專利名稱::鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法
技術(shù)領(lǐng)域:
:本發(fā)明涉及一種魚(yú)類品種優(yōu)化的方法。技術(shù)背景鯉魚(yú)是我國(guó)乃至世界最大的水產(chǎn)養(yǎng)殖魚(yú)種,是我國(guó)的主要經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚(yú)種。但是目前鯉魚(yú)養(yǎng)殖存在經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降的現(xiàn)象,其主要原因在于鯉魚(yú)的近親交配。目前采用的群體選育養(yǎng)殖和種內(nèi)雜交養(yǎng)殖都無(wú)法解決近親交配的問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為解決目前鯉魚(yú)選育養(yǎng)殖和種內(nèi)雜交養(yǎng)殖都存在近親交配比例高,導(dǎo)致群體遺傳衰退、經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降的問(wèn)題,而提供的一種鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法。本發(fā)明鯉魚(yú)按以下步驟進(jìn)行品種優(yōu)化一、對(duì)鯉魚(yú)個(gè)體進(jìn)行表型性狀挑選,符合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本;二、檢測(cè)親本間的遺傳信息;三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組,繁殖親本至少分成2個(gè)繁殖群體,每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離;四、自由交配,即得到品種優(yōu)化的鯉魚(yú)。本發(fā)明步驟一中表型性狀挑選公式為Xi^i士2S,公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值,X為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值,S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差。步驟二檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA;b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增;c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理;d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算,獲得遺傳信息。本發(fā)明方法可避免近親交配,因此品種能夠得到優(yōu)化,鯉魚(yú)的經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能顯著提高。具體實(shí)施方式'具體實(shí)施方式一本實(shí)施方式鯉魚(yú)按以下步驟進(jìn)行品種優(yōu)化一、對(duì)鯉魚(yú)個(gè)體進(jìn)行表型性狀挑選,符合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本;二、檢測(cè)親本間的遺傳信息;三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組,繁殖親本至少分成2個(gè)繁殖群體,每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離;四、每個(gè)繁殖群體內(nèi)的親本自由交配,即得到品種優(yōu)化的鯉魚(yú)。本實(shí)施方式還可以根據(jù)選育目標(biāo)對(duì)外觀與體型等不可量化的表型性狀進(jìn)行挑選。本實(shí)施方式可以對(duì)體型、體重、體度、體色等表型性狀進(jìn)行單一或綜合挑選,也可對(duì)懷卵量、飼料轉(zhuǎn)化率等綜合生產(chǎn)性狀進(jìn)行選擇。本實(shí)施方式步驟三中繁殖親本所分成的繁殖群體個(gè)數(shù)越多越好,可提供更多的選擇,從而選出品種優(yōu)異的鯉魚(yú);對(duì)于步驟三中不能配組的親本淘汰掉。本實(shí)施方式方法生產(chǎn)效率高明顯高于雌核發(fā)育方法。具體實(shí)施方式二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)是步驟一中表型性狀挑選公式為Xn^C士2S,公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值,又為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值,S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式一相同。由選擇強(qiáng)度可知1倍S則選擇強(qiáng)度最高,2倍S則選擇強(qiáng)度中等,3倍S則選擇強(qiáng)度最低,因此本實(shí)施方式將大于表型性狀平均值+二倍標(biāo)準(zhǔn)差和小于表型性狀平均值-二倍標(biāo)準(zhǔn)差的鯉魚(yú)個(gè)體舍去。具體實(shí)施方式三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)是步驟二檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA;b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增;c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理;d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算,獲得遺傳信息。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式一相同。本實(shí)施方式中要對(duì)提取過(guò)DNA的繁殖親本進(jìn)行標(biāo)記,可采用電子標(biāo)記、常規(guī)標(biāo)記方法(剪取背鰭、系不同顏色的塑料管等其它物理標(biāo)記方法)或分池飼養(yǎng)。本實(shí)施方式也可以不使用全部30對(duì)微衛(wèi)星引物,而只選用其中部分的微衛(wèi)星引物(但必須多于25對(duì)微衛(wèi)星引物)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。具體實(shí)施方式四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟b中每對(duì)微衛(wèi)星引物的PCR反應(yīng)總體積為25pL由18pLPCR反應(yīng)緩沖液、50ng繁殖親本DNA、l(iL微衛(wèi)星引物、lUTaq聚合酶和余量的無(wú)菌超純水制成;其中PCR反應(yīng)緩沖液每升由0.25mmo1pH值為8.3的Tris.Cl、1.25mmo1KC1、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP和余量的去離子水組成。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。具體實(shí)施方式五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟b中PCR反應(yīng)程序?yàn)?4""C預(yù)變性3min,94。