專利名稱：二十二碳五烯酸(n-6)油在嬰兒配方中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用多不飽和脂肪酸制備嬰兒配方的方法和相應(yīng)的嬰兒
配方組合物。
背景技術(shù)：
為嬰兒和幼兒增加有益長鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)的飲食攝取是人 們所希望的，所述有益長鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)包括例如，co-3長鏈 多不飽和脂肪酸(co-3 LC-PUFA)和co-6長鏈多不飽和脂肪酸(co-6 LC-PUFA)。 如本文中所使用的那樣，涉及的長鏈多不飽和脂肪酸或LC-PUFA指具有18 或更多個碳原子的多不飽和脂肪酸。對歸因于(0-6和co-3長鏈多不飽和脂肪 酸(LC-PUFA)的臨床收益的認(rèn)識激發(fā)了增加這些脂肪酸在嬰兒飲食中的用途 的努力(Carlson和Forsythe 2001 Q//r 6>p. C7/". Meto6. 4, 123-126; Birch等2000 Deve/o/ . Afed C/w'WA^wra. 42, 174-181)。另外，還充分認(rèn)識了 oj-3 LC-PUFA對母體補充劑(maternal supplement)、和其它類型的營養(yǎng)補充劑 及食品的臨床收益(Barclay和Van Elswyk 2000, Functional Foods 2000, Angus, F. and Miller C., eds.， pp. 60-67， Leatherhead Publishing, Surrey)。
基于碳鏈的長度和飽和度特征對脂肪酸進(jìn)行分類。如本文中所使用的那 樣，脂肪酸包括多種形式的脂肪酸，包括但不限于三酰甘油、二酰甘油、單 酰甘油、磷脂、游離脂肪酸、酯化脂肪酸、和這些脂肪酸的天然或合成的衍 生物形式(例如脂肪酸的鈣鹽、乙酯等)。短鏈脂肪酸具有2個至約7個碳并 且通常是飽和的。中等鏈脂肪酸具有約8個至約17個碳并且可以是飽和或 不飽和的。長鏈脂肪酸具有18-24個或更多個碳并且也可以是飽和或不飽和 的。在較長鏈的脂肪酸中，可能存在一個或多個不飽和的點，分別對應(yīng)于術(shù) 語"單不飽和，，和"多不飽和"。在本發(fā)明中對長鏈PUFA(LC-PUFA)尤其感興趣。
根據(jù)脂肪酸中雙鍵的數(shù)目和位置依照公知的命名法對LC-PUFA進(jìn)行分 類。依賴于最接近所述脂肪酸曱基末端的雙鍵的位置，存在兩個常見的
15LC-PUFA系列或家族n-3(或Q)-3或歐米茄-3)系列在第三個碳含有雙鍵，而 n-6(或Q)-6或歐米茄-6)直到第六個碳才含有雙#:。如此，二十二碳六烯酸 ("DHA")具有一條長為22個碳的鏈，有6個雙鍵，雙鍵起始于曱基末端的第 三個碳，所以將其指定為"22:6 n-3"。其它重要的 -3 LC-PUFA包括指定為 "20:5 n-3"的二十碳五烯酸("EPA")和指定為"22:5 n-3"的二十二碳五烯酸 ("DPA(n-3)")。此外，將o)-6LC-PUFA與本發(fā)明一起使用。例如，指定為"20:4 n-6"的花生四烯酸("ARA，，)和指定為"22:5 n-6"的二十二石友五烯酸 n-6("DPAn-6")是合適的。
co-3脂肪酸和(D-6脂肪酸的從頭(De w vo)或"新"合成不在人體內(nèi)發(fā)生。 co-3和co-6脂肪酸的前體脂肪酸分別是oc-亞麻酸(18:3n-3)和亞油酸(18:2n-6)。 這些脂肪酸是必需脂肪酸，并且必須通過飲食食用，因為人無法合成它們。 人不能將雙鍵插入至比從分子末端計數(shù)的第七個碳原子更接近Q)末端的位 置。然而，機體能夠?qū)-亞麻酸和亞油酸分別轉(zhuǎn)化為諸如DHA和ARA的 LCPUFA，盡管效率非常低。所有代謝轉(zhuǎn)化在不改變含有co-3和co-6雙鍵的 分子的co末端的情況下發(fā)生。因此，co-3和co-6酸是兩個單獨的脂肪酸家族， 因為它們在人體內(nèi)不能相互轉(zhuǎn)化。
足月和早產(chǎn)嬰兒均能從各個必需脂肪酸合成LC-PUFA，但是爭論集中 圍繞這樣 一 個事實，即母乳喂養(yǎng)的嬰兒(breastfed infant)比配方喂養(yǎng)的嬰兒 (formula-fed infant)具有更高血漿濃度的這些LC-PUFA?？梢詫⑦@個信息解 釋為暗示了配方喂養(yǎng)的嬰兒不能合成足夠的這些脂肪酸來滿足持續(xù)的需求，
盡管DHA和ARA的血漿含量僅占其它組織中可用的總脂肪酸池的非常小的 一部分。已經(jīng)證明向嬰兒配方添加DHA改善了嬰兒視覺功能，并且DHA 和ARA 二者的添加改善了認(rèn)知發(fā)育并促進(jìn)正常嬰兒生長。已經(jīng)開發(fā)了含 DHA和DPA(n-6)二者的油以及含ARA的油的來源用于營養(yǎng)用途，并且已經(jīng) 提出了將這些物質(zhì)用于嬰兒配方來更好地匹配人類母乳(human breast milk) 中存在的LC-PUFA譜(LC-PUFA profile)。
使用金槍魚油或卯脂質(zhì)作為DHA和ARA來源的嬰兒配方可能含有非常 少量的DPA(n-6)。卯黃油和魚油在嬰兒配方中的用途由Clandinin的美國專 利No. 4,670,285提出。他報導(dǎo)了(表2)每100毫升人類母乳提供約1.7mg DPA(n-6)，占人乳中總脂肪酸的約0.07%。
已經(jīng)提出了將花生四烯酸連同它的延長產(chǎn)物二十二碳四烯酸和二十二碳五烯酸與二十二碳六烯酸一起按照人類母乳中它們的天然存在情況包含
在嬰兒飲食中(Specter 1994)。 DPA(n-6)以占總脂肪酸的大約0.1%存在于人類 母乳中(Koletzko等1992, / Pe&aWcx 120, S62-S70)。 DPA(n-6)通常是人體內(nèi) 組織的成分，所述組織包括心臟(Rocquelin等1989 24, 775-780)、腦
(Svennerholm等1978， / A^Mrac&w. 30， 1383-1390; O'Brien等1965 J. Z^ 〃 L 6, 545-551)、 肝臟(Salem 1989 (9膨ga-3 Fa砂HM /ecw/"r 腸c/zem/ca/ j，加， in New Protective Roles for Selected NuTR正nts,(Spiller, G. A. and Scala, J., eds.), pp. 109-228, Alan R. Liss， New York.)、紅細(xì)胞(Sanders等1978 Jw. / C"".淑r. 31, 805-813; Sanders等1979
41， 619-623)和脂肪組織(Clandinin等1981， ￡ar/_y Deve/o/ meW 5, 355-366)。 DPA(n-6)占人腦皮質(zhì)中長鏈co-6脂肪酸的9%,并 且占眼睛視網(wǎng)膜中長鏈co-6脂肪酸的5%(Makrides等1994J. C//". 60, 189-194)。在人體內(nèi)，DHA和DPA(n-6)分別代表n-3和n-6脂肪酸途徑 中的最終延長產(chǎn)物。許多人用DHA飲食來源同樣也含有DPA(n-6)。成人和 兒童飲食中DPA(n-6)的主要來源是禽類(肉和蛋)和海產(chǎn)食品(Taber等1998 ' 33(12)， 1151-1157; Nichols等1998 Seafood:the Good Food:The
OlL(r'AT)CONTHNT AND COMPOSITION OF AUSTRALIAN COMMERCIAL FlSHES,
Si肌丄FiSHES and Crustaceans. CSIRO Marine Research, Hobart, Australia)。
許多組織為嬰兒配方中的LC-PUFA水平提供了建議。例如，國際脂肪 酸和類脂研究學(xué)會(International Society for the Study of Fatty Acids and Upids)(ISSFAL)在1994年建議嬰兒配方提供每日60-100mg/kg的預(yù)成型花生 四烯酸及其相關(guān)長鏈co-6形式(22:4(n-6)和22:5(n-6》。ISSFAL Board of Directors, /M/M丄We鄉(xiāng)/e"er:4-5(1994)。 ISSFAL在1999年對嬰兒配方中的 LC-PUFA提出了以下建議，從而確保足夠的LC-PUFA攝入亞油酸，18:2n-6， ]0%; a-亞麻酸，18:3， 1.50%;花生四烯酸，20:4n-6， 0.50%; 二十二石灰六 烯酸，22:6n-3, 0.35%; 二十碳五烯酸，20:5n-3, 0.10%。在這套建議中沒 有對DPA(n-6)的建議(參見Simopoulos等Co〃7Vz^ 18(5):487(1999))。
