專利名稱：一種液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物發(fā)酵領(lǐng)域，特別是涉及一種液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素 和竹黃多糖的方法。
背景技術(shù)：
竹黃菌(57 'ra/a 6a柳6ww'co/a Henn.)別名赤團(tuán)子、竹赤團(tuán)子、竹繭、竹赤 斑菌、淡菊花、天竹花、淡竹花、竹花等，為肉座菌科(Hypocreaceae)真菌竹黃 寄生于特定竹類上形成的子實(shí)體(也叫子座)。其性溫味淡，具有止咳祛痛、舒筋 活絡(luò)、祛風(fēng)利濕、補(bǔ)中益氣、活血補(bǔ)血、散瘀通經(jīng)之功效，主治中風(fēng)，小兒驚 風(fēng)，胃氣痛等。竹黃在民間用于治療虛寒胃痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、氣管炎，百日 咳、坐骨神經(jīng)痛、跌打損傷、貧血頭痛等癥，是我國一種重要的中藥資源。
研究表明竹黃菌中的主要活性成分為竹紅菌素、竹黃多糖、甘露醇、麥角 甾醇等。竹紅菌素是目前己知的在可見光區(qū)內(nèi)優(yōu)良的光敏劑，具有顯著的光療 作用，臨床上已用來治療皮膚病，如外陰白色病變和軟化疤痕疙瘩。更具應(yīng)用 前景的是竹紅菌素具有優(yōu)良的光敏殺傷腫瘤細(xì)胞和抑制艾滋病病毒HIV-1的作 用，并且可作為新型的光活化農(nóng)藥和潛在的光電轉(zhuǎn)換材料，
竹黃多糖主要由L-阿拉伯糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘露糖等單糖組成， 可提高免疫，并對肝炎具有一定的療效。
近幾年，以竹黃菌為出發(fā)菌，發(fā)酵法生產(chǎn)竹紅菌素已有研究報(bào)導(dǎo)，如
文獻(xiàn)蔡宇杰，丁彥蕊，張大兵等.竹黃菌固態(tài)發(fā)酵竹紅菌素條件的研究.生 物技術(shù)，2004， 14 (4): 46-47報(bào)道了以固態(tài)發(fā)酵法利用竹黃菌生產(chǎn)竹紅菌素的 條件；
文獻(xiàn)石貴陽，張大兵，樓志華等。竹黃菌液體培養(yǎng)條件下生成竹紅菌素 的研究.藥物生物技術(shù)，2004， 11(5): 299 301報(bào)道了以液體發(fā)酵法利用竹黃菌 生產(chǎn)竹紅菌素的條件；
文獻(xiàn)陳佳佳，李兆蘭，焦慶才。竹黃無性株的液態(tài)發(fā)酵工藝.中藥材，2005， 28 (12): 1049-1051報(bào)道了利用竹黃菌液體發(fā)酵生產(chǎn)竹紅菌素的培養(yǎng)基組成與 發(fā)酵條件。
現(xiàn)有的研究都只涉及發(fā)酵法生產(chǎn)竹紅菌素，由于竹紅菌素和竹黃多糖分別 為次級代謝產(chǎn)物和初級代謝產(chǎn)物，兩者的發(fā)酵生產(chǎn)條件不一，需要加以綜合考 察周時(shí)優(yōu)化竹紅菌素和竹黃多糖的生產(chǎn)。竹紅菌素和竹黃多糖都是具有良好應(yīng) 用前景的生物活性物質(zhì)，以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖可同時(shí)獲 得這兩種物質(zhì)，但目前尚無有關(guān)以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的 研究報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的工 藝，以獲得竹紅菌素和竹黃多糖這兩種具有良好應(yīng)用前景的活性物質(zhì)。
本發(fā)明的液體發(fā)酵工藝包括以竹黃菌為出發(fā)菌株，經(jīng)斜面菌種活化，進(jìn)行 液體搖瓶培養(yǎng)、液體搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)基及發(fā)酵培養(yǎng)獲得竹黃菌發(fā)酵液，從所得發(fā) 酵液中經(jīng)分離純化后分別獲得竹紅菌素和竹黃多糖。
一具體地，本發(fā)明以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的工藝中，所
采用的菌種竹黃菌(幼fraZa kzm^m'coto Henn.)為一種已知的菌種，采自浙江 省永嘉縣，其分離鑒定文獻(xiàn)如魏景超，《真菌鑒定手冊》，上海科學(xué)技術(shù)出版社， 1979年出版，p238;劉天惠，《食用菌概論》，中國展望出版社，1987年出版， p26;張灝等，"竹紅菌素產(chǎn)生菌的篩選與鑒定"，生物技術(shù)，2002， 12(4)， pl9-20， 中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心出具的保藏編號為CGMCC No.2201。保藏日期為2007年10月17日。
本發(fā)明以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的工藝中，所述斜面菌 種活化培養(yǎng)基為土豆培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基在多種教科書和論文中均有表述，例如 參見諸葛健、王正祥，《工業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)手冊》，北京，中國輕工業(yè)出版社， p367，本申請引用該文獻(xiàn)作為參考。斜面菌種培養(yǎng)溫度22 27"C，培養(yǎng)時(shí)間96 240 小時(shí)。
