99. 99 % )，柱頭壓力(200 kPa), 氬氣壓力200 kPa,空氣壓力500kPa,分流比4. 9 : 1，流速6. 2 mL.min—^
本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，其有益效果為本發(fā)明通過對菌種的篩 選和馴化，從不同種類的酵母屬酵母菌中篩選對2，5-己二酮的羰基具有高 還原活性的酵母菌抹HD-5;通過用本發(fā)明的方法對9株不同的酵母菌抹進(jìn) 行生物不對稱合成實(shí)驗(yàn)，從測定結(jié)果可以看出轉(zhuǎn)化活性較高的有4抹酵母，分別為HD-2、 HD-5、 HD-6、 HD-9，見表l,表1為9林酵母菌林催化2, 5-己二酮還原的產(chǎn)物得率和e. e.值。然后對轉(zhuǎn)化活性較高的4株酵母(HD-2、 HD-5、 HD-6、 HD-9)進(jìn)行進(jìn)一步的馴化，紫外誘變和高濃度底物馴化，篩 選得到具有耐高濃度底物的菌抹，從而確定HD-5的生物還原速度最快，產(chǎn) 物對映體選擇性最高，見表2,表2為4抹酵母菌株催化2， 5-己二酮還原 的產(chǎn)物得率和e.e.值。而且本發(fā)明在酵母細(xì)胞的生物轉(zhuǎn)化過程中，通過對 培養(yǎng)基組成的優(yōu)化、菌體接種量、溫度、pH值、攪拌轉(zhuǎn)速和時間的控制以 及對底物投加量和方法的選擇，使本發(fā)明具有生產(chǎn)成本低，高效，反應(yīng)條 件溫和，底物轉(zhuǎn)化率高，產(chǎn)物得率高，目標(biāo)產(chǎn)物光學(xué)純度(e. e.值)高， 對環(huán)境無污染的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1
游離酵母在有機(jī)培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)化底物2, 5-己二酮
配制有機(jī)培養(yǎng)基，有機(jī)培養(yǎng)基(g L—1):葡萄糖10. 0,蛋白胨5. 0， K2HP04 1.0, ZnS04 0.01, KC1 0.5, Fe2(S04)3 0.01, MgS04 7H20 0.5， pH 6. 0，滅菌后備用。
從篩選出來保存的HD-5菌林的菌種斜面中挑取培養(yǎng)物，接入到放有 150mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于30。C下振蕩培養(yǎng)，振蕩轉(zhuǎn)速為 250r.min-1，好氧培養(yǎng)36h，離心(6， 000 r min—、 15min)取濕菌體,4。C 保存。取50g濕菌體(約6°/ 干菌重)加入到250mL有機(jī)培養(yǎng)基中，微氧培養(yǎng)， 控制溫度為34°C,》茲力攪拌，攪拌速率為150r min—',通過流加4 mol I/1 NaOH維持pH值恒定7. 0?；罨?h后，投加底物2， 5-己二酮于反應(yīng)體系中， 2，5_己二酮的終濃度為30 mmol L人反應(yīng)過程中葡萄糖濃度控制在0.08 一O. 2g'L—范圍。反應(yīng)48h后，取培養(yǎng)液，離心(6000 r min畫1、 lOmin), 取上清液進(jìn)行氣相色譜分析，測定底物濃度、中間產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物濃度和 e. e.值。底物濃度0. 2畫ol L—\中間產(chǎn)物濃度3. 52 mmol L_1,產(chǎn)物濃度23. 84 mmol L—1,產(chǎn)物得率80.21%,目標(biāo)產(chǎn)物(2S， 5S) -2， 5-己二醇e. e. 值95. 35%。
實(shí)施例2
游離酵母在無機(jī)培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)化底物2， 5-己二酮
配制無機(jī)培養(yǎng)基，無機(jī)培養(yǎng)基(g L—1):葡萄糖5. 0， (NH4)2S04 5. 0, K2HP041. 0， ZnS04 0. 01， KC1 0. 5, Fe2 (S04) 3 0. 01 ， MgS04 7H20 0, 5， pH 6. 0， 滅菌后備用。