C變性30sec,退火30s,72。C延伸30s,循環(huán)38次,最后72。C延伸5min。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。具體實(shí)施方式六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟b中選用的30對(duì)微衛(wèi)星引物及其退火溫度如表1所示。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>R:CTCGCTTCTGTAGGCATTHLJ383F:GGCTCCTCCTCATCCTCTR:GCACTTCTGCACCTTTCA(CA)"51HU392F:GGCTACAAGGCAACACTGR:TGCGGTTAATGAGGTCTG(CA)2254HLJ393F:TGCGGTCATTACTCATTCGR:CCCAGCACCTGTTTCCAC(CA)i。54HLJ398F:CATTACTTGAACTATCATCCAR:TGTGCTGAGGATTATTGG(CT)1654HLJ400F:AAGAAGCCTCGGTCCTCCR:AAAGCCCAAAGCACATCA(CA)2251HLJ805F:TCTGCTGAAGGGCGAACAR:ACGATCACGCTGCGACTA(CA)948HLJ806F:GGTGTCAGGCTTTAGTCCR:CATCTGAGTTTTCTCCAAGT(CA)4848HLJ809F:ATCATCACAGCCAAAGAAGTR:TACGGACATAGTGCAGACAA(CA)1248HLJ817F:GACGATCCAGCAGCAATGR:CTCTTCCTAAAGCCTCAAA(GT)2248HLJ848F:GAGAACACGGCTGGATGGR:GTGGGTGTTTGAATTGAGAT(CA)2948HLJ855F:CGACCGAACTCAGAACACR:GAGCACCGCATTAACAGA(AC)4448HLJ873F:AGTGTCGTTTATGCGTATCTTR:AGCTCGCCTACTCTTCTACT(CA)5048HLJ878F:AGTGGAGGACGTGACAGTR:AAGCAGAGCCTGATTTGA(CA)3754HLJ896F:ATCACCAGTACATTCACTR:CGTTTAGCAAAGGTTAGT(CA)3653HLJ900F:AAGGACGACGGAAGGTTTR:ACACTGACGGGTCAAGAG(CT)5(CA)3450具體實(shí)施方式七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟d中使用的親緣分析軟件為POPGENEN軟件和PHYLIP軟件。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。具體實(shí)施方式八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是步驟CPCR擴(kuò)增產(chǎn)物先在電壓為200V的條件下凝膠電泳2h,然后GoldView染色,再以溴酚藍(lán)為凝膠上樣液進(jìn)行凝膠電泳,之后用凝膠成像儀記錄電泳結(jié)果并用圖譜分析軟件進(jìn)行數(shù)字化處理。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。本實(shí)施方式所用的凝膠為濃度為2%的瓊脂糖凝膠。具體實(shí)施方式九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三或八的不同點(diǎn)是步驟C中使用的圖譜分析軟件為Gel-pro4.5軟件。其它步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三或八相同。具體實(shí)施方式十本實(shí)施方式鯉魚(yú)按以下步驟進(jìn)行品種優(yōu)化步驟一、對(duì)國(guó)家換新良種場(chǎng)的450尾鏡鯉親魚(yú)進(jìn)行體重、鱗被等表型性狀挑選,挑選公式為Xr^X士2S,公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值,X為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值,S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差,將大于表型性狀平均值+二倍標(biāo)準(zhǔn)差和小于表型性狀平均值-二倍標(biāo)準(zhǔn)差的鯉魚(yú)個(gè)體舍去,符合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本。步驟二、檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA對(duì)繁殖親本進(jìn)行常規(guī)物理標(biāo)記,標(biāo)記的同時(shí)一對(duì)一的剪取鰭條0.080.12克,放到有與繁殖親本標(biāo)記相同的離心管(可放入冰箱待用或直接用于提取DNA);向離心管中加入0.5mL裂解液(每升裂解液中含有50mL十二垸基肌氨酸鈉、200(ig蛋白酶K和0.01molEDTA)后在5(TC條件下消化lh,消化液再放入68'C的環(huán)境中處理15min;之后用與消化液等體積的提取液(提取液由酚、氯仿和異戊醇組成,酚、氯仿與異戊醇的體積比為25:24:1)抽提2次;然后用無(wú)DNA的RNA酶消化其中含有的RNA,并用提取液(同上)抽提2次;再經(jīng)數(shù)次透析(每升透析液中含有50mmo1pH值為8.0Tris*Cl、lOmmolEDTA、lOmmolNaCl)直到OD27Q<0.05;向透析液中加入透析液體積2倍的冰預(yù)冷的無(wú)水乙醇,經(jīng)沉淀后離心除上清液,再向沉淀中加入與沉淀等體積的冰預(yù)冷的質(zhì)量濃度為70%乙醇洗滌,并離心除去上清液在室溫條件下干燥,再用(1/10)XTE緩沖液溶解。(或者按現(xiàn)有其它標(biāo)準(zhǔn)方法提取可進(jìn)行PCR分析所用的DNA樣品,樣品應(yīng)置于4"環(huán)境中保存?zhèn)溆?b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增每對(duì)微衛(wèi)星引物的PCR反應(yīng)總體積為25pL由18pLPCR反應(yīng)緩沖液、50ng繁殖親本DNA、l(JL微衛(wèi)星引物、lUTaq聚合酶和余量的無(wú)菌超純水制成;其中PCR反應(yīng)緩沖液每升由0.25mmo1pH值為8.3的Tris,Cl、1.25mmo1KC1、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP(4種dNTP每種dNTP在PCR反應(yīng)緩沖液中的濃度各為0.005mmol/L)和余量的去離子水組成;PCR反應(yīng)程序?yàn)?4'C預(yù)變性3min,9fC變性30sec,退火30s,72。C延伸30s,循環(huán)38次,最后72。C延伸5min;其中選用的30對(duì)微衛(wèi)星引物及其退火溫度如表1所示。c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理PCR擴(kuò)增產(chǎn)物先在電壓為200V的條件下凝膠電泳2h,然后GoldView染色,再以溴酚藍(lán)為凝膠上樣液凝膠電泳,之后用凝膠成像儀記錄電泳結(jié)果并用圖譜分析軟件Gel-pro4.5進(jìn)行數(shù)字化處理。d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算使用的親緣分析軟件為POPGENEN軟件和PHYLIP軟件進(jìn)行親緣分析和計(jì)算,獲得繁殖親本的遺傳信息(可以根據(jù)遺傳信息剔除劣質(zhì)個(gè)體)。