專(zhuān)利名稱(chēng)：：凸腹真桿菌和兩形真桿菌制劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及凸腹真桿菌和兩形真桿菌制劑及其應(yīng)用，具體涉及凸腹真桿菌和兩形真桿菌單獨(dú)或組合作為主要活性成份制成微生態(tài)制劑，及該微生態(tài)制劑在治療相關(guān)疾病中的應(yīng)用，屬于生物藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：目前，抗菌藥在臨床和養(yǎng)殖業(yè)等方面濫用的危害已引起重視，由于微生態(tài)制劑沒(méi)有副作用，利用微生態(tài)制劑治療相關(guān)疾病、保健及作為獸藥和詞料添加劑已得到廣泛應(yīng)用。目前的微生態(tài)制劑主要成份包括雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等，治療相關(guān)疾病療效不是非常理想。丁酸(酪酸)已經(jīng)被證實(shí)是結(jié)腸能量的首選來(lái)源，提供腸粘膜70%的能量，促進(jìn)腸粘膜細(xì)胞增殖生長(zhǎng)及消化系統(tǒng)發(fā)育成熟，同時(shí)丁酸也是調(diào)節(jié)免疫的重要物質(zhì)。本發(fā)明微生態(tài)制劑進(jìn)入腸道由于能夠分泌大量酪酸，治療相關(guān)疾病療效顯著，并可作為保健品、獸藥和伺料添加劑應(yīng)用，社會(huì)意義巨大，且未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道，特申請(qǐng)此發(fā)明專(zhuān)利。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種新型的微生態(tài)制劑，該微生態(tài)制劑中的主要活性成份進(jìn)入腸道能產(chǎn)生大量丁酸，修復(fù)腸粘膜，調(diào)節(jié)免疫，抑制炎癥因子過(guò)度表達(dá)，同時(shí)該微生態(tài)制劑還能恢復(fù)腸道菌群平衡和提高機(jī)體及粘膜免疫，有效治療消化系統(tǒng)疾病、營(yíng)養(yǎng)吸收障礙性疾病、自身免疫性疾病、心腦血管疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、手足口病及提高免疫和抗癌。其中所述消化系統(tǒng)疾病包括腹瀉、腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、抗生素相關(guān)性腹瀉、偽膜性腸炎、小兒肺炎繼發(fā)性腹瀉、腸癌、腫瘤放化療輔助治療、腹脹和消化不良、便秘、便臭、便臭中毒綜合征、肝膽疾病、病毒性腹瀉、喂養(yǎng)不耐受、壞死性小腸結(jié)腸炎、黃疸、口腔漬瘍、鵝口瘡、促進(jìn)小兒腸道發(fā)育成熟、促進(jìn)消化吸收、營(yíng)養(yǎng)保健和生長(zhǎng)發(fā)育；所述營(yíng)養(yǎng)吸收障礙性疾病包括佝僂病；所述自身免疫性疾病包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎；所述心腦血管疾病包括高脂血癥、高血壓、腦血栓、腦栓塞、腦缺血、心肌梗塞、冠心病、腦梗死、腦出血、心絞痛、心肌炎、動(dòng)脈粥樣硬化；所述變態(tài)反應(yīng)性疾病包括濕疹；所述提高免疫包括治療反復(fù)呼吸道感染。本發(fā)明的微生態(tài)制劑的制備優(yōu)選是通過(guò)下述步驟實(shí)施的，但不局限于此制備工藝，公知的能實(shí)現(xiàn)的制備工藝均可以采取含凸腹真桿菌或兩形真桿菌的樣本，優(yōu)選人或動(dòng)物糞便，更優(yōu)選健康嬰兒糞便，然后將樣品置于滅菌厭氧瓶?jī)?nèi)，吹入氮?dú)馔瑫r(shí)充分混合，迅速?gòu)闹腥?克樣品加入18mL滅菌的稀釋液中，吹入氮?dú)馔瑫r(shí)充分混勻，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)，進(jìn)行10-、10-2、10-3、10—4，10-5，IO-6，10—7梯度稀釋?zhuān)?0—5，10—6，10—7三個(gè)稀釋梯度，分別涂布于凸腹真桿菌或兩形真桿菌選擇性單菌落分離固體培養(yǎng)基上，置于厭氧罐內(nèi)，厭氧37。C下培養(yǎng)48小時(shí)，選擇長(zhǎng)勢(shì)良好的單菌落分別接種于液體擴(kuò)增培養(yǎng)基中，置于厭氧罐內(nèi)，厭氧37"C下擴(kuò)增培養(yǎng)48小時(shí)。將所得培養(yǎng)液離心(12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干燥，調(diào)制出各菌種的干燥菌粉，然后進(jìn)行菌種鑒定、產(chǎn)丁酸實(shí)驗(yàn)和毒性試驗(yàn)，將鑒定的無(wú)毒性凸腹真桿菌或兩形真桿菌干燥菌粉單獨(dú)或組合按需要比例添加輔料制成片劑、膠囊和散劑等各種劑型或獸藥、飼料添加劑。凸腹真桿菌或兩形真桿菌選擇性單菌落分離固體培養(yǎng)基優(yōu)選但不局限于純化水100mL，胰蛋白胨lg，酵母浸膏0.5g，磷酸氫二鈉0.4g，葡萄糖O.15g，可溶性淀粉0.05g，L-半胱氨酸0.02g，L-半胱氨酸鹽酸鹽0.05g，瓊脂1.5g，調(diào)pH值7.7，115。C，20分鐘高壓滅菌。滅菌后在冷卻到60°C后加入5mL脫纖維馬血，ES溶液4mL。其中ES溶液丙酸鈉30%，硫酸鏈霉素4%，硫酸巴龍霉素2%，硫酸多粘菌素B0.02%。凸腹真桿菌或兩形真桿菌液體擴(kuò)增培養(yǎng)基優(yōu)選但不局限于絞碎的牛肉500g，蒸餾水1L，1NNaOH25.0mL，用精牛肉或馬肉，絞碎去除脂肪和連接組織，混合肉、水和氫氧化鈉煮沸，同時(shí)攪拌，冷卻至室溫，略去表面的脂肪并過(guò)濾，保留濾液，補(bǔ)充足夠的蒸餾水濾液恢復(fù)1升原體積。向每100mL濾液中添加蛋白胨2.0g、葡萄糖0.5g、酵母浸膏1.0g、鹽酸半胱氨酸0.05g、鹽溶液4.0mL，維生素Kr溶液0.lmL、5mg/mL氯化血紅素溶液0.5mL，調(diào)pH至7.2士0.1，在厭氧管內(nèi)通入97%的氮，3%的氫，蓋緊丁基橡膠瓶塞帽，121°C高壓滅菌15min。其中1、鹽溶液的配制:稱(chēng)取無(wú)水氯化鈣0.2g，硫酸鎂0.2g，磷酸氫二鉀lg，磷酸二氫鉀lg，碳酸氫鈉10g，氯化鈉2g，加蒸餾水至lOOOmL;2、氯化血紅素溶液(5mg/mL)的配制稱(chēng)取氯化血紅素0.5g溶于lmol/L氫氧化鈉lmL中，加蒸餾水至100mL，12rC高壓滅菌15min，冰箱保存；3、維生素K,溶液的配制:稱(chēng)取維生素Klg加無(wú)水乙醇99mL，過(guò)濾除菌，放冷暗處保存。本發(fā)明優(yōu)選使用的凸腹真桿菌的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)、菌落形態(tài)顯微鏡觀(guān)察長(zhǎng)1.5-2微米，寬0.5微米，短桿，革蘭氏染色陽(yáng)性。平板形態(tài)菌體呈圓形、凸起、周邊整齊、光滑；顏色灰色，不透明。2、生理生化鑒定石蕊牛奶脂酶明膠液化過(guò)氧化氫酶精氨酸產(chǎn)氨:—;七葉苷水解+;吲哚一；硫化氫一；乙酰甲基甲醇試驗(yàn)(V-P試驗(yàn))一；是否需氧厭氧性。3、糖酵解實(shí)驗(yàn)鑒定纖維二糖_;D-果糖+;D-半乳糖+;葡萄糖+;D-甘露糖+;D-棉子糖一；鼠李糖一；山梨糖一；松三糖一；蔗糖一；海藻糖一；木糖+;麥芽糖+;淀粉+;蜜二糖+;核糖+;甘油七葉靈+;阿拉伯糖一；果糖+。本發(fā)明優(yōu)選使用的兩形真桿菌的細(xì)菌學(xué)性質(zhì)1、菌落形態(tài)顯微鏡觀(guān)察長(zhǎng)2.0-5微米，寬1.0微米，中長(zhǎng)桿，革蘭氏染色陽(yáng)性。平板形態(tài)菌體呈圓形、凸起、周邊整齊、光滑；顏色灰色，不透明。2、生理生化鑒定石蕊牛奶一；脂酶一；明膠液化一；過(guò)氧化氫酶—；精氨酸產(chǎn)氨一；七葉苷水解+;吲哚一；硫化氫V_P試驗(yàn)—；是否需氧厭氧性。3、糖酵解實(shí)驗(yàn)鑒定纖維二糖一；D-果糖+;D-半乳糖+;葡萄糖+;D-甘露糖+;D-棉子糖一；鼠李糖一；山梨糖_;松三糖_;蔗糖_;海藻糖+;木糖一；麥芽糖淀粉蜜二糖一；核糖七葉靈+;甘油一；阿拉伯糖_。發(fā)明人利用上述方法通過(guò)凸腹真桿菌或兩形真桿菌選擇性單菌落分離固體培養(yǎng)基分離鑒定出了凸腹真桿菌或兩形真桿菌。本發(fā)明所述凸腹真桿菌優(yōu)選但不限于凸腹真桿菌(五w6ac/en'wmvew/Wo^w)、CGMCC、保存編號(hào)2465。本發(fā)明所述兩形真桿菌優(yōu)選但不限于兩形真桿菌(五w&c^7^m6j'/bi7ze)、CGMCC、保存編號(hào)2466。本發(fā)明所述的凸腹真桿菌或兩形真桿菌指活生物個(gè)體。本發(fā)明是以有效劑量的上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌單獨(dú)或組合作為主要藥物活性成份，按照一定的制劑工藝，加入常規(guī)的賦形劑、調(diào)味劑、崩解劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、黏合劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、液體制劑、灌腸劑等劑型。本發(fā)明所述以有效劑量的上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌單獨(dú)或組合作為主要藥物活性成份制成活菌微生態(tài)制劑，也可以是上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌單獨(dú)或組合與雙歧桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、乳桿菌、鏈球菌、枯草芽孢桿菌等益生菌中的一種或幾種或其他活性成份組合制成活菌微生態(tài)制劑，以起到協(xié)同治療作用，提高治療效果。