專利名稱：：一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，屬于飼料添加劑
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：天然植物飼料添加劑產(chǎn)品的研究開發(fā)雖已取得了一定的進(jìn)展，且在一定范圍內(nèi)對畜禽疾病的控制取得了較好的效果，但還存在許多亟待解決的問題，如產(chǎn)品添加量大,有效成分不明，作用機(jī)理不清，作用效果不穩(wěn)定，劑型單一缺乏毒理安全方面的研究，原料和產(chǎn)品的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不完備等，導(dǎo)致新的天然植物添加劑研究與開發(fā)力度不大，上市新產(chǎn)品較少。這些問題的存在使目前市場上的天然植物飼料添加劑不符合"微量、高效"這一飼料添加劑的基本功能原則，難以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。天然植物提取技術(shù)的現(xiàn)代化至關(guān)重要，如不能有效地提取中藥中的藥效成分，則無論如何好的配方也不能發(fā)揮治療作用。目前國內(nèi)某些企業(yè)已經(jīng)遺棄了傳統(tǒng)中藥生產(chǎn)中落后的方法，把先進(jìn)的化工單元操作和現(xiàn)代分析手段應(yīng)用于中藥提取，并把天然植物制成先進(jìn)的劑型，合理有效地添加到飼料中，使之易于吸收，見效快。這些先進(jìn)的提取工藝技術(shù)主要有吸附色譜技術(shù)、連續(xù)逆流萃取技術(shù)、超臨界萃取技術(shù)、冷凍干燥技術(shù)、微囊化包合技術(shù)等，目前發(fā)酵技術(shù)用于天然植物藥物生產(chǎn)僅局限于簡單的炮制加工和一些菌類藥物的發(fā)酵，但如何發(fā)揮天然植物生物轉(zhuǎn)化技術(shù)尚在研究初期階段。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法。為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的詞料添加劑的制備方法，其特征在于，用天然植物發(fā)酵技術(shù)制備飼料添加劑，其方法為第一步.菌種的保藏和生產(chǎn)(1)取黑曲霉和枯草芽孢桿菌分別在4'C下保藏；(2)將黑曲霉接種于種子擴(kuò)大培養(yǎng)基中，放入35。C一4(TC的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，再接入種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基后置于35'C—4(TC的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，每300ml三角瓶裝量50ml液體培養(yǎng)基，得到培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌；(3)將枯草芽孢桿菌接種于斜面培養(yǎng)基中，放入35'C—40'C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，再接入種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基后置于35。C一4(TC的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，每300ml三角瓶裝量50ml液體培養(yǎng)基，，得到培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌種；第二步.黑曲霉對蒲公英的液體或固體發(fā)酵蒲公英液體發(fā)酵A.蒲公英水提液的制備使用一噸提取罐，以h2—4的比例加入蒲公英和水煮沸50分鐘一70分鐘，將蒲公英殘?jiān)^濾掉，使用中藥專用減壓濃縮罐減壓濃縮，則獲得蒲公英的粗提液；B.黑曲霉對蒲公英粗提液的發(fā)酵將黑曲霉菌劑15%—25%加以2:0.5-1.5:0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15%—25%及蒲公英水提液55%—65%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35—4(TC下發(fā)酵2—4天，經(jīng)過醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；或?qū)ζ压⒐腆w發(fā)酵A.蒲公英的制備用超微粉碎機(jī)將蒲公英粉碎至80目，再用35%水浸泡，備用5B.黑曲霉對蒲公英固體的發(fā)酵將黑曲霉菌劑15%—25%加以2:0.5-1.5:0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15%—25%及蒲公英55%—65%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35—4(TC下發(fā)酵4天一6天，水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；第三步.枯草芽孢桿菌對蒲公英的液體或固體發(fā)酵蒲公英的液體發(fā)酵A.蒲公英水提液的制備使用一噸提取罐，以l:2—4的比例加入蒲公英和水煮沸50分鐘一70分鐘，將蒲公英殘?jiān)^濾掉，減壓濃縮，則獲得蒲公英的粗提液；B.