專利名稱：：水產(chǎn)品中致病菌多重pcr快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法水產(chǎn)品中致病菌多重PCR快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種微生物檢測(cè)裝置及檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：我國是一個(gè)水產(chǎn)大國，隨著社會(huì)發(fā)展和人們對(duì)健康的關(guān)注以及國際貿(mào)易需要，水產(chǎn)品安全問題倍受關(guān)注，水產(chǎn)品安全問題直接影響漁業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展乃至水產(chǎn)品國際貿(mào)易。由于水產(chǎn)品營養(yǎng)豐富，因而極易受到各種微生物的污染，沙門氏菌(6^〗/z;o77eWaspp.)、副溶血性弧菌(Kz'/ttj'opara/ae/Bo^r"c〃s")和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌a^^eWsM/70CJ^O^77eS)是常見的引起水產(chǎn)品污染的重要致病菌，在我國現(xiàn)行國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中，這3種菌被列為無公害水產(chǎn)品不得檢出的致病菌。目前，包括我國在內(nèi)的許多國家對(duì)這些致病菌的檢驗(yàn)大多仍沿用傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)及生化鑒定方法，其檢測(cè)周期長、操作繁瑣、靈敏度低，而且每次只能檢測(cè)出一種致病菌，面對(duì)日益增加的多重混合污染，目前的實(shí)驗(yàn)診斷方法顯得嚴(yán)重滯后。因此，國內(nèi)外學(xué)者都致力于建立分子生物學(xué)的鑒定方法。由于多重PCR技術(shù)可以在一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)檢測(cè)多種病原微生物，具有高效、低成本、速度快等優(yōu)點(diǎn)，一經(jīng)提出，即得到眾多研究者的青睞，目前己在病原微生物的檢測(cè)中得到了廣泛應(yīng)用。選擇特異的靶基因和設(shè)計(jì)出合理的弓I物對(duì)PCR檢測(cè)致病菌至關(guān)重要。沙門氏菌的侵襲蛋白決定細(xì)菌進(jìn)入宿主上皮細(xì)胞的能力，與沙門氏菌的致病性密切相關(guān)，它是由invA、invB、invC、invD和invE等一組基因編碼，其中invA為沙門氏菌的主要毒力因子(ZhaoS，QaiyumiS，F(xiàn)riedmanS，etal.CharacterizationofSalmonellaentericaSerotypenewportisolatedfromhumansandfoodanimals.JClinMicrobiol,2003，41(12):5366-5371.)。研究證明沙門氏菌的invA基因序列比較保守，可以作為PCR檢測(cè)沙門氏菌的靶基因(CohenND.NeibergsHL.MegruderED，etal.Genus—specificdetectionofsalmonellaeusingthepolymerasechainreaction.JVetDiagnInvest,1993，5(3):368-371.)。副溶血性弧菌的PCR檢測(cè)方法中，多以其毒力基因tdh和trh為靶基因，但后來研究發(fā)現(xiàn)某些不含這兩種毒力基因的副溶血性弧菌菌株也具有致病性(OsawaR，ArakawaE.GenotypingofpandemicVibrioparahaemolyticus03:K6stillopentoq訓(xùn)tionjClinMicrobiol,2002，40(7):2708-2709.)。本文選取toxR作為檢測(cè)副溶血性弧菌的靶基因，toxR基因在弧菌屬中具有高度的保守性，實(shí)驗(yàn)證明副溶血性弧菌的toxR基因與霍亂弧菌的toxR基因的同源性是52。/。，要比它們的rRNA基因的同源性92。/。低得多(Kita-TsukamotoK，0yaizuH，NanbaK，etal.Phylogeneticrelationshipsofmarinebacteria,mainlymembersofthefamilyVibrionaceae，determinedonthebasisof16SrRNAsequences.IntJSystBacteriol，1993，43(1):8_19.及LinZ，KumagaiK，BabaK，etal.VibrioparahaemolyticushasahomologoftheVibriocholeraetoxRSoperonthatmediatesenvironmentallyinducedregulationofthethermostabledirecthemolysingene.JBacteriol,1993，175(12):3844-3855.)。單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的靶基因則采用編碼主要胞外蛋白p60的i即基因，它是單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌重要毒力因子(BubertA，HeinI，RauchM，etal.DetectionanddifferentiationofListeriaspp.byasinglereactionbasedonmultiplexPCR.ApplEnvironMicrobiol,1999,65(10):4688-4692.)