專利名稱：還原型輔酶q10的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含羥基或氧-金屬基的化合物，尤其是涉及一種使用氧化還原酶生產(chǎn)高 純度(〉98.5%)穩(wěn)定性好的還原型輔酶Q10的方法。
背景技術(shù)：
1957年，美國威斯康辛大學的格林博士領(lǐng)導下的一個研究小組首先從牛心臟中分離了一 種黃色物質(zhì)。接著，卡爾4昌克斯博士以幾微克樣品測定了它的結(jié)構(gòu)，它就是以后幾十年里被 廣大科學工作者深入研究和廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健、食品及化妝品行業(yè)，成為給人類健康帶
來巨大好處的天然物質(zhì)即輔酶QIO (氧化型)。
輔酶Q10的發(fā)現(xiàn)被稱為營養(yǎng)研究方面的里程碑。米切爾博士因發(fā)現(xiàn)了輔酶Q10在能量產(chǎn) 品過程中的作用，獲得了 1987年的諾貝爾獎，而?？怂挂惨驗樗芯枯o酶Q10在醫(yī)藥方面 的應(yīng)用而獲美國醫(yī)藥成就的最高獎。
自發(fā)現(xiàn)輔酶Q10以來，世界各國的學者進行了廣泛深入的生理化研究，闡明了輔酶QIO 在能量代謝中的途徑和作用，證實具有以下方面的功效
輔酶Q10是人體呼吸過程電子傳遞和ATP產(chǎn)生的基本物質(zhì)，它在人體內(nèi)的含量直接決定 著人體細胞的能量水平。輔酶Q10通過自身氧化還原結(jié)構(gòu)的變化阻止生物體內(nèi)脂肪和蛋白質(zhì) 的過氧化，清除自由基；輔酶Q10通過刺激人體代謝而具有減肥作用；輔酶Q10在治療心血 疾病特別是充血性心力衰竭方面有突出的療效；輔酶Q10在治療病毒性肝炎、艾滋病、腫瘤 有一定的輔助治療效果；Q10可以有效預防心力衰竭、心率失常、中風、高心壓、動脈硬化、 肌肉萎縮、牙齦萎縮等疾??；Q10也是優(yōu)良的化妝品添加劑，具有強大的清除自由基的能力， 在皮膚的抗衰老、抗炎癥、防皺、美白等方面顯示了良好的應(yīng)用性能。
目前輔酶Q10可以通過化學合成、發(fā)酵等方面得到，生產(chǎn)技術(shù)是成熟的。
還原型輔酶Q10是近幾年提出的輔酶Q10的還原態(tài)，與輔酶Q10比較具有以下優(yōu)點
1、 還原型輔酶Q10可以增加細胞能量，因為氧化型在細胞中要還原成還原型才可以起 抗氧化作用；
2、 還原型輔酶Q10在人體中吸收率要高于氧化型的輔酶Q10;
3、 氧化型輔酶Q10和還原型輔酶Q10的抗氧化作用機理不同，氧化型輔酶Q10是在細胞內(nèi)起作用，而還原型輔酶Q10是在人體血液中直接具有抗氧化作用；
4、 還原型輔酶Q10在做藥品時，可以制備更多的新劑型，例如可以制備針劑，直接進 行靜脈滴注；
5、 氧化型輔酶Q10是黃色，而還原型輔酶Q10是白色，更容易生產(chǎn)各種形式的化妝品;
6、 與輔酶Q10比較，還原型輔酶Q10有更高的在人身體中的生物利用率，該化合物以 用作優(yōu)良食品、營養(yǎng)功能食品、保健用食品、營養(yǎng)劑、飲料、化妝品、動物藥物、治療藥物 等應(yīng)用領(lǐng)域。
正因為還原型輔酶Q10有許多優(yōu)點，所以世界范圍內(nèi)的科學家都在高度關(guān)注和研究還原 型輔酶Q10的生產(chǎn)和應(yīng)用開發(fā)。目前已公開發(fā)表的還原型輔酶Q10的專利有 中國專利CN1551864A(W02003/006412)還原型輔酶Q10的制備方法； 中國專利CN1551863A(WO2003/006410)制備還原型輔酶Q10油性產(chǎn)物的方法； 中國專利CN1861556A生產(chǎn)具有優(yōu)異處理性質(zhì)的還原型輔酶Q10晶體的方法； 中國專利CN1527807A(WO2003/006408)利用防氧化效果高的溶劑生產(chǎn)還原型輔酶QIO 的方法；
中國專利CN1723181A(WO2004/063131)純化還原型輔酶Q10的方法；
中國專利CN1599603A(WO2003/032967)還原型輔酶Q10的穩(wěn)定方法；
中國專利CN1620413A(W02003/062182)還原型輔酶QIO的穩(wěn)定方法和組合物；
中國專利CN1525951A(W02003/008363)還原型輔酶Q10D的穩(wěn)定方法及酸性結(jié)晶方法；
中國專利CN101087598A(WO2006/075502)含有還原型輔酶Q10的固體制劑及其制造方
