專利名稱：：具有α_1a腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑特性的肽及其用途的制作方法具有OCh腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑特性的肽及其用途本發(fā)明涉及肽及其治療和藥理學(xué)用途，所述肽具有o^腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑的活性。常規(guī)的腎上腺素能受體(腎上腺素受體或AR)分為9種在藥理學(xué)上進(jìn)行了^的受體亞型3種cd腎上腺素受體ala、alb、ald;3種012腎上腺素受體a2a、a2b、012<:以及3種p腎上腺素受體(^、p2、p3。這9種受體均可被兒茶酚胺、腎上腺素和去甲腎上腺素激活，通過與G蛋白偶聯(lián)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來產(chǎn)生不同的生理效應(yīng)。al受體尤其表達(dá)在交感神經(jīng)系統(tǒng)的突觸后位置，其活化導(dǎo)致受其控制的平滑肌發(fā)生收縮。這些受體在正?；虿±頎顟B(tài)的心血管及泌尿生殖系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用(綜述參見Piascik等，Pharmacol.Ther.，1996,72,215-241;Michelotti等，Pharmacology&Therapeutics,2000,88，281-309)。另夕卜，已經(jīng)證明，男性和女性中所有泌尿生殖器官的肌肉張力均主要由cth亞型的激活來控制，而在靜脈和動(dòng)脈中則由a化和aw亞型的激活來特別地控制(BarrowJ.C.等，J.Med.Chem.,2000,43,2703-2718)。因此，阻斷(Xh受體使得有可能獲得泌尿生殖道平滑肌的松弛，這可用于治療排尿功能障礙和勃起障礙(Moreland等，TheJournalofPharmacology&ExperimentalTherapeutics,2004，308，797-804;Guiliano等,Progr6senUrologie[ProgressinUrology],1997，7，24-33)?？芍委煹闹饕膊“ā曰蚰行灾械墓δ苄阅蚵饭Ｗ?。前列腺腺瘤或良性前列腺增生(benignprostatehyperplasia,BPH)對(duì)應(yīng)于從40歲開始提高的前列腺尺寸的正常變化。這種發(fā)生頻率隨年齡增長而提高(70歲以上男性為80%)的前列腺肥大可伴隨導(dǎo)致排尿問題的不同程度的尿道顯著梗阻。已經(jīng)設(shè)想用多種方法治療該疾?。幻糠N方法分別涉及阻斷酶(5-a-還原酶)或阻斷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NET)的功能，或者阻斷對(duì)血清素、九眛素、谷氨酸、鈣或腎上腺素敏感的受體的功能。然而，已通過阻斷al腎上腺素能受體獲得了最佳效果。這是因?yàn)樽钄噙@些受體使得平滑肌松弛并佳尿流正常；-失禁:失禁可能是由于膀胱壓力高于尿道保持強(qiáng)度所導(dǎo)致。阻斷cth腎上腺素受體可使得膀胱壓力降低成為可能；—勃起障礙:某些勃起問題可以通過抑制Oda腎上腺素受體的活性從而促進(jìn)海綿體的充血(irrigation)來治療。另外，已經(jīng)提出，阻斷(Xh腎上腺素受體將對(duì)前列腺腫瘤具有預(yù)防和治療效果(歐洲專利EP0799618和EP0799619，Thebault爭,TheJ.Clin.Invest"2003,111，1691-1701)?，F(xiàn)有兩類分子可用于降低泌尿生殖器官中c^腎上腺素受體的活性-Cd腎上腺素能受體拮抗劑已鑒定了多種特異性結(jié)合A腎上腺素能受體中正構(gòu)(orthosteric)位點(diǎn)的竟?fàn)幮阅I上腺素拮抗劑喹唑啉類(哌哇噪、特拉唑嗪(tetrazosin)、阿夫唑喚(alfusozin)、多沙哇嚷)、艱嚷類(RWJ國38063、RWJ-68141、RWJ-68157、RWJ-69736)、苯基烷基胺類(坦洛新、丐l咪扭明)和西洛多辛(silodosin)。然而，由于它們對(duì)o^腎上腺素能亞型沒有任何選擇性，因此除KMD3213(西洛多辛)外的所有這些分子均導(dǎo)致不良的副作用(低血壓)。KMD3213(西洛多辛)是第一種對(duì)(Xh亞型具有選擇性的竟?fàn)幮赞卓箘?Shibata等，Mol.Pharmacol"1995，48-250-258)。該分子正處于治療前列腺肥大的臨床階段(Drugs,R.D.,2004，5，50-51)?！猘l腎上腺素能受體的別構(gòu)調(diào)節(jié)劑目前已知的針對(duì)這些腎上腺素受體的別構(gòu)調(diào)節(jié)劑僅有阿米洛利類(L印pik等，Mol.Pharmacol"2000，57,436-445)和p-芋螺毒素，其代表是肽p-TIA(Sharpe等，7Vfl似^JV^nw"e"ce,2001，4,卯2國卯7;歐洲專利EP1117681)。阿米洛利類在極高濃度下特異性和活性并不非常高。p-TIASEQIDNO.1)，它提取自海生郁金香芋螺(CVwws似/i》fl)的毒液。該肽對(duì)W腎上腺素受體具有100nM級(jí)的親和力，對(duì)控制血管張力的a化亞型具有弱選擇性(10nM的親和力)。歐洲專利EP1117681設(shè)想了p-TIA肽用于預(yù)防和治療心血管(高血壓)及泌尿(前列腺肥大)疾病、疼痛以及炎癥的用途。由于它們對(duì)c^亞型缺乏選擇性，因此od腎上腺素能受體的這兩種別構(gòu)調(diào)節(jié)劑容易產(chǎn)生不良副作用，特別^1血管方面的副作用(低血壓)。已從美洲曼巴蛇(mambas)De"</n7"s/7/sa"gMs//ce/w(綠曼巴)和Z^w^wis/7/s/w/j;/印/s(黑曼巴)的毒液中分離了多種神經(jīng)毒素(綜述參見Bradley,N;Pharmacology&Therapeutics,2000,85,87-109;JolkkonenM.