專利名稱：：南海真菌中新鹿角縮酮類化合物及其在制備抗高血壓藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及南海內生真菌鹿角菌X少/oran'a印.2508中已分離鑒定并篩選到一系列鹿角縮酮(xyloketals)類化合物及其在制備抗高血壓藥物中的應用。
背景技術：
：自從1929年從真菌中發(fā)現(xiàn)青霉素以來，真菌的代謝產物成為了藥物的豐富來源，絕大多數(shù)臨床應用的抗生素都來源于真菌和細菌，真菌的代謝產物還有其他的藥用價值，如抗腫瘤，治療心血管疾病，免疫調節(jié)劑等。由于海洋環(huán)境的特殊性，海洋微生物種類繁多，來源廣泛,篩選獲得率高，根據(jù)John教授在2005年《NaturalProductReports》的報道，2003年發(fā)現(xiàn)海洋天然產物新化合物中，海洋微生物是主要來源之一(另外包括海綿和腔腸動物)。海洋真菌能提供陸生真菌無法提供的代謝產物。植物內生真菌(Endophyticfungi)生活在高等植物的組織中，是植物微生態(tài)系統(tǒng)中的天然組成成分，在進化過程中與宿主建立了和諧的共生關系，據(jù)保守的估計內生真菌的種類繁多，大約有1.5><106種，由于數(shù)量龐大，而且與其他生物之間緊密的生態(tài)關系，使這類真菌成為潛在的具有產生豐富的次級代謝產物的來源。國際上這方面的研究從八十年代以來呈加速發(fā)展的趨勢，國內從海洋微生物也發(fā)現(xiàn)一批新的活性物質(LinYCetal,J.Org.Chem.;LinYCetal.Tetrahedron2000)。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一類新的來源于海洋真菌的具有潛在藥用價值的化合物在高血壓預防治療方面的應用價值。本發(fā)明的技術方案如下從南海內生真菌鹿角菌Xy/orar/a".2508中已分離鑒定并篩選到一系列鹿角縮酮(xyloketalA—F)類化合物中，結構分別如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>XyloketalDXyloketalEXyloketal本發(fā)明的化合物可以從真菌2508的發(fā)酵液中提取分離得到，所用的真菌2508已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，中國武漢大學校內)，保藏號為CCTCCNO:M202029，保藏日為2002年08月03日。本發(fā)明化合物鹿角縮酮化合物A—F(xyloketalA_F)可從真菌2508的發(fā)酵培養(yǎng)液中提取分離得到，制備方法的具體步驟如下a.真菌250S的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基按重量比為葡萄糖0.5-1.5，酵母提取物0.05-0.15，蛋白胨0.1-0.3,瓊脂1-1.5，氯化鈉3-5，水IOO，制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，30-35°C培養(yǎng)5-7天；b.真菌250S的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為葡萄糖0.5-1.5，酵母提取物0.05-0.15，蛋白胨0.1-0.3，瓊脂1-1.5，氯化鈉3-5,水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫25-35'C靜置1-2個月，或者于200L全自動發(fā)酵罐培養(yǎng)90小時；c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/3-1/5，用乙酸乙酯萃取多次，濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進行色譜分離，以1%_100%乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫。e.收集8%_30%的乙酸乙酯/石油醚洗脫，純化得到XyloketalA—F化合物.