法；
中國專利CN1849287A(WO2005/033054)穩(wěn)定性優(yōu)異的還原型輔酶Q10結(jié)晶及含有還原 型輔酶Q10結(jié)晶的組合物。
以上公開的專利申請采用的共同技術(shù)路線是以高純度輔酶Q10為原料，用不同的類型的 溶劑溶解，采用化學法把輔酶Q10還原成還原型輔酶Q10，再采用不同的技術(shù)進行純化、結(jié) 晶生產(chǎn)性能穩(wěn)定的還原型輔酶QIO。這些專利的生產(chǎn)方法存在的共同缺點是在還原時要加 入化學化合物，而這些化合物對產(chǎn)品的品質(zhì)產(chǎn)生影響，需要通過復雜的方法把這些化合物去 掉，并進行不斷的純化，因而造成生產(chǎn)工藝復雜，生產(chǎn)成本高，產(chǎn)品穩(wěn)定性差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有的在制備還原型輔酶QIO的方法中所存在的需要在還原時加入 化學化合物，而這些化合物對產(chǎn)品的品質(zhì)產(chǎn)生影響，需要通過復雜的方法把這些化合物去掉，并進行不斷的純化，因而造成生產(chǎn)工藝復雜、生產(chǎn)成本高、產(chǎn)品穩(wěn)定性差等問題，提供一種 改進的還原型輔酶Q10的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是使用氧化還原酶的生物技術(shù)。氧化還原酶(oxidordeuctase)是能催 化兩分子間發(fā)生氧化還原作用的酶的總稱。其中氧化酶(oxidase; oxydase)能催化物質(zhì)被氧 氣所氧化的作用，脫氫酶(dehydrogenase)能催化從物質(zhì)分子脫去氫的作用，主要是存在與 細胞中。氧化還原酶催化底物的氧化或還原，反應(yīng)時需要電子供體或受體，因此在反應(yīng)時添 加必要的催化劑。
本發(fā)明包括以下步驟
1 )將純度大于99%的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A，混合溶劑用溶劑和水配制，
溶解輔酶Qio時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑輔酶010= (4 30) :i;
2)將步驟1)所得的產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物八體積=(0.5 1) /100的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾 濃縮結(jié)晶，即可得到高純度、性能穩(wěn)定的還原型輔酶Q10產(chǎn)品。
在步驟1)中，溶劑最好選自乙醇、丙酮、乙酸乙酯、已垸、環(huán)己烷、石油醚等中的至 少一種，優(yōu)選丙酮、乙醇中的至少一種；按體積比混合溶劑中水的含量最好為0% 2%,優(yōu) 選0.15% 1%;溶解的溫度可為40 10(TC，優(yōu)選40 60'C;所述溶解最好在氮氣保護下進 行。
在步驟2)中，攪拌的溫度最好為40 5(TC，攪拌的時間最好為8 28h，攪拌的速度最 好為30 90rpm/min;所述超濾可分為二級，第一級采用聚丙烯腈膜，孔徑為1 5pm;第二 級采用聚丙烯腈膜，孔徑為0.001 0.02pm，通過二級超濾可以將含有還原型輔酶Q10的溶 液中殘留的酶及微小的不溶雜質(zhì)全部排除；所述濃縮是將含有還原型輔酶QIO的溶液濃縮到 溶液中還原型輔酶Q10的濃度為質(zhì)量百分比5% 10%;所述結(jié)晶是將濃縮后的溶液在5 26。C的條件下，結(jié)晶6 24h，晶體在40 45'C下真空干燥4 10h，即得高純性能優(yōu)良的還 原型輔酶Q10;所述反應(yīng)最好用99.9%氮氣充入反應(yīng)器內(nèi)保護下進行，盡可能減少與空氣的 接觸；氧化還原酶可選自EC1丄1氧化還原酶或EC1.2.1氧化還原酶等，優(yōu)選EC1.2.1氧化還 原酶(定義為輔酶Q10氧化還原酶)。EC1丄1氧化還原酶可選自氫或電子受體為醇、NAD 或NADP的氧化還原酶，EC1.2.1氧化還原酶可選自氫或電子受體為醛或酮基、NAD或NADP 的氧化還原酶。