等，Eur.J.Biochem.,1995,234,2，579-85)。"三指毒素(three-fingertoxin)"家族或"膽堿能毒素"家族的毒素是63至66個(gè)氨基酸的肽，其具有4個(gè)二減撟(在半胱氨酸l和3、2和4、5和6以及7和8之間橋l-3、2-4、5-6和7-8)以及特征性的三指結(jié)構(gòu)，其中環(huán)I、II和III形成手的中間3個(gè)指，二石錄形成手的手掌。這些毒素根據(jù)其活性分為幾組結(jié)合毒萆堿型乙酰膽喊受體的毒萆堿毒素(muscarinictoxins,MT)、結(jié)合煙堿型突觸后乙酖膽堿受體的a-神經(jīng)毒素以及作為非竟?fàn)幮砸阴Ｄ憠A酯酶抑制劑的fasciculin類。另外，對(duì)這些毒素序列進(jìn)行的系統(tǒng)發(fā)生研究(Fry等，J.Mol.,Evol.，2003,57，110-129)表明，這些不同的功能組(特別是4"覃堿毒素和a-神經(jīng)毒素(PCT國際申請(qǐng)WO99/24055))對(duì)應(yīng)于不同的肽序列。已在綠曼巴中分離了6種毒萆堿毒素[MTXl(MT1)、MTX2(MT2)、MTX3(MT3或m4-tox)、MTX4(MT4)、MTX5(MT5)、MTX7(MT7、ml-tox)，在黑曼巴中分離了2種:[MT畫a(MTa)和MT國P(MT卩)。盡管具有強(qiáng)序列同源性，然而這些肽在其與多種毒萆堿性受體亞型的相互作用方面具有特異性，并具有不同的藥理效應(yīng)。由于這種特異性，這些肽已用作測定某些毒萆堿性受體亞型的生理作用的工具。本發(fā)明A^綠曼巴的毒液中分離了新的毒素。這種毒素(稱為AdTxl)選擇性結(jié)合(Xh腎上腺素能受體，并以別構(gòu)方式降低正構(gòu)配體的親和力。AdTxl具有65個(gè)氨基酸的序列(SEQIDNO.2):LTCiVTSKSIFGITTEDCzPDGQNIiCsFKRRHYVVPKSnCDSTRGCaAATC^IPEHYDSIHC6C7KT:DKCaNE。AdTxl的結(jié)構(gòu)包括4個(gè)二硫橋，分別位于3位與24位半胱氨酸(半胱氨酸1和3:橋1-3)之間、17位與42位半胱氨酸(半胱氨酸2和4:橋2-4)之間、46位與57位半胱氨酸(半胱氨酸5和6:橋5-6)之間以及58位與63位半胱氨酸(半胱氨酸7和8:橋7-8)之間，這是作用于膽堿能系統(tǒng)的三指毒素家族的特征。AdTxl的序列與三指毒素家族中的毒革堿毒素組的某些序列顯示出非常高的同源性<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>這種新的毒素定義了三指毒覃堿毒素組中肽的亞群，特征為其(Xh腎上腺素能受體別構(gòu)拮抗劑的特性。另夕卜，這種c^腎上腺素能受體別構(gòu)拮抗劑的特性是新的，并且不明顯遵循現(xiàn)有技術(shù)中所述三指毒覃堿毒素的特性。因此，本發(fā)明涉及用作藥物的肽，所述肽的特征在于a)具有選自SEQIDNO.2序列以及與SEQIDNO.2完整序列具有至少70%同一性或80%相似性的衍生變體之中的序列，b)具有包含8個(gè)半胱氨酸殘基(半胱氨酸1至8)的三指結(jié)構(gòu)，其由分別在半胱氨酸1和3、2和4、5和6以及7和8之間的4個(gè)二硫橋(橋1-3、2-4、5國6和7畫8)連接，以及c)具有對(duì)c^腎上腺素能受體有選擇性的別構(gòu)拮抗劑活性。由于其對(duì)(Xh腎上腺素能亞型具有選擇性，因此如本發(fā)明所定義的肽能夠特異性阻斷Cda腎上腺素能受體。另外，不同于抑制劑(竟?fàn)幮赞卓箘?，它們作為激動(dòng)劑親和力的調(diào)節(jié)劑而發(fā)揮作用；這樣的調(diào)節(jié)劑具有這樣的優(yōu)點(diǎn)不阻斷受體的功能，而是僅在它們被其天然激動(dòng)劑活化時(shí)調(diào)節(jié)所述受體的應(yīng)答。這種調(diào)節(jié)看來比竟?fàn)幮赞卓箘└子诳刂?。此外，在大量使用別構(gòu)拮抗劑時(shí)沒有平臺(tái)效應(yīng)，勤目應(yīng)地降低了可能的毒效應(yīng)。*定義-就本發(fā)明而言，術(shù)語"三指結(jié)構(gòu)"意指上述定義的三指毒素家族的特征性結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)包括由4個(gè)二硫橋(橋l-3、2-4、5-6、7-8)維持的3個(gè)環(huán)(環(huán)I、II、III);-序列相對(duì)于參考序列SEQIDNO.2的同一性根據(jù)將兩個(gè)序列進(jìn)行比對(duì)以使它們之間獲得最大對(duì)應(yīng)性時(shí)相同氨基酸瓶基的百分比來評(píng)估。本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用序列比較計(jì)算^4呈序(例如BLAST系列的程序(Altschul等，NAR，1997，25,3389-3402))來計(jì)算同一性百分比。在由完整SEQIDNO.2(標(biāo)為參考序列)組成的比較窗中使用BLAST程序。包含與參考序列具有至少X%同一性的M酸序列的4Mt本發(fā)明中定義為這樣的肽:其序列在參考序列的每100個(gè)氨基酸中可包含最多(100-X)個(gè)變化，同時(shí)保留了參考肽的功能特性，在本文的情形中是(Xh腎上腺素能亞型選擇性拮抗劑的活性。就本發(fā)明而言，術(shù)語"變化"包括參考序列中氨基酸的連續(xù)或^t的缺失、替換或插入。該定義類推用于核苷酸序列。獲得最大對(duì)應(yīng)性時(shí)相同或由于保守性替換而不同的氨基酸殘基的百分比來評(píng)估。就本發(fā)明而言，術(shù)語"保守性替換"意指將一個(gè)M酸替換為另一個(gè)具有相似化學(xué)或物理特性(大小、電荷或極性)的氨基酸，這通常不改變肽的功能特性。