步驟三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組,繁殖親本分成2個(gè)繁殖群體,每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離。(本實(shí)施方式中每個(gè)雌性親本在群體中平均有近親雄魚(yú)2.5個(gè),選擇無(wú)近親關(guān)系或遺傳距離大于三代家系間近親的遺傳距離即遺傳距離〉0.20的親本進(jìn)行配組,去除掉遺傳距離小于0.20且近親關(guān)系重的無(wú)法配組的個(gè)體。)步驟四、每個(gè)繁殖群體內(nèi)的親本自由交配,即得到品種優(yōu)化的鯉魚(yú)。將國(guó)家換新良種場(chǎng)的另外450尾鏡鯉作為對(duì)照組、興國(guó)紅鯉作為空白組與本實(shí)施方式品種優(yōu)化的鯉魚(yú)進(jìn)行對(duì)比。在養(yǎng)殖條件相同的情況下,本實(shí)施方式品種優(yōu)化的鯉魚(yú)比對(duì)照組生長(zhǎng)速度平均快18.45%,比空白組生長(zhǎng)速度平均快131.38%;本實(shí)施方式品種優(yōu)化的鯉魚(yú)個(gè)體的體重比對(duì)照組的平均重18%,比空白組平均重130%。序列表<110>中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所<120>鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法<160>60<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>根據(jù)基因座Cca04設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(1)的上游引物<400>1atcccttaccgccctgtgt19<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座Cca04設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(1)的下游引物<400>2agctgaaaaacgctgtcacg20<210>3<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ019設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(2)的上游引物<400>3actgctggctcaggaaca18<210>4<211>19<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ019設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(2)的下游引物<400〉4agagcaaagatggtagctc19<210>5<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ037設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(3)的上游引物<400>5cgtggaggcataagggat18<210>6<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ037設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(3)的下游引物<400>6acgggagcgtacagaaat18<210>7<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ038設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(4)的上游引物<400>7cacag犯cgcatcsgtea18<210〉8<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ038設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(4)的下游引物<400>8tgtaaaccttcaacctcc18<210>9<211〉18<212>f)NA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HU041設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(5)的上游引物<400>9agaccaccgcagtaacaa18<210>10<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ041設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(5)的下游引物<400>10gactcactcagcaccaga18<210>11<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ044設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(6)的上游引物<400>11gtacagcgtgacagcat17<210〉12<211>18<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>根據(jù)基因座HLJ044設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(6)的下游引物<400>12aagttcatcggtgtcctc18<210>13<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ046設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(7)的上游引物<400>13aaccctgaactcacaaac18<210>14<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ046設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(7)的下游引物<400>14cacggaaactgagaagac18<210>15<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ049設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(8)的上游引物<400>15<210>16<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ049設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(8)的下游引物<400>16ctgtcacttctccttcca18<210>17<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ055設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(9)的上游引物<400>17ggtac犯cggg犯cc3ca18<210>18<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ055設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(9)的下游引物<400>18tgattgacaggcagtggg18<210〉19<211>18<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ058設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