專利名稱：一種海帶的引種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種海藻的引種方法，具體地說(shuō)涉及一種海帶的引種方法。
背景技術(shù)：
海帶是一種大型褐藻，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。不僅可供人類食用，而 且也是食品、化學(xué)、醫(yī)藥、飼料及海藻工業(yè)的原料。海帶藻體中含有多種 陸生蔬菜中沒(méi)有的植物化合物，其中所含的海帶多糖，具有較強(qiáng)的增強(qiáng)免 疫力和抗肺瘤功效，因而全世界對(duì)海帶的開發(fā)利用正在呈上升趨勢(shì)。我國(guó)
自二十世紀(jì)50年代就開展了海帶人工養(yǎng)殖生產(chǎn)，并最先成為水產(chǎn)養(yǎng)殖的支 柱產(chǎn)業(yè)。但多年來(lái)，我國(guó)海帶養(yǎng)殖品種只有一種，近50年的海帶育苗和海 帶養(yǎng)殖生產(chǎn)，基本上是重復(fù)利用這個(gè)品種，由于缺乏選育復(fù)壯技術(shù)，導(dǎo)致 品種嚴(yán)重退化、產(chǎn)量降低、病害頻發(fā)。而國(guó)內(nèi)和國(guó)外許多國(guó)家海帶的自然 資源分布較多，其中，日本北海道海區(qū)中自然分布著14種優(yōu)良海帶物種，如 何從國(guó)內(nèi)外成功引進(jìn)新的海帶優(yōu)良物種，推廣于生產(chǎn)或作為新的種質(zhì)資源， 應(yīng)用于海藻遺傳育種研究，是增加我國(guó)海藻養(yǎng)殖品種、提高海藻養(yǎng)殖品質(zhì)產(chǎn) 量的關(guān)鍵技術(shù)，海帶新物種的引進(jìn)，將會(huì)豐富我國(guó)海藻物種多樣性，有利 于我國(guó)海帶養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，同時(shí)海帶養(yǎng)殖不僅可創(chuàng)造巨大經(jīng)濟(jì)效益，還可起 到降低海區(qū)富營(yíng)養(yǎng)化，維護(hù)海區(qū)生態(tài)平衡的效果。具有重大的生態(tài)效益、 社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
海帶長(zhǎng)距離引種的傳統(tǒng)方法是，在海帶成熟季節(jié)，選取葉片具有成熟 孢子嚢的藻體片段，經(jīng)低溫保鮮保溫包裝，進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸。由于運(yùn)輸時(shí) 間較長(zhǎng)，很難保證藻體的新鮮程度，藻體易受環(huán)境條件改變而發(fā)生性狀改 變，中途會(huì)發(fā)生腐爛、孢子放散等情況，風(fēng)險(xiǎn)大，成功率低，經(jīng)常導(dǎo)致引 種的失敗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種海帶的引種方法，它可以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的選取葉
片具有成熟孢子嚢的藻體片段，進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，體積大不宜攜帶、藻體 葉片容易發(fā)生腐爛、孢子中途放散死亡，導(dǎo)致引種的失敗等問(wèn)題。
為了達(dá)到解決上述問(wèn)題的目的，本發(fā)明的方法按下述步驟進(jìn)行
(1) 在引種海區(qū)，采集帶有成熟孢子嚢的海帶葉片；
(2) 運(yùn)到室內(nèi)，用海水清洗帶有成熟孢子嚢的海帶葉片，經(jīng)陰干刺激 50 — 70分鐘，放入盛有消毒海水的容器中，控制水溫在8 — 12。C,令其孢 子放散；
(3) 當(dāng)鏡檢海水中游孢子密度為5 —15個(gè)/100X時(shí)，用紗布過(guò)濾孢子 水，把黏液和雜物濾出，放入附苗器和載玻片，用以檢查孢子附著發(fā)育情 況和雌、雄配子體的分離；
