專利名稱：粘柄絲膜菌菌劑制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種粘柄絲膜菌菌劑制作方法。

背景技術：
目前，外生菌根菌是一類與植物共生的大型真菌，是陸地生態(tài)系統(tǒng)中的重要組成部分，在生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)和能量流動中，擔當重要的角色。外生菌根真菌與樹木的根形成聯(lián)合體，擴大了植物根的吸收面積，增強了植物對礦質(zhì)元素、水分的吸收能力，已證明了菌根能促進植物對氮、磷、鉀、銅、鋅等元素和水分的吸收利用；另一方面，真菌也通過植物的根獲得碳水化合物及其它營養(yǎng)物質(zhì)，從而形成營養(yǎng)上的互利關系。菌根可以提高林木生長及抗病性，可應用于林木根部病害的生物防治。粘柄絲膜菌又名粘腿絲膜菌、趟子蘑、油蘑，可食，與松屬、云杉屬、櫟屬、鵝耳櫟屬、柳屬、榛屬的一些樹種形成外生菌根關系。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用粘柄絲膜菌菌絲體發(fā)酵液提高樟子松苗木生長及抗性。
為了達到上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是: (1)、粘柄絲膜菌子實體鑒別:子實體小至中等大，菌蓋扁半球形至平展，部分中央稍突，直徑4.0～9.5cm，紅褐色、黃褐色，中部色稍深，粘滑，邊緣平滑無條紋但有絲膜，菌褶較厚，密，初淡紫色或土黃色，后銹褐色，彎生或近直生，菌肉白色至淺黃色，菌柄圓柱形，向下漸粗，長4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部帶紫色，粘，具內(nèi)菌幕殘片，孢子橢圓形、扁球形，粗糙，淡銹色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌種分離、純化:采用組織分離法，無菌條件下，挑取菌柄與菌蓋之間的組織接種于改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板培養(yǎng)基上，待組織塊上長出菌絲，將菌絲轉(zhuǎn)接到改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，馬鈴薯150-200g，葡萄糖17-20g，瓊脂17-20g，柞樹皮5-10g，水1000ml， (3)、菌株鑒定:采用分子生物學鑒定方法，將子實體與分離得到的菌絲體分別進行rDNA ITS序列鑒定、比對，以證明分離得到的菌株來自于所分離的子實體， (4)菌絲體發(fā)酵液培養(yǎng):采用改良的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基配方，馬鈴薯180-250g，葡萄糖18-20g，磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素B1 10mg，水1000ml，接種量10％-15％、裝液量200-300mL/500mL、搖床轉(zhuǎn)速120-140r/min、溫度24℃-26℃、發(fā)酵天數(shù)15-20d， (5)菌劑制作:將上述發(fā)酵液無菌條件下粉碎，加入無菌水配成1(發(fā)酵液):5(無菌水)濃度。
本發(fā)明的優(yōu)點是: (1)、提高樟子松苗木生長及抗性水平。同時對云杉苗木、紅松苗木促生長及提高抗性水平效果顯著。
(2)、采用苗木截根-菌液浸根的方式，對紅皮云杉2年生換床苗接種粘柄絲膜菌菌絲體發(fā)酵液，130天苗木高生長提高24％、地徑生長提高29％、過氧化氫酶活性提高42％、根系活力提高11％。接種苗木無病害發(fā)生。

具體實施例方式 下面對本發(fā)明的實施例作進一步詳細描述。
實施例1、 (1)、粘柄絲膜菌子實體鑒別:子實體小至中等大，菌蓋扁半球形至平展，部分中央稍突，直徑4.0～9.5cm，紅褐色、黃褐色，中部色稍深，粘滑，邊緣平滑無條紋但有絲膜，菌褶較厚，密，初淡紫色或土黃色，后銹褐色，彎生或近直生，菌肉白色至淺黃色，菌柄圓柱形，向下漸粗，長4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部帶紫色，粘，具內(nèi)菌幕殘片，孢子橢圓形、扁球形，粗糙，淡銹色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌種分離、純化:采用組織分離法，無菌條件下，挑取菌柄與菌蓋之間的組織接種于改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板培養(yǎng)基上，待組織塊上長出菌絲，將菌絲轉(zhuǎn)接到改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，柞樹皮6g，水1000ml， (3)、菌株鑒定:采用分子生物學鑒定方法，將子實體與分離得到的菌絲體分別進行rDNA ITS序列鑒定、比對，以證明分離得到的菌株來自于所分離的子實體， (4)、菌絲體發(fā)酵液培養(yǎng):采用改良的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基配方，馬鈴薯200g，葡萄糖18g，磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素B1 10mg，水1000ml，接種量12.5％、裝液量300mL/500mL、搖床轉(zhuǎn)速140r/min、溫度26℃、發(fā)酵天數(shù)18d， (5)、菌劑制作:將上述發(fā)酵液無菌條件下粉碎，加入無菌水配成1(發(fā)酵液):5(無菌水)濃度。
