專利名稱：鏈霉菌s1-5及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株可防治植物病原真菌和殺螨的新菌株——鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)及其在抗植物病原真菌和殺螨中的應(yīng)用，以及用鏈霉菌S1-5制得的可用于抗植物病原真菌和殺螨的乳劑。
背景技術(shù)：
生物農(nóng)藥以其低毒、無殘留、無污染、原料易得等特性被人們公認(rèn)為是21世紀(jì)的綠色農(nóng)藥、理想農(nóng)藥。開發(fā)新型生物農(nóng)藥無疑是一種兼具社會效益和經(jīng)濟效益的超前行為。螨類和植物病原真菌是造成蔬菜、茶葉、果樹和棉花等多種經(jīng)濟作物的主要危害，據(jù)統(tǒng)計，全國僅螨害需防治面積不少于億畝，常年造成產(chǎn)量損失12％～20％，嚴(yán)重時達(dá)25％以上。植物病原真菌的危害造成的損失更是難以估量。傳統(tǒng)的生物農(nóng)藥，不管是蘇云金芽孢桿菌殺蟲劑還是其它微生物源殺蟲劑都有一個共同的弊端，那就是殺蟲譜窄，持效期短、藥效慢。阿維菌素對螨類活性高，但對很多鱗翅目害蟲毒力不夠理想。多氧霉素和尼可霉素是一類能抗真菌的嘧啶核苷肽類抗生素，現(xiàn)在兩者都主要用作抗植物病原真菌的農(nóng)用抗生素，但多氧霉素滲透進入真菌胞內(nèi)的能力較差，活性較差不理想，隨著這些藥物的長期使用，又出現(xiàn)真菌對該類藥物的耐藥性。因此，開發(fā)安全高效的新型抗真菌殺螨蟲生物農(nóng)藥十分迫切。
迄今尚沒有鏈霉菌(Streptomyces sp.)能同時具備防治植物病原真菌和殺螨蟲雙重效果的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是為了提供一株可防治植物病原真菌和殺螨的新菌株——鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)，及其在抗植物病原真菌和殺螨中的應(yīng)用。
為達(dá)到發(fā)明目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案是 鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期2007年5月24日，保藏編號CCTCC NoM207073。
本發(fā)明菌株的獲得從全國各地風(fēng)景名勝區(qū)，如安徽黃山、江西廬山和廣西桂林、海南三亞采集土壤樣品55份，通過樣品初篩，復(fù)篩，獲得具有抗植物病原真菌和殺螨能力的純培養(yǎng)物。對該純培養(yǎng)物進行了形態(tài)和生理生化鑒定，將其鑒定為鏈霉菌(Streptomyces sp.)，命名為鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)。
菌株的鑒定 1)菌株的培養(yǎng)特征孢子絲直或柔曲，無螺旋。孢子表面光滑。蔗糖查氏瓊脂上菌落圓形，氣絲絨狀，波曲形，叢生，孢子絲分節(jié)，淺黃色至綠灰色。在葡萄糖天門冬素瓊脂上菌落灰白色，圓形，有同心環(huán)，孢子絲雜亂，叢生，近松螺旋型，從上方觀察為逆時針左旋，孢子呈球形或卵形，大小不均，孢子表面光滑。在高氏一號瓊脂上菌落圓形，有同心環(huán)狀，表面有皺狀隆起，邊緣整齊向四周呈放射狀擴散，粉狀，略呈淺黃色或淺灰色，孢子絲近松螺旋型或波曲，叢生，從上方看為逆時針左旋。在燕麥片培養(yǎng)基菌落圓形，有同心圓狀，凹凸不平，灰白色，呈同心圓狀，上生黑色圓珠狀物。在克氏一號瓊脂上菌落灰色或灰白色，圓形，上生小黑點，有同心圓，孢子絲近松螺旋型或波曲，叢生。菌株顯微特征(15×100)和JEOL-1230電鏡照片見圖1。
