專利名稱:改良羅氏快速培養(yǎng)基及其制備方法
技術領域:
本發(fā)明涉及一種改良羅氏快速培養(yǎng)基,還涉及一種培養(yǎng)基的制 備方法。
技術背景目前我國普遍使用一種被稱之為"羅氏培養(yǎng)基"的固體結核菌 培養(yǎng)基來對結核菌進行體外人工分離培養(yǎng),這些記載在福州部隊總醫(yī)院編、朱忠勇、陳之航主編、上??茖W技術出版社1978年4月 出版的《臨床醫(yī)學檢驗》第454頁上。由于現(xiàn)有的固體結核菌培養(yǎng) 基均是靠各醫(yī)院去配制而無現(xiàn)成產(chǎn)品可購,這就需要院方單獨為此 添置一套相應的生產(chǎn)設備,既加大了醫(yī)院的設備開支,又相應增加 了配制工作量。經(jīng)檢索中國專利,專利申請?zhí)?8 1 10068其技術 方案是由基礎物質(zhì)、能量物質(zhì)、植物生長刺激物質(zhì)混合配制而成, 基礎物質(zhì)中有磷酸二氫鉀、硫酸鎂(MgS0 。
7HZo )、構榜酸鎂、 檸檬酸鐵按、天門冬酞胺、中性甘油、馬鈴薯粉、新鮮雞蛋液、2 % 孔雀綠水溶液、水、動物血清,能量物質(zhì)中有輔酶A 、三磷酸腺昔、 細胞色素丙,植物生長刺激物質(zhì)中有Q—蔡乙酸,每1000克結核 菌快速培養(yǎng)基中各組分的含量為磷酸二氫鉀1.36 1.4克、新鮮 雞蛋液560 600克、硫酸鎂0. 136 0. 14克2 %孔雀綠水溶液 11 13克構榜酸鎂0.3 0.4克水300 340克檸檬酸鐵錢 0.028 0.03克動物血清56 60克天門冬酞胺2.06 2. 1克輔 酶A0.4 0.8克中性甘油6 8克三磷酸腺昔0.04 0. 08克馬鈴薯粉17 17. 5克細胞色素丙0. 045 0. 075克。 一蔡乙酸0. 05 0. 1毫克。其步驟是A、制糊將17 17. 5克的馬鈴薯粉加150 170克水后,置于沸水浴中加熱,時加攪拌,使成均勻糊狀,自然降 至室溫后備用;B、混合調(diào)配將1.36 1.4克的磷酸二氫鉀、 0. 136 0. 14克的硫酸鎂、0.3 0.4克的構棟酸鎂、0. 028 0. 03克 的檸檬酸鐵錢、2.06 2. 1克的天門冬酞胺、6 8克的中性甘油加 150 170克水后,置于沸水浴中加熱溶解,待冷至50 。C以下時, 加入560 600克的新鮮雞蛋液、56 60克的動物血清、0. 4 0. 8 克的輔酶A、 0.04 0.08克的三磷酸腺昔、0.045 0.075克細胞 色素丙、0.05 0. 1毫克的Q —蔡乙酸,充分攪拌均勻后,再加入 167 187.5克的馬鈴薯粉及11 一 13克的2 %孔雀綠水溶液, 并經(jīng)充分攪勻后得1000克混合物;C 、分裝及密封;將混合物分 裝于大試管中,每管分裝5克,置成長斜面后,熔封;D 、滅菌; 采用血清凝固器對大試管進行滅菌,滅菌條件為頭日,85 °C , 30分鐘;次日,80°C , 30分鐘;第三是,80 。C , 30分鐘。 由以上所述可知,固體結核菌培養(yǎng)基的現(xiàn)有配制過程較為復雜和麻 煩,故醫(yī)院只能根據(jù)近期內(nèi)固體結核菌培養(yǎng)基的大致用量予先配制 一些備用,但是,全國幾千家醫(yī)院各自分散配制的固體結核菌培養(yǎng) 基,均存在著質(zhì)量標準不一致、成品率不高、不易長期貯存及貯存 期稍長因水份散失、藥物分解而使檢測結果不準的缺陷。臨床檢測是發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有的結核菌培養(yǎng)基存在以下缺陷1 、由于現(xiàn)有的固體結 核培養(yǎng)基保藏在大試管中,管口用橡皮塞塞緊,故該培養(yǎng)基被密封的程度較差,其內(nèi)的水份易散失,以至該培養(yǎng)基的貯藏期很短(僅3個月),這樣便不能通過工業(yè)化生產(chǎn)手其培養(yǎng)基中需有多種營養(yǎng)物 質(zhì),而如上所述可知,現(xiàn)有的固體結核菌培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的種類 少,另外其內(nèi)也沒有能加快結核菌新陳代謝活動以提高結核菌生長 繁殖速度的能量物質(zhì)和植物生長刺激物質(zhì),這樣使得結核菌在現(xiàn)有 的固體結核菌培養(yǎng)基中不能進行很好地生長繁殖,分裂周期長達12 16小時,要4 6周方能看到菌落。