為了提高酶氧化還原反應(yīng)的速度，可在步驟2)的反應(yīng)(氧化還原反應(yīng))中加入催化劑， 催化劑最好選自金屬離子、酸堿化合物或輔酶等，金屬離子選自Fe2+、 Fe3+、 Cu2+、 Co3+、 Na+、K+、 Mg2+、 Ca^等中的一種；酸堿化合物選自有機酸、無機酸或無機堿，優(yōu)選乙酸、抗壞血 酸、鹽酸和碳酸鈉，更優(yōu)選抗壞血酸；輔酶選自煙酰胺泉嘌呤二核苷酸(NAD)、煙酰胺泉嘌 呤二核苷酸磷酸(NADP)、黃素單核苷酸(FMN)、黃素泉嘌呤二核苷酸(FAD)等中的一 種，優(yōu)選煙酰胺泉嘌呤二核苷酸或煙酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸。
在傳統(tǒng)的概念中酶是催化水溶性底物的反應(yīng)，在有機溶劑中不僅不能反應(yīng)，還會引起酶 蛋白的變化，但實驗證明，這種概念是片面的，許多酶在無水或含微水(<2%)的有機溶劑 中，酶不僅能催化特殊反應(yīng)，而且穩(wěn)定性會顯著提高，由于介質(zhì)的改變，使酶具備了不少水 相中所不具備的特點，如有利于疏水底物的反應(yīng)，能明顯提高酶的熱穩(wěn)定性，能催化在水中
不能進行的反應(yīng)，能改變反應(yīng)的平衡點，提高酶的專一性，易于實現(xiàn)固定化，產(chǎn)品容易回收 等優(yōu)點。
與輔酶Q10比較，還原型輔酶Q10有更高的在人身體中的生物利用率，該化合物可以用 作優(yōu)良食品、營養(yǎng)功能食品、保健用食品、營養(yǎng)劑、飲料、化妝品、動物藥物、治療藥物等 應(yīng)用領(lǐng)域。
具體實施例方式
以下實施例將進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但這些實施例絕不限定本發(fā)明的保護范圍。
輔酶Q10/還原型輔酶Q10的HPLC分析方法
柱SYMMETRY C18(250x4.6讓)；
流動相C2H5OH : CH3OH=4 :3 (v/v);
檢測波長210nm;
流速lml/min;
柱溫30。C。
實施例1
取50g 99.3%的輔酶QIO，在40'C的條件下溶于500ml含去離子0.6%的已垸中，倒入 1000ml的三口反應(yīng)瓶中。加入輔酶Q10氧化還原酶3g，再加入5ml含有l(wèi)g抗壞血酸的去離 子水，充99.9%的氮氣保護，溫度保持在45 50°C，攪拌進行氧化還原反應(yīng)，攪拌速度 180rpm/min，反應(yīng)18h至溶液透明無色停止反應(yīng)。把反應(yīng)完成后的溶液真空抽入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶 中，在40 45。C時的條件下，真空蒸餾已垸，待己烷全部蒸出后，真空抽入無水乙醇1000ml 并加熱至6(TC，保溫用0.02pm的聚丙烯腈膜過濾溶液，濾液放入2000ml的三角瓶中，充氮 氣并密封瓶口，自然降溫至20 25°C，結(jié)晶8h，過濾晶體，晶體在40 45'C的條件下真空 干燥8h,即得45.6g還原型輔酶QIO， HPLC檢測純度為99.2%。
7實施例2
取50g 99.3%的輔酶QIO，在5(TC的條件下溶于900ml含去離子水1%的丙酮中，倒入 2000ml的三口反應(yīng)瓶中，加入乙酸10ml，加入輔酶Q10氧化還原酶4g，充99.9%的氮氣保 護，溫度保持在45 50'C，攪拌進行氧化還原反應(yīng)，攪拌速度180rpm/min，反應(yīng)18h至溶液 透明無色停止反應(yīng)。把反應(yīng)完成后的溶液保溫45 5(TC，用孔徑0.02nm聚丙烯腈膜過濾溶 液，濾液放入2000ml的三角瓶中充氮氣并密封瓶口，自然降溫至室溫并再降溫至IO'C,結(jié)晶 24h。過濾晶體，晶體在40 45t的條件下真空干燥8h,即得43.1g還原型輔酶Q10, HPLC 檢測純度為99.3%。
實施例3
取50g 99.3%的輔酶QIO，在60。C條件下溶于1000ml含去離子水1%的無水乙醇中，倒 入2000ml的三口反應(yīng)瓶中，加入5ml含有l(wèi)g抗壞血酸的去離子，加入輔酶Q10氧化還原酶 4g，充99.9%的氮氣保護，溫度保護在45 50'C，攪拌進行氧化還原反應(yīng)，攪拌速度180rpm/ 分，反應(yīng)20h至溶液透明無色停止反應(yīng)。把反應(yīng)完成后的溶液保溫45 5(TC用孔徑0.02jim 聚丙烯腈膜過濾溶液，濾液放入2000ml的三角瓶中，充氮氣并密封瓶口，自然降溫至20 25'C,結(jié)晶8h。過濾晶體，晶體在40 45'C時的條件下真空干燥8h，即得44.3g還原型輔酶 QIO， HPLC檢測純度為99.3%。
實施例4
