專利名稱：一種含益生元的液態(tài)奶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種液態(tài)奶，特別是涉及一種含有活性益生元的液態(tài)奶。
背景技術(shù)：
乳是營(yíng)養(yǎng)最全面的天然食品，是哺乳動(dòng)物出生后最初食用的食物，其中含有幼兒或幼畜所需的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物和礦物質(zhì)等。對(duì)新生的牛犢，如果每天喂奶，那么50天后體重會(huì)增加一倍；而對(duì)于嬰兒來(lái)說(shuō)，100天后其體重也可增加1倍左右。隨著人們對(duì)健康的認(rèn)識(shí)，飲奶肯定會(huì)越來(lái)越重視，在其他的國(guó)家已經(jīng)成為一種固定的飲食文化。在眾多食品中，乳的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值無(wú)可非議。在我國(guó)市場(chǎng)上，乳產(chǎn)品的發(fā)展迅速，年增長(zhǎng)率在30.0％左右。特別是高溫瞬時(shí)滅菌和無(wú)菌包裝在乳產(chǎn)品上的應(yīng)用，最大程度的保留了牛乳的營(yíng)養(yǎng)成分，延長(zhǎng)了產(chǎn)品的保質(zhì)期，擴(kuò)大了產(chǎn)品的銷售范圍，從而使乳制品以其口味多樣性、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高和飲用方便等特點(diǎn)，在食品市場(chǎng)中占據(jù)了重要位置。
人體內(nèi)雙歧桿菌的增殖對(duì)人大有裨益，然而提高人體內(nèi)雙歧桿菌的數(shù)量迄今為止仍是一個(gè)技術(shù)難題。這是因?yàn)殡p歧桿菌是厭氧型菌群，在空氣中很難存活，再加上胃酸的酸性很強(qiáng)，雙歧桿菌經(jīng)過(guò)胃時(shí)絕大部分都被殺死了，只有極少部分可到達(dá)腸內(nèi)，從而使其對(duì)人體的有益功效很難體現(xiàn)出來(lái)。低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖不能被人體的胃和小腸所消化吸收，而直接進(jìn)入大腸，為雙歧桿菌優(yōu)先利用，而腸內(nèi)的有害菌很難利用它們。雙歧桿菌以低聚糖為養(yǎng)分得到大量繁殖，增加了活力，逐漸占據(jù)優(yōu)勢(shì)，抑制了有害菌的生長(zhǎng)，促使微生態(tài)向良性調(diào)整，有利于人的身體健康。
低聚異麥芽糖(IMO)是淀粉糖的一種，主要成分是由α-1，6-糖苷鍵結(jié)合的異麥芽糖(IG2)、潘糖(P)、異麥芽三糖(IG3)及四糖以上(GN)組合成的功能性低聚糖。按形態(tài)可分為低聚異麥芽糖漿和低聚異麥芽糖粉兩種。糖漿為無(wú)色或淺黃色，透明的粘稠液體，甜味柔和，無(wú)異味，無(wú)正常視力可見(jiàn)雜質(zhì)。糖粉為白色無(wú)定形粉末，甜味柔和，無(wú)異味，無(wú)正常視力可見(jiàn)雜質(zhì)。不同純度低聚異麥芽糖(IMO)的基本組成如表1所示。
表1不同純度低聚異麥芽糖(IMO)的理化指標(biāo)


低聚木糖又稱木寡糖，是由2-7個(gè)木糖分子以-1，4糖苷鍵結(jié)合而成的功能性聚合糖，為無(wú)色至淺棕色液體或白色固體，相對(duì)甜度約為40％，其理化指標(biāo)、微生物指標(biāo)分別如表2和表3。
表2不同純度低聚木糖的理化指標(biāo)

表3不同純度低聚木糖的微生物指標(biāo)

低聚果糖(簡(jiǎn)稱FOS)，是一種以不超過(guò)4個(gè)果糖為鏈節(jié)，并以葡萄糖為鏈的端基的蔗果低聚糖，又名果寡糖和果糖低聚糖。低聚果糖通常作為果糖基單元以β(2-1)鍵連接在蔗糖(GF)分子上的果糖寡聚物的通稱，即GFn(n＝1-9)，主要包括蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)。按低聚果糖總含量分為G型和P型低聚果糖總含量不小于50％者為G型；低聚果糖總含量不小于90％者為P型。其理化指標(biāo)、微生物指標(biāo)分別如表4和表5。
表4不同純度低聚果糖的理化指標(biāo)、微生物指標(biāo)

表5不同純度低聚果糖的微生物指標(biāo)