從篩選出來保存的HD-5菌抹的菌種斜面中挑取培養(yǎng)物，接入到放有 150mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于30。C下振蕩培養(yǎng)，振蕩轉(zhuǎn)速為 ZSOr.min-1,好氧培養(yǎng)36h,離心取濕菌體，4。C保存。取25g濕菌體(約 3%干菌重)加入到250mL無機(jī)培養(yǎng)基中，微氧培養(yǎng)，控制溫度為30°C，磁力 攪拌，攪拌速率300r mirf1，通過流力口 4 mol LlaOH維持pH值恒定5. 0。 活化2h后，投加底物2， 5-己二酮于反應(yīng)體系中，2, 5-己二酮的終濃度為 50 mmol L—'。反應(yīng)過程中葡萄糖濃度控制在0. 01 — 0. 05g L—'范圍。反應(yīng) 50h后，取培養(yǎng)液，離心(6000 r.min—\ 10 min),取上清液進(jìn)行氣相色 譜分析，測定底物濃度、中間產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物濃度和e. e.值。底物濃度 0. 5mmol L-1，中間產(chǎn)物濃度4. 12 mmol L—、產(chǎn)物濃度39. 31mmol L—、 產(chǎn)物得率78.61%,目標(biāo)產(chǎn)物(2S，5S)-2，5-己二醇e. e.值90.03%。
實(shí)施例3
游離酵母在含一定濃度葡萄糖的蒸餾水中轉(zhuǎn)化底物2， 5-己二酮 配制含葡萄糖5. 0g L—i的蒸餾水培養(yǎng)基，滅菌后備用。 從篩選出來保存的HD-5菌抹的菌種斜面中挑取培養(yǎng)物，接入到放有 150mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于30。C下振蕩培養(yǎng)，振蕩轉(zhuǎn)速為 250r'mirT1，好氧培養(yǎng)36h，離心取濕菌體，4。C保存。取90g濕菌體(約 10°/。干菌重)加入到250mL蒸餾水培養(yǎng)基中，微氧培養(yǎng)，控制溫度為32°C， 不茲力攪拌，攪拌速率為250r miif1,通過流加4 mol L—1 NaOH維持pH值 恒定6.5?；罨?h后，投加底物2， 5-己二酮于反應(yīng)體系中，2，5-己二酮的終濃度為45 ,ol 'I/1。反應(yīng)過程中葡萄糖濃度控制在0.03—0.3 g'I/1 范圍。反應(yīng)62h后，取培養(yǎng)液，離心(6000 r'min—\ 10 min)，取上清液 進(jìn)行氣相色譜分析，測定底物濃度、中間產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物濃度和e. e.值。 底物濃度0. 2mmol'I/1，中間產(chǎn)物濃度2. 61 mmol L—1 ，產(chǎn)物濃度 33. 39mmo1 I/1,產(chǎn)物得率74.22%,目標(biāo)產(chǎn)物(2S, 5S) -2， 5-己二醇e. e. 值92.29%。
實(shí)施例4
游離酵母在磷酸鹽緩沖培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)化底物2， 5-己二酮
配制含葡萄糖5. 0g L^的0. 2 mol 1^磷酸鹽緩沖培養(yǎng)基，滅菌后備用。
從篩選出來保存的HD-5菌林的菌種斜面中挑取培養(yǎng)物，接入到放有 150mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于30。C下振蕩培養(yǎng)，振蕩轉(zhuǎn)速為 250r'min—1，好氧培養(yǎng)36h，離心取濕菌體，4。C保存。取45g濕菌體(約 5%干菌重)加入到250mL磷酸鹽緩沖培養(yǎng)基中，微氧培養(yǎng)，控制溫度為28°C, 磁力攪拌，攪拌速率為160r mirf1,通過流加4 mol L—1 NaOH維持pH值 恒定6. 5?；罨?h后，投加底物2， 5-己二酮于反應(yīng)體系中，2,5-己二酮的 終濃度為10 mmol L—'。反應(yīng)過程中葡萄糖濃度控制在0. 05—0. 25 g L—1 范圍。反應(yīng)24h后，取培養(yǎng)液，離心(6000 r *min—\ 10 min)，取上清液 進(jìn)行氣相色i普分析，測定底物濃度、中間產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物濃度和e. e.值。 底物濃度0. 25mmol'I/1，中間產(chǎn)物濃度1. 03 mmol L—\產(chǎn)物濃度 7. 56mmo1 L—、產(chǎn)物得率:75.59%,目標(biāo)產(chǎn)物(2S， 5S) -2， 5-己二醇e. e.值 93.11%。
實(shí)施例5
游離酵母在Tris-鹽酸緩沖培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)化底物2, 5-己二酮 配制含葡萄糖5. 0g L—'的0. 05 mol L，ris-鹽酸緩沖培養(yǎng)基，滅菌 后備用。
