專利名稱：痢疾桿菌診斷試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種痢疾桿菌診斷試劑，其主要成分是胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、小牛血清、葡萄糖、甘露醇經(jīng)一定的工藝制成。用以供糞便增菌培養(yǎng)痢疾桿菌。利用培養(yǎng)試驗鑒別細菌的種類，其關(guān)鍵在于準確、快速、簡便。而細菌接種量大小，會直接影響檢測結(jié)果。往往需要將樣本通過不同方法進行增菌培養(yǎng)，來進行細菌種類的鑒別，這是目前微生物實驗室最常用的手段。由于目前培養(yǎng)條件的應(yīng)用范圍所限，供糞便痢疾桿菌增菌培養(yǎng)的診斷試劑沒有特效的，存在所需接種量大、培養(yǎng)時間長、易出現(xiàn)假陽性或假陰性等問題。隨著生物研究的進展，國內(nèi)外對細菌鑒別的增菌診斷試劑研究也在不斷的發(fā)展中。生物工作者一直希望能有一種能克服上述不足的增菌診斷試劑一--痢疾桿菌診斷試劑。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的在于提供一種能克服已有鑒別診斷試劑不足的痢疾桿菌診斷試劑。與其它同類診斷試劑相比具備下列特點所需接種量小，少量細菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37。C培養(yǎng)5-6小時即可觀察結(jié)果；不易出現(xiàn)假陽性和假陰性；能破壞標本中存在的抑菌物質(zhì)，使細菌生長不受抑制
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點在于選擇合適的組分，并進行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌等工藝而成一種痢疾桿菌診斷試劑。
本發(fā)明選擇的配方如下(組分及其重量百分比％):胰蛋白胨(1.8-2.2)、枸櫞酸鈉
(0. 4-0. 5)、去氧膽酸鈉(0. 04-0. 06)、磷酸二氫鉀(0. 14-0. 16)、磷酸氫二鉀(0. 38-0. 42)、氯化鈉(0.4-0.5)、葡萄糖(0.10-0.12)、甘露醇(0.15-0.25)、小牛血清(0.4-0.5)、蒸餾水加至100ml。
本診斷試劑含有枸櫞酸鈉和去氧膽酸鈉，對革蘭氏陰性菌有抑制作用，大腸桿菌，綠膿桿菌及變形桿菌，在接種6小時內(nèi)生長緩慢，而痢疾桿菌可相對地得到增殖.氯化鈉用于調(diào)整滲透壓；磷酸二氫鉀用于調(diào)節(jié)pH。胰蛋白胨、小牛血清、葡萄糖、甘露醇是診斷試劑中的營養(yǎng)和支持成分。標本接種后即計算時間，在通常室溫下或37'C培養(yǎng)，均有增菌作用.增菌培養(yǎng)6小時后，即用劃線法移種到腸道選擇性診斷試劑上以分離致病菌。
本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是
1) 、將胰蛋白胨、枸橡酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、葡萄糖、甘
露醇按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至7.0矯正pH至6.8，用濾紙過濾；
2) 、壓力蒸汽滅菌0.70kg15分鐘；
3) 、無菌條件下，加入無菌小牛血清,分裝安培瓶，每瓶約5ml，存于冰箱中備用。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)所需接種量小，培養(yǎng)時間短，少量細菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37。C培養(yǎng)5-6小時即可觀察結(jié)果；(2)不易出現(xiàn)假陽性或假陰性；(3)能破壞標本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明按照下表所列數(shù)據(jù)(重量百分比％)及其所述步驟進行配置配方一