2)菌株的生理生化特性產(chǎn)淺黃色可溶性色素。菌株能使液化明膠，紅褐色素，水解淀粉，胨化牛乳，產(chǎn)生H2S，產(chǎn)生黑色素，在纖維素上能夠生長。對棉子糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、半乳糖、纖維二糖、L-鼠李糖、麥芽糖、甘露糖、D-果糖、肌醇、甘露醇等12種糖醇均有不同程度的利用能力。結(jié)果表明，菌株S1-5的生理特征與放線菌(Actinomycete)中的鏈霉菌屬(Streptomyces)極為相似。
3)菌株的確定依據(jù)菌體形態(tài)，S1-5菌株的基絲無隔，不斷裂，孢子絲呈鏈狀直絲，確定S1-5屬于鏈霉菌屬。S1-5按培養(yǎng)性狀鑒定種的標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)菌落圓形，有同心環(huán)狀，表面有皺狀隆起，邊緣整齊向四周呈放射狀擴散，粉狀；氣生菌絲多單叉分枝，孢子絲波曲形或近松螺旋型；明膠液化，石蕊牛乳先胨化后凝固；淀粉水解能力較強，纖維素上生長，產(chǎn)生硫化氫，有黑色素產(chǎn)生。依此查閱文獻初步確定S1-5屬于鏈霉菌(Streptomyces sp.)。
鏈霉菌S1-5可用于防治植物病原真菌和/或螨類害蟲引起的作物病害中。所述植物病原真菌為下列之一①蕃茄葉霉病菌(褐枝孢菌Fulriafulva)、②煙草疫霉菌(Phytophthora nicotianae)、③煙草赤星病菌(長柄格孢菌Alternaria alternata)、④水稻紋枯病菌(立枯絲核菌Rhizotoniasolani)。螨類害蟲以棉花、果樹紅蜘蛛為代表。
具體的，所述的應(yīng)用為將鏈霉菌S1-5接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，以發(fā)酵培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液或發(fā)酵液離心后的上清液稀釋后作為藥液，噴灑于作物植株上。發(fā)酵液離心后得到的濾餅，可用蒸餾水水洗后離心，得到的濾餅加無水乙醇，浸泡后離心，取上清液稀釋后也可作為藥液噴灑于作物植株上。
或者，所述的應(yīng)用為將鏈霉菌S1-5接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液離心后取上清液，用乙酸乙酯萃取，下層液體經(jīng)柱層析分離得分離液，分離液經(jīng)濃縮、純化，得到生物活性物質(zhì)結(jié)晶可按常規(guī)方法配制成水劑或乳劑，用于作物病害的防治。
所述生物活性物質(zhì)結(jié)晶的有效質(zhì)量濃度為2-3％(指水劑或乳劑母液中的濃度，實際使用時可根據(jù)需要稀釋1000～5000倍)。
所述發(fā)酵培養(yǎng)基可為本領(lǐng)域中常見適用于鏈霉菌的培養(yǎng)基，本發(fā)明中按如下組成配制1％黃豆餅粉浸液20g，葡萄糖20g，碳酸鈣2.0g，氯化鈉2.5g，蒸餾水1000mL。
鏈霉菌S1-5還可應(yīng)用與殺滅鱗翅目害蟲。
本發(fā)明還涉及一種用所述的鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)制備的乳劑，所述乳劑由如下方法制備得到將鏈霉菌S1-5接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液離心后取上清液，用乙酸乙酯萃取，下層液體經(jīng)柱層析分離得分離液，分離液經(jīng)濃縮、純化，得到生物活性物質(zhì)結(jié)晶，再按生物活性物質(zhì)結(jié)晶、水、二甲苯、洗衣粉質(zhì)量之比為0.1∶2∶2∶0.03進行配制，得到所述的乳劑。
所述發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制1％黃豆餅粉浸液20g，葡萄糖20g，碳酸鈣2.0g，氯化鈉2.5g，蒸餾水1000mL。