為長鏈co-3脂肪酸(DHA和EPA)確定的推薦日攝入量(Recommended Daily Intal(es)(RDI)范圍/人每日200 mg(COMA(Committee on Medical Aspects of Food Policy)(1994). Annual Report. London:Department of Health)到每曰1.2 g(Nordic Council of Ministers(1989). Nordic Nutrition Recommendations,Second Edition)。這些RDI代表成人每日3-20mg DHA+EPA/kg的DHA/EPA 攝入量范圍。盡管尚未確定DPA(n-6)的RDI，但出于比較的目的，可以從人 類母乳中DPA(n-6)含量的數(shù)據(jù)收集參考攝入量?；趫髮?dǎo)的母乳中(占總脂 肪酸的)大約0.1%的DPA(n-6)平均水平(Carlson等1986 C7/". iW欲4《
798-804), —個每日消耗0.8-1.0升每升含有32 g脂肪的母乳的3 kg母乳喂 養(yǎng)的嬰兒將會每日消耗大約26-32 mg的DPA(n-6)，或每日消耗大約10mg DPA(n-6)/kg。與食品中DHA和DPA(n-6)的組合攝入有關(guān)，眾所周知人類母 乳的PUFA含量是母源飲食(maternal diet)的脂肪酸組成的指示劑(Chen等 1994 一A 30, 15-21; Jensen 1996尸，.丄—L 35, 53-91)。 Chen等丄—s 32， 1061-1067(1997)最近檢驗了吃"西化"飲食的中國女性群體相對于吃"傳 統(tǒng)"中國飲食的群體之間母乳脂肪酸組成的差異。吃"傳統(tǒng)"飲食的女性每曰 平均食用7個蛋、220 g雞肉和54 g豬肉和11 g魚肉。基于Taber(1998)和 Nichols等(1998)的數(shù)據(jù)，上述飲食代表約158mg/日的每日DPA(n-6)攝入量。 吃"西化"飲食的女性每日食用1個蛋、44g雞肉、29g豬肉和26g魚肉，這 代表約32mg/日的DPA(n-6)攝入量(Taber 1998; Nichols等1998)。盡管據(jù)估 算傳統(tǒng)飲食中的DPA(n-6)是西化飲食中的五倍高，但是吃"傳統(tǒng)，，飲食的女性 的母乳的DPA(n-6)含量(占總脂肪酸的0.10重量％)并不顯著地有別于吃"西 化"飲食的女性(占總脂肪酸的0.09重量％)。吃傳統(tǒng)飲食的女性的母乳中ARA 水平較高(占總脂肪酸的0.76重量％與0.61重量％)，但不是統(tǒng)計學(xué)上有差異 的。這說明當(dāng)DPA(n-6)與DHA組合消耗時存在DPA(n-6)的最小積累，并且 DPA(n-6)可能幫助維持ARA水平。在嬰兒中最重要的是，這種高水平的 DPA(n-6)攝入(以mgZkg體重計)出現(xiàn)在腦和神經(jīng)組織快速發(fā)育期間。這也是 嬰兒體內(nèi)DHA積累達(dá)到峰值的時間，而人類母乳的DHA含量比DPA(n-6) 高出幾倍。
已知DPA(n-6)能夠藉由卩-氧化而反轉(zhuǎn)化(retroconvert)成花生四烯酸 (Stoffel等1970 &_y/er i Z.尸/zj^'o/. C77e亂351， 1545-1554)。 DPA(n-6)
向ARA的反轉(zhuǎn)化不是反向鏈延長，而是部分降解，包括氫化和鏈縮短，這 通過使用同位素標(biāo)記的脂肪酸在大鼠肝臟制備物中進(jìn)行的實驗來確定。已經(jīng) 提出喂食伴有DHA的DPA(n-6)可避免在單獨施用DHA時觀察到的血漿 ARA的迅速下降。然而尚未提出可以減少ARA喂食。
ARA通常是以最高濃度添加到嬰兒配方的LC-PUFA。當(dāng)前來自衛(wèi)生和監(jiān)管機構(gòu)(health and regulatory organization)的建議提出應(yīng)該按照約 2:1-1:1(ARA:DHA)的大概比例向嬰兒配方添加ARA和DHA。已知o>3 LC-PUFA如DHA的高飲食攝入量導(dǎo)致DHA含量的增加，但也降低ARA的 血漿水平。因此，以這些水平向嬰兒配方添加ARA來補償因DHA施用所致 的ARA血漿水平的下降。含有LC-PUFA的嬰兒配方可能比標(biāo)準(zhǔn)嬰兒配方貴， 原因是LC-PUFA成分的附加成本。
以這樣一種方式為嬰兒配方補充營養(yǎng)將是理想的，即在提高生產(chǎn)效率的 情況下提供由于補充有DHA和ARA而獲得的收益。本發(fā)明滿足了上述和其 它需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供ARA水平低于目前建議的水平或指標(biāo)(target)的嬰兒配方， 但是所述嬰兒配方卻顯著減少或防止當(dāng)嬰兒配方含有co-3脂肪酸如DHA時 將會產(chǎn)生的ARA血漿水平的相關(guān)下降。此外，本發(fā)明提供ARA水平在大約 目前建議的水平或指標(biāo)的嬰兒配方，但是所述嬰兒配方提供比當(dāng)前產(chǎn)品增加 的血漿ARA水平。ARA對于正常生長、重量、免疫發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育是 重要的；因此，減少或防止ARA血漿水平的下降可維持正常嬰兒生長、重 量、免疫系統(tǒng)發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育。含有co-3脂肪酸如DHA的嬰兒配方引 起嬰兒體內(nèi)ARA血漿水平的減少，并因此向嬰兒配方添加ARA來避免這種 減少。在一些實施方案中，本發(fā)明提供一種方法，其中用DPA(n-6)(—種通 常存在于母乳中的脂肪酸)使補充有DHA的嬰兒配方更富營養(yǎng)以補償DHA 所致的ARA血漿水平減少。詳細(xì)描述見下文。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種嬰兒配方組合物，其中當(dāng)可供嬰兒 食用(ready for con sumption by infant)時，所述組合物包含長鏈n-3脂肪酸和 長鏈n-6脂肪酸，并且其中所述長鏈n-3脂肪酸包含二十二碳六烯酸(DHA); 所述長鏈n-6脂肪酸包含二十二碳五烯酸(DPA(n-6))并且任選地包含花生四 烯酸(ARA)。在這個實施方案中，ARA:DHA的比例小于約3:1，并且 DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約0.5:1。
本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成 分、長鏈n-3脂肪酸和長鏈n-6脂肪酸；其中所述長鏈n-3脂肪酸包含DHA; 其中所述長鏈n-6脂肪酸包含ARA和DPA(n-6);其中ARA:DHA的比例小于約3:1，并且其中DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約0.5:1。由這種方法制 備的嬰兒配方組合物也包括在本發(fā)明中。
在這些實施方案的某些方面中，ARA:DHA的比例小于約2.95:1,小于 約2.85:1，小于約2.9:1，小于約2.8:1，小于約2.75:1,小于約2.5:1，小于 約2.25:1,小于約2:1，小于約1.95:1，小于約1.9:1,小于約1.85:1，小于約 1.8:1,或小于約1.75:1 。在其它的實施方案中，ARA:DHA的比例大于約0.4:1。 在進(jìn)一步的其它實施方案中，所述組合物不包含ARA。
在這些實施方案的某些方面中，DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約3:1， 從約5:1至約2:1，從約5:1至約1:1，約4:1，約3:1，約2:1，約1:1，或約 0.5:1。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪 酸在源油(source oil)中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油 中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約2%DPA(n-6)。在其它實施方案中， 所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含 至少約5% DPA(n-6),至少約10% DPA(n-6),至少約15% DPA(n-6)，至少約 20% DPA(n-6),至少約25% DPA(n-6),至少約30% DPA(n-6)，至少約40% DPA(n-6)，或至少約5 0% DPA(n-6)。