包含與參考序列具有至少x%相似性的M酸序列的肽在本發(fā)明中定義為這樣的肽:其序列可在參考序列的每100個(gè)氨基酸中包含最多(100-X)個(gè)非保守性變化。就本發(fā)明而言，術(shù)語"非保守性變化"包括參考序列中氨基酸的連續(xù)或*的缺失、非保守性替換或插入。-就本發(fā)明而言，"ala腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑"這一表述意指這樣的肽其選擇性結(jié)合Cda腎上腺素能受體，并能夠以別構(gòu)方式降低所述受體對(duì)正構(gòu)配體的親和力。根據(jù)常規(guī)的命名法，正構(gòu)位點(diǎn)是受體的內(nèi)源激動(dòng)劑(對(duì)于Cth腎上腺素能受體來說是腎上腺素)的結(jié)合位點(diǎn)。該位點(diǎn)也是某些拮抗劑(對(duì)于Cth腎上腺素能受體來說是哌哇漆)的結(jié)合位點(diǎn)。別構(gòu)調(diào)節(jié)意味著所述受體能夠通過兩個(gè)在拓樸學(xué)上不同的結(jié)合位點(diǎn)同時(shí)結(jié)合兩種配體；正構(gòu)配體結(jié)合正構(gòu)位點(diǎn)，而調(diào)節(jié)劑結(jié)合不同的位點(diǎn)(別構(gòu)位點(diǎn))。這兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)在構(gòu)象上的相關(guān)程度使得配體與位點(diǎn)1的結(jié)合干擾了位點(diǎn)2的結(jié)構(gòu)，從而改變它對(duì)其自身配體的親和力。對(duì)于本發(fā)明調(diào)節(jié)肽的情況，該肽與CCh腎上腺素能受體的結(jié)合降低特異性拮抗劑(如哌哇喚)對(duì)該受體的親和力，>^之亦然?？赏ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何常規(guī)技術(shù)來證實(shí)(Xh腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑的活性-借助常規(guī)的配體/受體結(jié)合測定，通過測量正構(gòu)配體(哌喳溱)在別構(gòu)配體(肽)存在下的結(jié)合來實(shí)現(xiàn)；通過提高肽濃度使正構(gòu)配體與cch腎上腺素能受體的結(jié)合被置換，i^明該肽是cda腎上腺素能受體的抑制劑；完全置換的缺乏指示了別構(gòu)調(diào)節(jié)。通過其他腎上腺素能受體亞型(alb、ald)和類型(a2、p)存在下的結(jié)合測定來證實(shí)對(duì)ai腎上腺素能受體的選擇性；-才艮據(jù)EllisJ.和SeidenbergM,Mol.Pharmacol.，2000,58:1451-1460中所述原則，通過在別構(gòu)配體存在下測量標(biāo)記的正構(gòu)配體/受體復(fù)合物的解離動(dòng)力學(xué)來實(shí)現(xiàn)；-通過測量對(duì)真核細(xì)胞中表達(dá)的0113受體激活的抑制以顯示其拮抗性質(zhì)來實(shí)現(xiàn)。表達(dá)腎上腺素能受體(例如ct^)的真核細(xì)胞(例如COS或HEK類型)能夠在該受體激活(例如由腎上腺素激活)期間將鉀釋放進(jìn)胞質(zhì)溶膠中。因此，當(dāng)腎上腺素與其正構(gòu)位點(diǎn)結(jié)合時(shí)，該受體被激活。它改變構(gòu)象，從而能夠結(jié)合胞質(zhì)G蛋白。該結(jié)合誘導(dǎo)了合成二酰甘油和肌醇三磷酸(IP3)等的事件級(jí)聯(lián)。后者通過結(jié)合IP3受體使鉀釋放i^&質(zhì)溶膠中。這種鈣濃度的變化之后產(chǎn)生熒光。該技術(shù)使顯示產(chǎn)物的激動(dòng)或拮抗性質(zhì)成為可能。本發(fā)明包括具有Cth腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑活性的天然、合成或重組肽的用途。特別地，本發(fā)明包括通過在序列SEQIDNO.2中突變(插入、缺失、替換)一個(gè)或多個(gè)氨基酸而得到的變體的用途，只要所述變體保留Cda腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑的活性即可。本發(fā)明還包括通過在M酸殘基或肽鍵或肽末端水平引入任何修飾而從上述肽衍生的修飾肽的用途，只要所述修飾肽保留o^腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑的活性即可。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法引入肽中的這些修飾包括但不僅限于用非蛋白氨基酸(DM酸或JL^酸類似物)替換天然氨基酸；將化學(xué)基團(tuán)(脂、低聚糖或多糖)添加到反應(yīng)性官能團(tuán)(reactivefunction)特別是側(cè)鏈R上；修飾肽鍵(-CO-NH-)，尤其是用逆式(retrotype)或逆反式(retro-inversotype)(-NH-CO-)的鍵或者不同于肽鍵的鍵進(jìn)行修飾；環(huán)化；將所述肽的序列與目的肽或蛋白(用于免疫檢測的目的表位)的序列融合；可用于純化所述肽的標(biāo)簽(特別是生物素、肽、flag),特別是可以被蛋白酶切割的形式的標(biāo)簽，熒光蛋白；與適當(dāng)?shù)姆肿犹貏e是標(biāo)記(例如熒光染料)偶聯(lián)。特別地，這些修飾意在提高穩(wěn)定性，特別是對(duì)蛋白水解的抗性，還意在提高溶解度，或者有利于純化或檢測本發(fā)明的肽或者Od腎上腺素能受體。對(duì)于醫(yī)學(xué)用途，可有利地通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法修飾該肽，從而改變其生理特性，特別是改善其在生物體中的半衰期(糖基化HAUBNERR.