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能促進(jìn)體內(nèi)有益菌——雙歧桿菌增殖的含益生元的液態(tài)奶。
本發(fā)明所提供的含益生元的液態(tài)奶，每100g含有如下重量的組分牛奶50-95g，低聚異麥芽糖0.01-10.0g，低聚木糖0.01-0.7g，低聚果糖0.01-5.0g，
穩(wěn)定劑0.1-1.0g，加水至100g。
其中，所述低聚異麥芽糖的添加量是以50％純度的低聚異麥芽糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚木糖的添加量是以70％純度的低聚木糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚果糖的添加量是以50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的。穩(wěn)定劑為乳化劑或增稠劑，或由乳化劑和增稠劑兩者組合而成；其中，所述乳化劑可選自蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、分子蒸餾單甘酯和聚甘油酯中的一種或幾種的組合；增稠劑可選自卡拉膠、瓜兒豆膠、羧甲基纖維素鈉、明膠、微晶纖維素、結(jié)冷膠、黃原膠、海藻酸丙二醇酯、魔芋膠、瓊脂、刺槐豆膠和果膠中的一種或幾種的組合。優(yōu)選的，穩(wěn)定劑包括分子蒸餾單甘酯、聚甘油酯、卡拉膠和黃原膠，這幾種組分可以以任意比混合，只需要使穩(wěn)定劑用量達(dá)到要求即可。
雙歧桿菌發(fā)酵低聚糖能產(chǎn)生短鏈脂肪酸(主要是醋酸和乳酸)和一些抗菌素物質(zhì)，從而抑制外源致病菌和腸內(nèi)固有腐敗菌的生長(zhǎng)繁殖。通過(guò)大量篩選各種配比，本發(fā)明提供的含有活性益生元液態(tài)奶中添加有一定含量的低聚異麥芽糖、低聚木糖和低聚果糖，與現(xiàn)有同類產(chǎn)品相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和有益的效果1)本發(fā)明中的低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖和牛奶、腸道中所含有的各種有益菌(比如雙歧桿菌、乳酸菌等)相互協(xié)調(diào)，相得益彰，可以更好的發(fā)揮有益菌群的作用；2)可使體內(nèi)多種有益菌(特別是雙歧桿菌)增殖，進(jìn)而起到改善人體腸胃環(huán)境、促進(jìn)腸道蠕動(dòng)、減少有毒發(fā)酵產(chǎn)物及有害細(xì)菌、防止便秘、保護(hù)肝臟功能、降低血清膽固醇、降低血壓、提高人體免疫力、促進(jìn)B族維生素合成、幫助鈣、鐵、鋅等營(yíng)養(yǎng)元素吸收的功效。人體試驗(yàn)表明攝入功能低聚糖可促使雙歧桿菌增殖，抑制有害細(xì)菌，特別產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌的生長(zhǎng)，每天攝入一定量低聚糖持續(xù)數(shù)周后，腸內(nèi)雙歧桿菌活菌增加7-8倍，而產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌總數(shù)減少了81％。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。以下實(shí)施例中百分含量如無(wú)特殊說(shuō)明均為質(zhì)量百分含量，所用的方法如無(wú)特殊說(shuō)明均為常規(guī)方法。液態(tài)奶配方中低聚異麥芽糖的添加量是以50％純度的低聚異麥芽糖(IMO)為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的，低聚木糖的添加量是以70％純度的低聚木糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的，低聚果糖(FOS)的添加量是以50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的，其它純度的低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖可以按照含量的不同進(jìn)行折算。
實(shí)施例1、含益生元液態(tài)奶的制備配方原料原料要求 添加量牛奶脂肪≥3.3％，蛋白質(zhì)≥2.9％50％非脂乳固體≥8.1％低聚異麥芽糖(IMO) 2％低聚木糖 0.3％低聚果糖(FOS) 2％穩(wěn)定劑0.2％水45.5％其中，穩(wěn)定劑的配方(占液態(tài)奶的百分含量)為分子蒸餾單甘酯0.13％，聚甘油酯0.04％，卡拉膠0.01％，黃原膠0.02％。所述低聚異麥芽糖是以IMO-50型糖粉的低聚異麥芽糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚木糖是以70％純度的低聚木糖粉為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚果糖是以G型糖漿，50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的。
制備過(guò)程工藝的具體操作如下1.牛奶制備工藝牛奶進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后要求各項(xiàng)指標(biāo)符合生產(chǎn)要求，標(biāo)準(zhǔn)化后脂肪為3.4％-4.1％，蛋白質(zhì)為2.95％-3.45％。原料奶要求4℃以下冷藏。使用的原奶的具體要求如下a.感官指標(biāo)色澤呈均勻一致的乳白色或稍帶黃色。
滋氣味具有新鮮牛乳固有的香味，無(wú)其它異味。
組織狀態(tài)呈均勻的膠態(tài)流體，無(wú)沉淀，無(wú)凝塊，無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)和其它異物。