在這些實施方案的某些方面中，所述組合物包含至少約7mg/L的 DPA(n-6),至少約13mg/L的DPA(n-6)，至少約26mg/L的DPA(n-6)，至少 約40mg/L的DPA(n-6)，至少約53mg/L的DPA(n-6)，至少約66mg/L的 DPA(n-6),至少約80mg/L的DPA(n-6)，至少約100mg/L的DPA(n-6)，至少 約120mg/L的DPA(n-6)。在其它實施方式中，所述組合物包含〗氐于約240mg/L 的DPA(n-6)，低于約220mg/L的DPA(n-6)，或低于約200mg/L的DPA(n-6)。 在其它實施方案中，所述組合物包含多種范圍的DPA(n-6)，所述范圍由任意 前述最小值和最大值的任意組合構(gòu)成。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含至少20mg/L 的DHA或至少40mg/L的DHA。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約40至約140mg/L的DHA，約20至約200mg/L的DHA。在其它實施 方案中，所述組合物包含低于約140mg/L的DHA或低于約200mg/L的DHA。 在其它實施方案中，所述組合物包含多種范圍的DHA,所述范圍由任意前 述最小值和最大值的任意組合構(gòu)成。在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L 的膽固醇至約500mg/L的膽固醇。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約0.37mg/L的膽固醇至約300mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至 約100mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至約50mg/L的膽固醇，或約 0.37mg/L的膽固醇至約10mg/L的膽固醇。在這些實施方案的某些方面中， 所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇至約3.75mg/L的膽固醇。在 一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含高于約0.5mg/L的膽固醇。在一 些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇，約0.75mg/L 的膽固醇，約1.5mg/L的膽固醇，約2.3mg/L的膽固醇，約3mg/L的膽固醇， 或約3.75mg/L的膽固醇。在某些方面中，所述膽固醇以微生物油(microbial oil) 的形式提供，所述油包含長鏈co-3脂肪酸或長鏈co-6脂肪酸。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含量1氐于約 3mg/L的二十碳五烯酸(EPA)。在某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含量 低于約60mg/L的EPA。在某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含約15mg/L 至約30mg/L的EPA。在一些實施方案中，EPA:DHA的比例以高達(dá)1:1的比 例提供。
在這些實施方案的某些方面中，將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)向嬰兒 施用時提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。在一些實施方案中，將所述嬰兒配 方組合物配制成當(dāng)向嬰兒施用時提供約3mg/kg/日DPA(n-6)至約8mg/kg/曰 DPA(n-6)。
在進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明提供包含長鏈n-6脂肪酸和DHA的嬰 兒配方組合物，其中所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪酸在源油中提供， 其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計 包含至少約2% DPA(n-6),所述嬰兒配方組合物中DHA:DPA(n-6)的比例為 約10:1至約0.5:1，并且其中將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)向嬰兒施用時 提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。
本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成 分、DHA和長鏈n-6脂肪酸，其中所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪酸 在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6 脂肪酸按重量計包含至少約2% DPA(n-6)，其中所述嬰兒配方組合物中 DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約0.5:1。將所述方法設(shè)計為提供一種配方(formulation),所述配方當(dāng)向嬰兒施用時提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。通 過這種方法制備的嬰兒配方組合物也包括在本發(fā)明中。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪 酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長《連n-6 脂肪酸按重量計包含至少約2%DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述源油包 含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約5% DPA(n-6)，至少約10% DPA(n-6)，至少約15% DPA(n-6)，至少約20% DPA(n-6),至少約25% DPA(n-6),至少約30% DPA(n-6)，至少約40% DPA(n-6)，或至少約50% DPA(n-6)。
在這些實施方案的其它方面中，所述長鏈n-6脂肪酸包含ARA，并且 ARA:DHA的比例小于約3:1。在一些實施方案中，ARA:DHA的比例小于約 2.95:1，小于約2.85:1，小于約2.9:1,小于約2.8:1，小于約2.75:1，小于約 2.5:1，小于約2.25:1，小于約2:1，小于約1.95:1，小于約1.9:1，小于約1.85:1， 小于約1.8:1，或小于約1.75:1。在其它實施方案中，ARA:DHA的比例大于 約0.4:1。在進(jìn)一步的其它實施方案中，所述組合物不包含ARA。
在這些實施方案的某些方面中，所述組合物包含至少約7mg/L的 DPA(n-6)，至少約13mg/L的DPA(n-6)，至少約26mg/L的DPA(n-6),至少 約40mgZL的DPA(n-6)，至少約53mg/L的DPA(n-6)，或至少約66mg/L的 DP八(n-6),至少約80mg/L的DPA(n-6),至少約100mg/L的DPA(n-6)，至少 約120mg/L的DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述組合物包含低于約M0mg/L 的DPA(n-6)，低于約220mg/L的DPA(n-6)，或低于約200mg/L的DPA(n-6)。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含至少20mg/L 的DIIA或至少40mg/L的DHA。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約40至約140mg/L的DHA，約20至約200mg/L的DHA。在其它實施 方案中，所述組合物包含低于約140mg/L的DHA或低于約200mg/L的DHA。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物中DHA:DPA(n-6) 的比例為約5:1至約3:1,約5:1至約2:1，約5:1至約1:1，約4:1，約3:1， 約2:1，約1:1，或約0.5:1。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L 的膽固醇至約500mg/L的膽固醇。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約0.37mg/L的膽固醇至約300mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至約100mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至約50mg/L的膽固醇，或約 0.37mg/L的膽固醇至約10mg/L的膽固醇。在這些實施方案的其它方面中， 所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇至約3.75mg/L的膽固醇。在 一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含高于約0.5mg/L的膽固醇。在一 些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇，約0.75mg/L 的膽固醇，約1.5mg/L的膽固醇，約2.3mg/L的膽固醇，約3mg/L的膽固醇， 或約3.75mg/L的膽固醇。在某些方面中，所述膽固醇以微生物油的形式提 供，所述油含有長鏈co-3脂肪酸或長鏈co-6脂肪酸。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含量低于約 3mg/L的二十碳五烯酸(EPA)。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含量 低于約60mg/L的EPA。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含約15mg/L 至約30mg/L的EPA。在一些實施方案中，EPA:DHA的比例以高達(dá)約1:1的 比例提供。