(4) 孢子附著密度控制在30 — 60個(gè)/100X，孢子附著后的附苗器和載 玻片，放入控溫光照培養(yǎng)箱中培育，光照強(qiáng)度控制在800—12001x，每天 控制光照8 —14小時(shí)，水溫控制在9一1(TC,經(jīng)培育7 —9天后，形成配子 體；
(5) 形成配子體后的附苗器和載玻片，準(zhǔn)備進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，將附苗 器分別裝入塑料袋(2層)中，注入9一1(TC的低溫海水，海水以浸沒(méi)苗簾為 宜，用橡皮筋密封袋口 ；將載玻片放入試管中，注入低溫海水后，用橡皮塞封 口，與密封塑料袋一同放入保溫箱中。將海水制成的冰塊用塑料袋包裹嚴(yán) 密后放到泡沫箱內(nèi)的四周，密封箱蓋防止水溫上升；
(6 )從引種區(qū)向目的地運(yùn)輸，途中觀察水塊溶化狀況和塑料袋水溫，若 冰塊溶化應(yīng)及時(shí)換冰，保持塑料袋中水溫為5 — 7。C，直至運(yùn)輸?shù)侥康牡兀?(7)將運(yùn)回的海帶配子體苗簾放入低溫室內(nèi)培養(yǎng)，采用人工光源，光照 強(qiáng)度控制在800—12001x，每天光照8 — 14小時(shí)，水溫控制在8-12。C，前 期施肥，加入氮和石粦，6 — 8天后，光照調(diào)至1800 — 22001x，每日光照8 — 14小時(shí)，后期施肥，加入氮和磷，直到培育附苗器上的配子體形成孢子體。 在本發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征在引種海區(qū)，當(dāng)海水 溫度到達(dá)16。C以上時(shí)，采集帶有成熟孢子嚢的海帶葉片。
在本發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征所述的附苗器為棕簾 附苗器，規(guī)格20xl5cm。
在本發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征途中打開塑料袋及試
管塞進(jìn)行氣體交換。
在本發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征所述前期施肥保持氮
濃度為1.5 — 2.5ppm,磷濃度為0. 15 — 0. 25ppm;后期施肥保持氮濃度為 3. 0—5, Oppm，磷濃度為0. 3—0. 5ppm。
在本發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征將附著在載玻片上的 海帶配子體，于顯微鏡下進(jìn)行雌雄配子體的分離，分離出的雌、雄配子體 分別放入加有消毒海水的燒瓶中，置于控溫實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行雌、雄配子體單獨(dú) 培育，培育海水溫度控制在7 — 9。C,用人工光源連續(xù)光照，控制光照強(qiáng)度 為300—5001x、營(yíng)養(yǎng)鹽控制在氮濃度1.5 — 2.5卯m,磷濃度為0.15 — 0. 25ppm,每月至少換水一次，約30—50天后，可形成肉眼可見(jiàn)的配子體 克隆，達(dá)到長(zhǎng)期保種之用。
由本發(fā)明的技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明所采用的引種方法是在引種 地點(diǎn)，先將海帶的成熟孢子嚢葉，在控溫實(shí)驗(yàn)室內(nèi)經(jīng)陰干刺激后，放入加 入新鮮消毒海水的水槽中，控制水溫在8 — 12"C,令其放散孢子，孢子附 著量為40個(gè)/100X左右，附著孢子的苗簾和載玻片同時(shí)放入低溫光照培養(yǎng) 箱中，控制光強(qiáng)10001x，每天光照12小時(shí)左右，水溫9. 5。C左右， 一周后 全部形成配子體。將附有海帶配子體的苗簾裝入塑料袋中，注入低溫海水 后將口扎緊，將玻片放入玻璃試管中注入低溫海水后用橡皮塞封口， 一同 放入四周布滿冰塊的保溫箱中，密封運(yùn)輸。途中兩次打開保溫箱換冰，打 開塑料袋及試管透氣，使水溫始終保持在6X:左右，經(jīng)48小時(shí)以上的長(zhǎng)距 離運(yùn)輸后，運(yùn)抵目的地低溫實(shí)驗(yàn)室。海帶苗簾及載玻片上的配子體形態(tài)全 部正常，無(wú)死亡現(xiàn)象。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)和積極效果海帶的配子體，是 海帶生長(zhǎng)史中的一種藻體階段，在低溫、弱光環(huán)境下可長(zhǎng)期保存不死亡， 其抵御惡劣環(huán)境能力比孢子體要高很多。利用海帶配子體進(jìn)行引種，簡(jiǎn)便、 易行、穩(wěn)定、成功率高，運(yùn)輸成活率可達(dá)到100%，是一種實(shí)用可行的引種 方法。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