本發(fā)明的化合物對KC1和苯腎上腺素(Phenylephrine,Phe)引起血管環(huán)收縮實驗中發(fā)現(xiàn)具有明顯的抑制作用，同時對高血壓大鼠模型如預期觀察到體內應用xyloketals系列化合物可產生降壓效應。下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明。圖1為預孵不同濃度XyloketalB對KC1引起大鼠胸主動脈環(huán)收縮反應的影響；圖2為預孵XyloketalB(20nM)禾BL-NAME(lOO^M)對Phe誘發(fā)的去內皮血管環(huán)收縮反應的影響。具體實施例方式實施例l化合物可以通過以下步驟制備得到aa.真菌250S的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基按重量比為葡萄糖0.5-1.5，酵母提取物0.05-0.15，蛋白胨0.1-0.3，瓊脂1-1.5，氯化鈉3-5，水IOO,制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，30-35°C培養(yǎng)5-7天；d.真菌250S的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為葡萄糖0.5-1.5，酵母提取物0.05-0.15，蛋白胨0.1-0.3，瓊脂1-1.5,氯化鈉3-5，水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫25-35°C靜置1-2個月，或者于200L全自動發(fā)酵罐培養(yǎng)90小時；e.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/3-1/5，用乙酸乙酯萃取多次，濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進行色譜分離，以1%—100%乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫。e.收集8%—30%的乙酸乙酉旨/石油醚洗脫，純化得到XyloketalA—F化合物.XyloketalA:無色塊狀晶體；mp164-166°C;[a]25D=-4.88°(c0.205,CHC13);IR(KBr)cm—1:2955,2930,2905,2844,1622，1459,1383,1327,1299，1180,1112，1099，1046,1018,931,868,699;UV義max(CHC13)222(e14370)，224(e14300),228(e14000)，272(e1274);!HNMR(500MHz,CDC13)1.05((!，/=6.5Hz，H-ll)，1.50(s，H-10),1.89(dd,J-6.5，11.0Hz,H-6),2.14(ddd，/=6.5,8.5,8.5Hz,H-5),2.64(dd,/=3.5,18.0Hz,H-7a)，2.85(d,18.0Hz,H-7b),3.53(m,H-4a)，4.17(m,H-4b);13CNMR(125MHz,CDC13)d16.1，18.9,22,9,35.5,47.6,74.0，98,9,107.4,149,8;FABMSm/z45(M+')，456,441,397，359,315,299,259,245,217,175,163,111,83,55.Anal.CalcdforC27H3606:C,71.05;H，7.95.Found:C71.13,H7.74.XyloketalB::白色粉狀固體;mp84-86°C;[a]25D=+8.2°(c0.061,CHC13);IR(KBr)cm-13356,2962,2935,2891,1622，1508，1454,1342,1190，1117,1069,876,818，612;UV義max(CHC13)215(e68790)，228(e41620)，274(e9827);'HNMR(500MHz,CDC13)1.05(d，/=7.0Hz,H-ll)，1.07((!，/=7.0Hz,H-ll，)，1.50(s，H-10),1.52(s,H-IO，)，1.88,，/=1.0,4.0,6.5Hz,H-6)，1.91(ddd,J-1.0，4.5,7.0Hz,H-6，)，2.13(m，H-5),2.14(m，H-5，)，2.62((!