專利名稱：：含有來自人類脂肪組織的多塑性干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和脂肪或脂肪細(xì)胞的整容或整形組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于整容或整形外科手術(shù)的組合物及其制備方法，所述組合物含有來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及脂肪或脂肪細(xì)胞(Adiopocyte)。
背景技術(shù)：
：干細(xì)胞指的是既具有自我復(fù)制能力又具有分化成至少兩種細(xì)胞能力的細(xì)胞，其可被分為全能干細(xì)胞(totipotentstemcell)、多能干細(xì)胞(pluripotentstemcells)以及多塑性干細(xì)胞(multipotentstemcells)。近來，發(fā)現(xiàn)脂肪組織是新的多塑性干細(xì)胞源(Cousin等人，SBiC.，301:1016，2003;Miranville等人，C/腳/a"臨110:349，2004;Gronthos等人，/Ce〃尸—W.,189:54，2001;Seo等人，朋iC.，328:258，2005)。也就是說，報道了通過抽脂術(shù)得到的人類脂肪組織含有一組未分化的細(xì)胞，它們具有分化成脂肪形成細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌源細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞的能力(Zuk等人，7!wwe7:211,2001;Rodriguez等人，5SiC.,315:255,2004)。而且通過動物模型實驗己經(jīng)知道，來自脂肪組織的細(xì)胞具有再生肌肉和刺激分化成神經(jīng)血管的能力。由于這種脂肪組織具有的優(yōu)點在于其可以被大規(guī)模提取，其作為克服現(xiàn)有缺點的新的干細(xì)胞源已經(jīng)引起矚目。到目前為止，己知的來自脂肪組織的干細(xì)胞包括能夠分化成上皮細(xì)胞的人類脂肪來源的成人干細(xì)胞(Brzoska等人，SSWC,330:142,2005)，能夠分化成成骨細(xì)胞和脂肪形成細(xì)胞的人類脂肪來源的成人千細(xì)胞(Cao等人，5SiC,332:370，2005),能夠分化成神經(jīng)細(xì)胞的人類脂肪來源的成人干細(xì)胞(Safford等人，SR/C，294:371，2002)，能夠分化成脂肪形成細(xì)胞的鼠脂肪來源的干細(xì)胞(Ogawa等人，5BiC，319:511，2004)，能夠分化成成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞的鼠脂肪來源的干細(xì)胞(Ogawa等人，SSiC，313:871，2004)，能夠分化成成軟骨細(xì)胞的人類脂肪來源的干細(xì)胞(Awad等人，BZoma化n'a/s,25:3211,2004)，能夠分化成神經(jīng)細(xì)胞的鼠脂肪來源的干細(xì)胞(Fujimura等人，B萬iC，333:116，2005)，和能夠分化成成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞或者肌肉細(xì)胞的脂肪來源的干細(xì)胞(美國專利6,777,231)。雖然到目前為止已經(jīng)付出了許多努力將脂肪來源的干細(xì)胞用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域包括治療不可治愈性的疾病，但較少努力去嘗試使用干細(xì)胞進(jìn)行整容和整形外科手術(shù)。因此，本發(fā)明的發(fā)明人付出了極大的努力在整容和整形外科手術(shù)領(lǐng)域(包括皺紋改善、松弛皮膚的保護(hù)及類似問題)中使用干細(xì)胞，通過培養(yǎng)通過抽脂術(shù)得到的含有脂肪細(xì)胞的懸浮液，收集含有成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞層，并將它們與脂肪細(xì)胞混合來進(jìn)行實驗，并發(fā)現(xiàn)得到的組合物對于整容治療和整形外科手術(shù)是有用的，從而完成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種用于整容或者整形外科手術(shù)的組合物及其制備方法，所述組合物含有來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和脂肪或脂肪細(xì)胞。