1) 將純度大于99"/D的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A,混合溶劑用溶劑和水配制， 溶解輔酶Q10時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑輔酶QIO-IO : 1;溶劑為乙 醇，按體積比混合溶劑中水的含量為0.15%，溶解的溫度為6(TC，所述溶解在氮氣保護下進 行。
2) 將步驟1)所得的產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物A體積=0.3/100 的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾濃縮結(jié)晶， 即可得到高純度、性能穩(wěn)定的還原型輔酶Q10產(chǎn)品。攪拌的溫度為45t:，攪拌的時間為10h， 攪拌的速度為90rpm/min;超濾分為二級，第一級采用聚丙烯腈膜，孔徑為3jim;第二級采 用聚丙烯腈膜，孔徑為0.005pm，通過二級超濾將含有還原型輔酶Q10的溶液中殘留的酶及 微小的不溶雜質(zhì)全部排除；濃縮是將含有還原型輔酶Q10的溶液濃縮到溶液中還原型輔酶 Q10的濃度為質(zhì)量百分比7。/。；所述結(jié)晶是將濃縮后的溶液在2(TC的條件下，結(jié)晶6h，晶體 在4(TC下真空干燥10h，即得高純性能優(yōu)良的還原型輔酶Q10;反應(yīng)用99.9%氮氣充入反應(yīng) 器內(nèi)保護下進行，盡可能減少與空氣的接觸；氧化還原酶為EC1.2.1氧化還原酶(定義為輔 酶Q10氧化還原酶)。實施例5
1) 將純度大于99M的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A，混合溶劑用溶劑和水配制， 溶解輔酶QIO時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑輔酶Q10-20 : 1;溶劑為丙 酮，按體積比混合溶劑中水的含量為2%，溶解的溫度為40'C，溶解在氮氣保護下進行。
2) 將步驟1)所得的產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物A體積-0.5/100 的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾濃縮結(jié)晶， 即可得到高純度、性能穩(wěn)定的還原型輔酶Q10產(chǎn)品。攪拌的溫度為43。C，攪拌的時間為28h， 攪拌的速度為30rpm/min;所述超濾分為二級，第一級采用聚丙烯腈膜，孔徑為lpm;第二 級采用聚丙烯腈膜，孔徑為0.001pm，通過二級超濾將含有還原型輔酶Q10的溶液中殘留的 酶及微小的不溶雜質(zhì)全部排除；濃縮是將含有還原型輔酶QIO的溶液濃縮到溶液中還原型輔 酶Q10的濃度為質(zhì)量百分比8%;結(jié)晶是將濃縮后的溶液在l(TC的條件下，結(jié)晶10h，晶體 在43'C下真空干燥8h，即得高純性能優(yōu)良的還原型輔酶Q10;反應(yīng)用99.9%氮氣充入反應(yīng)器 內(nèi)保護下進行，盡可能減少與空氣的接觸；氧化還原酶為EC1.2.1氧化還原酶。
實施例6
1) 將純度大于99n/。的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A，混合溶劑用溶劑和水配制， 溶解輔酶Q10時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑輔酶Q10=4 : 1;溶劑為乙 酸乙酯或巳垸，按體積比混合溶劑中水的含量為1%;溶解的溫度為8(TC，溶解在氮氣保護 下進行。
2) 將步驟1)所得的產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物A體積-0.7/100 的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾濃縮結(jié)晶， 即可得到高純度、性能穩(wěn)定的還原型輔酶Q10產(chǎn)品。攪拌的溫度為47'C，攪拌的時間為15h， 攪拌的速度為80rpm/min;超濾分為二級，第一級采用聚丙烯腈膜，孔徑為2pm;第二級采 用聚丙烯腈膜，孔徑為0.01pm，通過二級超濾將含有還原型輔酶Q10的溶液中殘留的酶及微 小的不溶雜質(zhì)全部排除；濃縮是將含有還原型輔酶Q10的溶液濃縮到溶液中還原型輔酶Q10 的濃度為質(zhì)量百分比5%;結(jié)晶是將濃縮后的溶液在5'C的條件下，結(jié)晶24h，晶體在42'C下 真空干7h，即得高純性能優(yōu)良的還原型輔酶Q10;反應(yīng)用99.9%氮氣充入反應(yīng)器內(nèi)保護下進 行，盡可能減少與空氣的接觸；氧化還原酶為氫或電子受體為醇的氧化還原酶。