本發(fā)明以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的工藝中，先進(jìn)行搖瓶 培養(yǎng)以保藏編號為CGMCCNo.2201的竹黃菌(5Tz/ra/a Z awZu^/co/a Henn.)菌 株為出發(fā)菌株，將10~100mg干重/L的試管斜面菌種接入裝有液體培養(yǎng)基的搖 瓶中，搖瓶裝液系數(shù)為0.1~0.25，回旋培養(yǎng)，回旋培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為150~250轉(zhuǎn)/分 鐘，培養(yǎng)溫度22 27"，培養(yǎng)時(shí)間72-120小時(shí)；然后進(jìn)行搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)，將搖 瓶培養(yǎng)所得培養(yǎng)物移入搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量2~10% (體積百 分?jǐn)?shù))，搖床轉(zhuǎn)速為150~250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度22 27t:，培養(yǎng)時(shí)間72~120小 時(shí)；最后進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，將搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)所得培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā) 酵罐內(nèi)培養(yǎng)，接種量5~10% (體積百分?jǐn)?shù))，培養(yǎng)溫度22 27°C，發(fā)酵罐壓力 0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速100 180轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量1: 0.3 lv/v/m，培養(yǎng)時(shí)間96-150 小時(shí)。發(fā)酵結(jié)束后得到竹黃發(fā)酵液，從所得發(fā)酵液中經(jīng)分離純化后分別獲得竹 紅菌素和竹黃多糖。
本發(fā)明以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的工藝中，搖瓶培養(yǎng)基、 搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)基、種子罐種子培養(yǎng)及發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為，每一升水中含 下列成分(單位:克)碳源20~40，氮源2 4， K2HP04 0.75 2, KC10.5 1.0' MgS04 0.5 1.0， FeSO40.1~0.5， pH5.5 6.5。其+碳源包括葡萄糖、麥芽糖、 蔗糖或土豆汁等；氮源包括酵母膏、蛋白胨、尿素或(NH4)2S04等。
更具體地，本發(fā)明的制備工藝通過以下步驟來實(shí)現(xiàn)
(1) 取出上述保藏的竹黃菌菌種接入新配制的斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度 22 27°C，培養(yǎng)時(shí)間96~240小時(shí)。其中所述的斜面培養(yǎng)基的組成成分為，每一 升水中含下列成分(單位克)土豆200 (煮汁)，葡萄糖20，瓊脂20， pH 5.5 6.5。
(2) 將步驟l中的斜面菌種接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，搖瓶培養(yǎng)基的
組成為，每一升水中含下列成分(單位克)碳源20~40，氮源2~4， K2HP04 0.75~2， KC1 0.5-1.0， MgS04 0.5 1.0， FeS04 0.1~0.5， pH 5.5~6.5;搖瓶培養(yǎng) 條件為培養(yǎng)溫度22 27。C，搖床轉(zhuǎn)速150-250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間72 120小時(shí)。
(3) 將步驟2中搖瓶回旋培養(yǎng)所得發(fā)酵培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入裝有搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)基的 搖瓶中，搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為，每一升水中含下列成分(單位克) 碳源20 40，氮源2 4， K2HPO40.75~2， KC1 0.5~1.0， MgS04 0.5~1.0， FeS04 0.1 0.5,pH5.5 6.5;搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為接種量2~10% (體積百分?jǐn)?shù))， 培養(yǎng)溫度22~27°C ，搖床轉(zhuǎn)速150 250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)時(shí)間72-120小時(shí)。
(4) 將步驟3中搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)所得培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐內(nèi) 培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成為，每一升水中含下列成分(單位克):碳源20~40， 氮源2~4， K2HPO40.75~2， KC1 0.5~1.0， MgS04 0.5 1.0， FeS04 0.1~0.5， pH 5.5~6.5;發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為接種量5~10% (體積百分?jǐn)?shù))，發(fā)酵罐壓 0.05MPa，培養(yǎng)溫度22 27°C，攪拌轉(zhuǎn)速100 180轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量1: 0.3~lv/v/m， 培養(yǎng)時(shí)間96-150小時(shí)。