b.理化指標(biāo)相對(duì)密度d2041.028-1.032脂肪，％≥3.2蛋白質(zhì)，％ ≥2.90非脂乳固體，％ ≥8.3酸度，0T ≤18.0雜質(zhì)度，mg/kg ≤4.0c.衛(wèi)生指標(biāo)汞(以Hg計(jì))，mg/kg ≤0.01砷(以As計(jì))，mg/kg ≤0.2
鉛(以Pb計(jì))，mg/kg≤0.05鉻(以Cr6+計(jì))，mg/kg ≤0.3硝酸鹽(以NaNO3計(jì))，mg/kg≤8.0亞硝酸鹽(以NaNO2計(jì))，mg/kg ≤0.2六六六，mg/kg≤0.05滴滴涕，mg/kg≤0.02黃曲霉毒素M1，μg/kg≤0.2抗生素 不得檢出d.微生物指標(biāo)菌落總數(shù)，cfu/ml ≤500000e.摻假項(xiàng)目不得在生鮮牛乳中摻入堿性物質(zhì)、淀粉、食鹽、蔗糖等非乳成分2.配料在化糖鍋中加入適量的牛奶，緩慢升溫到40℃-45℃，將乳化增稠劑、低聚異麥芽糖、低聚木糖、低聚果糖加入，保持原料分散均勻一致，然后升溫到70℃，在此溫度下保持15分鐘-20分鐘，使原料充分溶解后，降溫到20℃后打入混合罐，混合15分鐘。
3.定容用少量的原料奶將化糖鍋中的原料以及管路中殘留的原料全部頂入混合罐中，進(jìn)行定容。
4.預(yù)熱通過(guò)板式換熱器將混合物料預(yù)熱到60℃-75℃。
5.均質(zhì)將混合物料均質(zhì)，均質(zhì)壓力為22-25MPa，一級(jí)均質(zhì)壓力為12-14MPa，二級(jí)均質(zhì)壓力為8-10MPa，均質(zhì)溫度為55℃-75℃。
6.預(yù)殺菌將均質(zhì)后的物料預(yù)殺菌，殺菌溫度應(yīng)控制在85℃-90℃/15秒。
7.閃蒸濃縮將物料在閃蒸罐中閃蒸濃縮，閃蒸罐真空度控制在-0.055Mpa--0.085Mpa，閃蒸濃縮出的水分占物料總重的0.6-0.8％，物料出閃蒸溫度為60℃；8.冷卻將閃蒸后的物料降溫到8℃以下。
9.超高溫瞬時(shí)滅菌將經(jīng)閃蒸濃縮、冷卻后的物料在137℃±2℃下滅菌4秒。
10.無(wú)菌灌裝，得到產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果如下項(xiàng)目指標(biāo)總固體 7.2％
乳糖2.1％蛋白質(zhì) 1.00％脂肪1.50％實(shí)施例2、含益生元液態(tài)奶的制備配方原料原料要求 添加量牛奶脂肪≥3.3％，蛋白質(zhì)≥2.9％80％非脂乳固體≥8.1％低聚異麥芽糖(IMO) 5％低聚木糖 0.4％低聚果糖(FOS) 3％穩(wěn)定劑0.2％水11.4％其中，穩(wěn)定劑的配方(占液態(tài)奶的百分含量)為分子蒸餾單甘酯0.1％；聚甘油酯0.06％；卡拉膠0.02％；黃原膠0.02％。所述低聚異麥芽糖是以IMO-50型糖粉的低聚異麥芽糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚木糖是以70％純度的低聚木糖粉為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚果糖是以G型糖漿，50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的。
制備過(guò)程與實(shí)施例1相同，產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果如下項(xiàng)目指標(biāo)總固體 11.3％乳糖4.2％蛋白質(zhì) 2.73％脂肪3.20％實(shí)施例3、含益生元液態(tài)奶的制備配方原料原料要求 添加量牛奶脂肪≥3.3％，蛋白質(zhì)≥2.9％70％非脂乳固體≥8.1％低聚異麥芽糖(IMO) 7％低聚木糖 0.6％低聚果糖(FOS) 4％穩(wěn)定劑0.17％水18.23％其中，穩(wěn)定劑的配方(占液態(tài)奶的百分含量)為分子蒸餾單甘酯0.1％；聚甘油酯0.04％；卡拉膠0.01％；黃原膠0.02％。所述低聚異麥芽糖是以IMO-50型糖粉的低聚異麥芽糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚木糖是以70％純度的低聚木糖粉為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚果糖是以G型糖漿，50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的。
制備過(guò)程與實(shí)施例1相同，產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果如下項(xiàng)目指標(biāo)總固體 10.3％乳糖4.0％蛋白質(zhì) 2.67％脂肪3.00％實(shí)施例4、含益生元液態(tài)奶的制備配方原料原料要求添加量牛奶脂肪≥3.3％，蛋白質(zhì)≥2.9％ 90％非脂乳固體≥8.1％低聚異麥芽糖(IMO) 3％低聚木糖0.7％低聚果糖(FOS) 5％穩(wěn)定劑 0.2％水 1.1％其中，穩(wěn)定劑的配方(占液態(tài)奶的百分含量)為分子蒸餾單甘酯0.13％；聚甘油酯0.04％；卡拉膠0.015％；黃原膠0.015％。所述低聚異麥芽糖是以IMO-50型糖粉的低聚異麥芽糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚木糖是以70％純度的低聚木糖粉為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚果糖是以G型糖漿，50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的。
制備過(guò)程與實(shí)施例1相同，產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果如下項(xiàng)目指標(biāo)總固體 12.60％乳糖4.6％蛋白質(zhì) 2.85％脂肪3.41％實(shí)施例5、含益生元液態(tài)奶的制備配方原料原料要求添加量牛奶脂肪≥3.3％，蛋白質(zhì)≥2.9％ 55％非脂乳固體≥8.1％低聚異麥芽糖(IMO) 9％