(l)在引種海區(qū)，當(dāng)海水溫度到達(dá)16。C以上時(shí)，采集帶有成熟孢子嚢
的海帶葉片；
(2) 運(yùn)到室內(nèi)，用海水清洗帶有成熟孢子嚢的海帶葉片，經(jīng)陰干刺激 60分鐘，放入盛有消毒海水的容器中，控制水溫在8 —12°C,令其孢子放
散；
(3) 當(dāng)鏡檢海水中游孢子密度為10個(gè)/100X時(shí)，用紗布過(guò)濾孢子水， 把黏液和雜物濾出，放入棕簾附苗器和載玻片；
(4) 孢子附著密度控制在30—60個(gè)/100X，孢子附著后的附苗器和玻 片，放入控溫光照培養(yǎng)箱中培育，光照強(qiáng)度控制在10001x,每天控制光照 12小時(shí)，水溫控制在9. 5°C，經(jīng)培育7天后，形成配子體；
(5) 形成配子體后的附苗器和載玻片，準(zhǔn)備進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，將附苗 器分別裝入塑料袋中，注入低溫海水9.5°C，將載玻片放入盛有低溫消毒 海水的試管中，用橡皮塞封口，與密封塑料袋一起放入保溫箱中，將海水 制成的冰塊放到泡沫箱內(nèi)的四周，密封箱蓋防止水溫上升；
(6 )從引種區(qū)向目的地運(yùn)輸，途中觀察冰塊溶化狀況和塑料袋水溫，若 冰塊溶化應(yīng)及時(shí)換冰，保持塑料袋中水溫為6°C，直至運(yùn)輸?shù)侥康牡兀?br> (7)將運(yùn)回的海帶配子體苗簾放入低溫室內(nèi)培養(yǎng)，光照強(qiáng)度控制在 10001x，每天光照12小時(shí)，水溫控制在8-12。C,前期施肥，加入氮和磷， 保持氮濃度為2. Oppm,磷濃度為0.20ppm, 6天后，光照調(diào)至20001x，每 日光照12小時(shí)，后期施肥，加入氮和磷，保持氮濃度為4. Oppm,磷濃度 為0. 4ppm，直到培育附苗器上的配子體形成孢子體幼苗。
將附著孢子體的附苗器掛到海區(qū)培育，至幼苗長(zhǎng)度達(dá)到15 20cm左 右，開始分苗培育種海帶，翌年夏季種海帶收獲；至此海帶引種獲得成功。 實(shí)施例2
(1) 在引種海區(qū)，當(dāng)海水溫度到達(dá)16。C以上時(shí)，采集帶有成熟孢子嚢 的海帶葉片；
(2) 運(yùn)到室內(nèi)，用海水清洗帶有成熟孢子嚢的海帶葉片，經(jīng)陰干刺激 50分鐘，放入盛有消毒海水的容器中，控制水溫在8 — 12。C,令其孢子放
散；
(3) 當(dāng)鏡檢海水中游孢子密度為5個(gè)/100X時(shí)，用紗布過(guò)濾孢子水， 把黏液和雜物濾出，放入棕簾附苗器；
(4) 孢子附著密度控制在30 — 60個(gè)/100X,孢子附著后的附苗器，放 入控溫光照培養(yǎng)箱中培育，光照強(qiáng)度控制在8001x，每天控制光照14小時(shí)， 水溫控制在9. (TC,經(jīng)培育8天后，形成配子體；
(5) 形成配子體后的附苗器，準(zhǔn)備進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，將附苗器分別裝 入塑料袋中，注入低溫海水9. (TC，將密封塑料袋放入保溫箱中，將海水 制成的冰塊放到泡沫箱內(nèi)的四周，密封箱蓋防止水溫上升；
(6 )從引種區(qū)向目的地運(yùn)輸，途中觀察冰塊溶化狀況和塑料袋水溫，若 冰塊溶化應(yīng)及時(shí)換冰，保持塑料袋中水溫為5°C，直至運(yùn)輸?shù)侥康模?br> (7 )將運(yùn)回的海帶配子體苗簾放入低溫室內(nèi)培養(yǎng)，采用人工光源，光 照強(qiáng)度控制在8001x，每天光照14小時(shí)，水溫控制在8-12°C,前期施肥， 加入氮和磷，保持氮濃度為1. 5ppm，磷濃度為0. 15ppm， 6天后，光照調(diào) 至1S001x，每日光照l(shuí)4小時(shí)，后期施肥，加入氮和磷，保持氮濃度為3. Oppm， 磷濃度為0. 3ppm，直到培育附苗器上的配子體形成孢子體。