本發(fā)明乃從自然界篩選得到一株鏈霉菌(Streptomyces sp.)，其產(chǎn)生的一種新型廣譜抗真菌和殺蟲成分，試驗證明它不僅對多種危害農(nóng)作物的刺吸式口器螨蟲及其蟲卵具有極高的殺滅活性，還對很多鱗翅目害蟲毒力很高(阿維菌素對很多鱗翅目害蟲毒力不夠理想)，而且對植物病原真菌也有很好的防治效果。因此其優(yōu)勢體現(xiàn)在①抗菌殺蟲雙重效果。傳統(tǒng)生物農(nóng)藥要使用2次，利用本發(fā)明制得農(nóng)藥使用1次即可達(dá)到殺真菌和殺螨蟲的效果，大大降低農(nóng)業(yè)成本，減輕農(nóng)民負(fù)擔(dān)。②藥效快。持效期長達(dá)30天，同時也具備對人畜安全、不殺傷天敵和有益昆蟲、對防治對象不易產(chǎn)生抗藥性、不污染環(huán)境、可被土壤微生物迅速降解又不影響土壤肥力和微生物區(qū)系，無生物富集，對生態(tài)十分安全等優(yōu)點，是一種關(guān)鍵酶抑制劑類農(nóng)藥，與其他抗蟲藥物無交叉耐藥性。


圖1為菌株顯微特征(15×100)(A)和JEOL-1230電鏡照片(B)； 圖2為長柄格孢菌抑菌圈； 圖3為立枯絲核菌抑菌圈； 圖4為濃縮后得到的結(jié)晶HPLC色譜圖。
具體實施例方式 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此 實施例1發(fā)酵液的獲得 (1)斜面培養(yǎng)采用PDA培養(yǎng)基，斜面涂布鏈霉菌S1-5菌種，30℃下培養(yǎng)2～3天，獲得斜面菌種； (2)種子培養(yǎng)斜面菌種接種至高氏1號培養(yǎng)基，30℃下培養(yǎng)2～3天，獲得鏈霉菌S1-5菌落； (3)發(fā)酵培養(yǎng)原始發(fā)酵培養(yǎng)基配制1％黃豆餅粉浸液20mL、葡萄糖20g、蛋白胨3.0g、碳酸鈣2.0g、氯化鈉2.5g、蒸餾水1000ml。從高氏1號培養(yǎng)基培養(yǎng)的鏈霉菌S1-5菌落上刮取孢子置于無菌水中，振蕩10min，配成濃度1×108個/ml的孢子懸浮液，以10％(V/V)接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)，在搖床上250ml三角燒瓶，置于恒溫?fù)u床培養(yǎng)5d，得發(fā)酵液，備用。
實施例2發(fā)酵液提取物的獲得與測定 取發(fā)酵液50ml，5000r/min，離心10min，上清液加等體積無水乙醇即為生物活性物質(zhì)上清液粗提物。濾餅用蒸餾水水洗兩次離心，棄去上清液，濾餅加無水乙醇至還原到發(fā)酵液體積，浸泡1h后，5000r/min離心10min，取上清液即生物活性物質(zhì)菌絲體粗提物。將此兩種粗提物與發(fā)酵液經(jīng)離心后的上清液一起進行抑菌作用和殺螨試驗的測定，同時以相同的乙醇水溶液作對照。
抑菌作用測定方法(四種植物病原真菌為浙江大學(xué)植保系惠贈，其它試驗微生物為浙江工業(yè)大學(xué)微生物實驗室保藏) 參照夏諶恩等的方法，分別采用菌餅法、濾紙片法和杯碟法，均設(shè)置3次重復(fù)。用濾紙片分別浸取少量離心后上清液、上清液粗提物和生物活性物質(zhì)菌絲體提取物放到褐枝孢菌、煙草疫霉菌、長柄格孢菌、主枯絲核菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的含菌平板上。將平板在28℃條件下培養(yǎng)2-3天，分別用游標(biāo)卡尺測定其抑菌圈直徑大小。結(jié)果見表1 表1S1-5生物活性物質(zhì)粗提物對植物病原真菌的抑菌作用 殺螨作用測定方法 將離心后上清液分別以原液和稀釋10倍液、稀釋100倍液供試，蒸餾水對照，每濃度處理設(shè)3個重復(fù)，從柑桔園采集柑桔全爪螨雌成螨于室內(nèi)進行殺螨測定，每隔6h觀察一次，殺螨率＝已殺螨數(shù)\原螨數(shù)。結(jié)果見表2 表2S1-5生物活性物質(zhì)殺螨試驗測定結(jié)果 結(jié)論S1-5生物活性物質(zhì)上清液原液6h后對殺滅棉花紅蜘蛛就有很好的殺滅效果，10倍稀釋液12h后基本可殺滅棉花紅蜘蛛，100倍稀釋液18h后對棉花紅蜘蛛殺滅率為100％。