在這些實施方案的某些方面中，將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)向嬰兒 施用時提供約3mg/kg/日DPA(n-6)至約8mg/kg/日DPA(n-6)。
在進(jìn)一步的實施方案中，本發(fā)明提供嬰兒配方組合物，將所述嬰兒配方 組合物配制成當(dāng)可供食用時包含至少約7mg/L的DPA(n-6)，其中所述組合 物進(jìn)一步包含長鏈n-3脂肪酸；其中所述長鏈n-3脂肪酸包含DHA;其中所 述組合物進(jìn)一步任選地包含花生四烯酸(ARA);并且其中ARA:DHA的比例 小于約3:1。
本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成 分、DPA(n-6)、 DHA以及任選的ARA;其中將所述組合物配制成當(dāng)可供食 用時包含至少約7mg/L的DPA(n-6)，并且其中ARA:DHA的比例小于約3:1 。 通過這種方法制備的嬰兒配方組合物也包括在本發(fā)明中。
在這些實施方案的某些方面中，ARA:DHA的比例小于約3:1。在一些 實施方案中，ARA:DHA的比例小于約2.95:1,小于約2.85:1,小于約2.9:1， 小于約2.8:1,小于約2.75:1，小于約2.5:1,小于約2.25:1,小于約2:1，小 于約1.95:1，小于約1.9:1,小于約1.85:1，小于約1.8:1，或小于約1.75:1。 在其它實施方案中，ARA:DHA的比例大于約0.4:1。在進(jìn)一步的其它實施方 案中，所述組合物不包含ARA。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含至少約7mg/L
23的DPA(n-6)，至少約13mg/L的DPA(n-6),至少約26mg/L的DPA(n-6)，至 少約40mg/L的DPA(n-6)，至少約53mg/L的DPA(n-6)，或至少約66mg/L 的DPA(n-6)，至少約80mg/L的DPA(n-6)，至少約100mg/L的DPA(n-6), 至少約120mg/L的DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物包 含低于約240mg/L的DPA(n-6)，低于約220mg/L的DPA(n-6)，或低于約 200mg/L的DPA(n-6)。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪 酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6 脂肪酸按重量計包含至少約2%DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述嬰兒配 方組合物中的長鏈n-6脂肪酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂 肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約5% DPA(n-6)，至 少約10% DPA(n-6),至少約15。/。 DPA(n-6)，至少約20% DPA(n-6)，至少約 25%DPA(n-6)，至少約30%DPA(n-6),至少約40%DPA(n-6)，或至少約50% DPA(n-6)。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含至少20mg/L 的DHA或至少40mg/L的DHA。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約40至約140mg/L的DHA,約20至約200mg/L的DHA。在其它實施 方案中，所述組合物包含低于約140mg/L的DHA或低于約200mg/L的DHA。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物中DHA:DPA(n-6) 的比例為約10:1至約3:1，約5:1至約2:1，約5:1至約1:1，約4:1，約3:1， 約2:1，約1:1,或約0.5:1。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L 的膽固醇至約500mg/L的膽固醇。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約0.37mg/L的膽固醇至約300mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至 約100mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至約50mg/L的膽固醇，或約 0.37mg/L的膽固醇至約10mg/L的膽固醇。在這些實施方案的某些方面中， 所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇至約3.75mg/L的膽固醇。在 一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含高于約0.5mg/L的膽固醇。在一 些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇，約0.乃mg/L 的膽固醇，約1.5mg/L的膽固醇，約2.3mg/L的膽固醇，約3mg/L的膽固醇， 或約3.75mg/L的膽固醇。在某些方面中，所述膽固醇以微生物油的形式提
24供，所述油含有長鏈CO-3脂肪酸或長鏈C0-6脂肪酸。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含量低于約
3mg/L的二十碳五烯酸(EPA)。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含量 低于約60mg/L的EPA。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含約15mg/L 至約30mg/L的EPA。在一些實施方案中，EPA:DHA的比例以高達(dá)1:1的比
例提供。
在這些實施方案的其它方面中，將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)向嬰兒 施用時提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。在一些實施方案中，將所述嬰兒配 方組合物配制成當(dāng)向嬰兒施用時提供約3mg/kg/日DPA(n-6)至約8mg/kg/日 DPA(n-6)。
在另 一個實施方案中，本發(fā)明提供嬰兒配方組合物和用于制備嬰兒配方 組合物的方法，其中基于期望的ARA血漿水平來確定所述組合物中DPA(n-6) 的量。在這個實施方案中，將所述嬰兒配方組合物配制成滿足DHA和ARA 指標(biāo)要求，并且所述組合物包含量為指標(biāo)DHA要求量的DHA，包含量為低 于指標(biāo)ARA要求量的亞指標(biāo)量(sub-target amount)的ARA，并且包含以下量 的DPA(n-6)，所述DPA(n-6)的量足以在體內(nèi)反轉(zhuǎn)化成量足以彌補ARA亞指 標(biāo)量的ARA。
在另 一個實施方案中，本發(fā)明提供嬰兒配方組合物和用于制備嬰兒配方 組合物的方法，將所述嬰兒配方組合物配制成滿足DHA和ARA指標(biāo)要求， 其中所述組合物包含量為指標(biāo)DHA要求量的DHA，包含量為低于指標(biāo)ARA 要求量的亞指標(biāo)量的ARA,并且包含量為至少閾值量(threshold amount)的 DPA(n-6),其中所述ARA響應(yīng)曲線是曲線形的，并且其中所述閾值量導(dǎo)致 一個ARA響應(yīng)，在所述ARA響應(yīng)處ARA響應(yīng)曲線的斜率從負(fù)值變?yōu)檎怠?br> 本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成 分、DHA、 ARA和DPA(n-6)，其中DHA以指標(biāo)DHA要求量存在，ARA 以低于指標(biāo)ARA要求量的亞指標(biāo)量存在，并且DPA(n-6)以如下量存在，所 述I)PA(n-6)的量足以在體內(nèi)反轉(zhuǎn)化成量足以彌補ARA亞指標(biāo)量的ARA。通 過這種方法制備的嬰兒配方組合物也包括在本發(fā)明中。
本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合微生物油 的共混物和營養(yǎng)成分，其中所述共混物選自下組包含第一種油和第二種油 的共混物，所述第一種油包含DHA和DPA(n-6),所述第二種油包含DHA;包含第一種油和第二種油的共混物，所述第一種油具有DHA和DPA(n-6)的 第一種比例，所述第二種油具有DHA和DPA(n-6)的第二種比例，其中所述 兩種比例不同，并且其中所述第一種油與所述第二種油相比含有較多的 DPA(n-6);和包含來自破嚢壺菌(thmustochytrid)微生物的第一種油和來自溝 鞭藻類(dinoflagellate)微生物的第二種油的共混物。通過這種方法制備的嬰兒 配方組合物也包括在本發(fā)明中。