將附苗器掛到海區(qū)培育，至幼苗長(zhǎng)度達(dá)到15cm左右，開始分苗培育 種海帶，翌年夏季種海帶收獲，至此海帶引種獲得成功。 實(shí)施例3
(1) 在引種海區(qū)，當(dāng)海水溫度到達(dá)17。C以上時(shí)，采集帶有成熟孢子嚢 的海帶葉片；
(2) 運(yùn)到室內(nèi)，用海水清洗帶有成熟孢子嚢的海帶葉片，經(jīng)陰干刺激 70分鐘，放入盛有消毒海水的容器中，控制水溫在8 —12°C,令其孢子放
散；
(3) 當(dāng)鏡檢海水中游孢子密度為15個(gè)/100X時(shí)，用紗布過(guò)濾孢子水， 把翁液和雜物濾出，放入棕簾附苗器；
(4) 孢子附著密度控制在30_60個(gè)/100X,孢子附著后的附苗器，放 入控溫光照培養(yǎng)箱中培育，光照強(qiáng)度控制在12001x，每天控制光照10小 時(shí)，水溫控制在1(TC，經(jīng)培育6天后，形成配子體；
(5) 形成配子體后的附苗器，準(zhǔn)備進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，將附苗器分別裝 入塑料袋中，注入低溫海水1(TC,將密封塑料袋放入保溫箱中，將海水制 成的冰塊放到泡沫箱內(nèi)的四周，密封箱蓋防止水溫上升；
(6 )從引種區(qū)向目的地運(yùn)輸，途中觀察冰塊溶化狀況和塑料袋水溫，若
冰塊溶化換冰，保持塑料袋中水溫為7°C，直至運(yùn)輸?shù)侥康牡兀?br> (7)將運(yùn)回的海帶配子體苗簾放入低溫室內(nèi)培養(yǎng)，光照強(qiáng)度控制在 12001x,每天光照10小時(shí)，水溫控制在8-12。C，前期施肥，加入氮和石舞， 保持氮濃度為2. 5ppm,磷濃度為O. 25ppm， 6天后，光照調(diào)至22001x，每 曰光照IO小時(shí)，后期施肥，加入氮和磷，保持氮濃度為5.0ppm，磷濃度 為0. 5ppm,直到培育附苗器上的配子體形成孢子體。
將附苗器掛到海區(qū)培育，至幼苗長(zhǎng)度達(dá)到15cm左右，開始分苗培育
種海帶，翌年夏季種海帶收獲，至此海帶引種獲得成功。
在上述實(shí)施例中，可以將附著在玻片上的海帶配子體，于顯微鏡下進(jìn) 行雌雄配子體的分離，分離出的雌、雄配子體分別放入加有消毒海水的 150ml三角燒瓶中，置于控溫實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行雌、雄配子體單獨(dú)培育，培育海 水溫度控制在8。C，用人工光源連續(xù)光照，光照強(qiáng)度控制在300~5001x、營(yíng) 養(yǎng)鹽控制在N-2ppm， P-0.2ppm，每月至少換水一次，約30 50天后，可 形成肉眼可見(jiàn)的配子體克隆，達(dá)到長(zhǎng)期保種之用。
以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形 式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以 變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)
與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1. 