實施例2: (1)、粘柄絲膜菌子實體鑒別:子實體小至中等大，菌蓋扁半球形至平展，部分中央稍突，直徑4.0～9.5cm，紅褐色、黃褐色，中部色稍深，粘滑，邊緣平滑無條紋但有絲膜，菌褶較厚，密，初淡紫色或土黃色，后銹褐色，彎生或近直生，菌肉白色至淺黃色，菌柄圓柱形，向下漸粗，長4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部帶紫色，粘，具內(nèi)菌幕殘片，孢子橢圓形、扁球形，粗糙，淡銹色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌種分離、純化:采用組織分離法，無菌條件下，挑取菌柄與菌蓋之間的組織接種于改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板培養(yǎng)基上，待組織塊上長出菌絲，將菌絲轉(zhuǎn)接到改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，馬鈴薯180g，葡萄糖20g，瓊脂18g，柞樹皮8g，水1000ml， (3)、菌株鑒定:采用分子生物學鑒定方法，將子實體與分離得到的菌絲體分別進行rDNA ITS序列鑒定、比對，以證明分離得到的菌株來自于所分離的子實體， (4)、菌絲體發(fā)酵液培養(yǎng):采用改良的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基配方，馬鈴薯180g，葡萄糖20g，磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素B1 10mg，水1000ml，接種量10％、裝液量250mL/500mL、搖床轉(zhuǎn)速125r/min、溫度23℃、發(fā)酵天數(shù)15d， (5)、菌劑制作:將上述發(fā)酵液無菌條件下粉碎，加入無菌水配成1(發(fā)酵液):5(無菌水)濃度。
實施例3、 (1)、粘柄絲膜菌子實體鑒別:子實體小至中等大，菌蓋扁半球形至平展，部分中央稍突，直徑4.0～9.5cm，紅褐色、黃褐色，中部色稍深，粘滑，邊緣平滑無條紋但有絲膜，菌褶較厚，密，初淡紫色或土黃色，后銹褐色，彎生或近直生，菌肉白色至淺黃色，菌柄圓柱形，向下漸粗，長4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部帶紫色，粘，具內(nèi)菌幕殘片，孢子橢圓形、扁球形，粗糙，淡銹色，(10～16)μm×(7～9)μm， (2)、菌種分離、純化:采用組織分離法，無菌條件下，挑取菌柄與菌蓋之間的組織接種于改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板培養(yǎng)基上，待組織塊上長出菌絲，將菌絲轉(zhuǎn)接到改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，馬鈴薯210g，葡萄糖17g，瓊脂17g，柞樹皮10g，水1000ml， (3)、菌株鑒定:采用分子生物學鑒定方法，將子實體與分離得到的菌絲體分別進行rDNA ITS序列鑒定、比對，以證明分離得到的菌株來自于所分離的子實體， (4)、菌絲體發(fā)酵液培養(yǎng):采用改良的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基配方，馬鈴薯150g，葡萄糖19g，磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素B110mg，水1000ml)，接種量15％、裝液量240mL/500mL、搖床轉(zhuǎn)速130r/min、溫度28℃、發(fā)酵天數(shù)20d， (5)、菌劑制作:將上述發(fā)酵液無菌條件下粉碎，加入無菌水配成1(發(fā)酵液):5(無菌水)濃度。
權利要求
1.一種粘柄絲膜菌菌劑制作方法，其特征在于:
(1)、粘柄絲膜菌子實體鑒別:子實體小至中等大，菌蓋扁半球形至平展，部分中央稍突，直徑4.0～9.5cm，紅褐色、黃褐色，中部色稍深，粘滑，邊緣平滑無條紋但有絲膜，菌褶較厚，密，初淡紫色或土黃色，后銹褐色，彎生或近直生，菌肉白色至淺黃色，菌柄圓柱形，向下漸粗，長4.8～9.0cm，粗2.5cm，污白色，下部帶紫色，粘，具內(nèi)菌幕殘片，孢子橢圓形、扁球形，粗糙，淡銹色，(10～16)μm×(7～9)μm，
(2)、菌種分離、純化:采用組織分離法，無菌條件下，挑取菌柄與菌蓋之間的組織接種于改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂平板培養(yǎng)基上，待組織塊上長出菌絲，將菌絲轉(zhuǎn)接到改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，改良的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，馬鈴薯150-200g，葡萄糖17-20g，瓊脂17-20g，柞樹皮5-10g，水1000ml，
(3)、菌株鑒定:采用分子生物學鑒定方法，將子實體與分離得到的菌絲體分別進行rDNA ITS序列鑒定、比對，以證明分離得到的菌株來自于所分離的子實體，
(4)菌絲體發(fā)酵液培養(yǎng):采用改良的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基配方，馬鈴薯180-250g，葡萄糖18-20g，磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g、維生素B110mg，水1000ml，接種量10％-15％、裝液量200-300mL/500mL、搖床轉(zhuǎn)速120-140r/min、溫度24℃-26℃、發(fā)酵天數(shù)15-20d，
(5)菌劑制作:將上述發(fā)酵液無菌條件下粉碎，加入無菌水配成1(發(fā)酵液):5(無菌水)濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種粘柄絲膜菌菌劑制作方法，本發(fā)明采用的工藝是粘柄絲膜菌子實體鑒別，菌種分離、純化，菌株鑒定，菌絲體發(fā)酵液培養(yǎng)，菌劑制作。本發(fā)明提高樟子松苗木生長及抗性水平。同時對云杉苗木、紅松苗木促生長及提高抗性水平效果顯著。采用苗木截根-菌液浸根的方式，對紅皮云杉2年生換床苗接種粘柄絲膜菌菌絲體發(fā)酵液，130天苗木高生長提高24％、地徑生長提高29％、過氧化氫酶活性提高42％、根系活力提高11％。接種苗木無病害發(fā)生。
文檔編號C12N1/14GK101376874SQ200710072709
公開日2009年3月4日 申請日期2007年8月28日 優(yōu)先權日2007年8月28日
發(fā)明者宋瑞清, 余江勇 申請人:東北林業(yè)大學, 宋瑞清, 余江勇