在這些實施方案的某些方面中，所述ARA亞指標(biāo)量是選自下組的量 比指標(biāo)ARA要求量低約5%的量，比指標(biāo)ARA要求量低約10%的量，比指 標(biāo)ARA要求量低約15%的量，和比指標(biāo)ARA要求量低約20%的量。
在這些實施方案的某些方面中，ARA:DHA的比例小于約3:1,小于約 2.95:1，小于約2.85:1,小于約2.9:1，小于約2.8:1,小于約2.75:1，小于約 2.5:1，小于約2.25:1,小于約2:1，小于約1.95:1,小于約1.9:1，小于約1.85:1， 小于約1.8:1，或小于約1.75:1。在其它實施方案中，ARA:DHA的比例小于 約3:1，但是大于約0.4:1。在進(jìn)一步的其它實施方案中，所述組合物不包含 ARA。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物中的長鏈n^脂肪
酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6 脂肪酸按重量計包含至少約2%DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述嬰兒配 方組合物中的長鏈n-6脂肪酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂 肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約5% DPA(n-6)，至 少約10% DPA(n-6)，至少約15% DPA(n-6),至少約20% DPA(n-6),至少約 25%DPA(n-6)，至少約30% DPA(n-6)，至少約40% DPA(n-6)，或至少約50% DPA(n-6)。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含至少20mg/L 的DHA或至少40mg/L的DHA。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約40至約140mg/L的DHA,約20至約200mg/L的DHA。在其它實施 方案中，所述組合物包含低于約140mg/L的DHA或低于約200mg/L的DHA。
在這些實施方案的其它方面中，DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約3:1， 約5:1至約2:1，約5:1至約1:1，約4:1,約3:1，約2:1，約1:1，或約0.5:1。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含至少約7mg/L 的DPA(n-6)，至少約13mg/L的DPA(n-6)，至少約26mg/L的DPA(n-6)，至少約40mg/L的DPA(n-6),至少約53mg/L的DPA(n-6)，或至少約66mg/L 的DPA(n-6)，至少約80mg/L的DPA(n-6)，至少約100mg/L的DPA(n-6), 至少約120mg/L的DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物包 含低于約240mg/L的DPA(n-6),低于約220mg/L的DPA(n-6)，或低于約 200mg/L的DPA(n-6)。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L 的膽固醇至約500mg/L的膽固醇。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物 包含約0.37mg/L的膽固醇至約300mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至 約100mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至約50mg/L的膽固醇，或約 0.37mg/L的膽固醇至約10mg/L的膽固醇。在這些實施方案的某些方面中， 所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇至約3.75mg/L的膽固醇。在 一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含高于約0.5mg/L的膽固醇。在一 些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇，約0.75mg/L 的膽固醇，約1.5mg/L的膽固醇，約2.3mg/L的膽固醇，約3mg/L的膽固醇， 或約3.75mg/L的膽固醇。在某些方面中，所述膽固醇以微生物油的形式提 供，所述油含有長鏈o>3脂肪酸或長鏈co-6脂肪酸。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含量低于約 3mg/L的二十碳五烯酸(EPA)。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含量 低于約60mg/L的EPA。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含約15mg/L 至約30mg/L的EPA。在一些實施方案中，EPA:DHA的比例以高達(dá)1:1的比 例提供。
在這些實施方案的其它方面中，將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)對嬰兒 施用時提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。在一些實施方案中，將所述嬰兒配 方組合物配制成當(dāng)對嬰兒施用時提供約3mg/kg/日DPA(n-6)至約8mg/kg/日 DPA(n-6)。
在全部前述實施方案的一些方面中，所述DHA、 ARA或DPA(n-6)來自 選自下組的來源植物、油料種子(oilseed)、微生物、動物和上述來源的混 合來源。在一些方面中，所述微生物選自下組藻類、細(xì)菌、真菌和原生生 物。在一些方面中，所述孩i生物選自下組破嚢壺菌目(Thraustochytriales)、 溝鞭藻類(dinoflagellates)和毛霉目(Mucorales)。在其它方面中，所述微生物 選自下組裂殖壺菌屬(Sc/7/zoc/y，/wm)、石皮嚢壺菌屬(77zraus"toc/i!，n'ww)、 隱
27曱藻屬(07/7//2^0(^>7/"附)和灃皮孑包霉屬(^/0/^'^^〃")。
在其它方面中，所述來源選自經(jīng)遺傳修飾的植物和經(jīng)遺傳修飾的油料種
子，其中所述植物和油料種子選自下組大豆、玉米、紅花、向日葵、蕓苔、 亞麻、花生、芥菜(mustard)、油菜子(rapeseed)、鷹嘴豆(chickpea)、棉花、小
扁豆(lentil)、白三葉草(white clover)、橄欖、棕櫚、琉璃苣、月見草、亞麻 子和煙草以及它們的混合物。
在進(jìn)一步的其它方面中，所述來源選自下組經(jīng)遺傳修飾的植物、經(jīng)遺 傳修飾的油料種子和經(jīng)遺傳修飾的微生物，其中所述遺傳修飾包括聚酮合酶 (polyketide synthase)基因或其部分的導(dǎo)入。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解的那 樣，經(jīng)遺傳修飾的油料種子是經(jīng)遺傳修飾的植物中的部分。
在進(jìn)一步的方面中，所述組合物包含孩i生物油的共混物，其中所述共混 物包含包含DHA和DPA(n-6)的第 一種油，和包含DHA的第二種油。
在進(jìn)一步的方面中，所述組合物包含^:生物油的共混物，其中所述共混 物包含具有第 一種比例的DHA和DPA(n-6)的第 一種油，和具有第二種比 例的DHA和DPA(n-6)的第二種油，其中所述兩種比例不同，并且其中所述 第一種油與所述第二種油相比含有較多的DPA(n-6)。
在進(jìn)一步的方面中，所述嬰兒配方組合物包含微生物油的共混物，并且 其中所述共混物包含來自破嚢壺菌微生物的油和來自溝鞭藻類微生物的油。
在進(jìn)一步的方面中，所述組合物包含微生物油和植物油的共混物，其中 所述共混物包含來自經(jīng)遺傳修飾以產(chǎn)生DHA和DPA(n-6)的植物的油，并且 其中所述植物油包含DHA和DPA(n-6)，并且其中所述微生物油包含ARA。 在一些方面中，所述遺傳修飾包括PUFA聚酮合酶基因或其部分的導(dǎo)入。
在進(jìn)一步的方面中，所述組合物包含來自經(jīng)遺傳修飾以產(chǎn)生DHA和 DPA(n-6)的植物的植物油，并且其中所述油包含比例為約0.5:1至約10:1的 I)HA和DPA(n-6)。在進(jìn)一步的方面中，所述組合物包含來自經(jīng)遺傳修飾以 產(chǎn)生DPA(n-6)、 DHA或ARA之一的植物的植物油。在這個方面的優(yōu)選實施 方案中，所述微生物不產(chǎn)生另外兩種PUFA中的一種或另外兩種都不產(chǎn)生。 在一些方面中，所述遺傳修飾包括PUFA聚酮合酶基因或其部分的導(dǎo)入。