枯草芽孢桿菌對蒲公英粗提液的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15%—25%加以2:0.5-1.5:0.5-L5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15%—25%及蒲公英水提液55%一65%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35'C—4(TC下發(fā)酵2—4天，經(jīng)醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；或?qū)ζ压⒐腆w發(fā)酵A.蒲公英的制備用超微粉碎機(jī)將蒲公英粉碎至80目，再用35%水浸泡，備用；B.枯草芽孢桿菌對蒲公英固體的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15%—25%加以2:0.5-1.5:0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15%_25%及蒲公英55%—65%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35'C—4(TC下發(fā)酵4一6天，經(jīng)水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎得到粉末狀的成品；第四步.枯草芽孢桿菌對黃芪的液體或固體發(fā)酵黃芪的液體發(fā)酵A.黃芪水提液的制備使用一噸提取罐，以l:2—4的比例加入黃芪和水煮沸50分鐘一70分鐘，將黃芪殘?jiān)^濾掉，減壓濃縮，則獲得黃芪的粗提液；B.枯草芽孢桿菌對黃芪粗提液的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15%—25%加以2:0.5-1.5:0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15%—25%及黃芪水提液55%—65%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35'C—4(TC下發(fā)酵2—4天，經(jīng)醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；或?qū)S芪固體發(fā)酵A.黃芪的制備用超微粉碎機(jī)將黃芪粉碎至80目，再用35%水浸泡，備用；B.枯草芽孢桿菌對黃芪固體發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15%—25%加以2:0.5-1.5:0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15%—25%及黃芪55%—65%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35'C—40。C下發(fā)酵4天一6天，經(jīng)水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；第五步.制備天然植物藥物飼料添加劑將步驟二的干粉25%—35%、步驟三的干粉25%—35%、步驟四的干粉25%—35%、甘草粉5%—15%混合，過80目篩，得混合干粉成品，即本飼料添加劑成品。所述的枯草芽孢桿菌種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為蔗糖2%—4%，蛋白胨0.5%-1.5%，酵母膏0.3%-0.6%，磷酸二氫鉀(KH2P04)0.3°/。-0.6%，硫酸銨((亂)2S0J0.2%-0.4%,碳酸牽丐(CaC03)0.1%-0.3%、蒸餾水93%-95%，pH值為6.5-7.5。所述的黑曲霉的種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖5%-7%，豆餅0.5%_1.5%，硫酸銨O.4%-0.6%，氯化鈣0.2%-0.4%，蒸餾水91.5%-93.5%，PH值為46.5。所述的碳源為葡萄糖、氨基乙酸、蔗糖、玉米粉等；所述的氮源為尿素、硫酸銨、蛋白胨等；所述的無機(jī)鹽為碳酸鈣、磷酸二氫鉀、硫酸鎂。本發(fā)明利用天然植物發(fā)酵技術(shù)制備飼料添加劑，微生物具有氧化、酯化、甲基化、羥基化、還原化等多種能力，天然植物發(fā)酵經(jīng)生物轉(zhuǎn)化后，其有效成分能被充分分離、提取，使其更具有生物活性，并含有大量的活性酶，服用后能被機(jī)體組織細(xì)胞迅速吸收，達(dá)到祛病、健體、增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)的功能，更好地發(fā)揮天然植物這一天然藥物的藥效作用，從而降低用藥成本，提高功效。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1.本發(fā)明在配合詞料中不添加抗生素、鎮(zhèn)靜劑和激素等有害添加劑前提下，加入本發(fā)明，豬、雞增重提高5-10%左右，飼料轉(zhuǎn)化率提高5-8%;2.發(fā)酵為探索、改進(jìn)天然植物藥物制藥工藝提供了新的技術(shù)以天然植物藥物為培養(yǎng)基或在培養(yǎng)基中添加適量天然植物藥物，能對天然植物藥物進(jìn)行轉(zhuǎn)化后提高黃酮、綠原酸的含量，降低天然植物藥物的毒副作用或提高其藥效，其原理為利用酶強(qiáng)大的分解轉(zhuǎn)化能力，不僅可對培養(yǎng)基中中藥的纖維、糖類和蛋白等物質(zhì)加以利用，而且在代謝過程中可以對天然植物藥物中的一些成分進(jìn)行轉(zhuǎn)化，從而提高黃酮、綠原酸的比例及效價(jià)，天然植物藥物中的成分亦能促進(jìn)藥用真菌的生長或活性產(chǎn)物的產(chǎn)生，這樣可生產(chǎn)出包含多種活性成分且藥效較簡單，組方配伍更佳的新型發(fā)酵制劑；3.