(5) 將步驟4所得發(fā)酵培養(yǎng)物10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，分離竹黃菌菌 絲體和發(fā)酵清液。
(6) 將步驟5中所得發(fā)酵清液減壓濃縮至原體積的五分之一至十分之一， 加入四倍量乙醇，4'C靜置24小時(shí)，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘收集沉淀，將沉 淀物用水溶解，再經(jīng)乙醇沉淀、冷凍干燥，即得竹黃多糖。將步驟5所得竹黃 菌菌絲體經(jīng)細(xì)胞破碎、有機(jī)溶劑(丙酮、氯仿或乙酸乙酯等)萃取、真空濃縮、 再將濃縮液冷凍干燥獲得竹紅菌素。
通過本方法可以在竹黃菌液體發(fā)酵過程中以較高的產(chǎn)率同時(shí)獲得竹紅菌素 和竹黃多糖。相對于目前采用液體發(fā)酵僅生產(chǎn)竹紅菌素而言，本方法不增加額 外的設(shè)備，實(shí)現(xiàn)竹紅菌素和竹黃多糖這兩種活性成分的同時(shí)生產(chǎn)，可大幅度提 高生產(chǎn)過程的經(jīng)濟(jì)效益。竹紅菌素和竹黃多糖都具有較高的藥用價(jià)值，可廣泛 用于醫(yī)藥和保健等行業(yè)，因此，本發(fā)明是一種具有良好應(yīng)用前景的竹紅菌素和 竹黃多糖生產(chǎn)方法。
具體實(shí)施例方式
為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明所涉及的材料及實(shí)施工藝，給出了下述實(shí)施例，但 是，這些實(shí)施例不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。 實(shí)施^1_1
菌種采用竹黃菌(5T2/ra/a k^^w'co/a He皿.)，保藏編號為CGMCC No.2201，采自浙江省永嘉縣，其分離鑒定文獻(xiàn)如魏景超，《真菌鑒定手冊》，上 ?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979年出版，p238;劉天惠，《食用菌概論》，中國展望出 版社，1987年出版，p26;張灝等，"竹紅菌素產(chǎn)生菌的篩選與鑒定"，生物技術(shù)， 2002， 12 (4)， p19 20。
1、搖瓶培養(yǎng) 將保藏的竹黃菌菌種接入新配制的斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫 度25X:，斜面培養(yǎng)基配方為(單位為克/升)葡萄糖25， 土豆200，和瓊脂20。 待菌絲體長滿斜面后，將5毫克竹黃菌菌絲體接入裝有50mL搖瓶培養(yǎng)基的250mL三角瓶中(共5瓶)，置于25'C、 180轉(zhuǎn)/分鐘恒溫?fù)u床培養(yǎng)96小時(shí)。其 中所述搖瓶培養(yǎng)基配方為，每一升水中含下列成分(單位克)葡萄糖30， (NH4)2S04 3， K2HPO40.15， KC10.5, MgS04 0.5， FeSO40.1， pH6.0。
2、 搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng) 將上述搖瓶培養(yǎng)的菌種接入裝有l(wèi)OOmL擴(kuò)大培養(yǎng)基的 500mL三角瓶中(共20瓶)進(jìn)行培養(yǎng)，接種量為每500mL三角瓶中接入10mL 搖瓶種子，置于25t、 180轉(zhuǎn)/分鐘恒溫?fù)u床培養(yǎng)96小時(shí)。其中所述搖瓶擴(kuò)大培 養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為，每一升水中含下列成分(單位克)葡萄糖30, (NH4)2S04 3， K2HPO40.15， KC10.5, MgS04 0.5， FeSO40.1， pH6.0。
3、 發(fā)酵培養(yǎng) 將上述搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的菌種2000mL接入裝有21L發(fā)酵培 養(yǎng)基的30L發(fā)酵罐中培養(yǎng)。維持發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度25'C，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn) 速150轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量l: 0.5v/v/m，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)。其中所述的發(fā)酵培養(yǎng) 的培養(yǎng)基組成為，每一升水中含下列成分(單位克)葡萄糖30，酵母膏3， K2HPO40.15， KC10.5, MgS04 0.5， FeSO40.1, pH6.0。
發(fā)酵結(jié)束后，收獲菌絲體和發(fā)酵液，按以下方法進(jìn)行竹紅菌素和竹黃多糖 的含量分析
以10000轉(zhuǎn)/分鐘進(jìn)行離心分離獲得菌絲體(干重)8.81克/升以及發(fā)酵液；
發(fā)酵液減壓濃縮至原體積的四分之一，加入四倍體積的95%乙醇，4T:靜置 24小時(shí)，5000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘收集沉淀，再經(jīng)75%乙醇洗滌二次即得竹黃 多糖。以蒸餾水溶解，采用硫酸-苯酚法測定多糖含量為354.52毫克/升；
菌絲體45。C干燥，取100毫克，加入6毫升95%乙醇提取兩次，每次浸提時(shí) 間12小時(shí)，合并浸提液，于465nm比色測定竹紅菌素含量(參考文獻(xiàn)林海萍 等《竹黃竹紅菌甲素含量測定方法》[J]浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)，2002.19(2): 157~160)， 計(jì)算得含量為166.8毫克/升。