本發(fā)明中的微生態(tài)制劑在臨床上的用量，因患者年齡、體重及癥狀、用藥目的所決定的用藥方式和方法、治療效果及用藥時(shí)間等因素而不同，正確的用量應(yīng)該由醫(yī)師來(lái)決定，且應(yīng)用劑量也是臨床醫(yī)生根據(jù)病情很容易掌握和調(diào)整的。本發(fā)明所指有效劑量是指以上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌根據(jù)上面所述單獨(dú)或組合作為主要藥物活性成份制成的固體活菌制劑包含的總活菌數(shù)不能低于1X106CFU/g，一般在1X107CFU/g以上，最高可達(dá)到1X1012CFU/g或1X1012CFU/g以上。本發(fā)明所指有效劑量是指以上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌根據(jù)上面所述單獨(dú)或組合作為主要藥物活性成份制成的液體活菌制劑包含的總活菌數(shù)不能低于lX106CFU/mL，一般在lX107CFU/mL以上，最高可達(dá)到lX1012CFU/mL或IX1012CFU/mL以上。由于本發(fā)明首次公開(kāi)了凸腹真桿菌或兩形真桿菌在作為主要活性成份制成微生態(tài)制劑中的應(yīng)用，因此含上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌的藥劑均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明所述的凸腹真桿菌或兩形真桿菌中的任何一個(gè)菌株，包括凸腹真桿菌CGMCC2465株和兩形真桿菌CGMCC2466株，在制成任何一種劑型時(shí)，均具有治療上述疾病的作用。任何藥劑，如果其組份中含有上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌中的任何一個(gè)菌株成份制備成藥，在其包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療上述疾病的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明所述的凸腹真桿菌或兩形真桿菌中的任何一個(gè)菌株，包括凸腹真桿菌CGMCC2465株和兩形真桿菌CGMCC2466株可以制成保健品或飲品。將上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌中的任何一個(gè)菌株制成的保健品或飲品，如果在其包裝或說(shuō)明書(shū)等標(biāo)識(shí)上或者在其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療上述疾病的作用，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明所述的凸腹真桿菌或兩形真桿菌中的任何一個(gè)菌株，包括凸腹真桿菌CGMCC2465株和兩形真桿菌CGMCC2466株可以制成獸藥或飼料添加劑。將上述凸腹真桿菌或兩形真桿菌中的任何一個(gè)菌株制成獸藥或飼料添加劑，則落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。具體實(shí)施例方式藥物制備例說(shuō)明上述已經(jīng)對(duì)凸腹真桿菌和兩形真桿菌的制備進(jìn)行說(shuō)明，這里通過(guò)以凸腹真桿菌CGMCC2465株和兩形真桿菌CGMCC2466株為例，說(shuō)明凸腹真桿菌散劑、兩形真桿菌散劑和凸腹真桿菌兩形真桿菌二聯(lián)活菌散劑(以下簡(jiǎn)稱(chēng)二聯(lián)活菌)的制備方法，其他凸腹真桿菌和兩形真桿菌菌株制劑的制備方法本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)本實(shí)施例很容易掌握，其他劑型的制備方法本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)本實(shí)施很容易掌握，在此不再一一敘述說(shuō)明。制備方法并不局限于本發(fā)明實(shí)施例所述，公知的能夠達(dá)到制備目的的方法均可以，實(shí)施例的制備說(shuō)明只是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，并不是對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。藥物制備實(shí)施例1口服凸腹真桿菌活菌散劑、口服兩形真桿菌活菌散劑和二聯(lián)活菌散劑的制備1菌粉的制備和菌種的鑒定采取山東省膠南市一健康嬰兒糞便，然后將糞便置于滅菌厭氧瓶?jī)?nèi)，吹入氮?dú)馔瑫r(shí)充分混合，迅速?gòu)闹腥?克糞便加入18mL滅菌的稀釋液中，吹入氮?dú)馔瑫r(shí)充分混勻，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)，進(jìn)行10-丄、10-2、10-3、104、10-5、10—6、10—7梯度稀釋?zhuān)?0—5、10—6、l(T三個(gè)稀釋梯度，涂布于凸腹真桿菌或兩形真桿菌選擇性單菌落分離固體培養(yǎng)基上，置于厭氧罐內(nèi)，厭氧37。C下培養(yǎng)48小時(shí)，選擇長(zhǎng)勢(shì)良好的兩個(gè)單菌落分別接種到凸腹真桿菌或兩形真桿菌液體擴(kuò)增培養(yǎng)基中，置于厭氧罐內(nèi)，厭氧37"C下擴(kuò)增培養(yǎng)48小時(shí)。將所得培養(yǎng)液離心(12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干燥，調(diào)制出兩個(gè)菌種的干燥菌粉，然后根據(jù)上述方法進(jìn)行菌種鑒定，經(jīng)鑒定為凸腹真桿菌CGMCC2465株和兩形真桿菌CGMCC2466株。2產(chǎn)丁酸實(shí)驗(yàn)將分離到的凸腹真桿菌和兩形真桿菌分別接種到液體擴(kuò)增培養(yǎng)基中，置于厭氧罐內(nèi)，厭氧37X:下擴(kuò)增培養(yǎng)48小時(shí)，離心(12000rpm)，取上清液用氣相檢測(cè)代謝產(chǎn)物丁酸含量分別為7.8mmol/L和8.2腿ol/L，表明均能產(chǎn)丁酸。3生理生化鑒定經(jīng)鑒定均不產(chǎn)生硫化氫、吲哚、氨等有害物質(zhì)。4毒性試驗(yàn)4.l動(dòng)物及分組取30只SPF級(jí)別小鼠，68周齡，體重1619g，隨機(jī)分入凸腹真桿菌組、兩形真桿菌組和未給藥組，每組io只。4.2制備菌液將上述凸腹真桿菌菌粉和兩形真桿菌菌粉用純化水調(diào)制為含菌數(shù)均為lX1012CFU/mL的菌液。4.3方法凸腹真桿菌組、兩形真桿菌組和未給藥組均給予相同的基礎(chǔ)飼料，且飼養(yǎng)條件均一致，凸腹真桿菌組每天灌服凸腹真桿菌菌液0.5mL，兩形真桿菌組每天灌服兩形真桿菌菌液0.5mL，未給藥組每天灌服純化水0.5mL，飼喂6個(gè)月，觀(guān)察體重及毒性反應(yīng)。4.4結(jié)果各組小鼠均未出現(xiàn)異常情況，未發(fā)生振顫、痙攣、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、姿態(tài)異常，無(wú)眼球突出，排尿正常，皮膚、呼吸正常，無(wú)死亡情況，且凸腹真桿菌組、兩形真桿菌組的體重增加顯著高于未給藥組(P<0.05)，表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌有促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育作用，說(shuō)明兩菌株效果良好，未見(jiàn)中毒反應(yīng)，結(jié)果見(jiàn)表l。表l小鼠體重增加情況<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>5制備成散劑等劑型根據(jù)上述歩驟和方法分離鑒定凸腹真桿菌和兩形真桿菌后，經(jīng)實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)產(chǎn)丁酸、不產(chǎn)毒素、無(wú)毒性，就可制成菌粉，然后按照需要添加相關(guān)輔料制成各種劑型，優(yōu)選據(jù)凸腹真桿菌和兩形真桿菌菌粉的活菌數(shù)，按比例添加脫脂奶粉、葡萄糖制成散劑，使總活菌數(shù)不低于1X107CFU，然后將兩菌的菌粉單獨(dú)或組合裝袋，制成口服凸腹真桿菌活菌散劑、口服兩形真桿菌活菌散劑和二聯(lián)活菌散劑。應(yīng)用效果實(shí)施例說(shuō)明雖然凸腹真桿菌和兩形真桿菌有許多菌株，但按上述方法分離的不同菌株具有相同的生物學(xué)特性，且作用機(jī)理相同，包括進(jìn)入腸道分泌大量丁酸、補(bǔ)充腸道有益菌恢復(fù)腸道菌群平衡、提高機(jī)體和粘膜免疫等，因此本發(fā)明選用按上述方法分離的凸腹真桿菌和兩形真桿菌菌株為研究對(duì)象，介紹凸腹真桿菌和兩形真桿菌的應(yīng)用效果。實(shí)施例1、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)腸粘膜的修復(fù)作用研究1材料與方法1.1材料1.1.1藥物凸腹真桿菌菌液(107CFU/mL);兩形真桿菌菌液(107CFU/mL);二聯(lián)活菌菌液(l(^CFU/mL);雙歧桿菌菌液(10力FU/mL);右旋葡聚糖硫酸鈉(DSS，10g/并瓦，Sino-AmericanBiotec);愛(ài)爾新藍(lán)(lg/并瓦，Sino-AmericanBiotec)。1.1.2動(dòng)物SD雄性大白鼠70只，體重80100g，標(biāo)準(zhǔn)2級(jí)，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.2方法1.2.1腸粘膜損傷造型和治療大鼠70只，IO只大鼠作為正常對(duì)照組，另60只大鼠用3。