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種能同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的多重PCR檢測(cè)試劑盒以及檢測(cè)方法。本發(fā)明所述的檢測(cè)試劑盒，包括10XPCRbuffer,1.03.0ramol/LMgCh，240Wnol/LdNTPeach,60200nmol/L沙門氏菌引物，60200nmol/L副溶血性弧菌引物，200nmol/L單核增生李斯特氏菌引物，1.33.0UT叫酶。其中，三種菌的引物序列及PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小分別如表1所示。表1:二種齒的引物序列及PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，包括提取樣品DNA，多重PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，分析結(jié)果。較優(yōu)選地，在提取DNA之前，對(duì)樣品進(jìn)行沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的富集培養(yǎng)，培養(yǎng)基為含2%質(zhì)量(腦心浸液肉湯培養(yǎng)基干粉質(zhì)量)含量的NaCl的腦心浸液肉湯，培養(yǎng)溫度為37。C，培養(yǎng)時(shí)間為IO小時(shí)。其中，樣品DNA提取包括1)1.5mL樣品，10000r/min離心10min，去上清液；2)加567叱TE懸浮沉淀，加50g/L溶菌酶1(￥L37。C保溫1h，再加30PL100g/LSDS，3叱20mg/mL蛋白酶K，混勻，37。C保溫lh;3)加100叱5mol/LNaCl，混勻；4)力n80MLCTAB/NaCl溶液，混勻，65。C保溫20min;5)用等體積酚氯仿異戊醇(25:24:1，v:v:v)抽提，10000r/min離心10min,將上層清液移至干凈離心管；6)用等體積氯仿異戊醇(24:1，v:v)抽提，取上清液移至干凈離心管中；7)加等體積異丙醇，顛倒混合，室溫下靜置30min，沉淀DNA;8)用玻棒撈出DNA沉淀，70%乙醇漂洗后，吸干，溶解于IOO叱TE，-2(TC保存。多重PCR擴(kuò)增包括1)多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系10XPCRbuffer2.5PL，2腿ol/LMgCl2，240Mmol/LdNTPeach，引物濃度分別為單核增生李斯特氏菌引物200nmol/L，沙門氏菌、副溶血性弧菌引物各60200nmol/L，3UTaq酶，DNA模板2l^L，反應(yīng)體系25叱。2)擴(kuò)增反應(yīng)條件94。C預(yù)變性5min;94。C變性lmin、58。C退火lmin、72"C延伸2min，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72。C延伸10min;于4'C下保存。擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)包括將擴(kuò)增產(chǎn)物于15g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)及UVI凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。本發(fā)明有較好的特異性，簡便、快速、靈敏地實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品中沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的同時(shí)檢測(cè)，人工污染水產(chǎn)品檢測(cè)限為10cfu/mL;為無公害水產(chǎn)品食源性致病菌的快速檢測(cè)提供了理想手段，有良好的應(yīng)用前景。此外，本發(fā)明對(duì)食品樣品中的目標(biāo)菌進(jìn)行增菌培養(yǎng)，有效提高了樣品的檢測(cè)敏感性。選用能同時(shí)富集多種細(xì)菌的培養(yǎng)基，從而節(jié)約成本，提高檢測(cè)效率。圖1為引物靈敏度檢測(cè)的電泳圖，其中M:100bp分子量標(biāo)準(zhǔn)，1:稀釋度為10—32:稀釋度為10—43:稀釋度為10—54:稀釋度為10—65:稀釋度為10—76:稀釋度為10—87:稀釋度為10—98:空白對(duì)照具體實(shí)施方式實(shí)施例一引物特異性檢測(cè)根據(jù)所設(shè)計(jì)的3對(duì)特異性PCR引物對(duì)40株常見致病菌進(jìn)行PCR檢測(cè)，利用正交反應(yīng)多次試驗(yàn)，陰性、陽性結(jié)果見表2。結(jié)果顯示invA引物檢測(cè)的10株沙門氏菌全部擴(kuò)增出495bp的目的片段，其它30株非沙門氏菌菌株無任何擴(kuò)增條帶;toxR引物檢測(cè)的4株副溶血性弧菌均擴(kuò)增出368bp的目的片段，霍亂弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌和其它非弧菌屬菌株均無任何擴(kuò)增條帶；iap引物檢測(cè)的5株單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌均擴(kuò)增出660bp的目的片段，威爾氏李斯特氏菌、英諾克李斯特氏菌擴(kuò)增出小于660bp的非目的片段，格式李斯特氏菌和其它非李斯特氏菌屬的菌株均無任何擴(kuò)增條帶。結(jié)果表明，3對(duì)引物僅對(duì)它們的目標(biāo)生物特異。