在進(jìn)一步的方面中，所述組合物包含來自經(jīng)遺傳修飾的微生物的微生物 油，并且其中所述油包含比例為約0.5:1至約10:1的DHA和DPA(n-6)。在 進(jìn)一步的方面中，所述組合物包含來自經(jīng)遺傳^奮飾以產(chǎn)生DPA(n-6)、 DHA或ARA之一的微生物的微生物油。在這個方面的優(yōu)選實施方案中，所述微
生物不產(chǎn)生另外兩種PUFA中的一種或另外兩種都不產(chǎn)生。在一些方面中， 所述遺傳修飾包括PUFA聚酮合酶基因或其部分的導(dǎo)入。
本發(fā)明進(jìn)一步提供用于喂養(yǎng)嬰兒的方法，所述方法包括向嬰兒施用本發(fā) 明的嬰兒營養(yǎng)組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供喂養(yǎng)嬰兒的方法，所述方法包括向嬰兒施用含有營養(yǎng) 成分、DHA和DPA(n-6)的嬰兒配方組合物，其中以至少約2mg DPA(n-6)/kg/ 日的劑量喂食所述嬰兒。
如本文中所使用的那樣，量/kg/日的意思是就每天而言所述量乘以以千 克為單位的嬰兒重量。如本文中所使用的那樣，量/L的意思是意在供嬰兒食 用的一升嬰兒配方組合物中的量，即如果將所述嬰兒配方組合物制成干粉或 濃縮液，那么當(dāng)將所述干粉或濃縮液與足夠液體混合以獲得意在供嬰兒食用 的嬰兒配方組合物時測量所述"量/L"。當(dāng)在本文中使用所述脂肪酸和其它成 分的來源、量或范圍時，意在包括全部組合和亞組合(subcombination)和其中 的具體實施方案。


圖1以占總脂肪酸重量百分比的形式顯示血漿磷脂(PL)DHA水平因 DIA劑量和DHA來源而產(chǎn)生的相對于基線的4周變化，所述DHA來源是 用于實施例1的成人DHA生物利用度研究的DHA來源，其中使用富含DHA 的裂殖壺菌屬市售DHATM-S油(Sc/7/z0c/y;Www市售DHA -S Oil)與純DHA 油(DHASC.O⑧)進(jìn)行比較(LS平均值土S.E., n=12個個體/數(shù)據(jù)點)。
圖2以占總脂肪酸重量百分比的形式顯示血漿磷脂(PL)DPA(n-6)水平因 DHA劑量和DHA來源而產(chǎn)生的相對于基線的4周變化，所述DHA來源是 用于實施例1的成人DHA生物利用度研究的DHA來源，其中使用富含DHA 的裂殖壺菌屬市售DHATM-S油與純DHA油(DHASCO⑧)進(jìn)行比較(LS平均 值士S.E.， n=12個個體/數(shù)據(jù)點)。
圖3以占總脂肪酸重量百分比的形式顯示所測血漿磷脂(PL)花生四烯酸 水平因劑量和DHA來源而產(chǎn)生的相對于基線水平的4周變化，所述DHA 來源是用于實施例1的DHA生物利用度研究的DHA來源，其中使用富含 DHA的裂殖壺菌屬市售DHA -S油與純DHA油(DHASCO⑧)進(jìn)行比較(LS平均值士S.E.， n=12個個體/數(shù)據(jù)點)。
圖4以占總脂肪酸重量百分比的形式顯示在實施例2的兒童DHA生物 利用度研究中用富含DHA的裂殖壺菌屬市售DHATM-S油以200和400mg DHA/日的劑量補充4周，在此之前和在此之后的血漿磷脂脂肪酸水平 (n=10-12個個體/組)。
圖5A-C顯示在用含有市售DHATM-S油或DHASCO⑧油的飲食喂食大 鼠28天之后血漿中的DHA(A)、 DPA(n-6)(B)和ARA(C)水平。
具體實施例方式
本發(fā)明涉及制備補充有LC-PUPA的嬰兒配方產(chǎn)品和嬰兒配方組合物的 方法。美國法律將嬰兒配方定義為這樣的食物，所述食物由于它對人乳的模 擬或由于它作為人乳完全或部分替代品的適合性而聲稱用于或表現(xiàn)為用于 單獨作為嬰兒食物的特殊飲食用途。
在一些實施方案中，本發(fā)明的嬰兒配方可以具有低于目前建議水平或指 標(biāo)的ARA水平，但是卻顯著減少或防止當(dāng)所述嬰兒配方含有①-3脂肪酸如 DHA時將會產(chǎn)生的ARA血漿水平的相關(guān)下降。減少或防止ARA血漿水平 的下降可維持正常嬰兒生長、重量、免疫系統(tǒng)發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育。
如上所述，已經(jīng)提出按照如下量將LC-PUFA包括在嬰兒配方中，所述 量符合或近似模擬(closely mimic)人類母乳中存在的LC-PUFA譜。本發(fā)明的 配方基于這樣一種認(rèn)識，即嬰兒配方無需為了提供重要的營養(yǎng)益處而符合或 近似模擬人類母乳中存在的LC-PUFA譜。具體而言，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)向 補充有DHA的嬰兒配方添加DPA(n-6)將有助于維持嬰兒體內(nèi)的血漿ARA 水平。因此，向嬰兒配方添加的ARA的量可以降低至亞指標(biāo)量，從而抵消 從DPA(n-6)代謝而來的ARA。如本文中所使用的那樣，所提及的亞指標(biāo)量 的ARA指嬰兒配方中低于指標(biāo)ARA要求量的ARA的量。指標(biāo)ARA要求 量的實例是人類母乳中ARA的量。已有報導(dǎo)稱這個量為人類母乳中總脂肪 酸的0.37-0.49% (Yuhas等L/p油，2006 41(9):851-58)。因此，如本文中所使 用的那樣，就嬰兒配方組合物而言，指標(biāo)ARA要求量的一個實例將是在所 述嬰兒配方組合物中占總脂肪酸的0.37-0.49%。指標(biāo)ARA要求量的另一個 實例是向嬰兒配方組合物添加一定量的ARA從而提供約2:1至約 1:l(ARA:DHA)的大概比例。本發(fā)明人的認(rèn)識是以下發(fā)現(xiàn)的結(jié)果DPA(n-6)的補充導(dǎo)致曲線形的ARA響應(yīng)，其中在低劑量時ARA減少，但是在較高劑量時ARA水平幾乎得以保持。因此，本發(fā)明提供用于嬰兒配方的方法和組合物，其中將嬰兒配方中的至少一些ARA用DPA(n-6)替代或補充。不受理論的限制，認(rèn)為DPA(n-6)和ARA 二者作為影響生長的類二十烷酸的獨立來源均是重要的，并且它們的重要性還在于它們能夠與LC co-3脂肪酸如DHA竟?fàn)幉⑷爰?xì)胞膜。ARA可以延長成DPA(n-6),并且DPA(n-6)可以反轉(zhuǎn)化成ARA。不受理論的限制，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在閾值劑量時DPA(n-6)在體內(nèi)主動反轉(zhuǎn)化成ARA,這似乎是一種由底物驅(qū)動的現(xiàn)象。例如，圖3顯示了血漿ARA水平的曲線形響應(yīng)，其中隨著DPA(n-6)(市售DHA-S油的一種成分)的量的增加，ARA響應(yīng)的斜率從負(fù)值變?yōu)檎?。因此，圖3顯示了 DPA(n-6)的閾值劑量。此外，本發(fā)明包括補充有DHA的具有常規(guī)量ARA補充的嬰兒配方，所述嬰兒配方進(jìn)一步包括DPA(n-6),由此得到以下嬰兒配方，由于所述配方中ARA的組合以及DPA(n-6)向ARA的反轉(zhuǎn)化，所述嬰兒配方能夠?qū)崿F(xiàn)較高的ARA(增加的)血漿水平。
由于本發(fā)明的嬰兒配方包含多種成分，包括LC-PUFA,所以應(yīng)該認(rèn)識到所述嬰兒配方的不同實施方案可以通過說明一種或多種成分或這些成分的比例來描述。例如，所述組合物中ARA的量可以表示為ARA:DHA的比例。所述組合物中DPA(n-6)的量可以表示為與DHA的比例，或者表示為所述配方中含有的DPA(n-6)的濃度，例如在有意供嬰兒食用的一升所述配方中含有的DPA(n-6)的濃度。也可以基于所期望的ARA血漿水平，使用所述組合物中DPA(n-6)的量來描述所述嬰兒配方，即DPA(n-6)的量足以在體內(nèi)反轉(zhuǎn)化成ARA，并且足以彌補(補償)所述配方中以亞指標(biāo)量存在的ARA量。
因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供嬰兒配方組合物，其中ARA:DHA的比例低于約3:1。在其它實施方案中，ARA:DHA的比例低于約2.95:1，低于約2.85:1，低于約2.9:1，低于約2.8:1，低于約2.75:1,低于約2.5:1，低于約2.25:1，低于約2:1，低于約1.95:1,低于約1.9:1，低于約1.85:1，低于約1.8:1 ，或低于約1.75:1。在其它實施方案中,ARA:DHA的比例高于約0.4:1 。在進(jìn)一步的其它實施方案中，所述組合物不包含ARA。
在一些實施方案中，DHA:DPA(n-6)的比例為約10:1至約0.5:1，約5:1至約0.5:1,約5:1至約3:1，約5:1至約2:1,約5:1至約1:1，約4:1,約3:1,約2:1，約1:1，或約0.5:1。
在一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約2。/。DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約5% DPA(n-6)，至少約10%DPA(n-6)，至少約15°/。 DPA(n-6),至少約20% DPA(n-6)，或至少約25%DPA(n-6)，至少約30% DPA(n-6),至少約40% DPA(n-6),或至少約50%DPA(n-6)。