/。DSS溶液給空腹大鼠灌胃(lmL/100g)，每天1次，共7天，最后一次從肛門(mén)加注DSSlmL/只至直腸內(nèi)。然后處死其中10只(模型對(duì)照組)，剖腹取結(jié)直腸，測(cè)定結(jié)直腸濕重(g/100g.體重)，甲醛固定，用愛(ài)爾新藍(lán)溶液染色，肉眼觀(guān)測(cè)潰瘍和糜爛部分的點(diǎn)數(shù)，用卡尺測(cè)量藍(lán)染點(diǎn)的藍(lán)染面積(cm2)，證實(shí)潰瘍形成后，將其余50只模型大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別灌胃生理鹽水、凸腹真桿菌菌液(107CFU/mL)、兩形真桿菌菌液(107CFU/mL)、二聯(lián)活菌菌液(107CFU/mL)、雙歧桿菌菌液(107CFU/mL)，lmL/次，每天2次，共21天。21天后處死全部大鼠，按上法處理結(jié)直腸標(biāo)本，檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。1.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各組間的數(shù)據(jù)差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢驗(yàn)，用卜Wwfe/^Zt檢驗(yàn)，差異顯著性界限為P〈0.05。2結(jié)果2.1結(jié)直腸漬瘍(或糜爛)點(diǎn)數(shù)與面積'用DSS灌胃，加直腸給DSS后可在整個(gè)結(jié)直腸形成典型的大鼠腸粘膜損傷，尤其結(jié)腸下端和直腸的腸標(biāo)本用愛(ài)爾新藍(lán)染色后，腸粘膜可見(jiàn)明顯深染的不規(guī)則的潰瘍點(diǎn)或糜爛點(diǎn)。結(jié)直腸潰瘍(糜爛)點(diǎn)數(shù)及潰瘍面積凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組與模型對(duì)照組、生理鹽水模型對(duì)照組或雙歧桿菌治療組比較均有很顯著性差異(P<0.01)，而凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組和模型對(duì)照組治療前排稀便，偶爾帶血，治療后凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組均排正常便，模型對(duì)照組仍然排稀便。見(jiàn)表l。表l各種菌對(duì)腸粘膜的修復(fù)作用組另lj潰瘍或糜爛點(diǎn)數(shù)潰瘍或糜爛面積(cm2)正常組00模型對(duì)照組4.60±0.620.75±0.15生理鹽水模型對(duì)照組4.20±0.360.70±0.24雙歧桿菌治療組2.80±0.56.42±0.35凸腹真桿菌治療組1,12±0.450.07±0.03兩形真桿菌治療組1.25±0.380.08±0.07二聯(lián)活菌治療組1.21±0.320.06±0.043結(jié)論凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌丁酸，提供腸粘膜細(xì)胞能量，對(duì)腸粘膜細(xì)胞具有很好的促進(jìn)增殖作用，能修復(fù)受損傷的腸粘膜，改變腸粘膜通透性，促進(jìn)腸粘膜發(fā)育成熟，促進(jìn)消化吸收，療效顯著好于雙歧桿菌等非產(chǎn)丁酸益生菌。因此，凸腹真桿菌和兩形真桿菌可以單獨(dú)或組合治療腹瀉、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、抗生素相關(guān)性腹瀉、偽膜性腸炎、小兒肺炎繼發(fā)性腹瀉、腫瘤放化療輔助治療、病毒性腹瀉、壞死性小腸結(jié)腸炎等腸粘膜損傷性疾病，促進(jìn)腸道發(fā)育成熟，促進(jìn)消化吸收，消除腹脹和消化不良及治療喂養(yǎng)不耐受，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育和營(yíng)養(yǎng)保健，對(duì)營(yíng)養(yǎng)吸收障礙性疾病也有很好的治療作用，包括佝僂病。實(shí)施例2、凸腹真桿菌和兩形真桿菌調(diào)節(jié)免疫和炎癥因子表達(dá)的研究1實(shí)驗(yàn)材料與方法l.l實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:雄性SD大鼠，180-220g。1.2實(shí)驗(yàn)藥物美沙拉嗪(200mg/niL);凸腹真桿菌菌液(107CFU/mL);兩形真桿菌菌液(l()7CFU/mL);二聯(lián)活菌菌液(l()7CFU/mL);雙歧桿菌菌液(107CFU/mL)。由青島東海藥業(yè)有限公司提供。1.3實(shí)驗(yàn)試劑弗氏完全佐劑(sigma)，MTT(sigma);伴刀豆素球蛋白(ConA)(Sigma);脂多糖(LPS)(Sigma);MTT(Sigma),購(gòu)自北京舒伯偉化工儀器有限責(zé)任公司；1640培養(yǎng)液(Gibco);牛結(jié)腸粘膜蛋白凍干粉(自制)；IL-8ELISA試劑盒(BD);TNF-aELISA試劑盒(Ebioscience);大鼠IgG參考血清；兔抗大鼠IgG抗血清，外購(gòu)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1牛結(jié)腸粘膜蛋白凍千粉的制備取新生小牛結(jié)腸，刮取牛結(jié)腸粘膜，反復(fù)凍溶法獲取牛結(jié)腸粘膜蛋白，純化濃縮，真空凍干后于4"C保存?zhèn)溆谩?.2免疫紊亂性疾病模型的建立取牛結(jié)腸粘膜蛋白與完全弗氏佐劑(1:1)制成完全抗原，選用體重在200士20g的SD大鼠，造模大鼠首次每只足跖內(nèi)注射抗原4mg，于第IO、17、24、31天分別于足跖、背部、腹股溝、腹腔內(nèi)注射抗原6mg，最后1次注射不加佐劑，至血清抗結(jié)腸抗體達(dá)到一定效價(jià)。第35天模型組大鼠用異戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，并分別進(jìn)行下列處理(處理前禁食24h)，先用2。/。的甲醛溶液1.5mL灌腸，留置lh，用生理鹽水洗凈后排去。再用抗原液(4mg/mL，不加佐劑)2mL灌腸，留置2h,然后洗凈排去。3d后，隨機(jī)抽取2只模型組大鼠處死，取其結(jié)腸標(biāo)本(肛門(mén)向上10厘米)，病理檢查確認(rèn)有充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、潰瘍形成等一系列炎癥性腸病的病理變化。2.3動(dòng)物分組及治療設(shè)正常對(duì)照組(10只)。造模成功后，將造模大鼠隨機(jī)分組，I)模型對(duì)照組(IO只)，給予生理鹽水灌胃；2)陽(yáng)性藥(美沙拉嗪，200mg/mL)治療組(10只)；3)凸腹真桿菌(l()7CFU/mL)治療組(10只)；4)兩形真桿菌(107CFU/mL)治療組(10只)；5)二聯(lián)活菌(107CFU/mL)治療組(10只)；6)雙歧桿菌(l(TCFU/mL)治療組(10只)。每次lmL/100g'體重，1次/天，灌胃，連續(xù)給生理鹽水或治療藥21天。期間每周稱(chēng)一次體重，并持續(xù)觀(guān)察動(dòng)物一般情況及糞便性狀。2.4指標(biāo)測(cè)定給生理鹽水或藥物至第21天后，斷頭處死動(dòng)物，測(cè)定模型對(duì)照組和5個(gè)治療組結(jié)腸濕重指數(shù)、粘膜潰瘍指數(shù)、粘膜損傷指數(shù)、腸系膜淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率、IL-8、TNF-a和IgG等指標(biāo)。2.4.1結(jié)腸濕重指數(shù)結(jié)腸濕重指數(shù)=結(jié)腸濕重(g)/100g.體重。2.4.2粘膜潰瘍指數(shù)將新鮮結(jié)腸腸管縱行切開(kāi)，清除腸內(nèi)容物，將結(jié)腸中上段及結(jié)腸下段兩部分分別編號(hào)，固定在硬紙板上，新鮮標(biāo)本拍照后，在10%的甲醛液中固定，用卡尺測(cè)量結(jié)腸粘膜上細(xì)條索狀或線(xiàn)形出血性病變，以全部病變總長(zhǎng)度加以測(cè)量。潰瘍指數(shù)的計(jì)算病灶長(zhǎng)度小于lmm為l分，l-2mm為兩分，2-3mm為3分，3-4mm為4分，如病灶長(zhǎng)度大于4mm，將其分為若干段，每段按上法計(jì)分，當(dāng)病灶寬度大于2mm時(shí)，其得分加倍。一只動(dòng)物全結(jié)腸各病灶得分的總和為其潰瘍指數(shù)。2.4.3腸系膜淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率無(wú)菌環(huán)境下取大鼠腸系膜淋巴細(xì)胞，過(guò)200目細(xì)胞篩，無(wú)菌PBS洗滌兩次，1000rpm，5min。用完全1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為5Xl()S個(gè)/mL，每孔100ul，接種于96孔圓底細(xì)胞板中，同時(shí)加ConA(終濃度為3"g/mL)或LPS(終濃度為5iig/mL)，100u1/孔。另設(shè)定空白對(duì)照孔(未加誘導(dǎo)劑)，37°C、5%0)2孵育72h，培養(yǎng)結(jié)束前4h，加MTT(5mg/ml)20u1，培養(yǎng)結(jié)束后，測(cè)定540nm處測(cè)定0D值，計(jì)算淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)。淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(SI)^刺激組OD值/未刺激組OD值藥物。2.4.4IL-8、TNF-a和IgG斷頭處死大鼠，取血，4。C靜置過(guò)夜，3000rpm，20min離心，取上清，分裝，放于-2(TC待測(cè)。