發(fā)酵技術(shù)有利于中藥有效成分的提取與分析將發(fā)酵技術(shù)運(yùn)用于天然植物藥物的提取，不僅使天然植物藥物提取率得到提高，有效成分得到純化，而且還可以通過采用一些羥化酶等特殊酶對中藥的有效成分做一些結(jié)構(gòu)改造，由于微生物生長主要消耗的是動植物的蛋白質(zhì)、糖等常規(guī)物質(zhì)，對有效成分有濃縮作用；4.發(fā)酵技術(shù)有利于改善天然植物藥物藥理和毒理作用用發(fā)酵法生產(chǎn)的天然植物藥物與未發(fā)酵的天然植物藥物相比，其有效成分在藥理、毒理等方面的作用發(fā)生了改變，經(jīng)微生物的分解作用使原來不易消化吸收的物質(zhì)變得易于吸收；5.發(fā)酵技術(shù)用于天然植物藥物炮制現(xiàn)代發(fā)酵工程證實(shí)微生物具有酯化，氧化，乙?；€原化，甲基化，羥基化和羰基化等多種能力，因此利用微生物來發(fā)酵炮制天然植物藥物實(shí)質(zhì)上是一種酶催化天然植物藥物有效成分改性的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)，微生物由于自身存在豐富的酶系而有著在溫和條件下分解轉(zhuǎn)化物質(zhì)的能力，通過微生物與天然植物藥物共發(fā)酵來進(jìn)行天然植物藥物炮制可以比一般的物理化學(xué)手段更大幅度地改變藥性，提高藥效，降低毒副作用，擴(kuò)大適應(yīng)癥。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。本發(fā)明采用黑曲霉和枯草芽孢桿菌由農(nóng)業(yè)部菌種保存中心提供。實(shí)施例l:通過不同微生物對蒲公英、黃芪粗提液進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)飼料添加劑。取黑曲霉和枯草芽孢桿菌分別在4'C下保藏；步驟一黑曲霉對蒲公英粗提液的生物轉(zhuǎn)化本實(shí)例主要是提高蒲公英有效成分總黃酮的含量，以提高畜禽的免疫力，促進(jìn)動物生長。(1)黑曲霉種子及發(fā)酵培養(yǎng)基的制備將黑曲霉接種于種子擴(kuò)大培養(yǎng)基中，放入35'C—4(TC的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，再接入種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基后置于35'C—4(TC的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，每300ml三角瓶裝量50ml液體培養(yǎng)基，得到培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌；黑曲霉的種子擴(kuò)大培養(yǎng)基為種子培養(yǎng)基玉米粉3%、麩皮2%、硫酸銨O.15%、磷酸二氫鉀0.2%、硫酸鎂0.05%、蒸餾水94.6%,pH為6.0。黑曲霉的種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖(蔗糖)6%、豆餅(酵母膏或尿素)1%、硫酸銨0.5%、氯化鈣O.3%、蒸餾水92.2%，PH為46.5。(2)蒲公英水提液的制備取一噸提取罐，則稱取200千克蒲公英，加入500千克水煮沸60分鐘，將蒲公英殘?jiān)^濾掉，減壓濃縮，則獲得蒲公英的粗提液；(3)黑曲霉對蒲公英粗提液的發(fā)酵將黑曲霉菌劑20%加以2:1:1比例的氨基乙酸、尿素、無機(jī)鹽20%及蒲公英水提液60%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，40。C下發(fā)酵3天，經(jīng)醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；步驟二枯草芽孢桿菌對蒲公英粗提液的生物轉(zhuǎn)化本實(shí)例主要是提高蒲公英有效成分總綠原酸的含量，以提高畜禽的免疫力，促進(jìn)動物生長。(1)枯草芽孢桿菌種子及發(fā)酵培養(yǎng)基的制備將枯草芽孢桿菌接種于斜面培養(yǎng)基中，放入35X:—4(TC的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，再接入種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基后置于35'C—4(TC的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，每300ml三角瓶裝量50ml液體培養(yǎng)基，得到培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌種；枯草芽孢桿菌斜面培養(yǎng)基成分為牛肉膏0.5g、蛋白胨1.0g、氯化鈉0.5g、水100ml、瓊脂2g，pH自然，于0.lmpa蒸汽滅菌30min?？莶菅挎邨U菌種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為蔗糖3%、蛋白胨1%、酵母膏0.5%、磷酸二氫鉀(KH2P04)0.45%，硫酸銨((NH4)2S04)0.25%、碳酸鈣0.2%，蒸餾水94.6%，pH7.0。(2)蒲公英水提液的制備取一噸提取罐，則稱取200千克蒲公英，加入5001水煮沸60分鐘，將蒲公英殘?jiān)^濾掉，減壓濃縮，則獲得蒲公英的粗提液。