低聚木糖0.6％低聚果糖(FOS) 4％穩(wěn)定劑 0.2％水 31.2％其中，穩(wěn)定劑的配方(占液態(tài)奶的百分含量)為分子蒸餾單甘酯0.1％；聚甘油酯0.06％；卡拉膠0.02％；黃原膠0.02％。所述低聚異麥芽糖是以IMO-50型糖粉的低聚異麥芽糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚木糖是以70％純度的低聚木糖粉為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚果糖是以G型糖漿，50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的。
制備過(guò)程與實(shí)施例1相同，產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果如下項(xiàng)目指標(biāo)總固體 7.6％乳糖2.4％蛋白質(zhì) 1.10％脂肪1.31％實(shí)施例6、含益生元液態(tài)奶的制備配方原料原料要求添加量牛奶脂肪≥3.3％，蛋白質(zhì)≥2.9％ 57％非脂乳固體≥8.1％低聚異麥芽糖(IMO) 9％低聚木糖0.1％低聚果糖(FOS) 0.9％穩(wěn)定劑 0.3％水 32.7％其中，穩(wěn)定劑的配方(占液態(tài)奶的百分含量)為分子蒸餾單甘酯0.15％；聚甘油酯0.08％；卡拉膠0.04％；黃原膠0.03％。其中，低聚異麥芽糖是50％純度白色粉末，低聚木糖是70％純度白色粉末，低聚果糖(FOS)是50％純度G型糖漿。
制備過(guò)程與實(shí)施例1相同，得到含益生元的液態(tài)奶。
下述實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用百分比含量如無(wú)特別說(shuō)明均為質(zhì)量百分含量，下述實(shí)施例中低聚糖特指低聚異麥芽糖(IMO)、低聚木糖、低聚果糖(FOS)的混合物。
實(shí)施例7、低聚糖調(diào)節(jié)腸道菌群功能的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)受試樣品低聚異麥芽糖(IMO)、低聚木糖、低聚果糖(FOS)，低聚異麥芽糖是50％純度白色粉末，低聚木糖是70％純度白色粉末，低聚果糖(FOS)是50％純度糖漿，陰涼、干燥、通風(fēng)處保存。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所(許可證號(hào)SCXK-(京)2004-0001)的18-22g，BALB/C健康清潔級(jí)雄性小鼠48只，分為四組，每組12只。
劑量低聚異麥芽糖(IMO)、低聚木糖、低聚果糖(FOS)的比例為9∶0.1∶0.9，推薦量為成人(按60kg體重計(jì))每日10g、20g和30g。分別依照三個(gè)推薦劑量的10倍設(shè)置小鼠實(shí)驗(yàn)劑量，即每日劑量分別為1.67g/kgBW(低劑量組)、3.33g/kgBW(中劑量組)、5.00g/kgBW(高劑量組)。受試物用水(已消毒)配制，經(jīng)口每日一次給予小鼠受試物，連續(xù)灌胃14天后測(cè)試各項(xiàng)指標(biāo)。小鼠灌胃體積為0.10mL/10g鼠重。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組(0g/kgBW)，用水(已消毒)代替受試物，每日灌胃體積與各受試物組相同。
給予受試樣品前，無(wú)菌取小鼠糞便數(shù)粒，放到無(wú)菌的器皿中，用分析天平稱量，記錄重量。然后，在潔凈工作臺(tái)中，無(wú)菌操作，加入稀釋液(二次蒸餾水)，稀釋至10-2，充分振蕩混勻，依10倍系列稀釋至10-8，每種測(cè)定菌選擇合適的稀釋度，接種平板，檢測(cè)腸道五種典型菌(雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌)的菌群數(shù)量。培養(yǎng)基、培養(yǎng)和鑒定方法如表6所示，然后計(jì)算出每克濕便中的菌落數(shù)(cfu/g)，除產(chǎn)氣莢膜梭菌外，均取對(duì)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。在最后一次給予受試樣品之后24h，再次檢測(cè)上述腸道五種典型菌的菌群數(shù)量，方法步驟同上。
數(shù)據(jù)處理用SPSS軟件對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜F0.05，結(jié)論各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍為達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
結(jié)果判定最后，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)的判定標(biāo)準(zhǔn)，比較實(shí)驗(yàn)前后自身與組間雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量變化情況，實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性，或?qū)嶒?yàn)后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較差異有顯著性、且實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性，符合以下一項(xiàng)，可以判定該組受試樣品動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性(1)糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸桿菌、腸球菌無(wú)明顯變化。(2)糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸桿菌和/或腸球菌明顯增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌/乳桿菌增加的幅度。