使用ELISA試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)，測(cè)定大鼠血清中大鼠IL-8及TNF-a的含量。使用單向免疫擴(kuò)散法測(cè)定血清中IgG的含量。2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理各組間的數(shù)據(jù)差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性檢驗(yàn)，用t-stw/朋廣t檢驗(yàn)，差異顯著性界限為P〈0.05。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1糞便性狀、結(jié)腸濕重指數(shù)模型對(duì)照組大鼠在造型期間排白色粘液性稀便。治療組大鼠在治療前也排白色粘液性稀便，治療21天后均排正常便。美沙拉嗪治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組治療21天后結(jié)腸濕重指數(shù)與模型對(duì)照組和雙歧桿菌治療組比較呈顯著性降低(P<0.05)，但美沙拉嗪治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組大鼠治療后結(jié)腸濕重指數(shù)比較無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表1。表1免疫紊亂性模型大鼠結(jié)腸濕重指數(shù)變化情況(I±s)組別動(dòng)物數(shù)結(jié)腸濕重指數(shù)(g)/100g.體重正常對(duì)照組100.41±0,03模型對(duì)照組100.46±0.05雙歧桿菌治療組100.43±0.06美沙拉嗪治療組100.37±0.07凸腹真桿菌治療組100.37±0.05兩形真桿菌治療組100.37±0.06二聯(lián)活菌治療組100.36±0.073.2粘膜潰瘍指數(shù)(積分)美沙拉嗪治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組治療21天后粘膜潰瘍指數(shù)與模型對(duì)照組和雙歧桿菌治療組比較呈顯著性減小(P<0.05)，但美沙拉嗪治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組大鼠治療后粘膜潰瘍指數(shù)比較無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表2。表2免疫紊亂性模型大鼠腸粘膜潰瘍指數(shù)變化情況(7±S)組別動(dòng)物數(shù)粘膜潰瘍指數(shù)(積分)正常對(duì)照組100.00模型對(duì)照組1028.7±9.7雙歧桿菌治療組1020.1±6.2美沙拉嗪治療組1016.4±6.3凸腹真桿菌治療組109.1±4,2兩形真桿菌治療組109.5±3.6二聯(lián)活菌治療組109.4±4.63.3腸系膜淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率建立免疫紊亂模型成功后，B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率升高，T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率降低，美沙拉嗪治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組治療21天后與模型對(duì)照組和雙歧桿菌治療組比較B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著降低及T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著升高(P〈0.05)，但凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二嵌活菌治療組之間比較無(wú)顯著性差異(P〉0.05)，見(jiàn)表3。表3免疫紊亂性模型大鼠腸系膜淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率變化情況(S±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>3.4血清IL-8和TNF-a含量模型對(duì)照組大鼠血清中的IL-8和TNF-a含量比正常對(duì)照組的顯著升高(P<0.05)，美沙拉嗪治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組治療21天后血清IL-8和TNF-a含量與模型對(duì)照組和雙歧桿菌治療組比較呈顯著性降低(P〈0.05)，但凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組大鼠治療后血清IL-8含量和TNF-a比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，見(jiàn)表4。表4免疫紊亂性模型大鼠血清IL-8和TNF-a含it變化情況(5±s)組別IL-8(pg/ml)TNF-a(ng/ml)正常對(duì)照組37.3±14.717.6±5.0模型對(duì)照組81.0±10.957.4±7.7雙歧桿菌治療組60.3±11.242.5±5.3美沙拉嗪治療組47.7±16.936.6±8.3凸腹真桿菌治療組41.2±10.522.3±3.6兩形真桿菌治療組42.5±11.223.5±3.3二聯(lián)活菌治療組43.2±12.521.5±2.53.5血清IgG含量模型對(duì)照組大鼠血清中的IgG含量比正常對(duì)照組的顯著升高(P<0.05)，美沙拉嗪治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組治療21天后IgG含量與模型對(duì)照組和雙歧桿菌治療組比較呈顯著性降低(P〈0.05)，但凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組大鼠治療后血清IL-8和TNF-a含量比較無(wú)顯著性差異(P〉0.05)，見(jiàn)表5。表5免疫紊亂性模型大鼠血清IgG含量變化情況(x—±s)組別IgG(mg/ml)正常對(duì)照組7.5±0.3模型對(duì)照組13.9±0.4雙歧桿菌治療組11.8±0.6美沙拉嗪治療組13.2±0.5凸腹真桿菌治療組8.3±0.5兩形真桿菌治療組8.2±0,3二聯(lián)活菌治療組8.3±0.44結(jié)論各種原因?qū)е碌拿庖呶蓙y及其炎癥因子升高會(huì)引起各種疾病，使腸道敏感性增強(qiáng)、耐受力下降引起腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉；會(huì)使腸粘膜損傷，引起潰瘍性結(jié)腸炎或克羅恩??；會(huì)引發(fā)自身免疫性疾病，包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎；血液中炎癥因子升高會(huì)引發(fā)心腦血管疾病，包括高脂血癥、高血壓、腦血栓、腦栓塞、腦缺血、心肌梗塞、冠心病、腦梗死、腦出血、心絞痛、心肌炎，腫瘤壞死因子(TNF-a)、白介素8(IL-8)、白介素16(IL-10)等炎癥性細(xì)胞因子促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化及心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展，心腦血管疾病患者血清中的TNF-a、IL-8、IL-1P等炎癥性細(xì)胞因子水平明顯高于健康人；會(huì)引發(fā)變態(tài)反應(yīng)性疾病，包括變態(tài)反應(yīng)性皮膚病，進(jìn)一步包括濕疹。本研究表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌丁酸，通過(guò)調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子(NF-KB)的表達(dá)，調(diào)節(jié)免疫平衡、消除免疫異常及抑制TNF-a、IL-8等炎癥因子過(guò)度表達(dá)，有效治療上述各種免疫紊亂及其炎癥因子升高引起的疾病，且效果好于雙歧桿菌等非產(chǎn)丁酸益生菌。實(shí)施例3、凸腹真桿菌和兩形真桿菌促進(jìn)腸道發(fā)育成熟的研究1資料與方法1.1資料選擇喂養(yǎng)不耐受小兒100例，診斷標(biāo)準(zhǔn)臨床出現(xiàn)嘔吐、腹脹、胃潴留等胃腸動(dòng)力障礙表現(xiàn)，喂奶前從胃管內(nèi)抽出殘留奶汁。所有患兒均排除胃腸道先天畸形、機(jī)械性腸梗阻、無(wú)腦肝腎功能不全及心肌損害。男60例，女40例。按隨機(jī)數(shù)字表將100例小兒分為五組，A組(凸腹真桿菌治療組)、B組(兩形真桿菌治療組)、C組(二聯(lián)活菌治療組)、D組(雙歧桿菌治療組)和對(duì)照組。每組20例患兒，五組患兒胎齡、性別、體重、病情輕重程度經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異無(wú)顯著性((P>0.05))，具有可比性。1.2方法所有患兒均給予常規(guī)護(hù)理，輸液泵補(bǔ)液，治療原發(fā)病及胃腸外營(yíng)養(yǎng)支持等常規(guī)綜合治療。