等，J.Nucl.Med.，2001，42，326-36;與PEG綴合KIMTH.等，Biomaterials,2002，23，2311-7)、其溶解度(與白蛋白雜交KOEHLERMF.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，2002,12，2883-6)、其對(duì)蛋白酶的抗性(非天然氨基酸(例如L構(gòu)象))和/或其腸吸收(Lien等，TIB,2003，21，556-)。術(shù)語"天然或合成氨基酸"意指蛋白質(zhì)中常見的20種天然a-氨基酸(A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y和V)、在蛋白質(zhì)中很少見的某些M酸(羥脯氨酸、羥賴氨酸、曱基賴氨酸、二甲基賴氨酸等)、在蛋白質(zhì)中不存在的氨基酸(如(3-丙氨酸、Y-氨基丁酸、高半胱氨酸、鳥氨酸、瓜氨酸、刀豆氨酸、正亮氨酸、環(huán)己基丙氨酸等)以及上述氨基酸的對(duì)映體和非對(duì)映異構(gòu)體。所述肽的一個(gè)有利的實(shí)施方案是MT-P毒素(SWISSPROTP80495,SEQIDNO.3)，它是從黑曼巴毒液中提取的天然肽；MT-J3和AdTxl毒素的序列僅在38位和43位戎基處不同，分別為138和V43(MT-j3)以及S38和A(AdTxl)。根據(jù)所述肽的另一有利的實(shí)施方案，半胱氨酸1是所述肽序列的第一個(gè)或第二個(gè)氨基酸殘基，和/或半胱氨酸8是所述肽序列的倒數(shù)第二個(gè)或最后一個(gè)氨基酸殘基。該肽代表通過缺失位于半胱氨酸1上游或半胱氨酸8下游的至少一個(gè)N端和/或C端殘基而衍生自上述肽的截短肽。本發(fā)明的主題還包括用作藥物的表達(dá)載體，所述載體包含編碼如上文定義的肽的多核普酸，所述多核普酸受到適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列的控制，任選地受到適當(dāng)?shù)姆?^節(jié)序列的控制。根據(jù)本發(fā)明，所述多核苷酸序列是編碼所述肽的cDNA的序列；特別是編碼AdTxl的SEQIDNO.4序列。所述序列可以有利地進(jìn)行修飾，以使其密碼子用法在表達(dá)它的宿主中是最優(yōu)的。另外，所述多核苷酸可以連接至少一個(gè)異源序列。"相對(duì)于編碼本發(fā)明中所定義肽的核酸序列的異源序列"這一表述意任何核紗列。根據(jù)本發(fā)明，所述重組載體包括包含至少一個(gè)如上文所定義多核苷酸的表達(dá)盒，所述多核苷酸受到適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列以及任選地翻譯調(diào)節(jié)序列(啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、內(nèi)含子、起始密碼子(ATG)、終止密碼子、多腺苷酸化信號(hào))的控制。可在其中插入目的核酸分子從而將其引入并維持在真核或原核宿主細(xì)胞中的多種載體是已知的；適當(dāng)載體的選擇取決于該載體的預(yù)期用途(例如復(fù)制目的序列、表達(dá)該序列、以染色體外的形式維持該序列或者整合進(jìn)宿主的染色體材料中)，還取決于宿主細(xì)胞。例如，可以使用其中已先行插入目的序列的病毒載體，如腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、AAV和桿狀病毒；所述序列(分離的或插入質(zhì)粒載體中的)還可以與使其穿過宿主細(xì)胞膜的物質(zhì)相關(guān)聯(lián)，如轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(例如納米轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(nanotransporter))或者脂質(zhì)體或陽離子聚合物的制備物，或者可以使用物理方法(如電穿孔或顯微注射)引入所述宿主細(xì)胞中。另外，這些方法可以有利地進(jìn)行組合，例如通過使用電穿孔與脂質(zhì)體的組合。本發(fā)明的主題還包括藥物組合物，其特征在于它包含至少一種如上文定義的肽、編碼所述肽的多核苷酸或者載體以及可藥用運(yùn)載體(carrier)。本發(fā)明的藥物組合物采取適于腸胃外(皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi))給藥、腸(口服、舌下)給藥或局部(鼻、直腸、陰道)給藥的蓋侖制劑形式(galenicalform)。所述可藥用運(yùn)載體是常規(guī)使用的運(yùn)栽體。本發(fā)明的主題還包括如上文定義的至少一種肽和/或載體用于制備藥物的用途，所述藥物具有c^腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑的活性，用于治療泌尿生殖疾病或心血管疾病或者癌癥。所述泌尿生殖疾病包括排尿障礙女性或男性中的失禁、泌尿道功能性梗阻以及勃起障礙。優(yōu)選地，所述泌尿生殖疾病是良性前列腺增生；前列腺體積增加，其導(dǎo)致引起排尿障礙的尿道梗阻。阻斷cth腎上腺素受體使得平滑^U^弛并允許正常尿流o所述心臟疾病主要包括動(dòng)脈高血壓，因?yàn)樽钄郼^受體導(dǎo)致低血壓。某些形式的高血壓是由嗜鉻細(xì)胞瘤引起的；推薦在手術(shù)介入前使用a-阻斷劑。所述癌癥疾病主要包括前列腺癌，因?yàn)閛^腎上腺素能受體主要在該器官中表達(dá)。抑制腎上腺素受體將減慢前列腺癌中上皮細(xì)胞的增殖。本發(fā)明的主題還包括SEQIDNO.2序列的肽或者如上文定義的具有ala腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑活性的衍生變體作為研究Cda腎上腺素能受體的工具的用途。