專利名稱：一種cd326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用的制作方法
一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體地說關(guān)于一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試 劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
根據(jù)國(guó)內(nèi)外權(quán)威機(jī)構(gòu)提供的資料，我國(guó)每年癌癥的新增人數(shù)170萬，死亡 人數(shù)近160萬，患者600萬，全球每年新增癌癥患者800萬，死亡人數(shù)接近800 萬，患者約有8400萬人，到2020年以上人數(shù)將翻一番，這是一組可怕的數(shù)字。
2005年美國(guó)衛(wèi)生研究院、癌癥研究院、疾控中心等多家單位做了一個(gè)年度 報(bào)告，"認(rèn)為人類在抗癌大戰(zhàn)中是失敗"，也就是說癌癥死亡率沒有降低，其列 舉出造成抗癌大戰(zhàn)失敗的幾個(gè)因素是1.腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性；2.腫瘤細(xì)胞耐藥性； 3.抗癌藥物設(shè)計(jì)思路不完善等。同時(shí)，該報(bào)告中亦提出應(yīng)重新審視現(xiàn)有診治癌 癥的措施。
本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致癌癥死亡率不降的另二個(gè)重要原因是l.不 能做到真正的早期診斷;2.轉(zhuǎn)移的病理機(jī)制不清楚。依照傳統(tǒng)的醫(yī)學(xué)影像及和 其它生化(如蛋白標(biāo)記物)指標(biāo)來診斷癌癥，認(rèn)為占位性癌塊在2公分下是屬 于早期癌癥的診斷(更小些有時(shí)無癥狀體征)，這一概念值得認(rèn)真討論。影像 醫(yī)學(xué)的2公分以下癌塊屬早期這一界定科學(xué)性是不夠嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?，從?xì)胞學(xué)角度， 1公分的腫塊約有一億個(gè)腫瘤細(xì)胞，2公分的腫塊其三維空間的細(xì)胞疊加數(shù)遠(yuǎn) 不止2億個(gè)腫瘤細(xì)胞，從癌變前期到單克隆癌細(xì)胞產(chǎn)生及形成2公分的癌塊， 其病理演變過程相當(dāng)長(zhǎng)，可能是一年或兩年、甚至三年以上，很難證實(shí)的是在
這個(gè)過程中，腫塊是癌癥唯一的發(fā)生地和單獨(dú)的病灶。臨床上已證實(shí) 一旦形 成腫塊的同時(shí)，其他癌細(xì)胞通過不同途徑遷移到其他部位克隆生長(zhǎng)； 一旦切除 原發(fā)灶后，其他器官?gòu)?fù)發(fā)灶或多發(fā)癌塊灶先后形成或轉(zhuǎn)移。因此，在臨床上以 2公分以下的腫塊大小來界定早期與否，不夠嚴(yán)謹(jǐn)(有些病例，在發(fā)現(xiàn)原發(fā)病 灶時(shí)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶，不在我們表述的內(nèi)容中)，這時(shí)已經(jīng)是晚期了，這 是導(dǎo)致癌癥死亡率不降的真正原因。
隨著分子生物技術(shù)日益完善，功能基因組學(xué)，癌癥基因組學(xué)等研究的深入 展開，至今，我們己有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或 癌細(xì)胞形成(單克隆)時(shí)或腫瘤干細(xì)胞的存在及突破血管壁早期轉(zhuǎn)移時(shí)，就能 做到早期預(yù)測(cè)診斷。
多年前，研究人員已發(fā)現(xiàn)癌癥轉(zhuǎn)移患者及放、化療后血液中CD326的濃度 要比正常人高得多，而且持續(xù)性增高，與中腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。但一 直不知道它們?cè)诩?xì)胞當(dāng)中的功能及癌細(xì)胞發(fā)生變化的相關(guān)性。近來的研究發(fā) 現(xiàn)，許多癌癥(結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌等癌的腫瘤干細(xì)胞都表達(dá) 很高水平CD326。腫瘤干細(xì)胞在腫瘤細(xì)胞中所占比例較低，自我更新和持續(xù)再 生為新腫瘤的能力很強(qiáng)。腫瘤干細(xì)胞對(duì)多種化療都耐藥，這可能是為什么目前 大多數(shù)治療不能通過根除所有腫瘤細(xì)胞來根治腫瘤的主要原因。許多癌癥的腫 瘤干細(xì)胞表達(dá)CD326, CD326是一個(gè)常見的高表達(dá)的腫瘤相關(guān)抗原，將它作為 腫瘤干細(xì)胞的存在靶標(biāo)有非常重要的臨床診斷意義。CD326在許多癌癥中表達(dá) 過度。他作于癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的基因診斷早期指標(biāo)有非常重要的臨床意義。
目前對(duì)CD326基因的研究檢測(cè)技術(shù)、方法多用于科研方面，不適應(yīng)臨床應(yīng) 用，特別是個(gè)性化的應(yīng)用在我國(guó)現(xiàn)階段條件尚未發(fā)現(xiàn)。根據(jù)現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料 CD326基因的檢測(cè)試劑盒及相關(guān)技術(shù)未見報(bào)道。