實施例7
1)將純度大于99。/。的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A,混合溶劑用溶劑和水配制， 溶解輔酶Q10時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑輔酶Q10-30 : 1;溶劑為環(huán) 已烷，按體積比混合溶劑中水的含量為0.5%;溶解的溫度為45'C，溶解在氮氣保護下進行。2)將步驟1)所得的產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物A體積=0.8/100 的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾濃縮結(jié)晶， 即可得到高純度、性能穩(wěn)定的還原型輔酶QIO產(chǎn)品。攪拌的溫度為40'C，攪拌的時間為20， 攪拌的速度為50rpm/min;超濾分為二級，第一級采用聚丙烯腈膜，孔徑為第二級采 用聚丙烯腈膜，孔徑為0.015pm，通過二級超濾將含有還原型輔酶Q10的溶液中殘留的酶及 微小的不溶雜質(zhì)全部排除；所述濃縮是將含有還原型輔酶QIO的溶液濃縮到溶液中還原型輔 酶Q10的濃度為質(zhì)量百分比6%;結(jié)晶是將濃縮后的溶液在15'C的條件下，結(jié)晶15h，晶體 在44t下真空干燥5h，即得高純性能優(yōu)良的還原型輔酶Q10;反應(yīng)用99.9%氮氣充入反應(yīng)器 內(nèi)保護下進行，盡可能減少與空氣的接觸；氧化還原酶為氫或電子受體為醛或NAD的氧化 還原酶。
實施例8
1) 將純度大于99e/。的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A，混合溶劑用溶劑和水配制， 溶解輔酶Q10時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑輔酶Q1CN15 : 1;溶劑為石 油醚，按體積比混合溶劑中水的含量為0.8%;溶解的溫度為10(TC，溶解在氮氣保護下進行。
2) 將步驟l)所得的產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物A體積=1/100 的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾濃縮結(jié)晶， 即可得到高純度、性能穩(wěn)定的還原型輔酶Q10產(chǎn)品。攪拌的溫度為50'C，攪拌的時間為8h， 攪拌的速度為60rpm/min;超濾分為二級，第一級采用聚丙烯腈膜，孔徑為5nm;第二級采 用聚丙烯腈膜，孔徑為0.02nm，通過二級超濾將含有還原型輔酶Q10的溶液中殘留的酶及微 小的不溶雜質(zhì)全部排除；濃縮是將含有還原型輔酶Q10的溶液濃縮到溶液中還原型輔酶Q10 的濃度為質(zhì)量百分比10%;結(jié)晶是將濃縮后的溶液在26'C的條件下，結(jié)晶20h,晶體在45'C 下真空干燥4h，即得高純性能優(yōu)良的還原型輔酶Q10;反應(yīng)用99.9%氮氣充入反應(yīng)器內(nèi)保護 下進行，盡可能減少與空氣的接觸；氧化還原酶為氫或電子受體為醛或NADP的氧化還原酶。
實施例9
與實施例1類似，其區(qū)別在于為了提高酶氧化還原反應(yīng)的速度，在氧化還原反應(yīng)中加入 催化劑，催化劑為金屬離子、酸堿化合物或輔酶等，金屬離子選自F^+、 Fe3+、 Cu2+、 Co3+、 Na+、 K+、 Mg2+、 Ca^等中的一種；酸堿化合物選自有機酸、無機酸或無機堿，優(yōu)選乙酸、抗 壞血酸、鹽酸和碳酸鈉，更優(yōu)選抗壞血酸；輔酶選自煙酰胺泉嘌呤二核苷酸(NAD)、煙酰胺 泉嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、黃素單核苷酸(FMN)、黃素泉嘌呤二核苷酸(FAD)等中 的一種，優(yōu)選煙酰胺泉嘌呤二核苷酸或煙酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸。