表2引物特異性電泳結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注NCTC(UnitedKingdomNationalCollectionofTypeCultures,英國國立標(biāo)準(zhǔn)菌種收藏所)，CMCC(NationalCenterforMedicalCultureofCollections，中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心)，ATCC(AmericanTypeCultureCollection，美國標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心)，GDCIQ(GuangdongEntry-ExitInspectionandQuarantineBureauJ東出入境檢驗(yàn)檢疫局)，GIM(GuangdongInstituteofMicrobiology/—東省微生物研究所)，VPL4-卯(上海疾病控制中心來源菌種)實(shí)施例二引物靈敏度檢測(cè)將標(biāo)準(zhǔn)菌株51.加/j'縦j'鵬CMCC50115、K/araAa師〗W，VPL4-90、衡/ocj^^e77esCMCC54002的培養(yǎng)液(平板計(jì)數(shù)結(jié)果分別為2.5X109cfu/mL、1.5X109cfu/mL、4.7X109cfu/mL)等量混合后，做10倍梯度稀釋，然后將各個(gè)梯度稀釋液分別接種到含10g碎魚肉的90mL腦心浸液肉湯培養(yǎng)液(含腦心浸液肉湯培養(yǎng)基干粉質(zhì)量2X的NaCl)中，培養(yǎng)10h后，提取DNA進(jìn)行多重PCR檢測(cè)。結(jié)果如圖l所示。將可檢測(cè)到的最高稀釋濃度作為多重PCR在樣品中的最高檢測(cè)靈敏度。則結(jié)果表明可檢測(cè)的最高稀釋度為10—9，即可檢測(cè)到的三種菌的濃度分別為2.5cfu/mL沙門氏菌、1.5cfu/mL副溶血性弧菌、4.7cfu/mL單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌。實(shí)施例三、培養(yǎng)基的增菌比較分別使用普通營養(yǎng)肉湯液培養(yǎng)液、腦心浸液肉湯培養(yǎng)液和本發(fā)明所述的含2%(腦心浸液肉湯培養(yǎng)基干粉質(zhì)量含量)NaCl腦心浸液肉湯培養(yǎng)液，同時(shí)富集培養(yǎng)沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌，比較三種培養(yǎng)液的增菌效果。將沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌加入到5mL培養(yǎng)液中，37'C培養(yǎng)18h后，平板計(jì)數(shù)，其結(jié)果如表3所示。結(jié)果表明，本發(fā)明所述的含2%(腦心浸液肉湯培養(yǎng)基干粉質(zhì)量含量)NaCl腦心浸液培養(yǎng)液對(duì)沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的增菌效果較好。表3三種培養(yǎng)液富集培養(yǎng)目標(biāo)—誇的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例四、使用本發(fā)明所述的多重PCR快速檢測(cè)試劑盒檢測(cè)花甲中的沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌。1、富集培養(yǎng)采用無菌操作隨機(jī)取樣IOg，加入到90mL含2X(腦心浸液肉湯培養(yǎng)基干粉質(zhì)量含量)NaCl腦心浸液肉湯培養(yǎng)液中，37'C培養(yǎng)10小時(shí)。2、DNA提取1)取1.5mL培養(yǎng)物，10000r/min離心10min，去上清液；2)加567^LTE懸浮沉淀，加50g/L溶菌酶10l^L37。C保溫lh，再加30叱100g/LSDS，3叱20mg/mL蛋白酶K,混勻，37。C保溫lh;3)加100叱5mol/LNaCl，混勻；4)加80叱CTAB/NaCl溶液，混勻，65。C保溫20min;5)用等體積酚氯仿異戊醇(25:24:1，v:v:v)抽提，10000r/min離心lOmin，將上層清液移至干凈離心管；6)用等體積氯仿異戊醇(24:1，v:v)抽提，取上清液移至干凈離心管中；7)加等體積異丙醇，顛倒混合，室溫下靜置30min，沉淀DNA;8)用玻棒撈出DNA沉淀，70%乙醇漂洗后，吸干，溶解于100l^LTE，-2(TC保存。3、多重PCR擴(kuò)增1)多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系10XPCRbuffer2.5PL，2匪ol/LMgCU240Mmol/LdNTPeach，引物濃度分別為單核增生李斯特氏菌引物200nmol/L，沙門氏菌、副溶血性弧菌引物各60nmol/L，3UTaq酶，DNA模板2A，反應(yīng)體系25叱。2)擴(kuò)增反應(yīng)條件94。C預(yù)變性5min;94。C變性lmin、58。C退火lmin、72。C延伸2min，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72。C延伸10min;于4。C下保存。4、擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)將擴(kuò)增產(chǎn)物于15g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)及UVI凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果，產(chǎn)物大小為495bp，說明檢測(cè)的花甲中含沙門氏菌。