從篩選出來保存的HD-5菌林的菌種斜面中挑取培養(yǎng)物，接入到放有150niL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于30°。下振蕩培養(yǎng)，振蕩轉(zhuǎn)速為 ZSOr'min-1,好氧培養(yǎng)36h,離心取濕菌體，4。C保存。取l化濕菌體(約 2°/。干菌重)加入到250mL的Tris-鹽酸緩沖培養(yǎng)基中，孩史氧培養(yǎng)，控制溫度 為28。C,磁力攪拌，攪拌速率為280r mirf1,通過流加4 mol PNaOH維 持pH值恒定6. 3?；罨?h后，投加底物2, 5-己二酮于反應(yīng)體系中，2, 5-己二酮的終濃度為20 mmol.L-1。反應(yīng)過程中葡萄糖濃度控制在0. (B — 0. 11g'L人范圍。反應(yīng)36h后，取培養(yǎng)液，離心(6000 r min—1、 10min)， 取上清液進(jìn)行氣相色譜分析，測定底物濃度、中間產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物濃度和 e. e.值。底物濃度0.43 mmol L—1，中間產(chǎn)物濃度1.85 mmol I/1,產(chǎn) 物濃度14. 86 mmol L—1,產(chǎn)物得率73.43%,目標(biāo)產(chǎn)物(2S， 5S) -2, 5-己 二醇e. e.值89.2 %。實(shí)施例6分批補(bǔ)料方式?jīng)_殳加底物2， 5-己二酮培養(yǎng)方法同實(shí)施例2。但其中底物的投力口方式采取分批補(bǔ)料，每次加入 底物后，使底物濃度始終維持在3—6隱o1 'l/'左右。每隔一定時間后，取 培養(yǎng)液，離心(6000 r 'mirT1、 10 min)，取上清液進(jìn)行氣相色譜分析，測 定底物濃度、中間產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物濃度和e. e.值。還原反應(yīng)24h累計加入 底物96 mmol L—、停止補(bǔ)加底物，繼續(xù)反應(yīng)25h。這時，底物濃度0.25 mmol L—、中間產(chǎn)物濃度1. 05 mmol L—、產(chǎn)物濃度87. 55 mmol L一1。 產(chǎn)物得率91.20%，目標(biāo)產(chǎn)物(2S， 5S)-2， 5-己二醇e. e.值94.38%。實(shí)施例7固定化酵母細(xì)胞在連續(xù)攪拌式反應(yīng)器中轉(zhuǎn)化底物2, 5-己二酮從篩選出來保存的HD-5菌抹的菌種斜面中挑取培養(yǎng)物，接入到放有 150mL種子培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，于30。C下振蕩培養(yǎng)，振蕩轉(zhuǎn)速為 "0r'min—、好氧培養(yǎng)36h,離心后用0. 9%的生理鹽水洗滌兩次，稱取酵 母濕菌泥6g，加入到50 mL濃度為2%的海藻酸鈉溶液中，充分混勻，用注射器逐滴滴入4。/。CaCl2溶液中，得到直徑為3—5 mra的顆粒，在4。C下固化 8h后備用。培養(yǎng)基同實(shí)例2，反應(yīng)器培養(yǎng)基裝液量"0 mL，采用分批培養(yǎng)方式， 微氧培養(yǎng)，控制溫度為34°C，活化2h后，通過流加4 mol LlaOH維持pH 值恒定7.0，磁力攪拌，投加底物2，5-己二酮于反應(yīng)體系中，2, 5-己二酮 的終濃度為30 mmol 1/1。反應(yīng)過程中葡萄糖濃度控制在0. Ol一O. 3 g I/1 范圍內(nèi)。反應(yīng)48h后，取上清液進(jìn)行氣相色譜分析，測定底物濃度，中間 產(chǎn)物濃度、產(chǎn)物濃度和e. e.值。底物濃度0. O5 mmol L—1，中間產(chǎn)物濃度 1.21 mmol'l/1,產(chǎn)物濃度24.94 mmol L一1。產(chǎn)物得率83.12 %，目標(biāo) 產(chǎn)物(2S，5S)-2，5-己二醇e. e.值:96. 37%。表iSaccharomyces cerevisiae得率(％ )e. e.值(％ )HD-156. 6691. 51HD-256. 1993. 54HD-350. 7488. 54HD-448. 5590. 51HD-559. 2592. 12HD-655. 4293. 24HD-748. 6693. 15HD-841. 4687. 07HD-960. 7093. 23表2Saccharomyces cerevisiae得率(％ )e. e.值(％ )HD-260. 1593. 53HD-561. 9093. 72HD」656. 2992. 23HD-960. 5393. 241權(quán)利要求