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種制備用于整容或整形外科手術(shù)的組合物的方法，所述組合物含有(i)來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞，(ii)成纖維細(xì)胞以及(iii)脂肪或者脂肪細(xì)胞，所述方法包括下列步驟(a)在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)通過抽脂術(shù)從人類脂肪組織得到的含有脂肪的懸浮液以收集含有來自脂肪的附著在培養(yǎng)瓶上的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞層；以及(b)將含有來自脂肪的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的收集細(xì)4胞層與脂肪或者脂肪細(xì)胞混合。本發(fā)明還提供一種制備用于整容或整形外科手術(shù)的組合物的方法，所述組合物含有(i)來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞，(ii)成纖維細(xì)胞以及(iii)脂肪或者脂肪細(xì)胞，所述方法包括下列步驟(a)通過在含有N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)人類脂肪組織來源的微粒制備來自脂肪的成人干細(xì)胞，以收集來自脂肪的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞；以及(b)將所選來自脂肪的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞與脂肪或者脂肪細(xì)胞混合。此外，本發(fā)明提供一種用于整容或整形外科手術(shù)的組合物，所述組合物含有(i)來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞，(ii)成纖維細(xì)胞以及(iii)脂肪或者脂肪細(xì)胞。通過下列詳細(xì)描述和所附的權(quán)利要求書，本發(fā)明的其他特征和實施方式將更加清楚。圖1顯示了附著在培養(yǎng)瓶上的細(xì)胞的圖片，其中含有根據(jù)本發(fā)明的來自人類脂肪組織的多塑性干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及類似物(原始放大倍數(shù)100x)。圖2示出了使用免疫染色在含有CORM-2的MEBM培養(yǎng)基中球形培養(yǎng)的(sphere-cultured)來自人類脂肪組織的多塑性干細(xì)胞中Nestin、Oct4、SH2、SH3/4的表達(dá)結(jié)果(原始放大倍數(shù)100x)。圖3顯示了由根據(jù)本發(fā)明的來自人類脂肪組織的多塑性干細(xì)胞分化成的脂肪細(xì)胞的圖片(A:分化狀態(tài)的相差；和B:使用油紅O染色法染色的脂肪細(xì)胞，原始放大倍數(shù)200x)。具體實施例方式在一個方面，本發(fā)明涉及一種用于整容或整形外科手術(shù)的組合物，其含有來自人類脂肪組織的干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和脂肪或脂肪細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的組合物優(yōu)選可被用于通過形成新的乳房組織的乳房增大或者鈹紋去除，但不局限于這種目的。例如，其可通過微量脂注射和自體脂肪移植用于保持面部皮膚的緊致以及去除眉間的皺眉線和鼻唇溝的。理想的是在根據(jù)本發(fā)明的組合物中含有的來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞是自體來源細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物可通過培養(yǎng)通過抽脂術(shù)得到的來自人類脂肪組織的含有脂肪的懸浮液，并將得到的來自脂肪組織的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞與其他細(xì)胞或組織混合來制備。在一種實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物可通過下列步驟制備(a)在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)通過抽脂術(shù)從人類脂肪組織得到的含有脂肪的懸浮液以收集含有來自脂肪的附著在培養(yǎng)瓶上的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞層；以及(b)將含有來自脂肪的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的收集細(xì)胞層與脂肪或者脂肪細(xì)胞混合。