低聚糖對(duì)小鼠體重影響的檢測(cè)結(jié)果如表7所示，小鼠的初始體重和實(shí)驗(yàn)后體重在各劑量組與0g/kgBW組比較，差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，表明低聚糖對(duì)小鼠的體重?zé)o不良影響。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中腸桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表8所示，給受試物前各劑量組與0g/kgBW組間比較，腸桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)，而給受試物14天后與0g/kgBW組比較，5.00g/kgBW組腸桿菌的數(shù)量減少，有顯著差異(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)前后各劑量組自身比較腸桿菌數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中腸球菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表9所示，給受試前各劑量組與0g/kgBW組間比較，腸球菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，給受試物14天后與0g/kgBW組比較，5.00g/kgBW組腸球菌的數(shù)量減少，有顯著差異(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)前后各劑量組自身比較腸球菌均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中乳桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表10所示，給受試物前、后各劑量組與0g/kgBW組間比較，乳桿菌的數(shù)量無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。給受試物前、后各劑量組自身比較，乳桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中產(chǎn)氣莢膜梭菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表11所示，給受試前、后各劑量組與0g/kgBW組間比較，產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。給受試物前后各組自身比較，產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中雙歧桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表12和表13所示，由表12可知，給受試前、后各劑量組與0g/kgBW組間比較，雙歧桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。給受試物前后0g/kgBW、1.67g/kgBW組經(jīng)自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；3.33g/kgBW組自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加，有顯著性差異(P＜0.05)；5.00g/kgBW實(shí)驗(yàn)組自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加，有顯著性差異(P＜0.01)。由表13可知，給受試前、后各劑量組與0g/kgBW組間比較，雙歧桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。給受試物前后3.33g/kgBW組自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加1.4倍；5.00g/kgBW組自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加2.0倍。
綜上所述，小鼠經(jīng)口給予低聚糖14天前后，3.33g/kgBW組自身比較，小鼠腸內(nèi)雙歧桿菌的數(shù)量增加1.4倍，有顯著性差異(P＜0.05)；5.00g/kgBW組自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加2.0倍，有顯著性差異(P＜0.01)。小鼠經(jīng)口給予低聚糖14天后，與0g/kgBW組比較，5.00g/kgBW組腸桿菌數(shù)量減少(P＜0.05)；腸球菌數(shù)量顯著減少(P＜0.05)。給低聚糖前后，各組小鼠產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量均無(wú)顯著變化。低聚糖對(duì)小鼠體重?zé)o不良影響。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低聚糖調(diào)節(jié)腸道菌群功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，證明低聚糖能夠明顯增殖腸道雙歧桿菌。
表6腸道菌群檢驗(yàn)用培養(yǎng)基、培養(yǎng)和鑒定方法