(!,/=6.5,17.0Hz,H-7),2.80(d,■/=17.0Hz,H-7),2.82(d，/=16.0Hz，H-7'),2.69(dd,■/=7.0,16.0Hz,H-7，)，3.50(dd,J=8.5,17.0，H-4)，4.17(dd，/=7.5Hz,H-4)，3.55(dd，>/=8.5，17,0Hz,H-4，)，4.10(dd,/=6.5,17.0Hz,H-4，)，6.13(s,H-13),6.14(s,H-14);13CNMR(125MHz,CDC13)d15.9,16.1,18.4,18.6,22.8,23.1,35.5,35.3,47.5,47.8，74.0,74.0，95.9,98.5,99.4,107.4,107,7,152.0,152.1，153.2;FABMSm/z347(M+1),346，289,249,205,189，151，111,97，83,55.Anal.CalcdforC20H26O5:C,69.36;H,7.52.Found:C,69.39;H,7.35.XyloketalC::無色針狀結晶；mp>260°C;[a]25D=-52.4°(c0.038,CHC13);IR(KBr)cm-13357，3056,2982,2953,2905,1627,1595，1491,1450,1381，1337,1223,1191，1113,1077，987,877，810,598,569;UVAmax(CHC13)215(e15060),227(e9758)，275(e1515);'HNMR(500MHz,CDC13)(d，/=6.0Hz,H-11)，1.37(s,H-10),1.86(overlap,H-6),1.89(overlap,H-5),2.65(dd,/=6,0,17.0Hz，H-7),2.76(d，/=17.0Hz,H-7),3.36(t,/=8.0Hz，H-4)，3.96(t,/=8.0Hz,H-4),5.65(s,H-14);13CNMR(125MHz,CDCl3)rf8.39，15.4，18.6,22.8，34.8,47.1，72.8，95.8,99.2,106.6,151.9,153.0;FABMSw/z347(M+、，346,329,289，249,205，189,176,149,111,89,77,57.Anal.CalcdforC20H26O5:C,69.36;H,7.52.Found:C，68,81;H,7.82.XyloketalD::無色塊狀結晶；mp111-113°C;[a]25D=-119.5。(c0.113，CHC13);IR(KBr)cm-13479,3416,3089,3056,2954,2921,2879，1615，1492,1420,1381,1332，1261,1117,1070,1002,854,831，804，641，609;UV義max(CHC13)220(e17450),228(e10720)，280(e18040),307(e8766);'HNMR(500MHz,CDCl3)c/1.07(d，>/=7.0Hz，H-ll)，1.53(s，H-10),1.98(ddd,J=1.0,6.5，11.0Hz,H-6),2.15(m,H-5)，2.54(s,H-17),2,72(dd,/=6.5，18.0Hz,H-7),2.97(d,/=18.0Hz,H-7),3.57(t,■/=8.0Hz,H-4)，4.20(t，■/=8.0Hz,H-4),6.36(d,J=9.0Hz,H-15),7.51(d,J=9.0Hz,H-14),13.09(s,H-18);13CNMR(125MHz,CDC13)^15.8，18.0，22.7,26.1,35.1,47.0,74.3,106.2,108.3，108.8，113.2,130.0,159.5,162.9,202.6;FABMSz/z263(M+1),247,203，177,165,147，111，97，83,55.Anal.CalcdforC15H1804:C，68,70;H,6.87.Found:C,68.80;H,7.20.XyloketalE::無色塊狀結晶；mp170-172°C;[a]25D=+5.35°(c0.374，CHC13);&NMR(CDC13)c/1.00(d，/=6.5Hz,3H),1.04(d，/=6.5Hz,3H),1.08(d,/=6.5Hz,3H),1.48(s),I.50(s,3H)，1.53(s,3H),1.78(m，H)，1.84(m,H)，1.90((!