原位雜交技術(shù)(in situ hybridization)是將分子生物學(xué)與細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 結(jié)合起來，以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異性核酸分子的 技術(shù)。其原理是使含有特異序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條 件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交，再以放射自顯影或免疫 細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè)，從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分 子。
中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1556221公開了"IC53基因及其相關(guān)產(chǎn)物診斷和治療結(jié)腸 癌的用途及一種診斷結(jié)腸癌的試劑盒"。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1769485公開了 "櫛 孔扇貝病原類立克次氏體的原位雜交檢測(cè)方法及其試劑盒"。中國(guó)專利文 獻(xiàn)CN1556410公開了 "一種魚類病毒的檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法"。中國(guó)專利 文獻(xiàn)CN1680597公開了"一種用于定量檢測(cè)丙型肝炎病毒(HCV)的熒光定量PCR 試劑盒"。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN2918435，公開了 "一種檢測(cè)肥胖相關(guān)基因SNP的寡 核苷酸芯片及試劑盒"。但是，關(guān)于CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢 測(cè)技術(shù)未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑 盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用。
為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒 在制備檢測(cè)癌癥疾病藥物中的應(yīng)用，所述的癌癥是肺癌、胃癌、乳腺 癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、子宮癌、胰腺癌或膀胱癌，所述的試劑盒包括 雜交探針、標(biāo)記物，其中所述的雜交探針序列如SEQIDNO.l所示。CD326基 因序列見SEQ IDNO. 1， CD326基因的核苷酸序列長(zhǎng)度是1528bp， CDS
是179. . 1123bp，位于染色體2p21"上。
作為可選的技術(shù)方案，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.l所示的RNA序列。
作為可選的技術(shù)方案，所述的標(biāo)記物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。 作為可選的技術(shù)方案，所述的放射性核素選自SH、 35S、 1251或3￥中的一種。
作為可選的技術(shù)方案，所述的非放射性標(biāo)記物選自生物素、地高辛、堿性
磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的一種。
作為可選的技術(shù)方案，所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。 作為可選的技術(shù)方案，還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。 本發(fā)明還提供了一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、
標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ IDNO. 1所示，所述的標(biāo)記物選
自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。
本發(fā)明還提供了一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)方法，該方法包括以下
步驟
a、 將試劑盒中的雜交探針與底物中待測(cè)RNA接觸，形成雜交復(fù)合體；
b、 檢測(cè)a步驟得到的雜交復(fù)合體。
作為可選的技術(shù)方案，所述a步驟中形成雜交復(fù)合體的條件為核酸雜交 的溫度為42。C;核酸雜交的時(shí)間為16—24小時(shí)，所述的底物選用血液細(xì)胞標(biāo) 本或組織細(xì)胞標(biāo)本。
本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒是采用核酸雜交技術(shù)和組化免疫方法相結(jié)合，以 CD326基因?yàn)闄z測(cè)對(duì)象，合成探針是CD326基因的DNA或RNA序列，檢測(cè)的底 物是人體血液標(biāo)本白細(xì)胞或組織細(xì)胞的RNA的表達(dá)量。原位雜交技術(shù)的顯示方