表7實(shí)驗(yàn)前后各組小鼠的體重(x±SD)

表8小鼠腸道中腸桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)

a與0g/kgBW組比較有顯著差異表9小鼠腸道中腸球菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)


a與0g/kgBW組比較有顯著差異表10小鼠乳桿菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)

表11小鼠產(chǎn)氣莢膜梭菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(cfu/g，x±SD)

表12小鼠腸道中雙歧桿菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)

b與本組給受試物前比較有顯著差異表13小鼠腸道中雙歧桿菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(×108cfu/g，x±SD)

實(shí)施例8、低聚糖調(diào)節(jié)腸道菌群功能的人體實(shí)驗(yàn)受試樣品低聚異麥芽糖(IMO)、低聚木糖、低聚果糖(FOS)，低聚異麥芽糖是50％純度白色粉末，低聚木糖是70％純度白色粉末，低聚果糖(FOS)是50％純度糖漿，陰涼、干燥、通風(fēng)處保存。
受試人群經(jīng)臨床體檢指標(biāo)全部正常的成年人60名，男女各半。受試者中部分為便秘者。
腸道細(xì)菌培養(yǎng)方法如下雙歧桿菌BBL瓊脂培養(yǎng)基(青島海博生物技術(shù)有限公司)，37℃，48-72小時(shí)厭氧培養(yǎng)；乳桿菌LBs瓊脂培養(yǎng)基(青島海博生物技術(shù)有限公司)，37℃，48小時(shí)培養(yǎng)；腸桿菌EMB瓊脂培養(yǎng)基(青島海博生物技術(shù)有限公司)，37℃，24-48小時(shí)培養(yǎng)；腸球菌疊氮鈉-結(jié)晶紫-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基(青島海博生物技術(shù)有限公司)，37℃，24-48小時(shí)培養(yǎng)；擬桿菌Bd瓊脂培養(yǎng)基(青島海博生物技術(shù)有限公司)，37℃，24小時(shí)厭氧培養(yǎng)；產(chǎn)氣莢膜梭菌TSC瓊脂培養(yǎng)基(青島海博生物技術(shù)有限公司)，37℃，24小時(shí)厭氧培養(yǎng)。
隨機(jī)抽取上述60例受試者，分為3組(低、中、高劑量組)，每組20人，男女各半。在試食受試樣品之前，無(wú)菌采取受試者糞便，放到無(wú)菌的器皿中，用分析天平稱量，記錄重量。然后，在潔凈工作臺(tái)中，無(wú)菌操作，加入稀釋液(二次蒸餾水)，稀釋至10-2，充分振蕩混勻，依10倍系列稀釋至10-8，每種測(cè)定菌選擇合適的稀釋度，接種平板，檢驗(yàn)上述六種腸道菌群數(shù)(雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌、腸球菌、擬桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌)。然后，低、中、高劑量組受試者每日分別服用5g、10g、15g，低聚異麥芽糖(IMO)、低聚木糖、低聚果糖(FOS)的比例為9∶0.1∶0.9，連續(xù)14d。分別于服用受試物3d、7d、10d、14d，及停服后3d、7d、14d時(shí)，無(wú)菌采取受試者糞便檢測(cè)并用相同方法檢測(cè)上述六種腸道菌群數(shù)。觀察、記錄受試者食用前后自覺(jué)癥狀。
數(shù)據(jù)處理方法與實(shí)施例6相同。
每日服用5g受試物(低劑量組)，服用14d，腸道菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果如表14所示，5g/d實(shí)驗(yàn)組的腸桿菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌服用前、后數(shù)量無(wú)顯著變化(p＞0.05)；擬桿菌在服用后第10d和停服后第3d較服用前數(shù)量增加，差異有顯著性(p＜0.05；雙歧桿菌在服用后第7d、第10d數(shù)量增加，差異有顯著性(p＜0.05)；乳桿菌在停服后第7d數(shù)量降低，差異有極顯著性(p＜0.01)。
每日服用受試物10g(中劑量組)，服用14d，腸道菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果如表15所示，10g/d實(shí)驗(yàn)組的腸肝菌、乳桿菌數(shù)量無(wú)明顯差異(p＞0.05)；腸球菌在停服后第14d數(shù)量增加，差異有顯著性(p＜0.05)；擬桿菌在服用后第10d及停服后第3d數(shù)量增加，其中，服用后第10d差異具極顯著性(p＜0.01)，停服后第3d差異具顯著性(p＜0.05)；產(chǎn)氣莢膜梭菌在服用后第7d、第10d、第14d數(shù)量下降，其中第10d差異具極顯著性(p＜0.01)，第7d、第14d差異具顯著性(p＜0.05)；雙歧桿菌在服用后第7d、第10d及停服后第7d數(shù)量增加，服用后第10d差異具極顯著性(p＜0.01)，服用后第7d及停服后第7d差異具顯著性(p＜0.05)。
每日服用受試物15g(高劑量組)，服用14d，腸道菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果如表16所示，15g/d實(shí)驗(yàn)組的腸球菌、乳桿菌數(shù)量無(wú)顯著的變化(p＞0.05)；腸桿菌在服用后第14d及停服后第3d數(shù)量減少，差異有顯著性(p＜0.05)；擬桿菌在服用后第7d、第14d停服后第7d、14d數(shù)量減少，其中服用后第7d和停服后第14d差異有極顯著性(p＜0.01)，服用后第14d和停服后第7d差異有顯著性(p＜0.05)；產(chǎn)氣莢膜俊菌在服用后第7d和第10d數(shù)量下降，其中第10d差異有極顯著性(p＜0.01)，第7d差異有顯著性(p＜0.05)；雙歧桿菌在服用后第3d、第10d數(shù)量增加，差異均具極顯著性(p＜0.01)。
綜上所述，以5g/d、10g/d、15g/d劑量的低聚糖連續(xù)服用14d，雙歧桿菌有明顯增加。5g/d實(shí)驗(yàn)組經(jīng)自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加10倍(P＜0.05，差異有顯著性)；10g/d實(shí)驗(yàn)組和15g/d實(shí)驗(yàn)組經(jīng)自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加10倍，差異具極顯著性(P＜0.01)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量組的雙歧桿菌數(shù)量都有明顯提高，進(jìn)一步證明低聚糖能夠明顯促進(jìn)腸道內(nèi)雙歧桿菌增殖。
實(shí)驗(yàn)期間每天記錄受試者的主訴癥狀，結(jié)果受試者服用受試物-低聚異麥芽糖(IMO)、低聚木糖、低聚果糖(FOS)后，排便次數(shù)規(guī)律，糞便性狀正常，排便通暢，飲食、睡眠及精神狀態(tài)均保持良好，證明低聚糖對(duì)人無(wú)不良影響，服用安全。
表14服用低聚糖人體腸道菌群動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果I(5g/d)(logCFU/g，x±S，n＝10)