1、一種(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不對稱合成方法，包括如下步驟(1)菌種的確定選取對2，5-己二酮的羰基具有高還原活性的HD-5酵母菌株進(jìn)行保存，其中HD-5酵母菌株用于生物轉(zhuǎn)化時的培養(yǎng)方式分為游離酵母細(xì)胞和固定化酵母細(xì)胞；(2)細(xì)胞制備首先進(jìn)行種子培養(yǎng)挑取斜面保存菌種的培養(yǎng)物，接種于含有葡萄糖、蛋白胨的種子培養(yǎng)基中，搖瓶培養(yǎng)，取含酵母細(xì)胞的培養(yǎng)液離心，培養(yǎng)方式為游離酵母細(xì)胞時，取濕菌體，4℃保存?zhèn)溆?；?dāng)培養(yǎng)方式為固定化酵母細(xì)胞時，需將含酵母細(xì)胞的培養(yǎng)液離心后，用0.9％的生理鹽水洗滌兩次，稱其濕重，然后按一定比例加入到海藻酸鈉溶液中，充分?jǐn)噭蚝?，滴入到CaCl2的溶液中，待形成球狀顆粒穩(wěn)定后，收集顆粒，4℃保存?zhèn)溆茫?3)酵母細(xì)胞的生物轉(zhuǎn)化將濕菌體或固定化細(xì)胞接種于培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)，活化2h后，加入底物2，5-己二酮，使終濃度為10-60mmol·L-1，在一定溫度、pH值、攪拌轉(zhuǎn)速、反應(yīng)時間和葡萄糖濃度下，進(jìn)行底物2，5-己二酮的生物還原反應(yīng)。
2、如權(quán)利要求1所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不對稱合成方法， 其特征在于所述步驟3中的培養(yǎng)基采用有機(jī)培養(yǎng)基、無機(jī)培養(yǎng)基、蒸餾 水培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖培養(yǎng)基、Tris-鹽酸緩沖培養(yǎng)基中的一種。
3、 如權(quán)利要求2所述的(2S， 5S)-2， 5-己二醇的生物不對稱合成方法， 其特征在于所述的有機(jī)培養(yǎng)基組成包括葡萄糖10. Og.L—、蛋白胨 5. Og'L—1， K2HP04 l.Og'L—、 ZnS04 0. Olg L—、 KC1 0. 5g'L畫1, Fe2(S04)3 0. Olg L_1, MgS04 7H20 0. 5g L—、
4、 如權(quán)利要求2所述的(2S， 5S)-2, 5-己二醇的生物不對稱合成方法， 其特征在于所述的無機(jī)培養(yǎng)基組成包括葡萄糖5. 0g L—1 ， (NH4) 2S04 5. 0g L-1, K2HP04 1. 0g I/1, ZnS04 0. Olg L—1， KC1 0. 5g L—1 , Fe2 (S04) 0, Olg L—1， MgS04 7H20 0. 5g L-1。
5、如權(quán)利要求1所述的(2S, 5S)-2,5-己二醇的生物不對稱合成方法，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖培養(yǎng)基中的磷酸鹽濃度為0. 2mol'L—、含 葡萄糖5. 0g 1/1。
6、 如權(quán)利要求1所述的(2S, 5S)-2, 5-己二醇的生物不對稱合成方法， 其特征在于所述的Tris-鹽酸緩沖培養(yǎng)基中的Tris-鹽酸濃度為0. O5 mol I/1,含葡萄糖5. 0g L一1。
7、 如權(quán)利要求1所述的(2S, 5S)-2， 5-己二醇的生物不對稱合成方法， 其特征在于所述的蒸餾水培養(yǎng)基組成為含葡萄糖5. 0g L—工的蒸餾水。
8、 如權(quán)利要求1所述的(2S, 5S)-2，5-己二醇的生物不對稱合成方法， 其特征在于所述步驟3中的菌體接種量按菌體干重計算為1-10%,溫度恒 定在28-35°C， pH值為5. 0-7. 0,攪拌轉(zhuǎn)速為150-300r min—1,葡萄糖濃 度控制在0. Ol—O. 3 g L—、生物還原反應(yīng)時間為48-72h。
9、 如權(quán)利要求1所述的(2S, 5S)-2，5-己二醇的生物不對稱合成方法， 其特征在于所述步驟3中的底物投加采用一次性投加法或分批補(bǔ)料法。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不對稱合成方法，包括如下步驟首先進(jìn)行菌種的確定，篩選出HD-5菌株為對底物還原活性最高的酵母菌株；然后進(jìn)行細(xì)胞制備，最后將酵母細(xì)胞進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化這三個步驟。本發(fā)明具有生產(chǎn)成本低，高效，條件溫和，底物轉(zhuǎn)化率高，產(chǎn)物得率高，目標(biāo)產(chǎn)物光學(xué)純度高，對環(huán)境無污染的特點(diǎn)。
文檔編號C12N1/16GK101289679SQ20071000987
公開日2008年10月22日 申請日期2007年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月20日
發(fā)明者靜 葉, 肖美添, 黃雅燕 申請人:華僑大學(xué)