(3)枯草芽孢桿菌對蒲公英粗提液的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑20%加以2:1:1比例的氨基乙酸、尿素、無機(jī)鹽20%及蒲公英水提液60%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35—4(TC下發(fā)酵3天，醇沉，減壓，干燥，粉碎后得到粉末狀的成品。步驟三枯草芽孢桿菌對黃芪粗提液的生物轉(zhuǎn)化本實(shí)例主要是提高黃芪有效成分總黃酮的含量，以提高畜禽的免疫力，促進(jìn)動物生長。(1)黃芪水提液的制備取一噸提取罐，則稱取200千克黃芪，加入5001水煮沸60分鐘，將蒲公英殘?jiān)^濾掉，減壓濃縮，則獲得黃芪的粗提液。(2)枯草芽孢桿菌對黃芪粗提液的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑20%加以2:1:1.比例的氨基乙酸、尿素、無機(jī)鹽20%及黃芪水提液60%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35—4(TC下發(fā)酵3天，醇沉，減壓，干燥，粉碎后得到粉末狀的成品。步驟四生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)詞料添加劑成品制作將步驟一的干粉30%、步驟二的干粉30%、步驟三的干粉30%、甘草粉10%混合，過80目篩，得混合干粉成品，即本飼料添加劑成品。在使用時(shí)，根據(jù)不同畜禽按不同比例與飼料均勻拌和后喂養(yǎng)畜禽類動物按3%。比例；水產(chǎn)類動物按2%。比例。用于飼料制粒時(shí)，將本產(chǎn)品制粒專用型按1一3%。的比例加入詞料或預(yù)混料中進(jìn)行制粒。實(shí)施例2:通過不同微生物對蒲公英、黃芪固體發(fā)酵生產(chǎn)詞料添加劑步驟一黑曲霉對蒲公英固體發(fā)酵本實(shí)例主要是提高蒲公英有效成分總黃酮的含量，以提高畜禽的免疫力，促進(jìn)動物生長。(1)黑曲霉種子及種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基的制備與實(shí)施例l相同；(2)蒲公英的制備用超微粉碎機(jī)將蒲公英粉碎至80目，再用35%水浸泡，備用。(3)黑曲霉對蒲公英固體的發(fā)酵將黑曲霉菌劑20%加以2:1:1比例的氨基乙酸、尿素、無機(jī)鹽20%及蒲公英60%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35—4(TC下發(fā)酵5天，水提，醇沉，減壓，干燥，粉碎，得到粉末狀的成品。步驟二枯草芽孢桿菌對蒲公英固體發(fā)酵本實(shí)例主要是提高蒲公英有效成分總綠原酸的含量，以提高畜禽的免疫力，促進(jìn)動物生長。(1)枯草芽孢桿菌種子及種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基的制備與實(shí)施例1相同；(2)蒲公英的制備用超微粉碎機(jī)將蒲公英粉碎至80目，再用35%水浸泡，備用。(3)枯草芽孢桿菌對蒲公英粗提液的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑20%加以2:1:1比例的氨基乙酸、尿素、無機(jī)鹽20%及蒲公英60%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35—40'C下發(fā)酵5天，水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品。步驟三枯草芽孢桿菌對黃芪固體發(fā)酵本實(shí)例主要是提高黃芪有效成分總黃酮的含量，以提高畜禽的免疫力，促進(jìn)動物生長。(1)黃芪的制備用超微粉碎機(jī)將黃芪粉碎至80目，再用35%水浸泡，備用。(2)枯草芽孢桿菌對黃芪固體發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑20%加以2:1:1比例的氨基乙酸、尿素、無機(jī)鹽20%及黃芪60%均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35—4(TC下發(fā)酵5天，水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品。步驟四生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)飼料添加劑成品制作將步驟一的干粉30%、步驟二的干粉30%、步驟三的干粉30%、甘草粉10%一起混合，過80目篩，得混合干粉成品，即本飼料添加劑成品。在使用時(shí)，根據(jù)不同畜禽按不同比例與飼料均勻拌和后喂養(yǎng)畜禽類動物按3%0比例；水產(chǎn)類動物按2%。比例。用于飼料制粒時(shí)，將本產(chǎn)品制粒專用型按1一3。；的比例加入飼料或預(yù)混料中進(jìn)行制粒。指標(biāo)測定供試品溶液的制備及總黃酮含量的測定a.對照品溶液的配制精密稱取在120'C干燥至恒重的蘆丁對照品10mg,置100mL容量瓶中，精密吸取10mL0.85乙醇溶解，加蒸餾水稀釋至刻度(lmL=0.1mg戸丁)。b.供試品溶液的配制精密稱取本產(chǎn)品40g，加入1000mL水，熬制黃芪由黃色變?yōu)榘咨?，加?0%乙醇，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min，得到中藥濃縮液，備用.c.