10
權(quán)利要求
1. 還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將純度大于99％的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A，混合溶劑用溶劑和水配制，溶解輔酶Q10時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑∶輔酶Q10＝4～30∶1；2)將步驟1)所得的產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物A體積＝0.5～1/100的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾濃縮結(jié)晶，即得還原型輔酶Q10產(chǎn)品。
2. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟l)中，溶劑選 自乙醇、丙酮、乙酸乙酯、已垸、環(huán)已垸、石油醚中的至少一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟l)中，按體積 比混合溶劑中水的含量為0% 2%。
4. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟l)中，溶解的 溫度為40 10(TC;所述溶解在氮氣保護下進行。
5. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟2)中，攪拌的 溫度為40 5(TC，攪拌的時間為8 28h，攪拌的速度為30 90rpm/min。
6. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟2)中所述超濾 分為二級，第一級采用聚丙烯腈膜，孔徑為1 5pm;第二級采用聚丙烯腈膜，孔徑為0.001 0.02拜。
7. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述濃 縮是將含有還原型輔酶Q10的溶液濃縮到溶液中還原型輔酶Q10的濃度為質(zhì)量百分比5% 10%。
8. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述結(jié) 晶是將濃縮后的溶液在5 26'C的條件下，結(jié)晶6 24h，晶體在40 45'C下真空干燥4 10h。
9. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟2)中，氧化還 原酶選自EC1丄1氧化還原酶或EC1.2.1氧化還原酶，EC1丄1氧化還原酶選自氫或電子受體 為醇、NAD或NADP的氧化還原酶，EC1.2.1氧化還原酶選自氫或電子受體為醛或酮基、NAD 或NADP的氧化還原酶。
10. 如權(quán)利要求1所述的還原型輔酶Q10的制備方法，其特征在于在步驟2)的反應(yīng)中 加入催化劑，催化劑選自金屬離子、酸堿化合物或輔酶，金屬離子選自Fe2+、 Fe3+、 Cu2+、N+ K+ Mg2+ c^+中的一種；酸堿化合物選自有機酸、無機酸或無機堿；輔酶選自煙o酰胺泉嘌呤:蹄酸、煙酰胺泉嘌呤二核苷酸磷酸、黃素單核苷酸、黃素泉嘌呤二核苷酸 中的一種。
全文摘要
還原型輔酶Q10的制備方法，涉及一種含羥基或氧-金屬基的化合物，尤其是涉及一種使用氧化還原酶生產(chǎn)高純度(＞98.5％)穩(wěn)定性好的還原型輔酶Q10的方法。提供一種改進的還原型輔酶Q10的制備方法。將純度大于99％的輔酶Q10用混合溶劑溶解，得產(chǎn)物A，混合溶劑用溶劑和水配制，溶解輔酶Q10時，按體積/質(zhì)量比，混合溶劑的用量為混合溶劑∶輔酶Q10＝4～30∶1；將產(chǎn)物A倒入反應(yīng)器中，將氧化還原酶按酶質(zhì)量/產(chǎn)物A體積＝0.5～1/100的比例加入產(chǎn)物A中，攪拌，反應(yīng)完成后，將含有還原型輔酶Q10的溶液進行超濾濃縮結(jié)晶，即可得到高純度、性能穩(wěn)定的還原型輔酶Q10產(chǎn)品。
文檔編號C12P7/66GK101434971SQ200810072369
公開日2009年5月20日 申請日期2008年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月12日
發(fā)明者周贊興, 張水陸, 朱法科, 林木榮 申請人:廈門金達威維生素股份有限公司