實(shí)施例五、使用本發(fā)明所述的多重PCR快速檢測(cè)試劑盒檢測(cè)牡蠣中的沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌。1、富集培養(yǎng)采用無菌操作隨機(jī)取樣IOg，加入到90mL含2X(腦心浸液肉湯培養(yǎng)基干粉質(zhì)量含量)NaCl腦心浸液肉湯培養(yǎng)液中，37"C培養(yǎng)10小時(shí)。2、DNA提取1)取1.5mL培養(yǎng)物，10000r/min離心10min，去上清液；2)加567^LTE懸浮沉淀，加50g/L溶菌酶10l^L37。C保溫lh，再加30叱100g/LSDS，3叱20mg/mL蛋白酶K，混勻，37。C保溫lh;3)加100PL5mol/LNaCl，混勻；4)加80pLCTAB/NaCl溶液，混勻，65。C保溫20min;5)用等體積酚氯仿異戊醇(25:24:1，v:v:v)抽提，10000r/min離心10min，將上層清液移至干凈離心管；6)用等體積氯仿異戊醇(24:1，v:v)抽提，取上清液移至干凈離心管中；7)加等體積異丙醇，顛倒混合，室溫下靜置30min，沉淀DNA;8)用玻棒撈出DNA沉淀，70%乙醇漂洗后，吸干，溶解于100叱TE，-2(TC保存。3、多重PCR擴(kuò)增1)多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系10XPCRbuffer2.5叱，2mmol/LMgCl2，240tool/LdNTPeach,引物濃度分別為單核增生李斯特氏菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌引物各200nmol/L，3UTaq酶，DNA模板2叱，反應(yīng)體系25叱。2)擴(kuò)增反應(yīng)條件94。C預(yù)變性5min;94。C變性lmin、58'C退火lmin、72。C延伸2min，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72。C延伸10min;于4。C下保存。4、擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)將擴(kuò)增產(chǎn)物于15g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)及UVI凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果，產(chǎn)物大小分別為660bp和368bp，說明檢測(cè)的牡蠣中含副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌。實(shí)施例六、使用本發(fā)明所述的多重PCR快速檢測(cè)試劑盒檢測(cè)青口中的沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌。1、富集培養(yǎng)采用無菌操作隨機(jī)取樣IOg，加入到90mL含2X(腦心浸液肉湯培養(yǎng)基干粉質(zhì)量含量)NaCl腦心浸液肉湯培養(yǎng)液中，37'C培養(yǎng)10小時(shí)。2、DNA提取1)取1.5mL培養(yǎng)物，10000r/min離心10min，去上清液；2)加567叱TE懸浮沉淀，加50g/L溶菌酶10PL37。C保溫lh，再加30叱100g/LSDS，3叱20mg/mL蛋白酶K，混勻，37。C保溫lh;3)力B100PL5mol/LNaCl，混勻；4)加80叱CTAB/NaCl溶液，混勻，65。C保溫20min;5)用等體積酚氯仿異戊醇(25:24:l，v:v:v)抽提，10000r/min離心10min，將上層清液移至干凈離心管；6)用等體積氯仿:異戊醇(24:1，v:v)抽提，取上清液移至干凈離心管中；7)加等體積異丙醇，顛倒混合，室溫下靜置30min，沉淀DNA;8)用玻棒撈出DNA沉淀，70%乙醇漂洗后，吸干，溶解于100叱TE，-2(TC保存。3、多重PCR擴(kuò)增1)多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系10XPCRbuffer2.5叱，2腿ol/LMgCl2，240tool/LdNTPeach,引物濃度分別為單核增生李斯特氏菌、沙門氏菌、副溶血性弧菌引物各200nmol/L，3UTaq酶，DNA模板2叱，反應(yīng)體系25叱。2)擴(kuò)增反應(yīng)條件94'C預(yù)變性5min;94。C變性lmin、58'C退火lmin、72r延伸2min，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72'C延伸10min;于4。C下保存。4、擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)將擴(kuò)增產(chǎn)物于15g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)及UVI凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果，產(chǎn)物大小分別為495bp、660bp和368bp，說明檢測(cè)的青口中含沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌。權(quán)利要求1、一種水產(chǎn)品中致病菌多重PCR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括10×PCRbuffer，1.0～3.0mmol/LMgCl2，240μmol/LdNTPeach，60～200nmol/L沙門氏菌引物，60～200nmol/L副溶血性弧菌引物，200nmol/L單核增生李斯特氏菌引物，1.3～3.0UTaq酶。