標(biāo)準(zhǔn)曲線精密量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0.0,0.5，1.0,2.0，3.0，4.0，5.0mL,分別置10mL容量瓶中，按順序分別加5%亞硝酸鈉溶液0.4mL搖勻，放置6min。加10%氯化鋁溶液0.4mL，搖勻，放置6min。再加4%氫氧化鈉溶液4mL，并加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15min。以標(biāo)準(zhǔn)溶液中O.OmL的標(biāo)準(zhǔn)液做空白，于波長510nm處測定各吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得回歸方程。供試品溶液的制備及綠原酸含量的測定a.對照品溶液的配制精密稱取在120"C干燥至恒重的綠原酸對照品10mg，置100mL容量瓶中，精密吸取10mL0.85乙醇溶解，加蒸餾水稀釋至刻度(lmL=0.1mg綠原酸)。b.綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制根據(jù)所配置的己知濃度剃度的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，在35。C與三氯化鐵發(fā)生特殊的顯色反應(yīng)，在755nm條件下用可見光分管光度計(jì)測定吸光度值之后，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。c.供試品溶液的配制將10g本產(chǎn)品加入水中，煮沸30min，并不斷加水補(bǔ)充，并定容測體積。取蒲公英的提取液，醇沉后，取8ml液體，在35'C的水浴鍋中加入0.8ml的FeCl3溶液，震蕩搖勻后，靜置60min，以755nm為檢測波長，用可見光分光光度計(jì)測定提取液的吸光度值。根據(jù)綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線得到本產(chǎn)品中綠原酸含量。飼料添加劑參數(shù)的對比表表1不同方法制備飼料添加劑綠原酸和總黃銅的參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>權(quán)利要求1.一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，用天然植物發(fā)酵技術(shù)制備飼料添加劑，其方法為第一步.菌種的保藏和生產(chǎn)(1)取黑曲霉和枯草芽孢桿菌分別在4℃下保藏；(2)將黑曲霉接種于種子擴(kuò)大培養(yǎng)基中，放入35℃-40℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，再接入種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基后置于35℃-40℃的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，每300ml三角瓶裝量50ml液體培養(yǎng)基，得到培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌；(3)將枯草芽孢桿菌接種于斜面培養(yǎng)基中，放入35℃-40℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，再接入種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基后置于35℃-40℃的恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3天，每300ml三角瓶裝量50ml液體培養(yǎng)基，得到培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌種；第二步.黑曲霉對蒲公英的液體或固體發(fā)酵蒲公英液體發(fā)酵A.蒲公英水提液的制備使用一噸提取罐，以1∶2-4的比例加入蒲公英和水煮沸50分鐘-70分鐘，將蒲公英殘?jiān)^濾掉，使用中藥專用減壓濃縮罐減壓濃縮，則獲得蒲公英的粗提液；B.黑曲霉對蒲公英粗提液的發(fā)酵將黑曲霉菌劑15％-25％加以2∶0.5-1.5∶0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15％-25％及蒲公英水提液55％-65％均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35-40℃下發(fā)酵2-4天，經(jīng)過醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；或?qū)ζ压⒐腆w發(fā)酵A.蒲公英的制備用超微粉碎機(jī)將蒲公英粉碎至80目，再用35％水浸泡，備用；B.黑曲霉對蒲公英固體的發(fā)酵將黑曲霉菌劑15％-25％加以2∶0.5-1.5∶0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15％-25％及蒲公英55％-65％均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35-40℃下發(fā)酵4天-6天，水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；第三步.枯草芽孢桿菌對蒲公英的液體或固體發(fā)酵蒲公英的液體發(fā)酵A.蒲公英水提液的制備使用一噸提取罐，以1∶2-4的比例加入蒲公英和水煮沸50分鐘-70分鐘，將蒲公英殘?jiān)^濾掉，減壓濃縮，則獲得蒲公英的粗提液；B.