在一些實施方案中，所述組合物包含至少約7mg/L的DPA(n-6),至少約13mg/L的DPA(n-6)，至少約26mg/L的DPA(n-6)，至少約40mg/L的DPA(n-6)，至少約53mg/L的DPA(n-6)，或至少約66mg/L的DPA(n-6),至少約80mg/L的DPA(n-6)，至少約100mg/L的DPA(n-6),至少約120mg/L的DPA(n-6)。在其它實施方案中，所述組合物包含低于約240mg/L的DPA(n-6),低于約220mg/L的DPA(n-6),或低于約200mg/L的DPA(n-6)。
在一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含至少20mg/L的DHA或至少40mg/L的DHA。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約40至約140mg/L的DHA，約20至約200mg/L的DHA。在其它實施方案中，所述組合物包含低于約140mg/L的DHA或低于約200mg/L的DHA。
在這些實施方案的某些方面中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇至約500mg/L的膽固醇。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇至約300mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至約100mg/L的膽固醇，約0.37mg/L的膽固醇至約50mg/L的膽固醇，或約0.37mg/L的膽固醇至約10mg/L的膽固醇。在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇至約3.75mg/L的膽固醇。在一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含高于約0.5mg/L的膽固醇。在一些實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含約0.37mg/L的膽固醇，約0.75mg/L的膽固醇，約1.5mg/L的膽固醇，約2,3mg/L的膽固醇，約3mg/L的膽固醇，或約3.75mg/L的膽固醇。在某些方面中，所述膽固醇以微生物油的形式提供，所述油包含長鏈co-3脂肪酸或長鏈co-6脂肪酸。
在其它實施方案中，所述嬰兒配方組合物包含量低于約3mg/L的二十碳
32五烯酸(EPA)。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含量低于約60mg/L的EPA。在其它方面中，所述嬰兒配方組合物包含約15mg/L至約30mg/L的EPA。在一些實施方案中，EPA:DHA的比例以高達(dá)1:1的比例提供。
在其它實施方案中，將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)向嬰兒施用時提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。在一些實施方案中，將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)向嬰兒施用時提供約3mg/kg/日DPA(n-6)至約8mg/kg/日DPA(n-6)。
在一些實施方案中，ARA亞指標(biāo)量是選自下組的量比指標(biāo)ARA要求量低約5%的量，比指標(biāo)ARA要求量低約10%的量，比指標(biāo)ARA要求量低約15%的量，和比指標(biāo)ARA要求量低約20%的量。
在一個實施方案中，本發(fā)明提供嬰兒配方組合物，其中所述組合物包含長鏈n-3脂肪酸和長鏈n-6脂肪酸，并且其中所述長鏈n-3脂肪酸包含二十二碳六烯酸(DHA);所述長鏈n-6脂肪酸包含二十二碳五烯酸(DPA(n-6))并且任選地包含花生四烯酸(ARA)。在這個實施方案中，ARA:DHA的比例小于約3:1，并且DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約0.5:1。
本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成分、長鏈n-3脂肪酸和長鏈n-6脂肪酸；其中所述長鏈n-3脂肪酸包含DHA;其中所述長鏈n-6脂肪酸包含ARA和DPA(n-6);其中ARA:DHA的比例小于約3:1,并且其中DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約0.5:1。通過這種方法
在另一個實施方案中，所述嬰兒配方包含長鏈n-6脂肪酸和DHA，其中所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約2%DPA(n-6)， DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約0.5:1，并且其中將所述組合物配制成當(dāng)向嬰兒施用時提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。
本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成分、DHA和長鏈n-6脂肪酸，其中所述嬰兒配方組合物中的長鏈n-6脂肪酸在源油中提供，其中所述源油包含長鏈n-6脂肪酸，所述源油中的長鏈n-6脂肪酸按重量計包含至少約2% DPA(n-6)，其中DHA:DPA(n-6)的比例為約5:1至約0.5:1。將所述方法設(shè)計為提供以下配方，所述配方當(dāng)向嬰兒施用時提供至少約2mg/kg/日DPA(n-6)。通過這種方法制備的嬰兒配方組合物也包括在本發(fā)明中。在另 一個實施方案中，將所述嬰兒配方組合物配制成當(dāng)可供食用時包含
至少約7mg/L的DPA(n-6),其中所述組合物進(jìn)一步包含長鏈n-3脂肪酸；其中所述長鏈n-3脂肪酸包含DHA;其中所述組合物進(jìn)一步任選地包含花生四烯酸(ARA);并且其中ARA:DHA的比例小于約3:1 。
本發(fā)明還提供制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成分、DPA(n-6)、 DHA以及任選的ARA;其中將所述組合物配制成當(dāng)可供食用時包含至少約7mg/L的DPA(n-6),并且其中ARA:DHA的比例小于約3:1。通過這種方法制備的嬰兒配方組合物也包括在本發(fā)明中。
在另一個實施方案中，本發(fā)明提供嬰兒配方組合物，將所述嬰兒配方組合物配制成滿足DHA和ARA指標(biāo)要求，并且所述組合物包含量為指標(biāo)DHA要求量的DHA，包含量為低于指標(biāo)ARA要求量的亞指標(biāo)量(sub-target amount)的ARA，并且包含以下量的DPA(n-6),所述DPA(n-6)的量足以在體內(nèi)反轉(zhuǎn)化成量足以彌補ARA亞指標(biāo)量的ARA。應(yīng)該注意到的是，在本發(fā)明中認(rèn)為嬰兒沒有生理缺陷(例如嬰兒沒有ARA缺陷)。更確切地，用于本文中的術(shù)語"亞指標(biāo)"指低于建議量或指標(biāo)量的量。例如，廣泛建議的ARA量或ARA的指標(biāo)量是足以提供大小為2:1的ARA:DHA比例從而達(dá)到ARA和DHA的適當(dāng)血漿水平的量。
制備嬰兒配方組合物的方法，所述方法包括組合營養(yǎng)成分、DHA、 ARA和DPA(n-6)，其中DHA以指標(biāo)DHA要求量存在，ARA以低于指標(biāo)ARA要求量的亞指標(biāo)量存在，并且DPA(n-6)以如下量存在，所述DPA(n-6)的量足以在體內(nèi)反轉(zhuǎn)化成量足以彌補ARA亞指標(biāo)量的ARA。通過這種方法制備的嬰兒配方組合物也包括在本發(fā)明中。
本文涉及的ARA、 DHA和DPA(n-6)以及其它PUFA例如EPA可以呈天然脂質(zhì)中存在的任何常規(guī)形式，包括但不限于三酰甘油、二酰甘油、單酰甘油、磷脂、游離脂肪酸、酯化脂肪酸、或這些脂肪酸的天然或合成的衍生物形式(例如脂肪酸的鈣鹽、乙酯等)。如本發(fā)明中所^f吏用的那樣，所涉及的包含PUFA的油可以指僅包含一種PUFA(如DHA)的油，或指包含兩種或更多種PUFA(如DHA和EPA、或DHA和DPA(n-6》的混合物的油。