實施例3生物活性物質(zhì)的獲得與測定 鏈霉菌S1-5發(fā)酵液離心后，取上清液，加入等體積的乙酸乙酯，萃取，將上層減壓濃縮收集。將下層收集做抑菌測定，用乙酸乙酯作為淋洗劑走柱子，洗脫劑為石油醚/乙酸乙酯，柱層析硅膠(200～300目)為固定相，使用干法裝柱，用試管于下端收集洗脫液，每管收集10mL，一共收集10管。生物活性跟蹤將收集的10管洗脫液及萃取的下層溶液使用濾紙片法分別測定其對供試菌(長柄格孢菌和立枯絲核菌，浙江大學(xué)植保系惠贈)的抑菌效果(結(jié)果數(shù)據(jù)見圖2、圖3)。HPLC檢測柱層析效果，樣品在Carbohydrate Analysis 3.9×300mm Column分析柱上分析時，其抑菌物質(zhì)主峰對應(yīng)的流出液同時于Water 2996 Photodiode二極管陣列全波長(190～400nm)檢測器上進行掃描，測定其最大吸收峰處的波長，并繪制紫外吸收光譜。柱溫25℃；流速1.0ml/min；進樣量10μL；流動相甲醇∶水(30∶70體積比)。
將以上具有抑菌活性的分離液于15000r/min下離心10min，取上清液，加入等體積二甲苯，萃取，取有機相，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮成濃稠狀液體，于室溫下放置一天。將結(jié)晶用甲醇洗下，離心棄去沉淀，再次旋轉(zhuǎn)濃縮，于室溫下放置過夜，得到生物活性物質(zhì)結(jié)晶。將結(jié)晶用甲醇洗下(色譜醇)，收集做HPLC，條件同上(HPLC色譜圖見圖4、表3)。
表3HPLC結(jié)果數(shù)據(jù) 實施例4乳劑制備與測定 取按實施例3方法所得生物活性物質(zhì)結(jié)晶，按生物活性物質(zhì)結(jié)晶、膠體硫(杭州高晶精細(xì)化工有限公司)、水、二甲苯、洗衣粉(市購，雕牌普通洗衣粉)質(zhì)量之比為0.1∶1∶2∶2∶0.03進行配制，先將膠體硫溶于水中，加入洗衣粉攪拌，之后慢慢地倒入二甲苯，邊倒邊攪，持續(xù)5～10min，最后加入生物活性物質(zhì)結(jié)晶混勻，得到所述的乳劑。
室內(nèi)殺螨、殺卵效果測定 從柑桔園采集柑桔全爪螨雌成螨和卵于室內(nèi)進行自制乳劑2500倍液殺螨和殺卵測定，并用40％水胺硫磷1500倍液、20％三氯殺螨醇1500倍液作對比，設(shè)清水對照，殺螨率＝已殺螨數(shù)\原螨數(shù)。結(jié)果表明，自制乳劑2500倍液對柑桔全爪螨雌成蟲和卵的殺傷力很強，殺蟲率達(dá)92.1％～94.8％，殺卵率達(dá)89.7％～93.4％，與40％水胺硫磷和20％三氯殺螨醇500倍液效果基本一致。
實施例5自制乳劑防治棉花紅蜘蛛 乳劑的配制 取生物活性物質(zhì)結(jié)晶，按生物活性物質(zhì)結(jié)晶∶膠體硫∶水∶二甲苯∶洗衣粉＝0.1∶1∶2∶2∶0.03的重量比配制，先將膠體硫溶于水中，加入洗衣粉攪拌，之后慢慢地倒入二甲苯，邊倒邊攪，持續(xù)5～10min，最后加入生物活性物質(zhì)結(jié)晶混勻，制成母液。使用時按不同濃度稀釋加水。
田間防治試驗 在棉花田進行了自制乳劑3000倍液田間噴霧防治棉花紅蜘蛛試驗，以40％水胺硫磷1500倍液、20％三氯殺螨醇1500倍液為對照。結(jié)果如下 自制乳劑3000倍液藥后5d防效為87.8％，藥后10d防效為89.3％，藥后15d為98.5％； 40％水胺硫磷1500倍液藥后5d防效為99.6％，藥后10d為96.1％。藥后15d僅63.5％； 20％三氯殺螨醇1500倍液藥后5d防效為99.7％，藥后10d為98.7％，藥后15d僅為56.1％。
在自制乳劑1000ml中加入7.5％魚藤乳油60ml混合得混合液，取其1500倍液施用，5d后蟲口減退率可達(dá)90％以上，30～60d時，防治效果穩(wěn)定在90％～99％之間，而水胺硫磷、三氯殺螨醇處理區(qū)僅為40％左右。