A組在常規(guī)綜合治療基礎(chǔ)上給予口服凸腹真桿菌活菌散劑(青島東海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，500mg/袋，含凸腹真桿菌為1.0X107CFU/g)口服，1包/次，3次/天，喂奶后口服或鼻飼，療程7天以上；B組在常規(guī)綜合治療基礎(chǔ)上給予口服兩形真桿菌活菌散劑(青島東海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，500mg/袋，含兩形真桿菌為1.0X107CFU/g)口服，1包/次，3次/天，喂奶后口服或鼻飼，療程7天以上；C組在常規(guī)綜合治療基礎(chǔ)上給予口服二聯(lián)活菌散劑(青島東海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，500mg/袋，含凸腹真桿菌和兩形真桿菌活菌總數(shù)為1.0X107CFU/g)口服，l包/次，3次/天，喂奶后口服或鼻飼，療程7天以上；D組在常規(guī)綜合治療基礎(chǔ)上給予口服雙歧桿菌活菌散劑(青島東海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，500mg/袋，含雙歧桿菌為1.0X107CFU/g)口服，1包/次，3次/天，喂奶后口服或鼻飼，療程7天以上；對(duì)照組常規(guī)綜合治療，療程7天以上。1.3觀(guān)察指標(biāo)觀(guān)察五組腹脹、嘔吐、胃潴留和腸鳴音等癥狀變化，生理性體重下降恢復(fù)至出生體重時(shí)間，奶量增加情況及記錄停用靜脈營(yíng)養(yǎng)達(dá)到完全胃腸道營(yíng)養(yǎng)的時(shí)間，有無(wú)黃疸并發(fā)癥及黃疸持續(xù)時(shí)間，及有無(wú)不良反應(yīng)。1.4療效判斷標(biāo)準(zhǔn)顯效治療35天腹脹、嘔吐癥狀消失，腸鳴音正常，鼻飼奶每隔23小時(shí)1次，能耐受，無(wú)胃內(nèi)容物儲(chǔ)留；好轉(zhuǎn)治療57天腹脹、嘔吐癥狀減輕，腸鳴音弱，鼻飼奶每隔23小時(shí)l次，胃內(nèi)容物潴留<1/3;無(wú)效治療7天腹脹、嘔吐癥狀無(wú)好轉(zhuǎn)，腸鳴音弱，鼻飼奶每隔23小時(shí)1次，胃內(nèi)容物儲(chǔ)留〉1/3。顯效和好轉(zhuǎn)合計(jì)為有效。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。數(shù)據(jù)均以lT士s表示，組間比較采用？檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1六組療效比較A組顯效15例，好轉(zhuǎn)5例，總有效率100%;B組顯效16例，好轉(zhuǎn)4例，總有效率100%;C組顯效14例，好轉(zhuǎn)6例，總有效率100%;D顯效10例，好轉(zhuǎn)2例，無(wú)效8例，總有效率60%;對(duì)照組顯效5例，好轉(zhuǎn)4例，無(wú)效11例，總有效率45%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，A組、B組、C組總有效率顯著高于D組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.01)，A組、B組、C組之間總有效率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〉0.05)。2.2兩組觀(guān)察指標(biāo)比較恢復(fù)至出生體重時(shí)間，達(dá)到完全胃腸道營(yíng)養(yǎng)時(shí)間，嘔吐和腹脹消失時(shí)間，黃疸持續(xù)時(shí)間，A組、B組、C組與D組和對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05);A組、B組、C組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〉0.05)，見(jiàn)表1。表l兩組治療前后觀(guān)察指標(biāo)比較GT士s)觀(guān)察指標(biāo)A組B組C組D組對(duì)照組恢復(fù)至出生體重時(shí)7.ll士l.187.06±1.207.09±1.279.09±1.4510.85±2.13間(天)達(dá)到完全胃腸道營(yíng)養(yǎng)時(shí)間12.25±1.6513.17±1.3412.16±1.2215.38±11617.32±2.16(天)嘔吐消失時(shí)間(天)3.47±1.373.52±1.243.29±1.315.23±1.277.38±1.49腹脹消失時(shí)間(天)3.56±1.273.36±1.323.48±1.275.75±1,617.45±1.57黃疸持續(xù)時(shí)間(天)13.49±1,.2113.36±1,.7513.31±1,.2615.27±1.3119.55±2.413結(jié)論本研究表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌丁酸，提供腸粘膜細(xì)胞能量，促進(jìn)腸粘膜增殖及腸道發(fā)育成熟，治療喂養(yǎng)不耐受療效顯著，并有效治療嘔吐、腹脹。同時(shí)，分泌丁酸，降低P-葡萄糖醛酸苷酶的活性，競(jìng)爭(zhēng)性地阻止結(jié)合膽紅素分解為非結(jié)合膽紅素，減少肝腸循環(huán)；通過(guò)產(chǎn)生丁酸，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，促進(jìn)排便，增加膽紅素的排出；丁酸能促進(jìn)腸道內(nèi)結(jié)合膽酸分解為游離膽酸，減少結(jié)合膽酸在腸壁的重吸收，有利于消除膽汁淤積，因此縮短黃疸持續(xù)時(shí)間，有效預(yù)防和治療黃疸。同時(shí)，凸腹真桿菌和兩形真桿菌分泌丁酸，促進(jìn)腸道發(fā)育成熟，明顯縮短恢復(fù)至出生體重時(shí)間和達(dá)到完全胃腸道營(yíng)養(yǎng)時(shí)間，表明能促進(jìn)消化吸收和生長(zhǎng)發(fā)育，具有營(yíng)養(yǎng)保健作用。且凸腹真桿菌和兩形真桿菌的上述治療效果顯著好于雙歧桿菌等非產(chǎn)丁酸菌。實(shí)施例4、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)腸癌的預(yù)防作用研究1實(shí)驗(yàn)方法選體重為18-20g的雌性昆明種小鼠100只，隨機(jī)分為凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組、雙歧桿菌治療組和對(duì)照組(每組20只),實(shí)驗(yàn)時(shí)間為20周。致癌劑為1，2-二甲肼(symmetrical1，1-dimethylhydrazine，DMH)，為白色粉狀結(jié)晶，每次臨注射前以無(wú)菌生理鹽水配成0.4%溶液，并用NaHC03將其pH調(diào)至6.5。每周給小鼠腹腔注射DMH20mg/kg(即0.4XDMH溶液0.05ml/10g)一次，連續(xù)20周。于腹腔注射DMH1周后，飲水中添加右旋葡聚糖苷鈉(DSS)，濃度為20g/L，連續(xù)飲用7天。腹腔注射DMH的同時(shí)，凸腹真桿菌菌液(l()7CFU/mL)，兩形真桿菌菌液(107CFU/mL)，二聯(lián)活菌菌液(l()7CFU/mL)，雙歧桿菌菌液(107CFU/mL)，0.5mL/次，l次/天，連續(xù)20周。對(duì)照組，腹腔注射DMH的同時(shí)，生理鹽水灌胃，0.5mL/次，1次/天，連續(xù)20周。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第20周后，用乙醚將小鼠麻醉致死后，打開(kāi)腹腔，觀(guān)察腸道變化。結(jié)果表明對(duì)照組20只小鼠，大腸腸壁出現(xiàn)小結(jié)節(jié)，腸道皺褶減少或消失，腸道質(zhì)地堅(jiān)硬，100%生成了腸癌；雙歧桿菌治療組有14只小鼠大腸腸壁出現(xiàn)小結(jié)節(jié)，腸道皺褶減少或消失，腸道質(zhì)地堅(jiān)硬，70%生成了腸癌；凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組均有9只小鼠大腸腸壁出現(xiàn)小結(jié)節(jié)，腸道皺褶減少或消失，腸道質(zhì)地堅(jiān)硬，45%生成了腸癌，顯著低于對(duì)照組和雙歧桿菌治療組。3結(jié)論本實(shí)驗(yàn)表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌丁酸，丁酸是一種去乙?；?HDAC)抑制劑，主要通過(guò)改變組蛋白的乙?；潭葋?lái)改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)，調(diào)控P"等多種基因的表達(dá)，終止腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞成熟分化，誘導(dǎo)腸癌細(xì)胞凋亡，能有效預(yù)防癌變、防止腸癌復(fù)發(fā)和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移，能明顯預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎的癌變，預(yù)防率達(dá)到了55%，因此可以制成相關(guān)劑型，用于預(yù)防腸癌，尤其用于預(yù)防結(jié)或直腸息肉、血吸蟲(chóng)病、細(xì)菌性痢疾、阿米巴、克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎等腸道慢性疾病發(fā)生癌變，維護(hù)人類(lèi)腸道健康。大部分腸癌患者都死于手術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，因此凸腹真桿菌和兩形真桿菌也可以用于腸癌手術(shù)后預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，同時(shí)手術(shù)后服用可以促進(jìn)傷口的愈合，可以抑制有害菌、抗炎預(yù)防感染，可以提高機(jī)體免疫力。實(shí)施例5、凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療腸癌的實(shí)驗(yàn)研究1實(shí)驗(yàn)方法BALB/c小鼠100只，取動(dòng)物皮下傳代的小鼠結(jié)腸癌C26瘤組織，以生理鹽水按l:3的比例稀釋成懸液，按0.2ml/只接種于小鼠腋窩皮下，然后將小鼠隨機(jī)分為凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組、雙歧桿菌治療組和模型對(duì)照組(每組20只)。凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組、雙歧桿菌治療組分別在接種72小時(shí)、144小時(shí)后于瘤組織內(nèi)注射菌液(107CFU/mL)0.lmL/只。對(duì)照組分別在接種72小時(shí)、144小時(shí)后于瘤組織內(nèi)注射生理鹽水0.lmL/只。實(shí)驗(yàn)第12天測(cè)量各組動(dòng)物的腫瘤體積，觀(guān)察抑瘤率。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組瘤重與模型對(duì)照組和雙歧桿菌治療組比較顯著性降低(P〈0.05)，但凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組比較無(wú)顯著性差異(P〉0.05)，見(jiàn)表l。_表1凸腹真桿菌和兩形真桿菌的抗癌作用研究__^_瘤重(mg)_模型對(duì)照組1.10±0.12雙歧桿菌治療組0.75±0.13凸腹真桿菌治療組0.32±0.07兩形真桿菌治療組0.31±0.06二聯(lián)活菌治療組_0,33±0.043結(jié)論本實(shí)驗(yàn)表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌丁酸，具有顯著的抗癌作用，目前研究表明丁酸是一種抗癌劑。因此，凸腹真桿菌和兩形真桿菌可以單獨(dú)或組合治療或輔助治療腸癌及其他癌癥。實(shí)施例6、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)實(shí)驗(yàn)性腹瀉小鼠的止瀉作用研究1材料與方法BALB/C小鼠，雄性，體重(20士l)g，標(biāo)準(zhǔn)2級(jí)。凸腹真桿菌菌液(107CFU/mL);兩形真桿菌菌液(107CFU/mL);二聯(lián)活菌菌液(107CFU/mL);雙歧桿菌菌液(107CFU/mL)。由青島東海藥業(yè)有限公司提供。將小鼠隨機(jī)分為凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組和雙歧桿菌治療組和對(duì)照組(每組20只)，單籠飼養(yǎng)。造型前1天動(dòng)物禁食給水，隨后用氨芐青霉素鈉(加生理鹽水配制)0.15g灌胃，0.5mL/只，2次/天,引起小鼠腹瀉，排水樣或糊狀便。將小鼠分別用菌液灌胃，0.5mL/次，2次/天，空白對(duì)照組給等體積生理鹽水，連續(xù)3天。造型前和治療后取新鮮大便作糞便菌群分析。.2結(jié)果2.1止瀉作用凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、—聯(lián)活菌治療組的止瀉作用顯著好于模型對(duì)照組和雙歧桿菌治療組(P〈0.05)，但凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組比較無(wú)顯著性差異(P〉0.05),見(jiàn)表l。表1凸腹真桿菌和兩形真桿菌的止瀉作用研究組別水樣便(例數(shù))稀便(例數(shù))正常便(例數(shù))空白對(duì)照組7103雙歧桿菌治療組2126凸腹真桿菌治療組0020兩形真桿菌治療組0020二聯(lián)活菌治療組00202.2腸道菌群分析結(jié)果表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)腸道有益菌具有顯著的促增殖作用(P<0.05)，能快速恢復(fù)腸道菌群平衡，見(jiàn)表2。表2腸道菌群分析(Log,'。CFU.g—、n=10)組別^t干胃(KV培養(yǎng)基)學(xué)L木干0(MRS培養(yǎng)基)^Xlfe^干"ffl(化Y培養(yǎng)基)正常對(duì)照組9.OO士O.628.32±0.4210.13±0.35造型后6,12±0.426.Ol土O.567.54±0.41空白對(duì)照組6.56±0.326.48±0.338.42±0.52凸腹真桿菌治療組9.56±0.259.35±0.199.64±0.39兩形真桿菌治療組9.65±0.318.27±0.359.87±0.21二聯(lián)活菌治療組9.67±0.348.64±0.259.95±0.383結(jié)論本實(shí)驗(yàn)表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)腹瀉有顯著的治療作用，效果好于雙歧桿菌(P<0.05)。且能促進(jìn)腸道有益菌增殖，快速恢復(fù)腸道菌群平衡，證明對(duì)抗生素相關(guān)性腹瀉、偽膜性腸炎、小兒肺炎繼發(fā)性腹瀉、腫瘤放化療輔助治療、便秘、便臭等腸道菌群失調(diào)性疾病具有很好的治療和預(yù)防作用，同時(shí)揭示對(duì)冷涼瀉、喝酒瀉和腸易激綜合征也有顯著治療作用。實(shí)施例7、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)實(shí)驗(yàn)性便秘小鼠的治療作用研究1材料與方法BALB/C小鼠，雄性，體重(20±1)g，標(biāo)準(zhǔn)2級(jí)。凸腹真桿菌菌液(107CFU/mL);兩形真桿菌菌液(107CFU/mL);二聯(lián)活菌菌液(107CFU/mL)。由青島東海藥業(yè)有限公司提供。將小鼠隨機(jī)分為凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組、模型對(duì)照組和正常對(duì)照組(每組io只)，單籠飼養(yǎng)。除正常對(duì)照組外，其余各組造型前1天動(dòng)物禁食給水，隨后口服給予50mg/Kg復(fù)方地芬諾酯片誘發(fā)便秘。將小鼠分別用菌液灌胃，0.5mL/次，2次/天，模型對(duì)照組和正常對(duì)照組給等體積生理鹽水，2次/天，連續(xù)3天。2結(jié)果凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組對(duì)便秘的治療作用顯著好于模型對(duì)照組(P<0.05)，但凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組比較無(wú)顯著性差異(P〉0.05)，見(jiàn)表1。表1凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)便秘的治療作用研究組別首次排便時(shí)間(分)大便例數(shù)大便重量(g)正常對(duì)照組143.80±60.5339.4±3.200.87±0.08模型對(duì)照組285.67±78.2311.2±5.410.21±0.03凸腹真桿菌治療組162.12±39.8632.7±3.570.71±0.13兩形真桿菌治療組159.43±57.2633.4±2.240.70±0.11二聯(lián)活菌治療組164.31±45.2334.3±4.120.69±0.093結(jié)論由于凸腹真桿菌和兩形真桿菌進(jìn)入腸道能夠分泌大量丁酸，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，并能快速恢復(fù)腸道菌群平衡，改善腸道微環(huán)境，恢復(fù)腸道正常功能，因此有效治療便秘和便秘型腸易激綜合征。實(shí)施例8、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)便臭和便臭中毒綜合征的治療作用1方法用HP-6890氣相色譜儀，在知情同意的情況下，測(cè)定15例志愿者糞便中的吲哚及糞臭素含量。即取新鮮糞便0.5g精確稱(chēng)重后，置50mL三角瓶中，加乙醇20mL超聲提取20分鐘，濾過(guò)，加入內(nèi)標(biāo)液(0.l%p-Isopropylphenol)3mL，定容至25mL量瓶中，測(cè)定時(shí)，取4pl溶液注入色譜柱(HP-INNOWAX玻璃毛細(xì)管柱，30mX0.53腿、填充17。/oSiliconeSE-30)進(jìn)行分析。測(cè)定條件是，柱溫度200。C;進(jìn)樣口溫度230。C，檢測(cè)器溫度260。C，載氣流量N290mL/min;&流量58mL/min;空氣流量60miymin。15例志愿者，男5，女IO，年齡25—55歲，隨機(jī)分為凸腹真桿菌治療組(口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋，含凸腹真桿菌為1.0X107CFU/g)、兩形真桿菌洽療組(口服兩形真桿菌活菌散劑，500mg/袋，含兩形真桿菌為1.0X107CFU/g)、二聯(lián)活菌治療組(口服凸腹真桿菌兩形真桿菌二聯(lián)活菌散劑，500mg/袋，含總活菌數(shù)為1.0X107CFU/g)，在相同正常飲食情況下，飯后分別服用各制劑，每次3袋，一天3次，連用14天。服藥前后，采糞便測(cè)定剛哚和糞臭素的含量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果給藥后人體糞便中的吲哚和糞臭素的含量，均明顯下降(P<0.05)，見(jiàn)表l。表l凸腹真桿菌和兩形真桿菌消除便臭的作用研究組別吲哚"g/g)糞臭素Ug/g)凸腹真桿菌治療組兩形真桿菌治療組二聯(lián)活菌治療組治療前治療后治療前治療后治療前治療后372.8±112.7254.7±132,5368.2±121.3221.2±111.5360.9士110.2256.5±134.8326.1±110.3197.3±99.6323.5±131.7210.2±105.4310.7±97.3205.6±118.23結(jié)論凸腹真桿菌和兩形真桿菌能明顯降低吲哚和糞臭素等腸道毒素含量，有效消除便臭及便臭中毒綜合征，養(yǎng)顏美容，并能減輕肝臟負(fù)擔(dān)，可作為肝膽疾病的輔助治療藥物。實(shí)施例9、凸腹真桿菌和兩形真桿菌提高免疫力研究1材料與方法BALB/C小鼠，雄性，體重(20士l)g，標(biāo)準(zhǔn)2級(jí)。