2、如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的沙門氏菌引物序列為上游5，-ATCGGCGTTATCCCTTTCTCTGGTG-3，；下游5，-ATGTTGTCCTGCCCCTGGTAAGAGA_3，。3、如權(quán)利要求l所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的副溶血性弧菌引物序列為上游5，-GTCTTCTGACGCAATCGTTG-3，；下游5，-ATACGAGTGGTTGCTGTCATG-3，。4、如權(quán)利要求l所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的單核增生李斯特氏菌引物序列為上游5，-CAAACTGCTAACACAGCTACT-3，；下游5，-TTATACGCGACCGAAGCCAAC-3，。5、一種使用如權(quán)利要求1或2或3或4所述的檢測(cè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的多重PCR檢測(cè)方法，其特征在于包括提取樣品DNA，多重PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，分析結(jié)果。6、如權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于在提取DNA之前，對(duì)樣品進(jìn)行沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的富集培養(yǎng)。7、如權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于在富集培養(yǎng)中，培養(yǎng)基為含2%質(zhì)量含量的NaCl的腦心浸液肉湯。8、如權(quán)利要求5或6或7所述的檢測(cè)方法，其特征在于樣品DNA提取包括1)1.5mL樣品，10000r/min離心10min，去上清液；2)加567叱TE懸浮沉淀，加50g/L溶菌酶37。C保溫1h，再加30^L100g/LSDS，3HL20mg/mL蛋白酶K，混勻，37。C保溫lh;3)加100叱5mol/LNaCl，混勻；4)加80叱CTAB/NaCl溶液，混勻，65"保溫20min;5)用等體積的酚氯仿異戊醇，其體積比為25:24:l，抽提，10000r/min離心10min，將上層清液移至干凈離心管；6)用等體積氯仿:異戊醇，其體積比為24:1，抽提，取上清液移至干凈離心管中；7)加等體積異丙醇，顛倒混合，室溫下靜置30min，沉淀DNA;8)用玻棒撈出DNA沉淀，70%乙醇漂洗后，吸干，溶解于IOO叱TE，-20。C保存。9、如權(quán)利要求5或6或7所述的檢測(cè)方法，其特征在于多重PCR擴(kuò)增包括1)多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系10XPCRbuffer2.5叱，2咖ol/LMgCl2，240Wnol/LdNTPeach，引物濃度分別為單核增生李斯特氏菌引物200nmol/L，沙門氏菌、副溶血性弧菌引物各60200nmol/L,3UTaq酶，DNA模板2叱，反應(yīng)體系25化；2)擴(kuò)增反應(yīng)條件94"C預(yù)變性5min;94。C變性lmin、58°C退火lmin、72。C延伸2min，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；72。C延伸10min;于4。C下保存。10、如權(quán)利要求5或6或7所述的檢測(cè)方法，其特征在于擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測(cè)包括將擴(kuò)增產(chǎn)物于15g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)及UVI凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。全文摘要本發(fā)明涉及一種微生物檢測(cè)裝置及檢測(cè)方法。所述的水產(chǎn)品中致病菌多重PCR快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于包括10×PCRbuffer，1.0～3.0mmol/LMgCl₂，240μmol/LdNTPeach，60～200nmol/L沙門氏菌引物，60～200nmol/L副溶血性弧菌引物，200nmol/L單核增生李斯特氏菌引物，1.3～3.0UTaq酶。本發(fā)明有較好的特異性，簡便、快速、靈敏地實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品中沙門氏菌、副溶血性弧菌和單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的同時(shí)檢測(cè)，人工污染水產(chǎn)品檢測(cè)限為10cfu/mL；為無公害水產(chǎn)品食源性致病菌的快速檢測(cè)提供了理想手段，有良好的應(yīng)用前景。文檔編號(hào)C12Q1/04GK101235410SQ20081002603公開日2008年8月6日申請(qǐng)日期2008年1月25日優(yōu)先權(quán)日2008年1月25日發(fā)明者吳清平,張菊梅,楊小鵑,郭偉鵬申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所被以下專利引用(1),