(10)的上游引物<400>19cagatggcagacaggtaa18<210>20<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ058設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(10)的下游引物<400>20gagcaagtgagggaacag18<210>21<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ060設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(11)的上游引物<400>21cgatcactggcaagatta18<210>22<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ060設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(11)的下游引物<400>22atggactacacctcaccc18<210>23<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ338設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(12)的上游引物<400>23gaagaatgggtgagtaaga19<210>24<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ338設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(12)的下游引物<400>24actaggatttggaagagc18<210>25<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ372設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(13)的上游引物<400>25tctacttctaccgccact18<210>26<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ372設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(13)的下游引物<400>26gactattcacctgcatctt19<210>27<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ379設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(14)的上游引物<400>27ggggagacgagaagtgca18<210>28<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ379設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(14)的下游引物<400>28agcaggtctgtgggcaag18<210>29<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ380設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(15)的上游引物<400>29aggcagacgaaaggteaa18<210>30<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ380設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(15)的下游引物<400>30ctcgcttctgtaggcatt18<210>31<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ383設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(16)的上游引物<400〉31ggctcctcctcatcctct18<210>32<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ383設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(16)的下游引物<400>32gcacttctgcacctttca18<210>33<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ392設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(17)的上游引物<400>33ggctacaaggcaacactg18<210>34<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ392設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(17)的下游引物<400>34tgcggttaatgaggtctg18<210>35<211>19<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ393設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(18)的上游引物<400>35tgcggtcattactcattcg19<210>36<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ393設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(18)的下游引物<400>36cccagcacctgtttccac18<210〉37<211>21<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ398設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(19)的上游引物<400〉37cattacttgaactatcatcca21<210〉38<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ398設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(19)的下游引物<400>38tgtgctgaggattattgg18<210>39<211〉18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ400設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(20)的上游引物<400>39aagaagcctcggtcctcc18<210>40<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ400設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(20)的下游引物<400>40aaagcccaasgcacatcs18<210>41<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ805設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(21)的上游引物<400>41tctgctgaagggcgaaca18<210>42<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ805設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