具體地，所述組合物通過下列方式制備培養(yǎng)通過抽脂術(shù)得到的懸浮在生理鹽水中的含有脂肪的懸浮液，并在洗滌附著在培養(yǎng)容器諸如培養(yǎng)瓶中的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞之后收集，在收集它們之前，使用生理鹽水將它們洗滌1次以便除去上清液中殘余的脂肪和血細(xì)胞，并胰蛋白酶化包括附著在底部的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞層，通過刮下細(xì)胞層直接收集被懸浮在少量生理鹽水中的細(xì)胞，或者通過離心收集離心的細(xì)胞，接著將收集的細(xì)胞與脂肪混合。在本發(fā)明中，成人干細(xì)胞優(yōu)選為來自中胚層的細(xì)胞，來自中胚層的細(xì)胞優(yōu)選為脂肪形成細(xì)胞。在本發(fā)明中，成人干細(xì)胞優(yōu)選在含有地塞米松、消炎痛、胰島素和IBMX的a-MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)以分化成脂肪形成細(xì)胞。在另一種實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物可通過下列步驟制備(a)通過在含有N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)人類脂肪組織來源的微粒制備來自脂肪的成人干細(xì)胞，以收集來自脂肪的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞；以及(b)將所選來自脂肪的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞與脂肪或者脂肪細(xì)胞混合。抽脂術(shù)作為用于脂肪去除的整容或整形外科手術(shù)的技術(shù)，指的是通過真空泵或者真空注射器經(jīng)由供體區(qū)域中的切口抽取脂肪。在本發(fā)明中，對于脂肪或脂肪細(xì)胞來說，可以使用通過抽脂術(shù)附帶從人類脂肪組織中獲得的脂肪或脂肪細(xì)胞，但并不限于此。在本發(fā)明中，脂肪包括脂肪組織。當(dāng)脂肪被用作用于根據(jù)本發(fā)明的整容或整形外科手術(shù)的組合物時，優(yōu)選每lml脂肪組織含有1><1041><107個來自于脂肪的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，但是當(dāng)使用脂肪細(xì)胞時，優(yōu)選使用比來自脂肪的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的總細(xì)胞數(shù)目多l(xiāng)-50倍的脂肪細(xì)胞。此外，成纖維細(xì)胞是構(gòu)成纖維連接組織的重要組分的細(xì)胞，也被稱為纖維細(xì)胞。成纖維細(xì)胞的組織切片為扁平長條狀，通常具有不規(guī)則膨脹。成纖維細(xì)胞具有含有線粒體、高爾基復(fù)合體、中心體、小的基體等的細(xì)胞質(zhì)，但除它們之外不顯示其他專一性分化。細(xì)胞核為染色弱的橢圓形并含磷。它們被命名為成纖維細(xì)胞是因為它們聚集在膠原纖維周圍并被認(rèn)為與膠原纖維的形成有關(guān)。在本發(fā)明中，成纖維細(xì)胞可通過將干細(xì)胞從脂肪組織中分離的步驟分離。同時，從得到的來自人類脂肪組織的干細(xì)胞肉湯獲得表達(dá)目標(biāo)細(xì)胞表面抗原的多塑性干細(xì)胞包括使用具有分選功能的流式細(xì)胞計的方法(/敗/mm朋o/.,10(3):275,1998)，使用磁珠的方法以及使用抗體專一性識別多塑性干細(xì)胞的淘選法(panningmethod)U/附m柳o/.,141(8):2797，1998)。而且，從大量培養(yǎng)肉湯中得到多塑性干細(xì)胞的方法包括其中在細(xì)胞表面表達(dá)的抗體專一性識別分子(這里被稱為"表面抗原")被單獨使用或者與柱結(jié)合使用的方法。流式細(xì)胞計分選法包括水滴電荷法和細(xì)胞捕獲法以及類似方法，專一性識別細(xì)胞表面上的抗原的抗體被熒光標(biāo)記并且來自被標(biāo)記抗原-抗體復(fù)合物的熒光強度被轉(zhuǎn)換成電信號，從而對表達(dá)的抗原量進(jìn)行定量。還能夠通過將使用的熒光類型組合來分離表達(dá)多種表面抗原的細(xì)胞。可在這種情況下使用的熒光物質(zhì)包括FITC(異硫氰酸酯)，PE(藻紅蛋白)、APC(異藻青蛋白)、TR(TexasRed)、Cy3、CyChrome,Red613，Red670,TRI-Color，QuantumRed等等。使用流式細(xì)胞計的FACS法包括其中上述干細(xì)胞肉湯被收集的方法，通過該方法通過諸如離心并直接對抗體進(jìn)行染色分離細(xì)胞；以及其中細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)并增殖然后對抗體進(jìn)行染色的方法。