才艮據(jù)所述用途的一個(gè)有利的實(shí)施方案，所述肽與適當(dāng)?shù)臉?biāo)記偶聯(lián)。可以通過共價(jià)或非共價(jià)偶聯(lián)，使用放射性或非放射性化合物直接或間接標(biāo)記本發(fā)明中定義的肽，從而獲得可檢測的和/或可定量的信號(hào)。特別地，所述標(biāo)記是根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行的放射性標(biāo)記、磁性標(biāo)記或熒光標(biāo)記。特別地，所述可直接檢測的標(biāo)記是放射性同位素如氚(3H)和碘(1251)，或者發(fā)光化合物如輻射發(fā)光劑、化學(xué)發(fā)光劑、生物發(fā)光劑、熒光劑或磷光劑。特別地，所述可間接檢測的標(biāo)記包括生物素和B表位。特別地，通過以下方法進(jìn)行標(biāo)記—將熒光團(tuán)移植到活性胺(reactionamine)(即賴氨酸的胺)上。例如，有可能獲得在第34位發(fā)生突變的AdTxl(賴氨酸被替換為精氨酸或高精氨酸)，并且其中已將Cy3BTM試劑(Amersham)移植到該AdTxl的一個(gè)或多個(gè)其他賴氨酸上，-通過化學(xué)合成直接摻入熒光團(tuán)(在N或C端)，-通過重組產(chǎn)生或合成來引入活性基團(tuán)(游離的半胱氨酸、生物素)，然后將該基團(tuán)用于移植熒光團(tuán)。特別地，這些經(jīng)標(biāo)記的肽用于在體外和體內(nèi)定位(Xh腎上腺素能受體，達(dá)鐠。本發(fā)明的主題還包括用于在體外和體內(nèi)檢測(X^腎上腺素能受體的方法，其包括至少以下的步驟-將待分析的細(xì)胞與如上文定義的標(biāo)記肽接觸，以及一通過任何適當(dāng)?shù)姆椒z測標(biāo)記細(xì)胞。在體內(nèi)檢測哺乳動(dòng)物機(jī)體中的受體(細(xì)胞成像)(特別是實(shí)時(shí)檢測)包括預(yù)先對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用所述肽的步驟(腸胃外注射、經(jīng)口給藥)。特別地，所述細(xì)胞標(biāo)記是可通過任何本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)(熒光顯微術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、磁共振成象)檢測的熒光標(biāo)記或磁性標(biāo)記?；蛘?，所述標(biāo)記肽用于篩選分子文庫，其目的是鑒定C^腎上腺素能受體的其他別構(gòu)配體。本發(fā)明的主題還包括用于篩選Cda腎上腺素能受體的別構(gòu)配體的方法，其包括至少以下的步驟-在測試分子文庫存在下，將Cth腎上腺素能受體與如上文定義的標(biāo)記肽接觸，以及-通過任何適當(dāng)?shù)姆椒▉龛b定能夠置換所述肽與所述受體結(jié)合的分子。另外，可有利地使用本發(fā)明中所定義的肽與ala腎上腺素能受體的復(fù)合物來獲得晶體；這樣的晶體使得通過X射線衍射來測定c^腎上腺素能受體的三維結(jié)構(gòu)成為可能。本發(fā)明的主題還包括用于制備A腎上腺素能受體晶體的方法，其包括至少以下的步驟a)將w腎上腺素能受體與如上文定義的肽接觸，從而形成受體/配體復(fù)合物，以及b)在一定條件下，將a)中得到的復(fù)合物孵育足以獲得晶體形成的時(shí)間。本發(fā)明的主題還包括受體/配體復(fù)合物，其中所述受體是0113腎上腺素能受體，所述肽是如上文定義的肽，該肽任選地與適當(dāng)?shù)臉?biāo)記偶聯(lián)。本發(fā)明的主題還包括SEQIDNO.2序列的肽以及作為SEQIDNO.2變體的肽，所述作為SEQIDNO.2變體的肽包含用另一絲酸(特別是精氨酸或高精氨酸)替換SEQIDNO.2序列中的第34位賴氨酸。才艮據(jù)所述肽的一個(gè)有利的實(shí)施方案，它與適當(dāng)?shù)臉?biāo)記偶聯(lián)。本發(fā)明的主題還包括來自上述肽的多核普酸、表達(dá)盒、重組載體以及修飾的原核或真核宿主細(xì)胞。#>據(jù)所述多核普酸的一個(gè)有利的實(shí)施方案，它具有編碼AdTxl的SEQIDN0.4序列。特別地，本發(fā)明包括a)包含至少一種如上文所定義多核苷酸的表達(dá)盒，所述多核苷酸受到適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列以及任選地翻譯調(diào)節(jié)序列(啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、內(nèi)含子、起始密碼子(ATG)、終止密碼子、聚腺普酸化信號(hào))的控制，以及b)包含本發(fā)明多核苷酸的重組載體。優(yōu)選地，這些載體是包含至少一個(gè)如上文所定義表達(dá)盒的表達(dá)載體。特別地，可將如上文定義的多核苷酸、重組載體以及轉(zhuǎn)化細(xì)胞用于產(chǎn)生本發(fā)明所定義的肽。通過已知的常規(guī)方法獲得本發(fā)明的多核普酸，其根據(jù)如描述于CurrentProtocolsinMolecularBiology(Fi^flfencAAf.Jfyyt/AEX,2000，ff7fe^iSVw/wc"0/CVmgress，CASL4)和MolecularCloning:ALaboratoryManual,第三版(5Vi附^wA爭，2W，CV似i9/;r/"gE"/*6w，iV，IWAvCWcf5^nVigHfl丄"6omtoo;/Vess)中的標(biāo)準(zhǔn)^Mt來實(shí)現(xiàn)。例如，它們可以通過以下手段獲得通過PCR或RT-PCR擴(kuò)增核酸序列、通過與同源探針雜交來篩選基因組DNA文庫，或者完全或部分的化學(xué)合成。通過已知的常規(guī)重組DNA和遺傳工程技術(shù)構(gòu)建重組栽體并引入宿主細(xì)胞中。