(!，/=7，12Hz，H)，2.06(m，H),2.17(m，H)，2.38(m,H),2.58(dd,/=17.0,7.0Hz,H)，2.64(dd,■/=17.0，7.0Hz,H)，2.81(d,/=17.0Hz,H)，2.83(d,7=17.0Hz,H),2.86(dd,/=6,0,12.0Hz，H),3.38(dd,/=8.0,10.5Hz,H),3.46(d,>/=8,5Hz,H),3.54(/=8.5Hz,H),4.06((!(!,/=7.0，10.5Hz,H)，4.08(t，/=8.5Hz,H),4.168.5Hz,H),10.81(s,OH)，13CNMR(CDC13)cH5.5,16.3,16.2,19.1,18.7，22.5,23.0,28.4,32.7,35.4,35.7,47.0,47.7,49.3,73.9,74.0,74.2，89.1,98.2,98.8,107.3,107.5,110.8,148.3，150.2,152.0;FABMS445(M+'),444,429,385,347,331,287,249;UV義max(CHC13)216(e17510),226(el13卯),273(e1450).Anal.CalcdforC20H26O5:C,70.27;H,8.11.Found:C，70.53;H,8.42.XyloketalF:無色針狀結品，m.p.160—162。C.[a]D25—50.6(c=0.2,CH3OH).IR(KBr):人=3351,2955,2929,1615,1460，1381,1340,1311，1207,1115，1076，1004,869cm—1.UV/Vis(CH3OH):義max(e)=226(15411),273nm(2475).NMR'HNMR(500MHz,CDC13)c/1.02(d，/=6.5Hz,H-11),1.04((!,/=6.5Hz,H-ll,)，1.48(s,H-10),1.58(s,H-IO，)，1.87((!(!,/=7.0,11.0Hz,H-6)，1.91(dd,</=7.0,11.0Hz,H-6，)，2.13(m,H-5),2.13(m,H-5，)，2.6018.0Hz,H-7)，2.84(d，■/=18.0Hz,H-7),2.86(d,■/=18.0Hz，H-7，)，2,72(dd,/=7.0，18.0Hz,H-7，)，3.50(t，/=8.0,H-4)，4.14(t,■/=8.0Hz,H-4),3.61(t，/=8.0Hz,H-4'),4.30(t，/=6.0Hz,H-4，),3.72(s，H-14),8.40(s,OH);13CNMR(125MHz,CDC13)d15.8,15,9，17.2,19.2，19.2,22.3，22.9,,35.2,35.3，47.5,47.5,74.0,74.5,98.1,100.1,106.2,107.5，109.3,148.1,150.2,152.5;FABMS(70eV)705(M+').H腿S(EI)calcd.For[C41H52O10+Na]:,"/z=727.3458,found727.3279.實施例2XyloketalB對大鼠胸主動脈血管環(huán)收縮反應的影響(一)材料與方法1.藥物XyloketalB,白色粉末.溶于DMSO，貯存濃度50mmol/L,保存于4。C備用。2.雙腎雙夾法易卒中型腎血管性高血壓大鼠(RHRSP)模型制備]選用鼠齡60~90天，體重90~120克SD大鼠按雙腎雙夾法制備RHRSP模型，術前12小時禁食，10%水合氯醛(3g/Kg)腹腔注射麻醉，仰臥固定，常規(guī)消毒鋪巾，取腹正中縱行切口，鈍性分離雙側腎動脈，用內徑為0.3mm的環(huán)形銀夾分別鉗夾雙側腎動脈起始部，并確定使腎動脈置于銀夾的環(huán)形結構中。手術過程中注意不要損傷腎臟、肝臟、乳糜池、腎動脈及腎靜脈。逐層關腹，術后腹腔注射青霉素鈉鹽4萬單位/100克體重預防感染。假手術對照組不上銀夾，其余處理同實驗組P。高血壓組和假手術組每組術前經尾動脈測收縮壓，術后每周測血壓一次。3血壓測量用RBP-1B型大鼠心率血壓儀測量血壓。儀器預熱30分鐘后，將大鼠放入預熱箱，預熱10~15分鐘，固定于滑動式大鼠固定臺上，尾部固定在探頭的正中槽中，待大鼠安靜后測尾動脈收縮壓。每只鼠每次測三個值，取其平均值。術前三天測血壓為基礎血壓，術后每周測血壓一次。