法能提供CD326基因的半定量或定量表達(dá)程度判定。根據(jù)雜交后免疫組化顯色 判定以上基因的表達(dá)量，正常人CD326基因表達(dá)低或不表達(dá)，即不顯色，CD326 基因在癌癥病人和正常人有顯著差異，該基因的表達(dá)量比正常人表達(dá)量都高。 本發(fā)明的診斷試劑盒的組份是由雜交探針，雜交液，顯色劑，增效劑等組 成。本試劑盒的核酸雜交原理是分子生物學(xué)業(yè)內(nèi)人士均熟知，具體操作步驟是 標(biāo)本處理、預(yù)雜交、雜交、免疫組化染色、鏡下進(jìn)行定量分析、結(jié)果報(bào)告，其 中雜交的具體步驟包括 儀器操作
1) .將待測(cè)標(biāo)本放入反應(yīng)槽中；
2) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)加消化液；
3) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)后固定；
4) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)預(yù)雜交(42°C);
5) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗；
6) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)雜交(42°C);
7) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗；
8) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)與DIG抗體培養(yǎng)(室溫)；
9) .儀器自動(dòng)棄去液體，自動(dòng)清洗，顯色；
10) .取出封片鏡檢。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
1、 本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。
2、 本發(fā)明的檢測(cè)方法操作方便、簡(jiǎn)單，能在區(qū)級(jí)以上醫(yī)院普遍使用和推 廣。克服了目前對(duì)CD326基因的研究都采用高通量基因芯片方法，而這些方 法多用于科研方面，不適應(yīng)臨床應(yīng)用的缺陷。
3、本發(fā)明的臨床意義是更早期跟蹤檢測(cè)癌癥發(fā)生和病理演變過程，本發(fā) 明的診斷試劑盒與臨床上其它檢測(cè)癌胚蛋白標(biāo)志物，以及影像醫(yī)學(xué)檢査有顯著 不同。本發(fā)明可以在基因水平上(癌變前期或癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散早期)
檢測(cè)CD326基因異常表達(dá)，在影像醫(yī)學(xué)檢査未發(fā)現(xiàn)占位性癌轉(zhuǎn)移病灶之前， 癌癥生化指標(biāo)未產(chǎn)生異常之前，亦未形成轉(zhuǎn)移腫瘤之前，能及早做到以上基因 表達(dá)異常的信息采集，給臨床癌癥病患一個(gè)真正的早期轉(zhuǎn)移診斷以及治療后轉(zhuǎn) 移復(fù)發(fā)及早預(yù)測(cè)。這樣才有可能實(shí)施癌癥的早期診斷、早期預(yù)防、早期治療， 有可能從源頭上徹底根治癌癥惡疾。

圖1是本發(fā)明實(shí)施例中癌癥病人CD326過量表達(dá)圖片。 圖2是本發(fā)明實(shí)施例中正常人CD326表達(dá)圖片。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合圖對(duì)本發(fā)明提供的一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢 測(cè)方法和應(yīng)用的具體實(shí)施方式
做詳細(xì)說明。 實(shí)施例1
一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物、增 效劑，其中，所述的雜交探針序列如SEQ IDNO. 1所示。雜交探針用 地高辛標(biāo)記。試劑盒中的其它液體和標(biāo)本組成如下
消化液100u 1/管l管/盒無色透明液體
保護(hù)液100p1/管l管/盒無色透明液體
預(yù)雜交液1300 u 1/管2管/盒無色透明液體
正義雜交液10u 1/管l管/盒無色透明液體
反義雜交液10u 1/管l管/盒無色透明液體
封閉液1000 u 1/管l管/盒無色透明液體
堿性磷酸酶抗體ly 1/管l管/盒無色透明液體
顯色劑A175u 1/管l管/盒黃色液體
顯色劑B320ii 1/管l管/盒無色透明液體
緩沖液i 10x90ml/瓶l瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液n iox80ml/瓶l瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液iii 10x20m/瓶3瓶/盒淺黃色或無色透明液體
緩沖液IV 10x90ml/瓶i瓶/盒淺黃色或無色透明液體
固定液90ml/瓶i瓶/盒無色透明液體
陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本6片/盒
上述試劑成分說明(所有試劑購(gòu)自SIGMA)
1、 消化液20mg/ml蛋白酶K， 100mg蛋白酶K，加DEPC- H20 5ml;
2、 保護(hù)液0.2g的glycine加入lml的1X緩沖液I;
3、 預(yù)雜交液IX緩沖液II 7.5ml 50 XD 3ml
10mg/ml yest t-腿750ul llmg/ml SALMON TESTES DNA 682ul 0.04M EDTA 3ml 50% formamide 15ml
4、 封閉液0.03g的bloking (購(gòu)買自羅氏公司)加入lml IX緩沖液
III;
5、 lOx緩沖液I: (PH7. 1-7. 4)
NaCl 80g