一種海帶的引種方法，其特征在于所述方法按下述步驟進(jìn)行(1) 在引種海區(qū)，采集帶有成熟孢子嚢的海帶葉片；(2) 運(yùn)到室內(nèi)，用海水清洗帶有成熟孢子嚢的海帶葉片，經(jīng)陰干刺激 50 — 70分鐘，放入盛有消毒海水的容器中，控制水溫在8~12℃，令其孢 子放散；(3) 當(dāng)鏡檢海水中游孢子密度為5 15個(gè)/100X時(shí)，用紗布過(guò)濾孢子水， 把黏液和雜物濾出后，放入附苗器和載玻片；(4) 孢子附著密度控制在30 60個(gè)/100X，孢子附著后的附苗器和載 玻片，放入控溫光照培養(yǎng)箱中培育，采用人工光源光照強(qiáng)度控制在800— 12001x，每天控制光照8—14小時(shí)，水溫控制在9一10℃,經(jīng)培育7—9天 后，形成配子體；(5) 形成配子體后的附苗器和栽玻片，準(zhǔn)備進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，將附苗 器分別裝入塑料袋中，注入低溫海水9一1(TC,海水以浸沒(méi)苗簾為宜，密封 袋口；將載玻片放入試管中，注入低溫海水后，封口，與密封塑料袋一同 放入保溫箱中，將海水制成的冰塊用塑料袋包裹嚴(yán)密后放到泡沫箱內(nèi)的四 周，密封箱蓋防止水溫上升；(6) 從引種區(qū)向目的地運(yùn)輸，途中觀察冰塊溶化狀況和塑料袋水溫，若 冰塊溶化及時(shí)換冰，保持塑料袋中水溫為5 — 7℃，直至運(yùn)輸?shù)侥康牡兀?7) 將運(yùn)回的海帶配子體苗簾放入低溫室內(nèi)培養(yǎng)，用人工光源將光照強(qiáng) 度控制在800—12001x，每天光照8—14小時(shí)，水溫控制在8-12℃，前期 施肥，加入氮和磷，4一8天后，光照調(diào)至1800—22001x,每日光照8—14 小時(shí)，后期施肥，加入氮和磷，直到培育附苗器上的配子體形成孢子體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在引種海區(qū)，當(dāng)海水溫度 到達(dá)16℃以上時(shí)，采集帶有成熟孢子嚢的海帶葉片。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的附苗器為棕簾附苗 器，身見(jiàn)才各20xl5cm。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于途中打開塑料袋及試管進(jìn) 行氣體交換。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述前期施肥保持氮濃度 為1.5 — 2.5ppm,磷濃度為0.15 —0.25ppm;后期施肥保持氮濃度為3.0 — 5.0ppm，磷濃度為0.3 —0.5ppm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的方法，其特征在于 將附著在載玻片上的海帶配子體，于顯微鏡下進(jìn)行雌雄配子體的分離，分 離出的雌、雄配子體分別放入加有消毒海水的燒瓶中，置于控溫實(shí)驗(yàn)室進(jìn) 行雌、雄配子體單獨(dú)培育，培育海水溫度控制在7 — 9。C，用人工光源連續(xù) 光照，光照強(qiáng)度控制在300 5001x、營(yíng)養(yǎng)鹽控制在氮濃度1.5 — 2.5，磷濃度 為0.15 — 0.25ppm，每月至少換水一次，約30 50天后，可形成肉眼可見(jiàn) 的配子體克隆，達(dá)到長(zhǎng)期保種之用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種海帶的引種方法，它可以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的選取葉片具有成熟孢子囊的藻體片段，進(jìn)行長(zhǎng)距離運(yùn)輸，容易發(fā)生腐爛、孢子放散，導(dǎo)致引種的失敗等問(wèn)題。本發(fā)明所采用的引種方法是在引種地點(diǎn)，先將海帶的成熟孢子囊葉，在控溫實(shí)驗(yàn)室內(nèi)經(jīng)陰干刺激后，放入加入新鮮消毒海水的水槽中，控制水溫在8～12℃，令其放散孢子，再將孢子經(jīng)培育形成配子體，將附著配子體的苗簾放入低溫密封袋中，低溫保藏運(yùn)輸至目的地，海帶苗簾上的配子體形態(tài)全部正常，成功率高，成活率接近100％。
文檔編號(hào)C12N5/04GK101120650SQ20071011292
公開日2008年2月13日 申請(qǐng)日期2007年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月7日
發(fā)明者剛 丁, 波 于, 李美真, 王志剛, 詹冬梅 申請(qǐng)人:山東省海水養(yǎng)殖研究所