3 、有些液體培養(yǎng)基配方 復雜,方法繁瑣,羅氏培養(yǎng)基需35天。因此,使用現(xiàn)有的結核菌 培養(yǎng)基來對結核菌進行體外人工分離培養(yǎng)時,其檢測速度相當慢, 陽性檢出率低,不利于結核病的早期診斷和治療。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種簡單,實現(xiàn)快速培養(yǎng)結核桿菌培養(yǎng) 基,解決了臨床早期診斷及有效地治療的問題。本發(fā)明的另一目的是提供了一種方法易行,操作方便的一種改 良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法。為了達到上述目的,本發(fā)明采用以下技術措施一種改良羅氏快速培養(yǎng)基,它由下述重量配比的原料制成的培 養(yǎng)基磷酸二氫鉀(無水)0.96g,天門冬素(天門冬酰胺)0.27g, 枸櫞酸0.21g,硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0.084g,純甘油(中性) 4. 2ml, 2. 4 — 二氯苯氧乙酸鈉0. lg, 6 —糠氨基嘌呤 0. lg,蒸餾水120 ml,馬鈴薯粉0. 6g,新鮮雞蛋3-4個,10g/L的孔 雀綠溶液8 ml。一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法,該方法包括下列步驟A、 將"磷酸二氫鉀(無水)0.96g,天門冬素(天門冬酰胺) 0. 27g,枸櫞酸鎂0. 21g,硫酸鎂(MgS04、 7H20)0. 084g,純甘油(中 性4. 2ml, 2. 4 — 二氯苯氧乙酸鈉0. lg, 6 —糠氨基嘌呤 0. lg和蒸餾水120ml,"的各成份混合,置沸水中加熱溶解;B、 加入馬鈴薯粉,邊加邊攪拌,注意勿結成塊,并繼續(xù)在沸水 浴中加熱半小時,時加攪拌;C、 待冷至65'C時加入全蛋液200ml及10g/L孔雀綠溶液8ml,充 分混勻。D、 分裝無菌試管,每管約5 6ml,塞上塞;E、 置血清凝固器內(nèi)制成斜面,經(jīng)90。C1小時或高壓(103. 43kpa),滅菌20分鐘后,再作無菌試驗后備用。一種改良羅氏快速培養(yǎng)基,所述的本培養(yǎng)基ra為6. 0左右;一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的使用方法,該方法包括下列步驟把前處理好的標本直接接種2 3滴,蓋滿斜面,經(jīng)37。C培養(yǎng),每天觀查生長情況。約二 三天就可見到針尖樣細小菌落,六 七天就可見到成形菌落,七 十四天就可見到豐滿的菌落。即可做菌型鑒定和藥敏試驗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比,具有以下優(yōu)點和效果,配方合理,方 法易行,操作方便,檢測快速、準確可靠,價格低廉,通過臨床實 驗證明,尤其適用于基層醫(yī)院,具有良好的社會和經(jīng)濟效益。
具體實施方式
一種改良羅氏快速培養(yǎng)基,它由下述重量配比的原料制成的培養(yǎng)基磷酸二氫鉀(無水)0.96g,天門冬素(天門冬酰胺)0.27g, 枸櫞酸鎂0.21g,硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0.084g,純甘油(中性) 4.2ml,2.4—二氯苯氧乙酸鈉0. lg,6—糠氨基嘌呤0. lg,蒸餾水 120 ml,馬鈴薯粉0. 6g,新鮮雞3-4個,10g/L的孔雀綠溶液8 ml; 一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法,該方法包括下列步驟A、 將"磷酸二氫鉀(無水)0.96g,天門冬素(天門冬酰胺) 0.27g,枸櫞酸鎂0. 21g,硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0. 084g,純甘油(中性)4. 2ml, 2. 