細(xì)胞的染色通過將識別表面抗原的初級抗體與靶細(xì)胞樣品混合并將混合物在冰上培養(yǎng)30分鐘到1小時來進(jìn)行。當(dāng)初級抗體被熒光標(biāo)記后，細(xì)胞在洗滌后用流式細(xì)胞計分離。當(dāng)初級抗體沒有被熒光標(biāo)記時，細(xì)胞與初級抗體反應(yīng)并且將熒光標(biāo)記的對初級抗體具有結(jié)合活性的第二抗體在洗滌后混合，并在冰水上培養(yǎng)30分鐘到1小時。洗滌后，具有染色的初級抗體和第二抗體的細(xì)胞用流式細(xì)胞計分離。由于具有提高皮膚緊致度，改善皺紋諸如鼻唇溝和眉間皺眉線以及松弛的皮膚的功能，并通過整形外科手術(shù)恢復(fù)凹陷區(qū)域，含有來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和脂肪的本發(fā)明的組合物對于整容目的來說是有用的。此外，由于來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞可分化成脂肪細(xì)胞，根據(jù)本發(fā)明的組合物對于新的乳房組織形成而言是有用的。實施例此后，將通過實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。但對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是，這些實施例僅僅用于說明的目的，而不構(gòu)成本發(fā)明的范圍的限制。實施例1:來自脂肪組織的多塑性成人干細(xì)胞的分離和用于整形外科手術(shù)的組合物的制備制備實施例1將懸浮在生理鹽水中的通過抽脂術(shù)附帶得到的含有脂肪細(xì)胞的懸浮液使用合適量的生理鹽水均勻地再懸浮，并將足夠量的再懸浮的懸浮液置于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中或者搖瓶中靜置或搖動培養(yǎng)。對于靜置培養(yǎng)來說至少需要6-12小時。接著，附著在培養(yǎng)瓶表面上的細(xì)胞層(來自脂肪的MSC、成纖維細(xì)胞)通過用胰蛋白酶處理來收集(圖1)。此時，懸浮在少量生理鹽水中的細(xì)胞直接被收集以便使用，或者從生理鹽水收集的細(xì)胞層在1000ipm下離心10分鐘以便僅僅使用其中細(xì)胞層的體積應(yīng)當(dāng)被減小的情況下的沉淀小球。分離的細(xì)胞層含有成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的含有成人干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、脂肪和脂肪細(xì)胞的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物通過將分離的細(xì)胞層與脂肪混合來制備。制備實施例2多塑性干細(xì)胞從人類脂肪組織分離并純化。也就是說，將分離的人類脂肪組織用PBS洗滌3次然后精細(xì)切割。切割的組織以1:3的比例(脂肪組織DMEM)在添加了1型膠原酶(lmg/ml)的DMEM-LG(低糖)培養(yǎng)基中在37"C下消化1小時。在用PBS洗滌被消化組織之后，在1000rpm下離心5分鐘。吸去上清液，并用10%的FBS和DMEM-LG(低糖)以1:1的比例混合的混合液洗滌底部上殘余的小球，接著以1000rpm再離心5分鐘。得到的小球通過10(Him網(wǎng)過濾以除去殘渣并用PBS洗滌。得到的細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基(10%FBS，2mMNAC，0.2mM抗壞血酸)中培養(yǎng)。一夜后，用PBS洗滌未附著的細(xì)胞，并在K-NAC培養(yǎng)基(角化細(xì)胞-SFM培養(yǎng)基+2mMNAC+0.2mM抗壞血酸+0.09mM鈣+5ng/mlrEGF+50|xg/mlBPE+5^ig/ml胰島素+74ng/ml氫化可的松)中培養(yǎng)附著的細(xì)胞，在培養(yǎng)過程中每兩天更換一次培養(yǎng)基，從而得到來自人類脂肪組織多塑性干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。通過將得到的細(xì)胞與脂肪混合，制備了根據(jù)本發(fā)明含有成人干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和制成或者脂肪細(xì)胞的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物。實施例2:來自脂肪的多塑性干細(xì)胞的免疫特性在實施例1中得到的來自脂肪組織的成人干細(xì)胞用PBS洗滌并用胰蛋白酶處理。處理的細(xì)胞被收集并在4'C下以1000rpm離心5分鐘。