*表示服用受試物后與服用受試物前比較p＜0.05，**表示服用受試物后與服用受試物前比較p＜0.01。
表15服用低聚糖人體腸道菌群動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果II(10g/d)(logCFU/g，x±S，n＝10)

*表示服用受試物后與服用受試物前比較p＜0.05，**表示服用受試物后與服用受試物前比較p＜0.01。
表16服用低聚糖人體腸道菌群動(dòng)態(tài)觀察結(jié)果III(15g/d)(logCFU/g，x±S，n＝10)

*表示服用受試物后與服用受試物前比較p＜0.05，**表示服用受試物后與服用受試物前比較p＜0.01。
實(shí)施例9、含益生元液態(tài)奶與市售純牛奶調(diào)節(jié)腸道菌群功能的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)受試樣品實(shí)施例6所得含益生元的液態(tài)奶作為實(shí)驗(yàn)組材料，市售純牛奶作為空白對(duì)照組材料。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所(許可證號(hào)SCXK-(京)2004-0001)的18-22g，BALB/C健康清潔級(jí)雄性小鼠24只，分為兩組，每組12只。
劑量將含益生元的液態(tài)奶濃縮至原重量的五分之一，推薦量為成人(按60kg體重計(jì))每日20g。分別依照推薦劑量的10倍設(shè)置小鼠實(shí)驗(yàn)劑量，即每日劑量3.33g/kgBW。受試物用水(已消毒)配制，經(jīng)口每日一次給予小鼠受試物，連續(xù)灌胃14天后測(cè)試各項(xiàng)指標(biāo)。小鼠灌胃體積為0.10mL/10g鼠重。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組(0g/kgBW)，用市售純牛奶(已消毒)代替受試物，每日灌胃體積與受試物組相同。
數(shù)據(jù)處理用SPSS軟件對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊，計(jì)算F值，F(xiàn)值＜F0.05，結(jié)論各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；對(duì)非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍為達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
結(jié)果判定最后，根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)的判定標(biāo)準(zhǔn)，比較實(shí)驗(yàn)前后自身與組間雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量變化情況，實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性，或?qū)嶒?yàn)后實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組組間比較差異有顯著性、且實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前后自身比較差異有顯著性，符合以下一項(xiàng)，可以判定該組受試樣品動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性(1)糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸桿菌、腸球菌無(wú)明顯變化。(2)糞便中雙歧桿菌和/或乳桿菌明顯增加，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或不增加，腸桿菌和/或腸球菌明顯增加，但增加的幅度低于雙歧桿菌/乳桿菌增加的幅度。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中腸桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表17所示，給受試物前與0g/kgBW組間比較，腸桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)，給受試物14天后與0g/kgBW組比較，3.33g/kgBW組腸桿菌的數(shù)量減少，有顯著差異(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)前后各組自身比較腸桿菌數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中腸球菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表18所示，給受試前與0g/kgBW組間比較，腸球菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，給受試物14天后與0g/kgBW組比較，3.33g/kgBW組腸球菌的數(shù)量減少，有顯著差異(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)前后自身比較腸球菌均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中乳桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表19所示，給受試物前、后與0g/kgBW組間比較，乳桿菌的數(shù)量無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。給受試物前、后自身比較，乳桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中產(chǎn)氣莢膜梭菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表20所示，給受試前、后與0g/kgBW組間比較，產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。給受試物前后自身比較，產(chǎn)氣莢膜梭菌的數(shù)量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
實(shí)驗(yàn)前后小鼠腸道中雙歧桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果如表21，由表21可知，給受試前與0g/kgBW組間比較，雙歧桿菌的數(shù)量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。受試后與0g/kgBW組間比較，雙歧桿菌的數(shù)量有顯著性差異(P＜0.05)。3.33g/kgBW組自身比較，雙歧桿菌的數(shù)量增加，有顯著性差異(P＜0.05)。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明調(diào)節(jié)腸道菌群功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，證明該含益生元的液態(tài)奶能夠明顯增殖腸道雙歧桿菌。
表17小鼠腸道中腸桿菌菌群數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)