本制劑原料易得，成本低廉，配制簡便，使用安全，對天敵殺傷作用小，無殘毒、殘留，同時可兼治其他害蟲，可在果樹及其他作物上廣泛推廣使用。
實施例6防治水稻紋枯病研究 (1)菌株S1-5在田間植株上的定殖能力測定 在水稻苗期，將按實施例1方法制得的菌株S1-5發(fā)酵液(3.6×105cfu/mL)噴施在水稻植株上，從接種后第1天開始觀察記載葉片上每平方厘米的菌體數(shù)量變化。
(2)田間防治效果測定 處理分別為S1-5發(fā)酵液(3.6×105cfu/mL)，20％井崗霉素WP(湖南生物藥廠)(CK1)為藥劑對照和清水對照(CK2)。每個處理4次重復(fù)，每重復(fù)小區(qū)面積30m2。各小區(qū)雙埂包膜隔離，小區(qū)間距和小區(qū)與保護行間距為80cm，保護行品種為崗優(yōu)527。移栽前，用玉米粉培養(yǎng)的紋枯病菌與河沙混勻混合。每小區(qū)200g，均勻撒栽小區(qū)內(nèi)，于分蘗盛期和孕穗期進行防治。根據(jù)水稻葉鞘和葉片危害癥狀程度分級，以株為單位每小區(qū)對角線五點取樣，每點調(diào)查相連5叢，共25叢，記錄總株數(shù)、病株數(shù)和病級數(shù)。0級全株無??；1級第四葉片及以下各葉鞘、葉片發(fā)病(以劍葉為第一片葉)；3級第三葉片及以下各葉鞘、葉片發(fā)??；5級第二葉片及以下各葉鞘、葉片發(fā)?。?級劍葉葉片及以下各葉鞘、葉片發(fā)??；9級全株發(fā)病，提早枯死。
鏈霉菌S1-5發(fā)酵液對水稻紋枯病具有顯著的控制效果，4年多點田間試驗結(jié)果顯示，鏈霉菌S1-5發(fā)酵液防治紋枯病效果穩(wěn)定在80％～85％之間，與對照藥劑20％井崗霉素的防治效果相當(dāng)。根據(jù)實際小區(qū)測產(chǎn)結(jié)果，供試鏈霉菌S1-5發(fā)酵液處理均有顯著的保產(chǎn)作用(6.91％～18.13％)。
實施例7二次防治法突擊防治桑園鱗翅目類害蟲 每年的8月中下旬以后，桑園中的鱗翅目害蟲特別是桑尺蠖進入高發(fā)期，正處于1齡期，蟲量達(dá)2400～62000只/畝。桑園中桑螟成蟲也陸續(xù)羽化，在9月初進入幼蟲盛孵期。本實施例提到的二次防治法突擊防治桑園鱗翅目類害蟲，第一次防治時間可定在8月下旬，第二次防治時間可在9月上旬。
乳劑的配制取生物活性物質(zhì)結(jié)晶，按生物活性物質(zhì)結(jié)晶∶膠體硫∶水∶80％敵敵畏(湖南生物藥廠)1000倍稀釋液＝0.1∶1∶2∶2的重量比配制，先將膠體硫溶于水中，加入敵敵畏1000倍稀釋液，邊倒邊攪，持續(xù)5～10min，最后加入生物活性物質(zhì)結(jié)晶混勻，制成母液。使用時按不同濃度稀釋加水。安全用葉間隔期5天。
田間防治試驗 在大蠶用葉桑園進行了自制乳劑2500倍液田間噴霧防治桑園中的鱗翅目害蟲特別是桑尺蠖的試驗，以40％桑寶(江蘇省常州市江南農(nóng)藥廠)2500倍加60％敵馬(江蘇省常州市江南農(nóng)藥廠)1500倍加40％樂果(江蘇省常州市江南農(nóng)藥廠)1000倍液為對照。結(jié)果如下 自制乳劑2500倍液藥后5d防效為79.4％，藥后10d防效為93.7％，藥后15d為92.3％； 以40％桑寶2500倍加60％敵馬1500倍加40％樂果1000倍液藥后5d防效為88.4％，藥后10d為96.7％。藥后15d僅63.5％； 中秋期桑樹枝條長、長勢旺，如果再加上氣候干燥，溫度較高，桑條上下的葉片農(nóng)藥殘毒期有一定的差異，因此用葉前必須做到先試后吃，謹(jǐn)防蠶兒農(nóng)藥中毒。在噴藥時要使用專用噴霧器、用潔凈水配藥、濃度配準(zhǔn)、噴霧要細(xì)、藥液噴足，以提高防效和確保養(yǎng)蠶安全。
權(quán)利要求
1.鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期2007年5月24日，保藏編號CCTCC NoM207073。
2.鏈霉菌S1-5在防治植物病原真菌和/或螨類害蟲引起的作物病害中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述植物病原真菌為下列之一
