專利名稱：：乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片及其試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于臨床檢測(cè)的基因芯片
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)涉及一種乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片及其試劑盒。
背景技術(shù)：
：我國(guó)是世界上乙肝病毒感染最嚴(yán)重的國(guó)家。通常對(duì)乙肝進(jìn)行兩對(duì)半檢測(cè)是臨床診斷與血液篩查的重要內(nèi)容。乙肝e抗原是檢測(cè)中的一項(xiàng)重要指標(biāo)。e抗原來(lái)源于乙型肝炎病毒的核心。查出e抗愿，其意義就等于査出核心抗原，表示病毒復(fù)制活躍，并且傳染性較強(qiáng)。要了解HBsAg陽(yáng)性的人有沒(méi)有傳染性，比較常用而又可靠的檢測(cè)方法就是驗(yàn)e抗原和e抗體。乙肝e抗原免疫逃避可引起臨床血清學(xué)對(duì)乙肝e抗原的漏檢，從而不利于判斷病人的傳染性及治療愈后情況。目前臨床上還沒(méi)有針對(duì)乙肝e抗原漏檢采取專門診斷方法。
發(fā)明內(nèi)容為了提供一種檢測(cè)乙肝e抗原漏檢的方法，提供了一種乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片及其試劑盒。本發(fā)明采用下述技術(shù)方案提供一種乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片，在固相載體上固定檢測(cè)乙肝e抗原免疫逃避的特異DNA探針，所說(shuō)的探針序列可以為probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT所述的固相載體是NC膜，尼龍膜，硅膠片，或玻片，固相載體是經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的，固相載體可以是經(jīng)過(guò)醛基化修飾的玻片。本發(fā)明還提供一種如上所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片試劑盒，由乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片和配套使用的試劑組成；配套使用的試劑包括對(duì)血清樣本進(jìn)行處理的處理液，對(duì)處理樣本進(jìn)行擴(kuò)增標(biāo)記的擴(kuò)增液，與微陣列進(jìn)行雜交反應(yīng)的雜交液，洗滌液，酶標(biāo)工作液，和檢測(cè)液；在血清樣本的檢測(cè)過(guò)程中配套試劑盒與乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片是聯(lián)合使用的。所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片的試劑盒，其特征在于，所述的配套使用的試劑可以擴(kuò)增標(biāo)記引起乙肝e抗原免疫逃避的突變DNA基因片斷，所述的樣本擴(kuò)增液由乙肝e抗原免疫逃避的突變DNA基因片斷擴(kuò)增引物和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液組成，所述的引物有生物素標(biāo)記，所述的引物序列可以是Primer5，-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3，-B1965tcagaaggcaaaaatcagagt所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片的試劑盒，其特征在于，所述的與微陣列進(jìn)行雜交反應(yīng)的雜交液，和用于洗滌的洗滌液主要成分是SSC和SDS。所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片的試劑盒，其特征在于，所述的酶標(biāo)工作液由辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素組成，所述的檢測(cè)液由發(fā)光物和過(guò)氧化氫二種試劑組成，使用前混合，所述的發(fā)光物為魯米諾、異魯米諾或其衍生物。綜上所述，本發(fā)明提供了一種經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便的方法，用于對(duì)乙肝e抗原免疫逃避的檢測(cè)，避免臨床血清學(xué)對(duì)乙肝e抗原的漏檢，從而判斷病人的傳染性及治療愈后情況。圖1為檢測(cè)乙肝e抗原免疫逃避基因的探針矩陣示意圖具體實(shí)施方式本發(fā)明的目的，是這樣實(shí)現(xiàn)的，將設(shè)計(jì)的特異性探針固定于玻片、膜、硅片、高分子材料載體表面上，形成具有微陣列的基因檢測(cè)芯片。將待測(cè)樣本經(jīng)過(guò)處理，用專門設(shè)計(jì)的引物擴(kuò)出所需片斷，與載體表面探針微陣列經(jīng)過(guò)雜交，再用發(fā)光儀進(jìn)行檢測(cè)得到結(jié)果。探針設(shè)計(jì)probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT引物設(shè)計(jì)-Primer5'-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3'-B1965tcagaaggcaaaaatcagagt實(shí)施例1:按以下方法對(duì)各測(cè)試血請(qǐng)樣品進(jìn)行檢測(cè)1.按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)對(duì)血清樣本進(jìn)行處理，提取病毒核酸。2.加入PCR擴(kuò)增液，對(duì)處理得到的核酸樣品進(jìn)行擴(kuò)增標(biāo)記，用帶BIOTIN標(biāo)記的引物給產(chǎn)物標(biāo)記上生物素。