實(shí)施例2
本實(shí)施例的菌種及其搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組成與實(shí) 施例l相同。
發(fā)酵培養(yǎng) 將搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的菌種2000mL接入裝有21L發(fā)酵培養(yǎng)基的 30L發(fā)酵罐中培養(yǎng)。維持發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度25°C，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速150 轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量l: 0.5v/v/m，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)。其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng) 基組成為，每一升水中含下列成分(單位克)葡萄糖30，蛋白胨3， K2HP04 0.15， KC10.5, MgS04 0.5， FeSO40.1， pH6.0。
發(fā)酵結(jié)束后，收獲菌絲體和發(fā)酵液，進(jìn)行竹紅菌素和竹黃多糖的含量測定， 測定方法同實(shí)施例l。結(jié)果，菌絲體干重為9.26克/升，竹黃多糖為283.17毫克 /升，竹紅菌素為192.5毫克/升。
實(shí)施例3
本實(shí)施例的菌種及其搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組成與實(shí) 施例1相同。
發(fā)酵培養(yǎng) 將搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的菌種2000mL接入裝有21L發(fā)酵培養(yǎng)基的 30L發(fā)酵罐中培養(yǎng)。維持發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度25°C，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量l: 0.5v/Wm，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)。其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng) 基組成為，每一升水中含下列成分(單位克)葡萄糖30， (NH4)2S043， K2HP04 0.15， KC10.5, MgS04 0.5， FeSO40.1， pH6.0。
發(fā)酵結(jié)束后，收獲菌絲體和發(fā)酵液，進(jìn)行竹紅菌素和竹黃多糖的含量測定， 測定方法同實(shí)施例l。結(jié)果，菌絲體干重為7.94克/升，竹黃多糖為207.62毫克 /升，竹紅菌素為158.4毫克/升。
實(shí)施例4
本實(shí)施例的菌種及其搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組成與實(shí) 施例1相同。
發(fā)酵培養(yǎng) 將搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的菌種2000rnL接入裝有21L發(fā)酵培養(yǎng)基的 30L發(fā)酵罐中培養(yǎng)。維持發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度25°C，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速180 轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量l: 0.6v/v/m，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)。其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng) 基組成為，每一升水中含下列成分(單位克)蔗糖30， (NH4)2S043， K2HP04 0.15， KC10.5, MgS04 0.5， FeSO40,l， pH6.0。
發(fā)酵結(jié)束后，收獲菌絲體和發(fā)酵液，進(jìn)行竹紅菌素和竹黃多糖的含量測定， 測定方法同實(shí)施例l。結(jié)果，菌絲體干重為8.22克/升，竹黃多糖為217.35毫克 /升，竹紅菌素為178.9毫克/升。
實(shí)施例5
本實(shí)施例的菌種及其搖瓶培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基組成與實(shí) 施例1相同。
發(fā)酵培養(yǎng) 將搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的菌種2000rnL接入裝有21L發(fā)酵培養(yǎng)基的 30L發(fā)酵罐中培養(yǎng)。維持發(fā)酵罐培養(yǎng)溫度25°C，罐壓0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速180 轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量l: 0.6v/v/m，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)。其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng) 基組成為，每一升水中含下列成分(單位克)葡萄糖30，尿素3， K2HPO40.15， KC10.5, MgS04 0.5， FeSO40,l， pH6.0。