4大鼠胸主動脈血管環(huán)實驗用頸椎脫臼法處死大鼠，迅速打開胸腔，小心分離胸主動脈，截取胸主動脈約1.5cm，置于冰冷的盛有Kreb's液的平皿中，去掉血管表面結締組織，制備成約3mm長的環(huán)型血管標本。去內皮標本用小鑷子穿入血管經滾動破壞形成，內皮是否去除，用10nmol/LAch能否引起舒張反應來判定。將血管環(huán)懸掛于37°CKrebs液的浴槽中，通入95%02和5%C02的混合氣體，連接張力傳感器，記錄血管環(huán)張力的變化?；A張力為lg，每15min換l次新鮮Krebs液，經平衡1h后，加入60mmol/LKC1作用15min誘導血管環(huán)收縮，激發(fā)舒縮活性，然后沖洗使血管環(huán)張力恢復至基線，反復3次，穩(wěn)定30min后進行后續(xù)實驗，記錄血管環(huán)張力變化數(shù)值。張力變化以血管環(huán)收縮幅度變化相對值的百分比(％)來表示。(二)實驗結果1.Xyloketals系列化合物在正常大鼠胸主動脈血管環(huán)上的實驗結果(1)對Xyloketals系列化合物的篩選取去內皮的血管環(huán)，在正常Kreb's液中，加入60mmol/LKC1，待血管環(huán)收縮達到穩(wěn)定后，采用累積加藥方法，逐步增加受試化合物濃度(0.05100pmol/L)。以加入化合物后血管張力幅度與KCl誘發(fā)的血管環(huán)的最大收縮幅度之間的比率反映血管張力的變化，制作受試化合物舒張作用量效曲線。在篩選過的9個Xyloketals系列化合物中，迄今為止已發(fā)現(xiàn)XyloketalB,F能抑制KCl引起的大鼠胸主動脈血管環(huán)收縮，并呈現(xiàn)一定量效關系。其半數(shù)有效濃度分別為15.2±4.6|_imol/L(n=6),35.7±8.4nmol/L，其中XyloketalB作用最強，在20pmol/L對KCl誘發(fā)的血管環(huán)最大收縮幅度可抑制約2030%。因此選用XyloketalB進行后續(xù)實驗，并同時進行結構改造。(2)XyloketalB對KCl和苯腎上腺素(Phenylephrine,Phe)引起血管環(huán)收縮實驗的影響圖1所示，20nmol/LXyloketalB對KCl誘發(fā)的去內皮血管環(huán)的最大收縮幅度可分別抑制約24%。這提示XyloketalB抑制血管環(huán)收縮反應機制中存在內皮依賴性成分。所測試的Xyloketals系列化合物對離體血管環(huán)均無直接松弛作用。(3)XyloketalB在高血壓大鼠胸主動脈血管環(huán)上的實驗結果本室先前研究證實，在RHRSP模型手術后8周，高血壓穩(wěn)定形成。于RHRSP術后8周，分離胸主動脈血管環(huán)，去內皮后置于正常Kreb，s液中，加入10nmol/LCPA，待血管環(huán)收縮達到穩(wěn)定后，沖洗，平衡后，分次預孵不同濃度XyloketalB(520|amol/L)10min后，再加入lOfimol/LCPA,比較預孵XyloketalB前后CPA誘發(fā)的血管環(huán)收縮最大幅度，反映XyloketalB對CPA引起的血管收縮的影響。表1XyloketalB對CPA誘發(fā)假手術組，高血壓組胸主動脈環(huán)收縮反應的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*P<0.01vsSham,**P<0.01vsShamcontrol,#P<0.01vshypertension表1示，與假手術組相比，在高血壓組CPA引起更強的收縮反應。預孵20jxmol/LXyloketalB能夠明顯抑制CPA誘發(fā)的高血壓去內皮血管環(huán)收縮反應，預孵XyloketalB前后，高血壓組CPA誘發(fā)的血管環(huán)收縮最大收縮幅度分別為1.91±0.11和1.59±0.16。(三)實驗討論及化合物評價正常生理情況下，血壓由一定血管張力維持，而血管張力主耍由血管平滑肌決定。血管環(huán)張力實驗反映各種因素對血管舒縮活動的調節(jié)和對血管平滑肌功能的影響，是檢測藥物能否是否影響血管收縮功能的經典篩選實驗。Xyloketals系列化合物在正常大鼠胸主動脈環(huán)的實驗研究結果，提示該化合物有可能存在降壓作用，我們因此檢測此化合物是否對CPA引起高血壓大鼠離體胸主動脈環(huán)的收縮反應有影響。