凸腹真桿菌菌液(l()7CFU/mL);兩形真桿菌菌液(107CFU/mL);二聯(lián)活菌菌液(107CFU/mL);左旋咪唑(50mg/Kg)。由青島東海藥業(yè)有限公司提供。將小鼠隨機(jī)分為凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組、左旋咪唑治療組、模型對(duì)照組和正常對(duì)照組(每組10只)，單籠詞養(yǎng)。除正常對(duì)照組外，采用皮下注射25mg/Kg氫化可的松造模。將小鼠分別用菌液灌胃，0.5mL/次，2次/天，左旋咪唑治療組，50mg/Kg，2次/天，模型對(duì)照組和正常對(duì)照組給等體積生理鹽水，2次/天，連續(xù)21天。末次給藥后，印度墨汁法檢測(cè)鼠血.的碳粒廓清指數(shù)(K值)和吞噬指數(shù)(a值)，同時(shí)考察鼠胸腺指數(shù)(g/10g.B.W)的變化。2結(jié)果凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組和左旋咪唑治療組與模型對(duì)照組相比，顯著提高免疫力(P〈0.05)，但凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組比較無(wú)顯著性差異(PX).05)，見(jiàn)表l。表1凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)免疫功能的影響組別K值a值胸腺指數(shù)正常對(duì)照組0.017±0.0035.312±0.4250.019±0.002模型對(duì)照組0.008±0.0043.032±0.3250.009±0.005左旋咪唑治療組0.015±0.0055.098±0.2150.018±0.006凸腹真桿菌治療組0.017±0.0025.321±0.1040.016±0.006兩形真桿菌治療組0.016±0.0035.214±0.1540,017±0.004二聯(lián)活菌治療組0.017±0.0045.234±0.1720.018±0.0053結(jié)論本實(shí)驗(yàn)表明凸腹真桿菌和兩形真桿菌能顯著提高免疫力，因此腫瘤患者可以應(yīng)用凸腹真桿菌或兩形真桿菌提高免疫力，尤其放化療免疫力降低時(shí)，作為輔助治療藥物；凸腹真桿菌和兩形真桿菌，能夠修復(fù)腸粘膜，快速恢復(fù)腸道菌群平衡，并能提高免疫力抗病毒，因此能有效治療病毒性腹瀉；凸腹真桿菌和兩形真桿菌通過(guò)提高免疫力，對(duì)口腔潰瘍、鵝口瘡、手足口病和反復(fù)呼吸道感染也有顯著的治療作用，并可作為肝膽疾病的輔助治療藥物。實(shí)施例10、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)腸易激綜合征治療作用研究1對(duì)象與方法1.1觀(guān)察對(duì)象選擇20062008年就診的按1999年提出的羅馬II診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷明確的腸易激綜合征(IBS)患者隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組。.1.2觀(guān)察治療前后癥狀的改善情況。1.3安全性評(píng)價(jià)治療中認(rèn)真觀(guān)察可能與治療藥有關(guān)的不良反應(yīng)，記錄發(fā)生時(shí)間、癥狀及持續(xù)時(shí)間、處理結(jié)果。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SAS統(tǒng)計(jì)分析軟件，數(shù)據(jù)分別用百分率或均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，治療前后的差異顯著性測(cè)驗(yàn)，用;^檢驗(yàn)和精確概率法，或t檢驗(yàn)，差異的顯著性水平為P<0.05。2結(jié)果各組均30例患者，詳細(xì)療效觀(guān)察結(jié)果如下2.1口服凸腹真桿菌活菌散劑治療腸易激綜合征30例療效觀(guān)察結(jié)果2.1.1臨床資料男性16例，女性14例，平均年齡36.8歲，平均病程21.9月。IBS分型，腹瀉為主型13例，便秘為主型14例，腹瀉便秘交替型3例。2.1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天，療程60天。2.1.3療效觀(guān)察結(jié)果腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較30例IBS患者的腹瀉和便秘等癥狀，治療后均有顯著的改善(P<0.05)，見(jiàn)表l。表l腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較癥狀治療前(例數(shù))治療后(例數(shù))※顯著性檢驗(yàn)(P值)腹瀉130P<0.05便秘140P<0.05腹瀉+便秘30P<0.05腹痛170P<。.05腹脹80P<0.05腹部不適91P<0.05※用卡方檢驗(yàn)或精確概率法2.2口服兩形真桿菌活菌散劑治療腸易激綜合征30例療效觀(guān)察結(jié)果2.2.1臨床資料男性17例，女性13例，平均年齡40.2歲，平均病程19.5月。IBS分型，腹瀉為主型20例，便秘為主型6例，腹瀉便秘交替型4例。2.2.2給藥方法口服兩形真桿菌活菌散劑，5Q0mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于1.0Xl()7CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天，療程60天。2.2.3療效觀(guān)察結(jié)果綜合征患者治療前后的癥狀改善比較，30例IBS患者的腹瀉和便秘等癥狀，治療后均有顯著的改善(P<0.05)，見(jiàn)表2。表2腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較癥狀治療前(例數(shù))治療后(例數(shù))※顯著性檢驗(yàn)(P值)腹瀉200P<0.05便秘60P<0.05腹瀉+便秘40P<0.05腹痛180P<0.05腹脹60P<0.05腹部不適73P<0.05※用卡方檢驗(yàn)或精確概率法2.3口服二聯(lián)活菌散劑治療腸易激綜合征30例療效觀(guān)察結(jié)果2.3.1臨床資料男性18例，女性12例，平均年齡35.6歲，平均病程26.2月。IBS分型，腹瀉為主型16例，便秘為主型9例，腹瀉便秘交替型5例。2.3.2給藥方法口服二聯(lián)活菌散劑，500mg/袋，(含總活菌數(shù)不低于l.OX107CFUZg)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天，療程60天。2.3.3療效觀(guān)察結(jié)果腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較，30例IBS患者的腹瀉和便秘等癥狀，治療后均有顯著的改善(P<0.05)，見(jiàn)表3。表3腸易激綜合征患者治療前后的癥狀改善比較癥狀治療前(例數(shù))治療后(例數(shù))※顯著性檢驗(yàn)(P值)腹瀉160P<0.05便秘90P<0.05腹瀉+便秘50P<0.05腹痛80P<0.05腹脹112P<0.05腹部不適181P<0.05※用卡方檢驗(yàn)或精確概率法3結(jié)論腸易激綜合征是一組包括腹痛、腹部不適、排便習(xí)慣改變和大便性狀異常等表現(xiàn)的臨床綜合征，非器質(zhì)性疾病。冷涼、喝酒性腹瀉是指受涼、食用冷涼食物或喝酒后出現(xiàn)的腹瀉、腹痛、腹部不適等癥狀或以上癥狀加重，在臨床上診斷為腹瀉型腸易激綜合征，屬于腹瀉型腸易激綜合征的一種。目前醫(yī)學(xué)研究表明IBS(包括冷涼瀉和喝酒瀉)是由于腸道免疫功能紊亂，炎癥因子過(guò)度表達(dá)，使腸道耐受力下降，敏感性增強(qiáng)導(dǎo)致的。凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌丁酸，調(diào)節(jié)免疫平衡，抑制炎癥因子過(guò)度表達(dá)，增強(qiáng)腸道耐受力，降低敏感性，恢復(fù)腸道正常功能，有效治療IBS、冷涼瀉和喝酒瀉。實(shí)施例ll、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)口腔潰瘍的治療作用研究1對(duì)象與方法1.1病例資料經(jīng)常復(fù)發(fā)的口腔潰瘍患者15例，男10例，女5例，平均年齡35歲。潰瘍復(fù)發(fā)史213年，每例患者平均每年復(fù)發(fā)6次以上。口腔潰瘍發(fā)作時(shí)，隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組，每組5例口腔潰瘍患者，觀(guān)察治療口腔潰瘍和預(yù)防口腔潰瘍復(fù)發(fā)的療效。1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天?？诜尚握鏃U菌活菌散劑，500mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天?？诜?lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天。以上療程均為2周。1.3觀(guān)察方法設(shè)自身對(duì)照，觀(guān)察治療前后潰瘍面積、疼痛程度和服用2周口腔潰瘍的復(fù)發(fā)時(shí)間。1.4治療口腔潰瘍療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(周平秀，孟祥勇.聯(lián)合用藥治療復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍的臨床觀(guān)察.