(21)的下游引物<400>42acgatcacgctgcgacta18<210>43<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ806設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(22)的上游引物<400>43ggtgtc鄉(xiāng)ctttagtcc18<210〉44<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ806設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(22)的下游引物<400>44catctgagttttctccaagt20<210>45<211>20<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ809設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(23)的上游引物<400>45atcatcacagccaaagaagt20<210>46<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ809設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(23)的下游引物<400〉46tacggacatagtgcagacaa20<210>47<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ817設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(24)的上游引物<400>47gacgatccagcagcaatg18<210>48<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ817設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(24)的下游引物<400>48ctcttcctaaagcctcaaa19<210>49<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ848設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(25)的上游引物<400>49gagaacacggctggatgg18<210>50<211〉20<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根據(jù)基因座HLJ848設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(25)的下游引物<400>50gtgggtgtttgaattgagat20<210>51<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ855設(shè)計(jì)微衛(wèi)呈引物(26)的上游引物<400〉51cgaccgaactcagaacac18<210>52<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ855設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(26)的下游引物<楊>52gagcaccgcattaacaga18<210〉53<211〉21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ873設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(27)的上游引物<400>53agtgtcgtttatgcgtatct121<210>54<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ873設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(27)的下游引物z/inr、《/i、,V/V/,J,agctcgcctactcttctact20<210〉55<211>18<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>根據(jù)基因座HLJ878設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(28)的上游引物<400>55agtggaggacgtgacagt18<210>56<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ878設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(28)的下游引物<400>56aagcagagcctgatttga18<210>57<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ896設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(29)的上游引物<400>57atcaccagtacattcact18<210>58z,11\1O、厶11,iu<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ896設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(29)的下游引物<400>58cgtttagcaaaggttagt18<210>59<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根據(jù)基因座HLJ900設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(30)的上游引物<400>59aaggacgacggaaggttt18<210>60<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220〉<223〉根據(jù)基因座HLJ900設(shè)計(jì)微衛(wèi)星引物(30)的下游引物<400>60acactgacgggtcaagag18權(quán)利要求1、鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于鯉魚(yú)按以下步驟進(jìn)行品種優(yōu)化一、對(duì)鯉魚(yú)個(gè)體進(jìn)行表型性狀挑選,符合要求的鯉魚(yú)作為繁殖親本;二、檢測(cè)親本間的遺傳信息;三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行繁殖配組,繁殖親本至少分成2個(gè)繁殖群體,每個(gè)繁殖群體中任意一對(duì)雌雄個(gè)體間的遺傳距離應(yīng)大于家系三代間的遺傳距離;四、每個(gè)繁殖群體內(nèi)的親本自由交配,即得到品種優(yōu)化的鯉魚(yú)。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟一中表型性狀挑選公式為Xi^Xi2S,公式中Xn為親本的表型性狀測(cè)定值,X為鯉魚(yú)群體表型性狀的平均值,S為鯉魚(yú)群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟二檢測(cè)親本間的遺傳信息a.提取繁殖親本DNA;b.繁殖親本DNA均用30對(duì)微衛(wèi)星引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增;c.利用圖譜分析軟件對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行數(shù)字化處理;d.