已知高血壓大鼠血管張力增強的機制與細胞內流異常密切相關，包括了電壓依賴性Ca"內流異常和非電壓依賴性(^2+內流異常等機制，CPA是胞內內質網Ca"泵抑制劑，可通過促胞內Ca"釋放，誘發(fā)非電壓依賴性Ca2+內流。我們的實驗結果顯示，CPA引起RHRSP大鼠離體胸主動脈環(huán)反應性增高，表明在這一高血壓模型上，非電壓依賴性<^2+內流在高血壓血管張力增高過程中起重要作用。XyloketalB能抑制CPA誘發(fā)的高血壓大鼠離體胸主動脈環(huán)的收縮反應，提示XyloketalB可通過抑制非電壓依賴性C^+內流，從而產生松弛血管平滑肌藥理效應。實施例3XyloketalB對腎血管性髙血壓大鼠血壓的影響(一)材料與方法1.藥物XyloketalB，白色粉末.先溶于丙三醇，再以生理鹽水稀釋成溶劑(丙三醇終濃度20%)，保存于4。C備用。2.雙腎雙夾法易卒中型腎血管性高血壓大鼠(RHRSP)模型制備及給藥設計選用鼠齡6090天，體重90120克SD大鼠按雙腎雙夾法制備RHRSP模型，術前12小時禁食，10%水合氯醛(3g/Kg)腹腔注射麻醉，仰臥固定，常規(guī)消毒鋪巾，取腹正中縱行切口，鈍性分離雙側腎動脈，用內徑為0.3mm的環(huán)形銀夾分別鉗夾雙側腎動脈起始部，并確定使腎動脈置于銀夾的環(huán)形結構中。手術過程中注意不要損傷腎臟、肝臟、乳糜池、腎動脈及腎靜脈。逐層關腹，術后腹腔注射青霉素鈉鹽4萬單位/100克體重預防感染。假手術對照組不上銀夾，其余處理同實驗組[2]。將手術成功的46只大鼠分為6組高血壓組(Hyp，n=ll)，假手術對照組(Sham，n=7),XyloketalB溶劑治療組(含20%丙三醇生理鹽水組，NS，i^ll)，尼莫地平組(Nim，100ng/kg/d,n=7),卡托普利組(Cap，100ng/kg/d，n=7)，XyloketalB治療組(Xyl-B，20mg/kg/d，n=3),藥物治療于術后第2天開始，每組術前經尾動脈測收縮壓，術后每周測血壓一次。3.血壓測量用RBP-1B型大鼠心率血壓儀測量血壓。儀器預熱30分鐘后，將大鼠放入預熱箱，預熱10~15分鐘，固定于滑動式大鼠固定臺上，尾部固定在探頭的正中槽中，待大鼠安靜后測尾動脈收縮壓。每只鼠每次測三個值，取其平均值。術前三天測血壓為基礎血壓，術后每周測血壓一次。(二)實驗結果Sham組術后12周內血壓維持在118±17mmHg126±22mmHg;Hyp組術后第2、4、8、12周血壓緩慢升高，自第4周起Hyp組的血壓均值與Sham組血壓均值相比有統(tǒng)計學意義(157土12mmHgvs120土17mmHg，PO.05),Nim組術后血壓在146±25mmHg~1卯±35mmHg，與Hyp組比較差異無顯著性(PX).05)，Cap治療后血壓為116±22mmHg~125±19mmHg，與Sham組相比，差異無顯著性(PX).05)。XyloketalB治療后血壓均值自第8周起與Hyp組血壓均值相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，第8周Sham組，Hyp組，Xyl-B組的血壓均值分別為128土24mmHg,172土16mmHg,150士14mmHg，XyloketalB呈現(xiàn)出降壓作用。與同時期Sham組相比，Xyl-B組的血壓均值仍偏高，但差異無顯著性(PX).05)。各時間點溶劑組與高血壓組血壓均值比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05);提示溶劑對高血壓形成無影響。上述結果表明高血壓模型建模成功，尼莫地平在所用劑量下無降壓作用，XyloketalB、卡托普利在所用劑量下均有降壓作用。表2卡托普利、尼莫地平、XyloketalB對腎血管性高血壓大鼠血壓的影響(7±SD,mmHg)周數(shù)ShamHypCapNimXyl-BNSPre98±1296±1399±1499±1599±12101±10(7)(11)(7)(7)(3)(11)2w118±17143±15116±22146±25135±17150±15(7)(11)(7)(7)(3)(11)4w120±17157±12'118±23150±26144±19156±14(7)(11)(7)(7)(3)(11)6w125±20165±13123±21142±22147±16167±13<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*尸<0.05,**/M).0I，vsSham組#P<0.05,##尸O.01，vsHyp組(三)實驗討論及化合物評價上述結果表明髙血壓模型建模成功，尼莫地平在所用劑量下無明顯降壓作用，卡托普利在所用劑量下有明顯降壓作用。