Na2HP04. 12H20 3 60g KC1 2g KH2P04 2g
加三蒸水至ll,并高壓滅菌；
6、 lOx緩沖液II: (PH7. 0) NaCl 175.3g
檸檬酸鈉88.2g HCl 幾滴
加三蒸水至ll，并高壓滅菌；
7、 緩沖液III: (PH7.9) Tris 121. lg
NaCl 87.66g HCl 60ml左右 加三蒸水至ll，并高壓滅菌；
8、 緩沖液IV:
1M Tris-HCl (PH9. 5): Tirs 121. lg加HCl 3ml左右，加水900ml，調(diào)PH 至9.5，加水至ll，并高壓滅菌；
1M NaCl: NaCl 58. 44加水至11，并高壓滅菌；
0. 5M MgCl2: 101. 65g MgCl2. 6H20加水至11，并高壓滅菌；
9、 固定液多聚甲醛40g加1X緩沖液I至11，稍加熱(約50-60度)攪 拌至溶解；
10、 顯色劑A: NBT lg加70%DMF11.44ml; 11 、 顯色劑B: BCIP lg加100%DMF30ml 。 本發(fā)明的試劑盒可以多人份使用或一人份使用。 實(shí)施例2
一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)方法及試劑盒應(yīng)用 一、標(biāo)本處理
1、用10ml的離心管，裝4. 5ml淋巴細(xì)胞分離液，再將3 ml抗凝血緩慢 加入含有淋巴細(xì)胞分離液(血淋巴細(xì)胞分離液=1:1.5)的離心管 中，2000r/min離心10 min;
2、 吸取中間層白細(xì)胞至另一離心管中，再在此管中加入約兩倍的1X緩沖液 I，混勻，1500g/min離心10 min;
3、 棄上清.沉淀加入約兩倍的1X緩沖液I，混勻，1500g/min離心10 min;
4、 棄上清，并把試管口多余的液體用擦手紙吸去。再將沉淀制成懸液，滴 在玻片上推片，自然干燥。(有條件的醫(yī)院可以用制片機(jī)制片。)3 ml血，可以 做4張片子；
5、 用40ml 4%固定液，在玻璃缸中，固定30min，再用1 X緩沖液I洗5min。 每缸可以放16片；
6、 標(biāo)本可保存在-2(TC,或繼續(xù)做實(shí)驗(yàn)。
二、將試劑盒中試劑配制成使用濃度
1、 將10X緩沖液I用三蒸水按1:10稀釋成1X緩沖液I ;
2、 將20 X緩沖液II用三蒸水按1:10稀釋成2 X緩沖液II;
按1:100稀釋成0. 2 X緩沖液II ;按1:200稀釋成0. 1 X緩沖液II;
3、 將IOX緩沖液III用三蒸水按1:10稀釋成lX緩沖液m;
4、 IOX緩沖液IV用三蒸水按1:10稀釋成X緩沖液IV (取1#， 2tt， 3#各
lOml，加水至100ml既可)。 三、實(shí)驗(yàn)歩驟
1、 取每位待檢者標(biāo)本兩張，(另外兩張留作復(fù)查用)及陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本兩張
(每次實(shí)驗(yàn)做一對(duì)陽(yáng)性對(duì)照)；
2、 在玻璃缸里加消化液(消化液100ul加1X緩沖液199. 9ml，即為使用濃 度)20 ml。 37。C水浴預(yù)熱10分鐘。放進(jìn)16張玻片，37。C處理12 min，再用1 X緩沖液I洗5min;
3、 用0. 2%的保護(hù)液(保護(hù)液lml加1 X緩沖液199ml即為使用濃度)洗10min， 三蒸水洗5min，以上過程都在玻璃缸進(jìn)行。玻片自然干燥；
4、 將玻片放入保濕盒內(nèi)，加預(yù)雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放 在42。C恒溫水浴箱中3h以上；
5、 取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)，用70%， 90%， 95%的乙醇各洗 2min ，自然干燥；
6、 將玻片放入保濕盒內(nèi)，每位病人標(biāo)本兩張， 一張加正義雜交液20ul/片， 另一張加反義雜交液20ul/片.蓋上蓋玻片，蓋緊保濕盒，放在42。C恒溫水浴 箱中16-24h;
7、 取出玻片，棄去蓋玻片，將玻片放入玻璃缸內(nèi)
在42"C恒溫水浴箱中用2X緩沖液II洗兩次，每次15min 在42X:恒溫水浴箱中用0. 2X緩沖液II洗一次，每次15min 在42X:恒溫水浴箱中用0. 1 X緩沖液II洗兩次，每次15min;
8、 用IX緩沖液III洗30s，取出玻片，自然干燥；
9、 將玻片放入保濕盒內(nèi)，加0. 5%1封閉液(lml封閉液加5mllX緩沖液I工I) 100ul/片，蓋緊保濕盒，在室溫下作用30min;
10、 取出玻片，用IX緩沖液III洗30s，自然干燥；
11、 將玻片放入保濕盒內(nèi)，加堿性磷酸酶抗體(加入1.8mllX緩沖液 ni)100ul/片，蓋緊保濕盒在室溫下作用30min;
12、 取出玻片，用IX緩沖液III洗3次，每次15min;
13、 1 X緩沖液IV洗2min，加顯色劑(顯色劑A73. 3ul，顯色劑B157. 5ul加 到30mllX緩沖液IV中，混勻)，室溫避光12h以上；
14、 用三蒸水洗5min，自然干燥，(用甘油加10%的1X緩沖液I混勻)封片 鏡檢。
四、結(jié)果判斷
在光鏡下計(jì)數(shù)100-300個(gè)細(xì)胞，計(jì)算染上紫色細(xì)胞的百分比。 陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本加反義雜交液的應(yīng)該80%以上染上紫色。 所有加正義雜交液的陰性內(nèi)對(duì)照應(yīng)無色。