數(shù)字化數(shù)據(jù)導(dǎo)入親緣分析軟件分析計(jì)算,獲得遺傳信息。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟b中每對(duì)微衛(wèi)星引物的PCR反應(yīng)總體積為25pL由18pLPCR反應(yīng)緩沖液、50ng繁殖親本DNA、lpL微衛(wèi)星引物、lUTaq聚合酶和余量的無(wú)菌超純水制成;其中PCR反應(yīng)緩沖液每升由0.25mmo1pH值為8.3的Tris'Cl、1.25mmo1KC1、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmo1dNTP和余量的去離子水組成。5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟b中PCR反應(yīng)程序?yàn)?4。C預(yù)變性3min,94。C變性30sec,退火30s,72。C延伸30s,循環(huán)38次,最后72。C延伸5min。6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟b中選用的30對(duì)微衛(wèi)星引物及其退火溫度分別為微衛(wèi)星弓l物(1)上游弓l物ATCCCTTACCGCCCTGTGT下游引物AGCTGAAAAACGCTGTCACG退火溫度為50°C,微衛(wèi)星引物(2)上游引物ACTGCTGGCTCAGGAACA下游引物AGAGCAAAGATGGTAGCTC退火溫度為53°C,微衛(wèi)星引物(3)上游引物CGTGGAGGCATAAGGGAT退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為微衛(wèi)星引物退火溫度為下游引物53。C,(4)上游引物下游引物.-53°C,(5)上游引物下游引物53°C,(6)上游引物下游引物53°C,(7)上游引物下游引物-53°C,(8)上游引物下游引物54°C,(9)上游引物下游引物54°C,(10)上游引物:下游引物:53°C,(11)上游引物:下游引物::54°C,(12)上游引物:下游引物::51°C,(13)上游引物:下游引物::54°C,ACGGGAGCGTACAGAAATCACAGAACGCATCAGTAATGTAAACCTTCAACCTCCAGACCACCGCAGTAACAAGACTCACTCAGCACCAGAGTACAGCGTGACAGCATAAGTTCATCGGTGTCCTCAACCCTGAACTCACAAACCACGGAAACTGAGAAGACGATTTGTGCTCCTCAACCCTGTCACTTCTCCTTCCAGGTACAACGGGAACCACATGATTGACAGGCAGTGGGCAGATGGCAGACAGGTAAGAGCAAGTGAGGGAACAGCgATCACTGGCAAGATTAATGGACTACACCTCACCCGAAGAATGGGTGAGTAAGAACTAGGATTTGGAAGAGCTCTACTTCTACCGCCACTGACTATTCACCTGCATCTT微衛(wèi)星引物(14)上游引物:下游引物:退火溫度為54°C,微衛(wèi)星引物(15)上游引物:下游引物:退火溫度為54°C,微衛(wèi)星引物(16)上游引物:下游引物退火溫度為51°C,微衛(wèi)星引物(17)上游引物下游引物退火溫度為54°C,微衛(wèi)星引物(18)上游引物下游引物退火溫度為54°C,微衛(wèi)星引物(19)上游引物下游引物-退火溫度為54°C,微衛(wèi)星引物(20)上游引物下游引物退火溫度為51°C,微衛(wèi)星引物(21)上游引物:下游引物:退火溫度為48°C,微衛(wèi)星引物(22)上游引物:下游引物-退火溫度為48°C,微衛(wèi)星引物(23)上游引物-下游引物退火溫度為48°C,微衛(wèi)星引物(24)上游引物:下游引物:GGGGAGACGAGAAGTGCAAGCAGGTCTGTGGGCAAGAGGCAGACGAAAGGTAAACTCGCTTCTGTAGGCATTGGCTCCTCCTCATCCTCTGCACTTCTGCACCTTTCAGGCTACAAGGCAACACTGTGCGGTTAATGAGGTCTGTGCGGTCATTACTCATTCGCCCAGCACCTGTTTCCACCATTACTTGAACTATCATCCATGTGCTGAGGATTATTGGAAGAAGCCTCGGTCCTCCAAAGCCCAAAGCACATCATCTGCTGAAGGGCGAACAACGATCACGCTGCGACTAGGTGTCAGGCTTTAGTCCCATCTGAGTTTTCTCCAAGTATCATCACAGCCAAAGAAGTTACGGACATAGTGCAGACAAGACGATCCAGCAGCAATGCTCTTCCTAAAGCCTCAAA退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為:微衛(wèi)星引物退火溫度為.-48°C,(25)上游引物:下游引物:48°C,(26)上游引物:下游引物:48。C,(27)上游引物:下游引物:48°C,(28)上游引物:下游引物:54°C,(29)上游引物:下游引物:53。C,(30)上游引物:下游引物-50°C。GAGAACACGGCTGGATGGGTGGGTGTTTGAATTGAGATCGACCGAACTCAGAACACGAGCACCGCATTAACAGAAGTGTCGTTTATGCGTATCTTAGCTCGCCTACTCTTCTACTAGTGGAGGACGTGACAGTAAGCAGAGCCTGATTTGAATCACCAGTACATTCACTCGTTTAGCAAAGGTTAGTAAGGACGACGGAAGGTTTACACTGACGGGTCAAGAG7、根據(jù)權(quán)利要求3所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟d中使用的親緣分析軟件為POPGENEN軟件和PHYLIP軟件。8、根據(jù)權(quán)利要求3所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟cPCR擴(kuò)增產(chǎn)物先在電壓為200V的條件下凝膠電泳2h,然后GoldView染色,再以溴酚藍(lán)為凝膠上樣液進(jìn)行凝膠電泳,之后用凝膠成像儀記錄電泳結(jié)果并用圖譜分析軟件進(jìn)行數(shù)字化處理。9、根據(jù)權(quán)利要求3或8所述的鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,其特征在于步驟c中使用的圖譜分析軟件為Gelpro4.5軟件。全文摘要鯉魚(yú)品種優(yōu)化的方法,它涉及一種魚(yú)類品種優(yōu)化的方法。它解決了目前鯉魚(yú)選育養(yǎng)殖和種內(nèi)雜交養(yǎng)殖都存在近親交配比例高,導(dǎo)致群體遺傳衰退、經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降的問(wèn)題。選育步驟一、表型性狀挑選;二、檢測(cè)親本間的遺傳信息;三、根據(jù)遺傳信息進(jìn)行群體繁殖配組;四、每個(gè)繁殖群體內(nèi)的親本自由交配,即得到品種優(yōu)化的鯉魚(yú)。本發(fā)明方法可避免近親交配,因此品種能夠得到優(yōu)化,鯉魚(yú)的經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能顯著提高。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101120667SQ20071014436公開(kāi)日2008年2月13日申請(qǐng)日期2007年9月26日優(yōu)先權(quán)日2007年9月26日發(fā)明者匡友誼,孫效文,曹頂臣,梁利群,魯翠云申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所