(變體、修飾肽)，特別是通過固相或^目合成或者通過在適當(dāng)?shù)?真核或原核)細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)重組DNA來制備。更具體地，-所述肽及其衍生物最初由Merrifield等描述的Fmoc技術(shù)(J.Am.Chem.Soc.，1964，85:2149-)固相合成，并通過反相高效液相色鐠進(jìn)行純化。-所述肽及其衍生物(如變體腿可以由相應(yīng)的cDNA產(chǎn)生，所述cDNA通過本領(lǐng)域4支術(shù)人員已知的任何方法獲得；將所述cDNA克隆進(jìn)真核或原核表達(dá)載體，利用任何適當(dāng)?shù)姆椒兓?jīng)所述重組載體修飾的細(xì)胞中產(chǎn)生的蛋白質(zhì)或片段，特別是通過親和層析來純化。除了上述內(nèi)容以外，參考以下附圖，本發(fā)明還包括將體現(xiàn)在以下說明中的其他內(nèi)容，所述說明涉及本發(fā)明主題的示例性實(shí)施方案，在附圖中-圖1展示了哌喳喚()或AdTxl(o)存在下置換經(jīng)放射性標(biāo)記的AdTxl肽(125I-AdTxl)與oth腎上腺素能受體的結(jié)合。哌唑嚷和AdTxl肽的ICso值分別為2.2xl(T1GM以及5xl(T"M;-圖2展示了通過旅哇嚷或所述AdTxl肽置換311-哌唑嚷、311-蘿芙素和3H-CPG12177與多種腎上腺素能受體亞型的結(jié)合。(□)通過艱哇溱置換與(Xh受體結(jié)合的311-哌喳嚷(IC50=0.99xlO-9M)。()通過AdTxl置換與ct^受體結(jié)合的311-哌喳噪(IC5。=1.8xl(r9M)。(■)通過AdTxl置換與ct化受體結(jié)合的311國哌哇喚(IC50=2.3xlO-6M)。()通過AdTxl置換與ctw受體結(jié)合的311-哌峻溱(IC5o=9.9xlO-6M)。(o)通過AdTxl置換與0t2a受體結(jié)合的311-蘿芙素(IC5。>5xl(r5M)。()通過AdTxl置換與^受體結(jié)合的3H-CGP12177(IC5o>5xlO—5M);-圖3代表125I-AdTxl在表達(dá)ala腎上腺素能受體的酵母膜上的熱飽和。在20嗎酵母膜存在下，將多種濃度的125I-AdTxl孵育加h。在1jimAdTxl存在下測量非特異性結(jié)合。(A)非特異性結(jié)合。()特異性結(jié)合。(o)總結(jié)合。特異性結(jié)合可以被飽和，并且是高親和力的結(jié)合，等于0.8±0.2nM;—圖4展示了用AdTxl-Cy3BTM熒光衍生物對(duì)COS細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)的h-(Xh(A)和h-cdb(B)腎上腺素能受體進(jìn)行標(biāo)記。實(shí)施例1:制備AdTxl多肽1)化學(xué)合成通過Fmoc(貧曱氧aU技術(shù)固相合成AdTxl肽，其中使用二環(huán)己M二亞胺/l-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAT)作為偶聯(lián)劑以及N-甲基吡咯烷酮作為溶劑(Mourier等，MolecularPharmacology,2003,63，26-35)。簡言之，該合成使用0.05mmol樹脂從肽的C端向N端進(jìn)行。在合成結(jié)束時(shí)，用9ml三氟乙酸、0.5ml三異丙^:烷和0.5ml蒸餾水的混合物處理樹脂/肽。然后，在孵育2小時(shí)后將肽從樹脂上裂解下來。將所述混合物過濾至冷乙醚中并離心兩次。將所得沉淀溶于乙酸溶液(10%)中并凍干。在DiscoveryBioWidePoreC5，25cmxlOmm,10半制備柱(SUPELCO)上，;150分鐘中用40%至70%的溶劑B梯k(A:0.1%TFA，B:50%乙腈和0.1%TFA)通過反相色鐠(HPLC)來純化還原的合成毒素，流速為4.51111/分鐘。其后在220nm處進(jìn)行檢測。然后，在還原型谷胱甘肽(GSSG)和氧化型谷胱甘肽(GSH)(GSSG/GSH摩爾比為1/1，濃度為1mM)存在下，將所述合成毒素在100mMTris緩沖液(pH8.0)中進(jìn)行折疊。在4。C置于黑暗和氬氣中3天后，在與上i^目同的條件下通過反相色鐠(HPLC)對(duì)折疊的合成毒素進(jìn)行純化。合成毒素的濃度為5nM。2)產(chǎn)生重組多肽根據(jù)所述技術(shù)(Gateway,Invitrogen)，通過同源重組來克隆編碼AdTxl的核普財(cái)列。通過PCR擴(kuò)增多核苷酸片段(SEQIDNO.4)，該片段從5，到3，依次包含flftBl重組序列、TEV切割位點(diǎn)(ENLYFQG)、編碼AdTxl的序列(SEQIDNO.3)、假終止子、編碼Stag肽的序列、終止密碼子以及flttB2重組序列。通過同源重組將所述PCR產(chǎn)物克隆進(jìn)供體質(zhì)粒pDONR221(Invitrogen)中。所得克隆用于產(chǎn)生適于在適當(dāng)細(xì)胞系統(tǒng)中i達(dá)AdTxl的重組表達(dá)載體。實(shí)施例2:分析AdTxl與w腎上腺素能受體的結(jié)合1)材料和方法a)AdTxl毒素的碟化利用由乳過氧化物酶催化的卣化反應(yīng)對(duì)AdTxl進(jìn)行碘化。將包含以下成分的反應(yīng)混合物在251C孵育l分鐘50jiil0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.3)、10pi100毒素、10[il1/50,000H202、1mCi[1251和0.7單位的乳過氧化物酶(Sigma)。然后，如前述通過反相HPLC對(duì)碘化毒素進(jìn)行純化(KrimmI.等，J.Mol.Biol"1999,285,1749-63)。