發(fā)酵結(jié)束后，收獲菌絲體和發(fā)酵液，進(jìn)行竹紅菌素和竹黃多糖的含量測定， 測定方法同實(shí)施例l。結(jié)果，菌絲體干重為8.25克/升，竹黃多糖為207.94毫克 /升，竹紅菌素為161.6毫克/升。
權(quán)利要求
1、一種液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的方法，其特征在于包括如下步驟(1)搖瓶培養(yǎng)以保藏編號為CGMCC No.2201的竹黃菌(Shiraiabambusicola Henn.)菌株為出發(fā)菌株，將試管斜面菌種接入裝有液體培養(yǎng)基的搖瓶中，裝液系數(shù)為0.1～0.25，回旋培養(yǎng)，回旋培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為150～250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度22～27℃，培養(yǎng)時(shí)間72～120小時(shí)；(2)搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)將搖瓶培養(yǎng)所得培養(yǎng)物移入搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量2～10％(體積百分?jǐn)?shù))，搖床轉(zhuǎn)速為150～250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度22～27℃，培養(yǎng)時(shí)間72～120小時(shí)；(3)發(fā)酵培養(yǎng)將搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)所得培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)，接種量5～10％(體積百分?jǐn)?shù))，培養(yǎng)溫度22～27℃，發(fā)酵罐壓力0.05MPa，攪拌轉(zhuǎn)速100～180轉(zhuǎn)/分鐘，通風(fēng)量10.3～1v/v/m，培養(yǎng)時(shí)間96～150小時(shí)；發(fā)酵結(jié)束后得到竹黃發(fā)酵液，從所得發(fā)酵液中經(jīng)分離純化后分別獲得竹紅菌素和竹黃多糖。
2、 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，搖瓶培養(yǎng)基、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為，每一升水中含下列成分(單位克)碳源20-40，氮源2 4， K2HP04 0.75 2， KC1 0.5 1.0， MgS04 0.5~1.0， FeS04 0.1 0.5， pH 5,5~6.5。
3、 如權(quán)利要求1和權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，搖瓶培養(yǎng)基、搖 瓶擴(kuò)大培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源包括葡萄糖、麥芽糖、蔗糖或土豆汁等；氮源包括酵母膏、蛋白胨、尿素或(NH4)2S04等。
4、 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵液的分離純化步驟包 括發(fā)酵液的離心分離，分別獲得上清液和菌體；所得上清液濃縮至1/6~1/12體 積，以乙醇沉淀，將沉淀物用水溶解，再經(jīng)乙醇沉淀、冷凍干燥，得竹黃多糖； 所得菌體經(jīng)細(xì)胞破碎、有機(jī)溶劑(丙酮、氯仿或乙酸乙酯等)萃取、真空濃縮、 再將濃縮液冷凍干燥獲得竹紅菌素。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物發(fā)酵領(lǐng)域，特別是涉及一種液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的方法。本發(fā)明以液體發(fā)酵法同時(shí)生產(chǎn)竹紅菌素和竹黃多糖的工藝中，先進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)以竹黃菌菌株為出發(fā)菌株，將試管斜面菌種接入裝有液體培養(yǎng)基的搖瓶中，搖瓶裝液系數(shù)為0.1～0.25，回旋培養(yǎng)，回旋培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為150～250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度22～27℃；然后進(jìn)行搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)，將搖瓶培養(yǎng)所得培養(yǎng)物移入搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種量2～10％，搖床轉(zhuǎn)速為150～250轉(zhuǎn)/分鐘，培養(yǎng)溫度22～27℃，培養(yǎng)時(shí)間72～120小時(shí)；最后進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，將搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)所得培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)，接種量5～10％，培養(yǎng)溫度22～27℃。發(fā)酵結(jié)束后得到竹黃發(fā)酵液，從所得發(fā)酵液中經(jīng)分離純化后分別獲得竹紅菌素和竹黃多糖。
文檔編號C12P7/24GK101186932SQ20071013544
公開日2008年5月28日 申請日期2007年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月11日
發(fā)明者楊海龍, 肖彩霞 申請人:楊海龍;肖彩霞