胰蛋白胨1.8-2.2
枸櫞酸鈉0. 4-0. 5
去氧膽酸鈉0. 04-0. 06
磷酸二氫鉀0. 14-0. 16
磷酸氫二鉀0. 38-0. 42
氯化鈉0. 4-0. 5
葡萄糖0. 10-0. 12
甘露醇0. 15-0. 25
小牛血清0. 4-0. 5
蒸餾水加至100
配方二
胰蛋白胨1.8-2.0
枸櫞酸鈉0. 4-0. 45
去氧膽酸鈉0. 04-0. 05
磷酸二氫鉀0. 14-0. 15
磷酸氫二鉀0. 38-0. 40
氯化鈉0. 4-0. 45
葡萄糖0. IO-O. 11
甘露醇0. 15-0. 20
小牛血清0. 4-0. 45
蒸餾水加至100
配方三
胰蛋白胨2. 0-2. 2
枸櫞酸鈉0. 45-0. 5
去氧膽酸鈉0. 05-0. 06
磷酸二氫鉀0. 15-0. 16
磷酸氫二鉀0. 40-0. 42
氯化鈉0. 45-0. 5
葡萄糖0. 11-0. 12
甘露醇0. 18-0. 25
小牛血清0. 45-0. 5
蒸餾水加至100
4配方四
胰蛋白胨1.9-2. 1
枸櫞酸鈉0. 42-0. 45
去氧膽酸鈉0. 05-0. 06
磷酸二氫鉀0. 15-0. 16
磷酸氫二鉀0. 39-0. 40
氯化鈉0. 42-0. 45
葡萄糖0. 11-0. 12
甘露醇0. 17-0. 22
小牛血清0. 42-0. 45
蒸餾水加至100
權(quán)利要求
1、一種痢疾桿菌診斷試劑，是以胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、小牛血清、葡萄糖、甘露醇為主要成分；其特征在于具有如下配方(組分及其重量百分比％)胰蛋白胨(1.8-2.2)、枸櫞酸鈉(0.4-0.5)、去氧膽酸鈉(0.04-0.06)、磷酸二氫鉀(0.14-0.16)、磷酸氫二鉀(0.38-0.42)、氯化鈉(0.4-0.5)、葡萄糖(0.10-0.12)、甘露醇(0.15-0.25)、小牛血清(0.4-0.5)、蒸餾水100ml。
2、 一種權(quán)利要求1所述痢疾桿菌診斷試劑的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1) 、將胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、葡萄糖、甘露醇按比例加入蒸餾水中，再加熱溶解，矯正pH至7.0矯正pH至6.8，用濾紙過濾；2) 、壓力蒸汽滅菌0.70kgl5分鐘;3) 、無菌條件下，加入無菌小牛血清，分裝安培瓶，每瓶約5ml，存于冰箱中備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種痢疾桿菌診斷試劑，其主要成分是胰蛋白胨、枸櫞酸鈉、去氧膽酸鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、氯化鈉、小牛血清、葡萄糖、甘露醇經(jīng)一定的工藝制成。用以供糞便增菌培養(yǎng)痢疾桿菌。利用培養(yǎng)試驗鑒別細菌的種類，其關(guān)鍵在于準確、快速、簡便。而細菌接種量大小，會直接影響檢測結(jié)果。往往需要將樣本通過不同方法進行增菌培養(yǎng)，來進行細菌種類的鑒別，這是目前微生物實驗室最常用的手段。由于目前培養(yǎng)條件的應(yīng)用范圍所限，供糞便痢疾桿菌增菌培養(yǎng)的診斷試劑沒有特效的，存在所需接種量大、培養(yǎng)時間長、易出現(xiàn)假陽性或假陰性等問題。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)所需接種量小，培養(yǎng)時間短，少量細菌即可迅速繁殖，在通常室溫下或37℃培養(yǎng)5-6小時即可觀察結(jié)果；(2)不易出現(xiàn)假陽性或假陰性；(3)能破壞標本中存在的四環(huán)素、金霉素、土霉素、新霉素、多粘菌素及鏈霉素的抑菌作用。
文檔編號C12Q1/04GK101463374SQ20071011562
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月18日
發(fā)明者丁月芳 申請人:丁月芳