在本發(fā)明的組合物和方法中，包含至少一種PUFA的油的優(yōu)選來源包括微生物來源。微生物來源和用于培養(yǎng)包含營養(yǎng)物和/或PUFA的微生物的方法是本領(lǐng)域已知的(/"^Wha/ A/,'craZ>/o/ogy aw/S/ofec/wo/o^, 2nd edition, 1999,American Society for Microbiology)。優(yōu)選地，將所述樣i生物培養(yǎng)在發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)基中。本發(fā)明的方法和組合物可以應(yīng)用于產(chǎn)生任何種類營養(yǎng)物或期望成分的任何工業(yè)微生物，例如藻類、原生生物、細(xì)菌和真菌(包括酵母)。微生物來源可以包括微生物諸如藻類、細(xì)菌、真菌和/或原生生物。優(yōu)選的生物包括選自下組的那些生物金藻(golden algae)(例如萆鞭生物界(Stramenopiles)的孩i生物)、鄉(xiāng)錄藻(green algae)、石圭藻(diatoms)、溝賓更藻類(例如甲藻目(order Dinophyceae)的微生物，包括隱曱藻屬(CVj^/2ec0W"/Mw)的成員，例如寇氏隱曱藻(0^^/zecc^m'wm co/zm'z'))、酵母、和毛霉屬(Mwcc^)和尋皮孢霉屬(MoWwe〃a)的真菌(包括但不限于高山被孢霉(^0"&^/& a/p/"e)和施穆克被孑包霉(M9rftke〃" sect, sc/wmcfen,》。所述萆鞭生物界(Stramenopiles)微生物的成員包括微藻(microalgae)和藻樣(algae-like)微生物，包括下組的微生物Hamatores、源滴蟲目(Proteromonads) 、 Opalines、 Develpayella、 Diplophrys、Labrinthulids、 破嚢壺菌(Thraustochytrids)、 Biosecids、 卵菌纟岡(Oomycetes)、絲孑瓜菌纟岡(Hypochytridiomycetes)、 Commation、 Reticulosphaera、 Pelagomonas、Pelagococcus、 Ollicola、 Aureococcus、 Parmales、 娃藻(Diatoms)、 黃藻門(Xanthophytes)、 Phaeophytes(凈曷'藻)、黃纟錄-藻(Eustigmatophytes)、 Raphidophytes、Synurids、 Axodines(包括Rhizochromulinaales、 Pedinellales、 Dictyochales)、Chrysomeridales 、 Sarcinochrysidales 、 水樹藻目(Hydrurales)、 蟄居金藻目(Hibberdiaes)和色金藻目(Chromulinales)。所述破嚢壺菌包括裂殖壺菌屬(iScyfeoc/i[vfr/,)(種包括 aggrega化m 、 //m腦cewm 、 m朋grove/、 mz'"z^w 、ocZ'os7 (9rMW),破嚢壺菌屬(種包括arM(i/認(rèn)"to/e、 awreM附、6e/7f/2/c'。/a、g/o6o5wm、、 wo /vww 、 mM/drwc^mewfa/e 、/ ac/zj^/erww/77 、/ n9/i/^rw777 、 、 it廠/"/ww)，
f//A;e z-fl屬*(種包4舌amoe6o/^ea、 ^ergwe/e"s/51、 w/"wto、 pro/Mwc/a、 na(^(3fe、
屬(牙中包4舌/7fl//o//cfa、 A:erg^e/era&、 pra/w"(ia、 stocc/ /wo/)' Japo"oc/2j^n'i/w屬(種包4舌mar/wwm)，爿/f/20n7/a屬(種包4舌crawc/z//)， 和￡7/w<3屬(種包才舌mar/5"/60、 5&or^ca)。由于就t/汰e"/"是否為不同于石皮嚢壺菌屬的單獨屬而言在專家中存在不同的意見，出于本申請的目的，破嚢壺菌屬將包括t/汰em'a屬。Labrinthulids 包括La6戶V 細(xì)/a屬(種包括a/gen'e肌.s、 coewo，fe 、c/zc/〃cw//、 /額c'/饑yWs 、 macracW.s a^/"w"'ca、附"cra，似m"craqyWs 、 "7"n7 "、w/鼎/a、 rosx'o,m7,s 、 wz汰awovz7、 v/te〃/wa、 v"e〃/憩戸"》ca、 v"e〃z7 a Wte〃/ a、
35，Z^6_yW"^7ow_yxa屬(種包4舌, La/^n'"f/zM/o/(ies1屬(種包4舌 /7(3//W必、；wA:e似^)， s屬(種包括a/r/ze".), 戶戸/zosoms屬*(種包
括6bra卻/op/z，屬*(種包括We/twea), C77/am>><icw7>aa屬*(種包 括/"Z^n>7//zM/o/6fes、柳cwtowa)。 (*=對于這些屬的確切分類學(xué)定位目前沒有共 識)。；^ 、、,、。、 ，、
形式的PUFA,但是出于簡潔、方便和示例的原因，本發(fā)明的詳述部分將討 論用于培養(yǎng)能夠產(chǎn)生包含co-3和/或co-6多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)的微生物(尤 其是能夠產(chǎn)生DHA(或緊密關(guān)聯(lián)的化合物如DPA、 EPA或ARA)的微生物) 的方法。額外的優(yōu)選微生物是藻類，例如破嚢壺菌目(Thraustochytriales)的破 嚢壺菌，包括破嚢壺菌屬(包括C/汰ew'a屬)，和裂殖壺菌屬，還包括在共同 指定的授予Barclay的美國專利5,340,594和5,340,742中公開的破嚢壺菌目， 在此將所述專利完整引入作為參考。更優(yōu)選地，所述微生物選自下組具有 ATCC編號20888、 ATCC編號20889、 ATCC編號20890、 ATCC編號20891 和ATCC編號20892鑒別特征的微生物。還優(yōu)選的是腐爛被孢霉(MoW,'e"〃a "'/7mt,der/')菌抹(例如包括具有ATCC 74371鑒別特征的微生物)和高山被孢 |(M;r"ere//a a/p/"e)菌株(例如包括具有ATCC 4M30鑒別特征的微生物)。 還優(yōu)選的是寇氏隱曱藻菌^^朱，包括具有ATCC編號30021、 30334-30348、 30541-30543、 30555-30557、 30571、 30572、 30772-30775、 30812、 40750、 50050-50060和50297-50300鑒別特征的樣i生物。還優(yōu)選的是源自任何前述 菌才朱的突變菌4朱以及它們的混合菌4朱。含油樣i生物(oleaginous microorganism) 也是優(yōu)選的。如本文中所使用的那樣，將"含油微生物"定義為以下微生物， 所述微生物所能夠積累的脂質(zhì)形式高于它們細(xì)胞重量的20%。經(jīng)遺傳修飾的 產(chǎn)生PUFA的微生物也適用于本發(fā)明。這些微生物可以包括經(jīng)遺傳修飾的天 然產(chǎn)生PUFA的微生物，以及不天然產(chǎn)生PUFA但是經(jīng)遺傳修飾后產(chǎn)生PUFA 的微生物。
合適的生物可以得自多種可用的來源，包括從自然環(huán)境收集。例如，美 國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)當(dāng)前列出了多種公
眾可獲得的上述微生物的菌株。本文使用的任何生物或生物的任何具體類型 包括野生菌株、突變體或重組型。培養(yǎng)或生長這些生物的生長條件是本領(lǐng)域5,130,242、美國專利No. 5，407，957、美國專利No. 5,397,591 、美國專利No. 5,492,938和美國專利No. 5,711,983中，在此將所述專利完整引入作為參考。
在本發(fā)明的組合物和方法中，包含至少一種PUFA的油的另 一個優(yōu)選來 源包括植物來源，例如油料種子植物。由于植物不天然產(chǎn)生碳鏈為20或更 長的PUFA,所以產(chǎn)生上述PUFA的植物是經(jīng)遺傳工程化以對產(chǎn)生上述PUFA 的基因進(jìn)行表達(dá)的那些植物。如2006年6月12日提交的題為"PUFA polyketide synthase systems and uses thereof(PUFA聚酮合酶系統(tǒng)及其用途)，，的 共同未決的美國專利申請序列號11/452,096中所述，在此將所述申請完整引 入作為參考，PUFAPKS系統(tǒng)(PUFA聚酮合酶系統(tǒng))提供了得到具有獨特脂肪 酸產(chǎn)生能力的植物的機會，所述植物例如為經(jīng)遺傳工程化以在同一植物中產(chǎn) 生一種或多種PUFA(包括DHA和DPA(n-6))的植物。還公開了如何得到不同 比例和形式的多種"設(shè)計者油(designer oil)"中的任何一種。
在一些實施方案中，包含至少一種PUFA的油是源自油料種子植物的植 物種子油，所述油料種子植物已經(jīng)被遺傳修飾以產(chǎn)生長鏈多不飽和脂肪酸。 這些基因可以包括對經(jīng)典脂肪酸合酶途徑中涉及的蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的基因， 或?qū)UFA聚酮合酶(PKS)途徑中涉及的蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的基因。經(jīng)典脂肪 酸合酶途徑中涉及的基因和蛋白質(zhì)，和用這些基因進(jìn)行轉(zhuǎn)化的經(jīng)遺傳修飾的 生物如才直物，在以下文獻(xiàn)中描述例如Napier和Sayanova,尸racee(i/wgs o尸f/ze A^n—〃朋 So".外(2005), 64:387-393 ; Robert 等 F廳"o憩/ 尸/挺 /i/o/ogy(2005)32:473-479;或美國專利申請
發(fā)明者威廉·巴克萊, 瑪麗·范埃爾斯維克, 琳達(dá)·阿特伯恩, 薩繆爾·G·澤勒, 詹姆斯·弗萊特 申請人:馬泰克生物科學(xué)公司