4—二氯苯氧乙酸鈉O. lg, 6—糠氨基嘌吟 0. lg和蒸餾水120ml"的各成分混合,置沸水中加熱溶解;B、 加入馬鈴薯粉,邊加邊攪拌,注意勿結成塊,并繼續(xù)在沸水 浴中加熱半小時,時加攪拌;C、 待冷至65。C時加入全蛋液200ml及10g/L孔雀綠溶液8ml,充 分混勻。D、 分裝無菌試管,每管約5 6ml,塞上塞;E、 置血清凝固器內(nèi)制成斜面,經(jīng)9(TC1小時或高壓(103. 43kpa),滅菌20分鐘后,再作無菌試驗后備用。一種改良羅氏快速培養(yǎng)基,所述的本培養(yǎng)基PH為6. 0左右;一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的使用方法,該方法包括下列步驟把前處理好的標本直接接種2 3滴,蓋滿斜面,經(jīng)37"C培養(yǎng),每天觀査生長情況。約二 三天就可見到針尖樣細小菌落,六 七天就可見 到成形菌落,七 十四天就可見到豐滿的菌落。即可做菌型鑒定和 藥敏試驗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比,具有以下優(yōu)點和效果,配方合理,方 法易行,操作方便,檢測快速、準確可靠,價格低廉,通過臨床實 驗證明,尤其適用于基層醫(yī)院,具有良好的社會和經(jīng)濟效益。
權利要求
1. 一種改良羅氏快速培養(yǎng)基,其特征在于它由下述重量配比的原料制成的培養(yǎng)基磷酸二氫鉀(無水)0.96g,天門冬素(天門冬酰胺)0.27g,枸櫞酸鎂0.21g,硫酸鎂(MgSO4、7H2O)0.084g,純甘油(中性)4.2ml,2.4-二氯苯氧乙酸鈉0.1g,6-糠氨基嘌呤0.1g,蒸餾水120ml,馬鈴薯粉0.6g,新鮮雞蛋3-4個,10g/L的孔雀綠溶液8ml。
2 、一種實現(xiàn)權利要求1所述的一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的制備方法,其特征在于該方法包括下列步驟A、 將"磷酸二氫鉀(無水)0.96g,天門冬素(天門冬酰胺) 0. 27g,枸櫞酸鎂0. 21g,硫酸鎂(MgS04、 7H20) 0. 084g,純甘油(中 性4. 2ml, 2. 4 — 二氯苯氧乙酸鈉0. lg, 6 —糠氨基嘌呤 0.1g和蒸餾水120 ml"的各成份混合,置沸水中加熱溶解;B、 加入馬鈴薯粉,邊加邊攪拌,注意勿結成塊,并繼續(xù)在沸水 浴中加熱半小時,時加攪拌;C、 待冷至65r時加入全蛋液200ml及10g/L孔雀綠溶液8ml,充分混勻;D、 分裝無菌試管,每管約5 6ml,塞上塞;E、 置血清凝固器內(nèi)制成斜面,經(jīng)9(TC1小時或高壓(103. 43kpa), 滅菌20分鐘后,再作無菌試驗后備用。
3、根據(jù)權利要求1所述的一種改良羅氏快速培養(yǎng)基,其特征在于所述的本培養(yǎng)基ra為6. 0左右。
4、 一種實現(xiàn)權利要求1所述的一種改良羅氏快速培養(yǎng)基的方法,其特征在于該方法包括下列步驟把前處理好的標本直接接種2 3滴,蓋滿斜面,經(jīng)37'C培養(yǎng),每天觀査生長情況。約二 三天就可見到針尖樣細小菌落,六 七天就可見到成形菌落,七 十四天 就可見到豐滿的菌落。即可做菌型鑒定和藥敏試驗。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種改良羅氏快速培養(yǎng)基及其制備方法一、由下述原料制成的培養(yǎng)基基礎液(磷酸二氫鉀,天門冬素,枸櫞酸鎂,硫酸鎂,純甘油,2.4-二氯苯氧乙酸鈉,6-糠氨基嘌呤和蒸餾水)、馬鈴薯粉、新鮮雞蛋和孔雀綠溶液。二、培養(yǎng)基的制備方法,該方法包括下列步驟A、將“基礎液”的各成份混合,置沸水中加熱溶解;B、加入馬鈴薯粉,邊加邊攪拌,注意勿結成塊,并繼續(xù)在沸水浴中加熱半小時,時加攪拌;C、待冷至65℃時加入全蛋液及孔雀綠溶液,充分混勻;D、用無菌試管分裝,塞上塞;E、置血清凝固器內(nèi)制成斜面,經(jīng)90℃1小時或高壓20分鐘,滅菌,再作無菌試驗后備用。
文檔編號C12Q1/04GK101280337SQ20081009981
公開日2008年10月8日 申請日期2008年5月25日 優(yōu)先權日2008年5月25日
發(fā)明者劉照云 申請人:深圳市伯勞特生物制品有限公司