①蕃茄葉霉病菌、②煙草疫霉菌、③煙草赤星病菌、④水稻紋枯病菌。
4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為將鏈霉菌S1-5接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，以發(fā)酵培養(yǎng)獲得的發(fā)酵液或發(fā)酵液離心后的上清液稀釋后作為藥液，噴灑于作物植株上。
5.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為將鏈霉菌S1-5接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液離心后取上清液，用乙酸乙酯萃取，下層液體經(jīng)柱層析分離得分離液，分離液經(jīng)濃縮、純化，得到生物活性物質(zhì)結(jié)晶用于作物病害的防治。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述生物活性物質(zhì)結(jié)晶的有效質(zhì)量濃度為2～3％。
7.如權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)用，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制1％黃豆餅粉浸液20mL，葡萄糖20g，碳酸鈣2.0g，氯化鈉2.5g，蒸餾水1000mL。
8.鏈霉菌S1-5在殺滅鱗翅目害蟲中的應(yīng)用。
9.一種用權(quán)利要求1所述的鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)制備的乳劑，所述乳劑由如下方法制備得到將鏈霉菌S1-5接種至發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液離心后取上清液，用乙酸乙酯萃取，下層液體經(jīng)柱層析分離得分離液，分離液經(jīng)濃縮、純化，得到生物活性物質(zhì)結(jié)晶，再按生物活性物質(zhì)結(jié)晶、膠體硫、水、二甲苯、洗衣粉質(zhì)量之比為0.1∶1∶2∶2∶0.03進行配制，得到所述的乳劑。
10.如權(quán)利要求9所述的乳劑，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)基按如下組成配制1％黃豆餅粉浸液20mL，葡萄糖20g，碳酸鈣2.0g，氯化鈉2.5g，蒸餾水1000mL。
全文摘要
本發(fā)明提供了一株可防治植物病原真菌和殺螨的新菌株——鏈霉菌S1-5及其在抗植物病原真菌和殺螨中的應(yīng)用。鏈霉菌S1-5(Streptomyces sp.S1-5)，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期2007年5月24日，保藏編號CCTCC NoM 207073。利用本發(fā)明制得農(nóng)藥使用1次即可達(dá)到殺真菌和殺螨蟲的效果，大大降低農(nóng)業(yè)成本，減輕農(nóng)民負(fù)擔(dān)；且持效期長達(dá)30天，同時也具備對人畜安全、不殺傷天敵和有益昆蟲、對防治對象不易產(chǎn)生抗藥性、不污染環(huán)境、可被土壤微生物迅速降解又不影響土壤肥力和微生物區(qū)系，無生物富集，對生態(tài)十分安全等優(yōu)點，是一種關(guān)鍵酶抑制劑類農(nóng)藥，與其他抗蟲藥物無交叉耐藥性。
文檔編號C12N1/20GK101182483SQ200710156460
公開日2008年5月21日 申請日期2007年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月31日
發(fā)明者吳石金 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)