a與0g/kgBW組比較有顯著差異表18小鼠腸道中腸球菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)

a與0g/kgBW組比較有顯著差異表19小鼠乳桿菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)

表20小鼠產(chǎn)氣莢膜梭菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(cfu/g，x±SD)

表21小鼠腸道中雙歧桿菌菌群數(shù)量檢測(cè)結(jié)果(log10cfu/g，x±SD)

權(quán)利要求
1.一種含益生元的液態(tài)奶，每100g含有如下重量的組分牛奶50-95g，低聚異麥芽糖0.01-10.0g，低聚木糖0.01-0.7g，低聚果糖0.01-5.0g，穩(wěn)定劑 0.1-1.0g，加水至100g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含益生元的液態(tài)奶，其特征在于所述低聚異麥芽糖的添加量是以50％純度的低聚異麥芽糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚木糖的添加量是以70％純度的低聚木糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的；所述低聚果糖的添加量是以50％純度的低聚果糖為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的含益生元的液態(tài)奶，其特征在于所述穩(wěn)定劑為乳化劑或增稠劑，或由乳化劑和增稠劑兩者組合而成；其中，所述乳化劑可選自蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、分子蒸餾單甘酯和聚甘油酯中的一種或幾種的組合；增稠劑可選自卡拉膠、瓜兒豆膠、羧甲基纖維素鈉、明膠、微晶纖維素、結(jié)冷膠、黃原膠、海藻酸丙二醇酯、魔芋膠、瓊脂、刺槐豆膠和果膠中的一種或幾種的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含益生元的液態(tài)奶，其特征在于所述穩(wěn)定劑包括分子蒸餾單甘酯、聚甘油酯、卡拉膠和黃原膠。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含益生元的液態(tài)奶。本發(fā)明所提供的含益生元的液態(tài)奶，每100g含有如下重量的組分牛奶50－95g，低聚異麥芽糖0.01－10.0g，低聚木糖0.01－0.7g，低聚果糖0.01－5.0g，穩(wěn)定劑0.1－1.0g，加水至100g。通過(guò)大量篩選各種配比，本發(fā)明提供的含有活性益生元液態(tài)奶中添加有一定含量的低聚異麥芽糖、低聚木糖和低聚果糖，可使體內(nèi)多種有益菌(特別是雙歧桿菌)增殖，進(jìn)而起到改善人體腸胃環(huán)境、促進(jìn)腸道蠕動(dòng)、減少有毒發(fā)酵產(chǎn)物及有害細(xì)菌、防止便秘、保護(hù)肝臟功能、降低血清膽固醇、降低血壓、提高人體免疫力、促進(jìn)B族維生素合成、幫助鈣、鐵、鋅等營(yíng)養(yǎng)元素吸收的功效。
文檔編號(hào)A23C9/152GK101066071SQ20071010023
公開日2007年11月7日 申請(qǐng)日期2007年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月6日
發(fā)明者母智深, 張剛, 張冬潔 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團(tuán))股份有限公司 被以下專利引用 (6),