在棄去上清液并且細(xì)胞用2%的溶于PBS中的FBS洗滌后，在4。C下以1000rpm離心5分鐘。棄去上清，并且微粒用PBS懸浮使每個樣品中含有1乂105個細(xì)胞，之后在4。C下以1000rpm離心5分鐘。棄去上清，并將細(xì)胞與150|11封閉液(5。/。的溶于PBS中的FBS)混合，并在4"C下以1000rpm離心5分鐘再次棄去上清并將細(xì)胞與100|11封閉液(5%的溶于PBS中的FBS)混合以便將它們在4"C下培養(yǎng)30分鐘。之后，將溶液在4t下1000rpm離心5分鐘并除去上清液，接著將150|ul封閉液(5%的溶于PBS中的FBS)加入到混合孔中。將抗體(R-藻紅蛋白結(jié)合的鼠抗人單克隆抗體)置入每個孔中并在4r下培養(yǎng)30分鐘。培養(yǎng)后，將它們在4'C下以1000rpm離心5分鐘。除去上清液，并將細(xì)胞用PBS洗滌并在4"C下以1000rpm離心5分鐘。再次除去上清液，將細(xì)胞用PBS洗滌并在4"C下以1000rpm離心5分鐘。在棄去上清液之后，將細(xì)胞與200WPBS混合并用1%多聚甲醛固定，最后使用流式細(xì)胞計進(jìn)行分析。表l:來自脂肪的干細(xì)胞的表面抗原的FACS分析<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>結(jié)果，如表1中所示，根據(jù)本發(fā)明的來自脂肪的成人干細(xì)胞顯示對CD73的91%、對CD卯的97%,對CD29的96%,對CD44的83%，以及對CD105的80%陽性應(yīng)答。而且，對其他抗原的FACS分析的結(jié)果表明，本發(fā)明的干細(xì)胞顯示對所有CD33，CD34,CD45,CD4,CD31,CD62p，CD14和HLA-DR的陰性免疫應(yīng)答。實施例3:來自脂肪組織的干細(xì)胞的免疫染色分析將在實施例1中得到的來自脂肪組織的干細(xì)胞用PBS洗滌3次并用含有4%多聚甲醛的PBS固定30分鐘。細(xì)胞用PBS洗滌3次并用含有0.1%Triton-X100滲透10分鐘。在使用PBS洗滌3次后，將細(xì)胞用10%NGS培養(yǎng)1小時，然后用含有初級抗體的PBS培養(yǎng)過夜。將細(xì)胞再用PBS洗滌3次，并允許其在暗室中與第二抗體反應(yīng)1小時。在用PBS洗滌3次之后，將細(xì)胞固定(mounted)。結(jié)果，如圖2所示，根據(jù)本發(fā)明的多塑性干細(xì)胞球體顯示了對所有可被認(rèn)為是未分化細(xì)胞的標(biāo)記物的Oct4和作為間葉細(xì)胞干細(xì)胞的標(biāo)記物的SH2(CD105)和SH3/4(CD73)的陽性應(yīng)答。實施例4:來自脂肪的多塑性干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞將在實施例1中得到的來自脂肪組織的多塑性成人干細(xì)胞在含有5%FBS,lpM地塞米松，200jxM消炎痛，lOpg/ml胰島素和0.5mMIBMX(3-異丁基-l-甲基黃嘌呤)的a-MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)兩周，誘導(dǎo)脂肪形成分化，然后使用油紅O染色法進(jìn)行分析。結(jié)果，如圖3所示，發(fā)現(xiàn)來自人類脂肪組織的多塑性干細(xì)胞分化成脂肪形成細(xì)胞。實施例5:使用來自脂肪的多塑性干細(xì)胞的動物分析使用老鼠檢測由來自脂肪的干細(xì)胞保持脂肪組織量的能力。使用12只老鼠作為對照組，12只老鼠作為實驗組。在實驗組中將脂肪(11111)+來自脂肪組織的多塑性干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞(5x105/200pl鹽)注射到頭部真11皮中，老鼠中不存在皮下脂肪組織，而將脂肪(lml)+賦形劑(20(^1鹽)注射到對照組中。注射15天后，通過鼠的頭部切口分離脂肪組織，并測定脂肪組織的量。結(jié)果，在對照組中注射的脂肪量減少了31%，而在其中注射了通過實施例1制備的組合物的實驗組中注射的脂肪量的45%得到保持。通過該結(jié)果發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的來自脂肪組織的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞具有減少由抽脂術(shù)產(chǎn)生的脂肪量降低的效果。工業(yè)實用性如上詳細(xì)描述的那樣，本發(fā)明具有提供一種用于整容或者整形外科手術(shù)的組合物的效果，所述組合物含有來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和脂肪或者脂肪細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物不僅對于整容目的來說是有用的，諸如提高皮膚的緊致度，改善鈹紋及松弛的皮膚，以及恢復(fù)通過整形外科手術(shù)降低的區(qū)域，而且對于新的乳房組織的形成也是有用的，因為來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞可分化成脂肪細(xì)胞。