b)制備包含腎上腺素能受體的膜在轉(zhuǎn)化了表達(dá)質(zhì)粒的巴斯德畢赤酵母(/wston's)中表達(dá)每種受體亞型(Xh、alb、ald、ct2a和P"所i^達(dá)質(zhì)粒中包含對(duì)應(yīng)于所述受體的cDNA。每個(gè)克隆均以同樣的方式培養(yǎng)。將所述畢赤酵母克隆接種進(jìn)10ml培養(yǎng)基(1%酵母提取物、2%蛋白胨、100mM磷酸鉀(pH6)、1.3%酵母氮源、1%甘油)中，在30。過夜，然后將培養(yǎng)物稀釋到100ml新鮮培養(yǎng)基中，并在30。C再孵育4h。隨后離心培養(yǎng)物(3000g，5分鐘)，重懸在補(bǔ)充了2.5%DMSO的500ml誘導(dǎo)培養(yǎng)基(1%酵母提取物、2%蛋白胨、100mM磷酸鉀(pH6)、1.3%酵母氮源、0.5%曱醇)中，并于20。C搖動(dòng)(200rpm)孵育18h。收集培養(yǎng)物(3000g，15分鐘，4°C)并重懸在3ml緩沖液(50mM磷酸鉀(pH7.4)、100mMNaCl、5%甘油、2mMEDTA和1mMPMSF)中，在水中冷卻。將冷的玻璃珠(2ml;用酸洗過的400-600玻璃珠，Sigma)加至所述懸液中，然后將混合物進(jìn)行8次30秒渦旋，之后置于冰中。然后，通過離心(5分鐘，3000g，4'C)將玻璃珠和未裂解的細(xì)胞從裂解液中分離，并且在相同條件下洗滌沉淀?；厥丈锨逡翰⒁?0,000g離心1h。使用勻漿器將每種制備物的沉淀重懸在緩沖液(50mMTris(pH8)、120mMNaCl、10%甘油、lmMPMSF)中，等分并保存在-80'C待用。c)結(jié)合測定將5嗎膜與終濃度為1nM的3H-哌哇喚([7-甲^L^-3H]，PerkinElmerLifeSciences)或311-蘿芙素([甲基畫3H，PerkinElmerLifeSciences)或3H-CPG12177(PerkinElmerLifeSciences)在補(bǔ)充了10mMMgCl2的Tris-HCl緩沖液(pH7.2)中混合，終體積為200pl，然后在劑量遞增的AdTxl(0.01nM至100|LiM)存在下將混合物于室溫孵育5小時(shí)。在以下試劑存在下測量非特異性結(jié)合在1nM哌哇溱(Sigma)存在下測量與3H-哌喳溱的結(jié)合、在1育亨賓(Sigma)存在下測量與3H-蘿芙素的結(jié)合，或在1nM普萘洛爾(Sigma)存在下測量與3H-CPG12177的結(jié)合。通過在4。C下將反應(yīng)介質(zhì)稀釋到2ml洗滌緩沖液(Tris-HCl，pH7.2，10mM)中然后過濾來終止反應(yīng)。過濾利用在0.3%PEI緩沖液(聚乙烯亞胺，Sigma)中預(yù)處理的玻璃濾器(GFC，Whatman)來進(jìn)行。連續(xù)進(jìn)行兩次連續(xù)洗滌。在80。C將濾器干燥1小時(shí)，并向其中添加10mlLipolumaPlus(LumacLMC)。用Rockbeta1211計(jì)數(shù)器(LKBWallac)檢測發(fā)射，以cpm(每分鐘的計(jì)數(shù))給出每個(gè)測定的值。使用Kaleidograph軟件(Toolsfordiscovery,SynergySoftware,PA，USA)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。按照與用于氖化配體中相同的方案來分析碘化AdTxl肽(0.1nM)對(duì)cth腎上腺素能受體結(jié)合的置換，并使用Multigamma1261計(jì)數(shù)器(LKBWallac)來測量ii射性。通過將濃度遞增的碘化肽在包含Cda腎上腺素能受體的20嗎膜存在下孵育20h然后如上所述測量放射性來分析AdTxl對(duì)Cda腎上腺素能受體的飽和。在1AdTxl存在下測量非特異性結(jié)合。2)結(jié)果在圖1、2和3中給出了對(duì)AdTxl肽與多種腎上腺素能受體亞型ala、lb、ld、2a和^結(jié)合的分析。AdTxl肽是oth腎上腺素能受體的配體(圖1)。用對(duì)多種腎上腺素能受體亞型具有特異性的正構(gòu)配體進(jìn)行的竟?fàn)幮越Y(jié)合測定(圖2)表明，AdTxl肽選擇性結(jié)合cda腎上腺素能亞型。通過IQ。值評(píng)估的其對(duì)于ala、lb、ld、2a和Pi亞型的親和力分別為1.8xl(T9M、2.3xlO-6M、9.9xlO_6M、>5xl05M以及>5乂105M。在AdTxl肽存在下置換與o^腎上腺素能受體結(jié)合的哌喳溱的曲線(圖1和2)表明，該置換是不完全的，這反映了別構(gòu)調(diào)節(jié)。圖1和2給出的結(jié)果表明，AdTxl肽特異性結(jié)合c^腎上腺素能受體，并且它由于這種結(jié)合而以別構(gòu)方式降低對(duì)正構(gòu)配體的親和力。因此，它是對(duì)(X^腎上腺素能受體具有選擇性的別構(gòu)拮抗劑。ala腎上腺素能受體的飽和曲線(圖3)顯示，AdTxl的特異性結(jié)合可以被飽和，并且為高親和力的結(jié)合，等于0.8±0.211]\1。實(shí)施例3:用AdTxlCy3BTM熒光衍生物標(biāo)記o^腎上腺素能受體1)材料和方法如實(shí)施例1中對(duì)AdTxl所描述的那樣合成AdTxlK34R變體。然后，根據(jù)制造商推薦的方案，將AdTxlK34R變體與Cy3B-單-NHS-酯熒光團(tuán)(AMERSHAM)偶聯(lián)。將轉(zhuǎn)染了Aala腎上腺素能受體表達(dá)載體或人alb腎上腺素能受體表達(dá)載體并且瞬時(shí)表達(dá)該c^或a化受體的COS細(xì)胞(ATCC)在2nMAdTxl-Cy3b存在下孵育16h，然后以40倍放大倍數(shù)使用熒光顯^t鏡(LeicaTCSSP2，LEICAMICROSYSTEMS)對(duì)用543nm激光^L后發(fā)射的熒光進(jìn)行分析。2)結(jié)果圖4展示了用所述AdTxl熒光衍生物對(duì)c^腎上腺素能受體進(jìn)行的特異性標(biāo)記。