癌癥病人CD326過量表達(dá)圖片見圖1。正常人CD326表達(dá)圖片見圖2。 地高辛標(biāo)記的cDNA、 RNA和寡核苷酸探針，不但探針的具有生物素標(biāo)記優(yōu) 點(diǎn)，還克服了生物素標(biāo)記的探針在原位雜交過程中受組織內(nèi)源性生物素干憂等 缺點(diǎn))，將該雜交探針與人體血液白細(xì)胞的待測(cè)RNA核酸進(jìn)行雜交，再用免疫 組化的方法顯色，在光鏡下觀察mRNA的存在和定位,根據(jù)染色的細(xì)胞數(shù)，判斷 目的基因的表達(dá)量。
本發(fā)明方法是目前常用的核酸原位雜交技術(shù)，該方法通過檢測(cè)底物細(xì)胞中 的CD326基因表達(dá)量，用來確定癌癥是否發(fā)生轉(zhuǎn)移及殘存的腫瘤干細(xì)胞，臨床 研究表明，CD326基因是腫瘤干細(xì)胞的相關(guān)抗原，因?yàn)镃D326基因在正常人中 低表達(dá)或不表達(dá)，如果CD326基因表達(dá)高，說明癌癥己經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而獲得 癌癥的診斷信息。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通 技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些 改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
SEQUENCE LISTING 〈110〉芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司
〈120〉 一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用 〈130〉 / 〈160〉 1
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〈213〉 智人(Homo sapiens) 〈400〉 1
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權(quán)利要求
1.一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒在制備檢測(cè)癌癥疾病藥物中的應(yīng)用，所述的癌癥是肺癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、子宮癌、胰腺癌或膀胱癌，所述的試劑盒包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的雜交探針 序列如SEQ ID NO. 1所示的RNA序列。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的標(biāo)記 物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的放射性核 素選自3H、 35S、 1251或32P中的一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性 標(biāo)記物選自生物素、地高辛、堿性磷酸酶、辣根過氧化酶或熒光素中的 一種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的非放射性標(biāo)記物優(yōu)選自地高辛。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的試劑盒還包括增效劑，所述的增效劑是堿性磷酸酶抗體。
8. —種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物， 其特征在于，所述的雜交探針序列如SEQ IDNO. 1所示，所述的標(biāo)記 物選自放射性核素或非放射性標(biāo)記物。
9. 一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟a、將權(quán)利要求8所述試劑盒中的雜交探針與底物中待測(cè)RNA接 觸，形成雜交復(fù)合體； b、檢測(cè)a步驟得到的雜交復(fù)合體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)方法，其特征在于a步驟中形 成雜交復(fù)合體的條件為核酸雜交的溫度為42°C;核酸雜交的時(shí)間 為16 — 24小時(shí)，所述的底物選用血液細(xì)胞標(biāo)本或組織細(xì)胞標(biāo)本。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)試劑盒，包括雜交探針、標(biāo)記物，所述的雜交探針序列如SEQ ID NO.1所示。本發(fā)明還提供了一種CD326基因的原位雜交檢測(cè)方法。另外，本發(fā)明還提供了試劑盒在制備檢測(cè)癌癥疾病藥物中的應(yīng)用，所述的癌癥是肺癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、子宮癌、胰腺癌或膀胱癌。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供的試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。本發(fā)明的檢測(cè)方法操作方便、簡(jiǎn)單，能在區(qū)級(jí)以上醫(yī)院普遍使用和推廣。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101363050SQ20081004226
公開日2009年2月11日 申請(qǐng)日期2008年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月29日
發(fā)明者張?jiān)聘? 裘建英 申請(qǐng)人:芮屈生物技術(shù)(上海)有限公司