枯草芽孢桿菌對蒲公英粗提液的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15％-25％加以2∶0.5-1.5∶0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15％-25％及蒲公英水提液55％-65％均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35℃-40℃下發(fā)酵2-4天，經(jīng)醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；或?qū)ζ压⒐腆w發(fā)酵A.蒲公英的制備用超微粉碎機(jī)將蒲公英粉碎至80目，再用35％水浸泡，備用；B.枯草芽孢桿菌對蒲公英固體的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15％-25％加以2∶0.5-1.5∶0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15％-25％及蒲公英55％-65％均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35℃-40℃下發(fā)酵4-6天，經(jīng)水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎得到粉末狀的成品；第四步.枯草芽孢桿菌對黃芪的液體或固體發(fā)酵黃芪的液體發(fā)酵A.黃芪水提液的制備使用一噸提取罐，以1∶2-4的比例加入黃芪和水煮沸50分鐘-70分鐘，將黃芪殘?jiān)^濾掉，減壓濃縮，則獲得黃芪的粗提液；B.枯草芽孢桿菌對黃芪粗提液的發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15％-25％加以2∶0.5-1.5∶0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15％-25％及黃芪水提液55％-65％均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35℃-40℃下發(fā)酵2-4天，經(jīng)醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；或?qū)S芪固體發(fā)酵A.黃芪的制備用超微粉碎機(jī)將黃芪粉碎至80目，再用35％水浸泡，備用；B.枯草芽孢桿菌對黃芪固體發(fā)酵將枯草芽孢桿菌劑15％-25％加以2∶0.5-1.5∶0.5-1.5比例的碳源、氮源、無機(jī)鹽15％-25％及黃芪55％-65％均勻混合后置入通風(fēng)罐內(nèi)，35℃-40℃下發(fā)酵4天-6天，經(jīng)水提、醇沉、減壓、干燥、粉碎后得到粉末狀的成品；第五步.制備天然植物藥物飼料添加劑將步驟二的干粉25％-35％、步驟三的干粉25％-35％、步驟四的干粉25％-35％、甘草粉5％-15％混合，過80目篩，得混合干粉成品，即本飼料添加劑成品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的枯草芽孢桿菌種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為蔗糖2%一4%，蛋白胨0.5%-1.5%，酵母膏0.3%-0.6%，磷酸二氫鉀(KH2P04)0.45%,硫酸銨((NH丄S04)0.25%,碳酸鈣0.2%，蒸餾水93%-95%，pH值為6.5-7.5。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的黑曲霉的種子優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖5%-7%,豆餅0.5%_1.5%,硫酸銨0.4%-0.6%，氯化鈣0.2%_0.4%，蒸餾水91.5%-93.5%，PH值為46.5。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的碳源為氨基乙酸、葡萄糖、蔗糖等。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的氮源為尿素、蛋白胨等。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，所述的無機(jī)鹽為氯化鈣、硫酸鎂等。全文摘要本發(fā)明涉及一種基于天然植物活性成分生物轉(zhuǎn)化的飼料添加劑的制備方法，其特征在于，用天然植物發(fā)酵技術(shù)制備飼料添加劑，其方法為將黑曲霉和枯草芽孢桿菌接分別培養(yǎng)，將黑曲霉對蒲公英的液體或固體發(fā)酵后制得到粉末狀成品，將枯草芽孢桿菌對蒲公英的液體或固體發(fā)酵后制得到粉末狀成品，將枯草芽孢桿菌對黃芪的液體或固體發(fā)酵后制得到粉末狀成品，將三種干粉加甘草粉混合，目篩，得混合干粉成品，即為天然植物藥物飼料添加劑。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是能對天然植物藥物進(jìn)行轉(zhuǎn)化后提高總黃酮、總綠原酸的含量，降低天然植物藥物的毒副作用，在配合飼料中不添加抗生素、鎮(zhèn)靜劑和激素等有害添加劑前提下，加入本發(fā)明產(chǎn)品，豬、雞增重提高5-10％左右，飼料轉(zhuǎn)化率提高5-8％。文檔編號C12N1/14GK101112220SQ20071004527公開日2008年1月30日申請日期2007年8月27日優(yōu)先權(quán)日2007年8月27日發(fā)明者劉國慶申請人:劉國慶