圖4A顯示，所述AdTxl熒光衍生物強(qiáng)烈標(biāo)記h-ala腎上腺素能受體。相比而言，圖4B顯示，所述AdTxl熒光衍生物不標(biāo)記h-alb腎上腺素能受體(圖4B)。權(quán)利要求1.用作藥物的肽，所述肽的特征在于a)其序列選自SEQIDNO2序列以及與SEQIDNO2完整序列具有至少70％同一性或80％相似性的衍生變體，b)具有三指結(jié)構(gòu)，其包含由4個(gè)二硫橋連接的8個(gè)半胱氨酸殘基，所述二硫橋分別在第1和第3個(gè)半胱氨酸之間、第2和第4個(gè)半胱氨酸之間、第5和第6個(gè)半胱氨酸之間以及第7和第8個(gè)半胱氨酸之間，以及c)α1a腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑活性。2.權(quán)利要求l的肽，其特征在于它具有SEQIDN0.3序列。3.權(quán)利要求1或2的肽，其特征在于所述第1個(gè)半胱氨酸在a)中所定義序列的1位或2位，和/或所述第8個(gè)半胱氨酸在a)中所定義序列的最后一位或倒數(shù)第二位。4.用作藥物的表達(dá)載體，所述載體包含編碼權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所定義的肽的多核苷酸，所述多核苷酸受到適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列的控制，并且任選地受到適當(dāng)?shù)姆g調(diào)節(jié)序列的控制。5.藥物組合物，其特征在于它包含至少一種權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所定義的肽或者權(quán)利要求4所定義的載體，以及可藥用運(yùn)載體。6.至少一種權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所定義的肽或者權(quán)利要求4所定義的載體用于制備治療泌尿生殖疾病或心血管疾病或者治療癌癥的藥物的用途，所述藥物具有cth腎上腺素能受體選擇性別構(gòu)拮抗劑的活性。7.權(quán)利要求6的用途，其特征在于所述疾病選自良性前列腺增生、尿失禁、勃起障礙、動(dòng)脈高血壓和前列腺癌。8.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所定義的肽作為研究c^腎上腺素能受體的工具的用途。9.權(quán)利要求8的用途，其特征在于所述肽是SEQIDN0.2序列的變體，其包含用另一M酸替換SEQIDNO.2序列的第34位賴氨酸。10.權(quán)利要求9的用途，其特征在于第34位賴氨酸被替換為精氨酸或高精氨酸。11.權(quán)利要求8至10中任一項(xiàng)的用途，其特征在于所述肽與適當(dāng)?shù)臉?biāo)i己偶聯(lián)。12.權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)的用途，其特征在于所述研究包括測定(Xh腎上腺素能受體的組織表達(dá)鐠。13.權(quán)利要求1至3和9至11中任一項(xiàng)所定義的肽用于篩選a^腎上腺素能受體的別構(gòu)配體的用途。14.用于篩選cth腎上腺素能受體的別構(gòu)配體的方法，其包括至少以下的步驟-將(Xh腎上腺素能受體與測試分子文庫以;5L^利要求11所定義的被標(biāo)記的肽接觸，以及-通過任何適當(dāng)?shù)氖侄蝸龛b定能夠置換所述肽與所述受體的結(jié)合的分子。15.用于在體外和體內(nèi)檢測c^腎上腺素能受體的方法，其包括至少以下的步驟-將待分析的細(xì)胞與權(quán)利要求11所定義的被標(biāo)記的肽接觸，以及—通過任何適當(dāng)?shù)氖侄蝸頇z測被標(biāo)記的細(xì)胞。16.用于制備al腎上腺素能受體的晶體的方法，其包括至少以下的步驟a)以形成受體/配體復(fù)合物的方式將所述al腎上腺素能受體與權(quán)利要求1至3和9至11中任一項(xiàng)所定義的肽接觸，以及b)在一定條件下將a)中得到的復(fù)合物孵育足以獲得晶體形成的時(shí)間。17.分離的肽，其特征在于它具有SEQIDN0.2的序列。18.權(quán)利要求9或權(quán)利要求10所定義的分離的肽。19.權(quán)利要求17或權(quán)利要求18的肽，其特征在于它與適當(dāng)?shù)臉?biāo)記偶聯(lián)。20.分離的受體/配體復(fù)合物，其特征在于所述受體是c^腎上腺素能受體，所述肽是權(quán)利要求1至3和9至11中任一項(xiàng)所定義的肽。21.多核苷酸，其特征在于它編碼權(quán)利要求17或權(quán)利要求18的肽。22.權(quán)利要求21的多核苷酸，其特征在于它具有SEQIDN0.4序列。23.重組載體，其特征在于它包含權(quán)利要求21或權(quán)利要求22的多核苷酸。24.用權(quán)利要求21或權(quán)利要求22的多核普酸或者權(quán)利要求23的載體進(jìn)行了〗務(wù)飾的細(xì)胞。全文摘要肽及其治療和藥理學(xué)用途，所述肽具有以下特征a)其序列選自SEQIDNO2序列以及與SEQIDNO2完整序列具有至少70％同一性或80％相似性的衍生變體，b)三指結(jié)構(gòu)，其包含通過4個(gè)二硫橋連接的8個(gè)半胱氨酸殘基，所述二硫橋分別在第1和第3個(gè)半胱氨酸之間、第2和第4個(gè)半胱氨酸之間、第5和第6個(gè)半胱氨酸之間以及第7和第8個(gè)半胱氨酸之間，以及c)對(duì)α_1a腎上腺素能受體具有選擇性的別構(gòu)拮抗劑活性。文檔編號(hào)C12N15/63GK101389646SQ200780006270公開日2009年3月18日申請(qǐng)日期2007年2月23日優(yōu)先權(quán)日2006年2月23日發(fā)明者安德烈·梅內(nèi)斯,尼古拉斯·吉勒斯申請(qǐng)人:原子能委員會(huì)