雖然已經(jīng)參照特定特征對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)描述，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是，該描述僅僅用于優(yōu)選實施方式，而不是限制本發(fā)明的范圍。因此，本發(fā)明的實質(zhì)范圍將由所附的權(quán)利要求書及其等同物來限定。權(quán)利要求1、一種用于整容或整形外科手術(shù)的組合物，其含有(i)來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞，(ii)成纖維細(xì)胞以及(iii)脂肪或者脂肪細(xì)胞。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的組合物，其特征在于，組合物用于新的乳房組織的形成或者鈹紋去除。3、一種制備用于整容或整形外科手術(shù)的組合物的方法，所述組合物含有(i)來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞，(ii)成纖維細(xì)胞以及(iii)脂肪或者脂肪細(xì)胞，所述方法包括下列步驟(a)在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)通過抽脂術(shù)從人類脂肪組織得到的含有脂肪的懸浮液以收集含有來自脂肪的附著在培養(yǎng)瓶上的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞層；以及(b)將含有來自脂肪的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的收集細(xì)胞層與脂肪或者脂肪細(xì)胞混合。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，成人干細(xì)胞是來自中胚層的細(xì)胞。5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，來自脂肪的成人干細(xì)胞在含有地塞米松、消炎痛、胰島素和IBMX的(x-MEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。6、一種制備用于整容或整形外科手術(shù)的組合物的方法，所述組合物含有(i)來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞，(ii)成纖維細(xì)胞以及(m)脂肪或者脂肪細(xì)胞，所述方法包括下列步驟(a)通過在含有N-乙酰-L-半胱氨酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)人類脂肪組織來源的微粒制備來自脂肪的成人干細(xì)胞，然后收集來自脂肪的干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞；以及(b)將收集的來自脂肪的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞與脂肪或者脂肪細(xì)胞混合。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于整容或整形外科手術(shù)的組合物及其制備方法，所述組合物含有來自人類脂肪組織的成人干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及脂肪或脂肪細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物可通過下列方法制備培養(yǎng)通過抽脂術(shù)得到的含有脂肪的懸浮液，然后收集含有附著在培養(yǎng)瓶表面上的來自脂肪的成人干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞兩者的細(xì)胞層，接著將脂肪細(xì)胞加入到收集的細(xì)胞層中。根據(jù)本發(fā)明的用于整容或整形外科手術(shù)的組合物對于整容目的來說是有用的，諸如皮膚緊密度的提高，皺紋及松弛皮膚的改善，以及由整形外科手術(shù)降低的區(qū)域的恢復(fù)，而且對于新的乳房組織的形成也是有用的。文檔編號C12N5/077GK101473030SQ200780022343公開日2009年7月1日申請日期2007年5月31日優(yōu)先權(quán)日2006年6月15日發(fā)明者羅正燦申請人:Rnl生物技術(shù)株式會社