XyloketalB的體內應用實驗初步表明該化合物對腎性高血壓大鼠有降壓作用。RHRSP的發(fā)生機制純粹由高血壓因素引起，因此在模擬研究高血壓性血管損害方面更為可靠[2]。上述研究表明臨床上廣泛應用的降壓藥物血管緊張素II轉換酶抑制劑卡托普利能明顯降低RHRSP的血壓水平至正常水平。Ca^內流抑制劑尼莫地平(nimodipine，Nim)是二氫吡啶類L型電壓依賴性<^2+通道阻斷劑，脂溶性強，容易穿透血腦屏障，對腦血管的舒張作用強于外周血管。臨床應用證明Nim可解除蛛網膜下腔出血后腦血管痙攣，用量大時有降壓作用。本實驗發(fā)現(xiàn)Nim在所用劑量下對RHRSP的血壓沒有影響，說明此劑量的Nim無降壓作用。XyloketalB對RHRSP有一定降壓作用。但需指出的是，由于XyloketalB是全新結構的化合物，這是XyloketalB首次應用于體內實驗，因缺乏一般藥理學和藥代動力學資料，其給藥劑量和給藥途徑的確定均依據(jù)本室先前對中藥新藥研發(fā)的經驗，且由于該化合物尚未大規(guī)模合成(還處于化合物結構進一步改造階段)，動物例數(shù)有限，其確切降壓效果有待進一步評價。本實驗室先前體外研究己證實XyloketalB對L型電壓依賴性Ca2+ffi道有阻斷作用，這可能是其降壓機制之一。我們最近研究尚表明該化合物可能存在胞內抗氧化作用，并可能影響經非電壓依賴性Ca"通道的胞外C內流。因此XyloketalB的降壓機制是否還有其他解釋，還需要更多實驗進一步揭示。結果表明本發(fā)明的化合物對預防和治療高血壓等心血管疾病具有很好的應用前景。權利要求1.鹿角縮酮類化合物的結構式2.權利要求1所述化合物的制備方法，其特征是該方法包括以下步驟a.真菌250S的種子培養(yǎng)培養(yǎng)基按重量比為葡萄糖0.5-1.5，酵母提取物0.05-0.15，蛋白胨0.1-0.3，瓊脂1-1.5，氯化鈉3-5，水100，以上數(shù)值均為質量比。制成試管斜面，挑取菌株接入斜面，30-35°C培養(yǎng)5-7天;b.真菌250S的發(fā)酵培養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)基按重量比為葡萄糖5-15，酵母提取物l-4，蛋白胨0.5-4，氯化鈉3-5，水100，將斜面中培養(yǎng)好的菌株挑入發(fā)酵培養(yǎng)基，于室溫25-35'C靜置l-2個月，或者于200L全自動發(fā)酵罐培養(yǎng)90小時；c.將上述培養(yǎng)好的發(fā)酵液過濾除去菌體；d.將發(fā)酵液加熱濃縮至原液體積的1/3-1/5，用乙酸乙酯萃取多次，濃縮乙酸乙酯萃取液，在硅膠柱中進行色譜分離，以1%—100%乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑梯度洗脫。e.收集8%_30%的乙酸乙酉旨/石油醚洗脫，純化得到XyloketalA_F化合物.3.權利要求1所述的化合物在制備抗高血壓藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明從南海內生真菌鹿角菌Xylorariasp.2508中已分離鑒定并篩選到一系列鹿角縮酮(xyloketalA-F)類化合物中，發(fā)現(xiàn)該類化合物對某些心血管疾病具有良好的治療前景。本發(fā)明公開了該類化合物在高血壓預防治療中的應用。本發(fā)明的化合物對KCl和苯腎上腺素(Phenylephrine，Phe)引起血管環(huán)收縮具有明顯的抑制作用，同時對高血壓大鼠模型如預期觀察到體內應用xyloketals系列化合物可產生降壓效應。文檔編號C12R1/645GK101580512SQ20081002812公開日2009年11月18日申請日期2008年5月15日優(yōu)先權日2008年5月15日發(fā)明者捷劉,孟偉峰,龐冀燕,林永成,王冠蕾,陳建文申請人:中山大學