3.加入反應(yīng)區(qū)域，10-20ul。4.42'C保溫保濕反應(yīng)60分鐘。5.用洗液洗滌4-6次，每次2分鐘，振動(dòng)。6.加入親和反應(yīng)液，10-20ul。7.在42'C反應(yīng)15-20min。8.用洗液洗滌4-6次，每次2分鐘，晃動(dòng)。9.加檢測(cè)液20ul/孔，使檢測(cè)液均勻分布于反應(yīng)區(qū)域。10.CCD檢測(cè)，視發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度曝光30-60秒。實(shí)施例2:按以下方法對(duì)各測(cè)試血請(qǐng)樣品進(jìn)行檢測(cè)1.按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)對(duì)血清樣本進(jìn)行處理，提取病毒核酸。2.加入PCR擴(kuò)增液，對(duì)處理得到的核酸樣品進(jìn)行擴(kuò)增標(biāo)記，用帶熒光標(biāo)記的引物給產(chǎn)物標(biāo)記上熒光。3.加入反應(yīng)區(qū)域，10-20ul。4.42'C保溫保濕反應(yīng)60分鐘。5.用洗液洗滌4-6次，每次2分鐘，振動(dòng)。6.用共聚焦熒光顯微鏡或熒光掃描儀檢測(cè)獲得結(jié)果。結(jié)果判定依據(jù)不同指標(biāo)的CutOff值，參考標(biāo)準(zhǔn)品梯度曲線，判定樣品血清的陰陽(yáng)性。與此同時(shí)，用常規(guī)方法對(duì)測(cè)試的血清樣品進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。結(jié)果表明，用本發(fā)明的試劑盒得出的測(cè)試結(jié)果與常規(guī)方法相同。序列表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求1.一種乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片，其特征在于固相載體上固定有帶有乙肝e抗原免疫逃避相關(guān)核酸序列的DNA探針，所說(shuō)的探針的核酸序列可以為如下一組序列probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT2.如權(quán)利要求l所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片，其特征在于，所述的固相載體是硝酸纖維素膜，尼龍膜，硅膠片，或玻片，固相載體是經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的，固相載體可以是經(jīng)過(guò)醛基化修飾的玻片。3.—種包含如權(quán)利要求l所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片的試劑盒，'由乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片和配套使用的試劑組成；配套使用的試劑包括對(duì)血清樣本進(jìn)行處理的處理液，對(duì)經(jīng)過(guò)處理的樣本進(jìn)行擴(kuò)增標(biāo)記的擴(kuò)增液，與微陣列進(jìn)行雜交反應(yīng)的雜交液，洗滌液，酶標(biāo)工作液，和檢測(cè)液。4.如權(quán)利要求3所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片的試劑盒，其特征在于，所述的擴(kuò)增液由乙肝e抗原免疫逃避突變基因片段的擴(kuò)增引物和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)液組成，所述的引物有生物素標(biāo)記，所述的引物序列可以是-Primer5'-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3、B1965tcagaaggcaaaaatcagagt5.如權(quán)利要求3或4所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片的試劑盒，其特征在于，所述的與微陣列進(jìn)行雜交反應(yīng)的雜交液，和洗滌液的主要成分是SSC和SDS。6.如權(quán)利要求3或4所述的乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片的試劑盒，其特征在于，所述的酶標(biāo)工作液由辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素組成，所述的檢測(cè)液由發(fā)光物和過(guò)^化氫二種試劑組成，所述的發(fā)光物為魯米諾、異魯米諾或其衍生物。全文摘要本發(fā)明提供一種乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片及其試劑盒，屬于臨床檢測(cè)的基因芯片
技術(shù)領(lǐng)域：
，包括固相載體上固定有檢測(cè)乙肝e抗原免疫逃避的特異DNA探針的基因芯片和配套使用的試劑；配套使用的試劑包括對(duì)血清樣本進(jìn)行處理的處理液，對(duì)處理樣本進(jìn)行擴(kuò)增標(biāo)記的擴(kuò)增液，與微陣列進(jìn)行雜交反應(yīng)的雜交液，洗滌液，酶標(biāo)工作液，和檢測(cè)液；在血清樣本的檢測(cè)過(guò)程中配套試劑與乙肝e抗原免疫逃避檢測(cè)基因芯片是聯(lián)合使用的。本發(fā)明可用于乙肝e抗原免疫逃避的檢測(cè)，避免臨床上乙肝e抗原漏檢，從而有利于判斷乙肝病人的傳染性及治療愈后情況。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101333559SQ20071004322公開(kāi)日2008年12月31日申請(qǐng)日期2007年6月29日優(yōu)先權(quán)日2007年6月29日發(fā)明者汪寧梅,穆海東,羅芳英,颯黎申請(qǐng)人:上海裕隆生物科技有限公司