華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，8:81-82)顯效3天內(nèi)潰瘍愈合或明顯縮小，疼痛消失；有效5天內(nèi)潰瘍愈合或明顯縮小及疼痛消失；無(wú)效潰瘍愈合或明顯縮小均在7天后。1.5預(yù)防口腔復(fù)發(fā)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)顯效口腔潰瘍發(fā)作，服用2周藥物后，3個(gè)月內(nèi)未復(fù)發(fā)。有效口腔潰瘍發(fā)作，服用2周藥物后，2個(gè)月內(nèi)未復(fù)發(fā)。無(wú)效口腔潰瘍發(fā)作，服用2周藥物后，2個(gè)月內(nèi)復(fù)發(fā)。2結(jié)果2.1治療效果所有患者均在5天內(nèi)潰瘍愈合、疼痛消失，三組治療口腔潰瘍有效率均為100°/。。2.2預(yù)防口腔潰瘍復(fù)發(fā)效果所有患者服藥2周后，隨訪(fǎng)3個(gè)月，口腔潰瘍均未復(fù)發(fā)，三組預(yù)防口腔潰瘍復(fù)發(fā)有效率均達(dá)到了100%。且未發(fā)現(xiàn)任何副作用。3結(jié)論口腔潰瘍是最常見(jiàn)的口腔粘膜疾病之一。有人偶爾發(fā)生，有人頻繁發(fā)作，還有人從口腔潰瘍開(kāi)始，最終發(fā)展到白塞氏病綜合癥并導(dǎo)致了口腔腫瘤，專(zhuān)家們?cè)谂R床中發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的患者患口腔鱗癌發(fā)病率有逐年增高的趨勢(shì)。對(duì)口腔潰瘍的治療方法雖然很多，但基本上都是對(duì)癥治療，目的主要是減輕疼痛，很難完全控制復(fù)發(fā)，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為要想完全避免其復(fù)發(fā)，可能性不大，而本發(fā)明的藥物用途通過(guò)恢復(fù)腸道菌群平衡，增強(qiáng)粘膜免疫功能，使治療和控制口腔潰瘍復(fù)發(fā)成為現(xiàn)實(shí)。并通過(guò)口服治療口腔潰瘍，解決了大部分治療口腔潰瘍的藥物是局部用藥，用藥不方便的難題，且沒(méi)有任何副作用。實(shí)施例12、凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療克羅恩病療效觀(guān)察1對(duì)象與方法1.1病例資料經(jīng)臨床、結(jié)腸鏡、組織學(xué)或X線(xiàn)鋇餐等檢査診斷為克羅恩病患者，共15例，男9例，女6例，平均年齡35歲，均具有腹痛、腹瀉等癥狀。隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組，每組5例患者。1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，34次/天。.口服兩形真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，34次/天?？诜?lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，34次/天。以上療程均為68周。1.3觀(guān)察方法設(shè)自身對(duì)照，觀(guān)察治療前后腹痛、腹瀉等臨床癥狀和炎癥的改善情況。1.4治療克羅恩病療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(參照2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)修訂的對(duì)炎癥性腸病診斷與治療規(guī)范的建議)臨床緩解經(jīng)治療后臨床癥狀消失，X線(xiàn)或結(jié)腸鏡檢査發(fā)現(xiàn)炎癥趨于穩(wěn)定；有效經(jīng)治療后臨床癥狀減輕，X線(xiàn)或結(jié)腸鏡檢査發(fā)現(xiàn)炎癥減輕；無(wú)效經(jīng)治療后臨床癥狀、X線(xiàn)、內(nèi)鏡及病理檢査結(jié)果無(wú)改善。2結(jié)果治療后，15例患者臨床癥狀和炎癥均有不同程度的改善。凸腹真桿菌組有4例腹痛、腹瀉等臨床癥狀消失，達(dá)到了臨床緩解；l例腹痛、腹瀉、炎癥減輕，治療有效，總有效率100%。兩形真桿菌組有3例腹痛、腹瀉等臨床癥狀消失，達(dá)到了臨床緩解；2例腹痛、腹瀉、炎癥減輕，治療有效，總有效率100%。二聯(lián)活菌組有3例腹痛、腹瀉等臨床癥狀消失，達(dá)到了臨床緩解；2例腹痛、腹瀉、炎癥減輕，治療有效，總有效率100%。三組間療效比較無(wú)顯著性差異(P〉0.05)3結(jié)論克羅恩病是炎癥性腸病的一種，屬于過(guò)度免疫反應(yīng)引起的自身免疫性疾病，炎癥因子過(guò)度表達(dá)，凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌免疫調(diào)節(jié)劑丁酸，調(diào)節(jié)免疫恢復(fù)正常，抑制炎癥因子過(guò)度表達(dá)，并能修復(fù)腸粘膜，對(duì)克羅恩病具有顯著的治療作用，且沒(méi)有任何毒副作用。'實(shí)施例13、凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療潰瘍性結(jié)腸炎療效觀(guān)察1對(duì)象與方法1.1病例資料經(jīng)臨床、結(jié)腸鏡、組織學(xué)或X線(xiàn)鋇餐等檢查診斷為潰瘍性結(jié)腸炎患者，共30例，男18例，女12例，2765歲，平均年齡46.4歲。病程最短的6個(gè)月，最長(zhǎng)15年，平均4年。隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組，每組10例患者。1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，34次/天?？诜尚握鏃U菌活菌散劑，500mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，34次/天?？诜?lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，34次/天。以上療程均為8周。1.3觀(guān)察方法設(shè)自身對(duì)照，觀(guān)察治療前后腹痛、腹瀉、粘液便、血便等臨床癥狀和腸粘膜的改善情況。1.4治療潰瘍性結(jié)腸炎療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(參照2000年中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)修訂的對(duì)炎癥性腸病診斷與治療規(guī)范的建議)完全緩解經(jīng)治療后臨床癥狀消失，結(jié)腸鏡檢査發(fā)現(xiàn)粘膜大致正常；有效經(jīng)治療后臨床癥狀基本消失，結(jié)腸鏡檢査發(fā)現(xiàn)粘膜輕度炎癥或假息肉形成；無(wú)效經(jīng)治療后臨床癥狀、內(nèi)鏡及病理檢査結(jié)果無(wú)改善。2結(jié)果治療后，30例患者臨床癥狀和炎癥均有不同程度的改善。凸腹真桿菌組有6例腹痛、腹瀉等臨床癥狀消失，達(dá)到了完全緩解；4例腹痛、腹瀉、炎癥減輕，治療有效，總有效率100%。兩形真桿菌組有5例腹痛、腹瀉等臨床癥狀消失，達(dá)到了完全緩解；5例腹痛、腹瀉、炎癥減輕，治療有效，總有效率100%。二聯(lián)活菌組有7例腹痛、腹瀉等臨床癥狀消失，達(dá)到了完全緩解；3例腹痛、腹瀉、炎癥減輕，治療有效，總有效率100%。三組間療效比較無(wú)顯著性差異(PX).05)2.3不良反應(yīng)治療過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)任何不良反應(yīng)。3結(jié)論潰瘍性結(jié)腸炎是炎癥性腸病的一種，病變主要局限于腸粘膜，屬于過(guò)度免疫反應(yīng)引起的自身免疫性疾病，炎癥因子過(guò)度表達(dá)，使腸粘膜出現(xiàn)潰瘍，凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌免疫調(diào)節(jié)劑丁酸，調(diào)節(jié)免疫恢復(fù)正常，抑制炎癥因子過(guò)度表達(dá)，并能修復(fù)腸粘膜，對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎具有顯著的治療作用，且沒(méi)有任何毒副作用。實(shí)施例14、凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎療效觀(guān)察1對(duì)象與方法1.1病例資料經(jīng)臨床明確診斷為類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者，共15例，平均年齡36歲，病史在2年10年。臨床癥狀為關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、晨僵或有關(guān)節(jié)摩擦音。隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組，每組5例患者。1.2給藥方法.口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天?？诜尚握鏃U菌活菌散劑，500mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天。口服二聯(lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天。以上療程均為1224周。1.3觀(guān)察方法設(shè)自身對(duì)照，觀(guān)察治療前后關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、晨僵或關(guān)節(jié)摩擦音的改善情況。1.4療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(按國(guó)家中醫(yī)藥管理局1994年發(fā)布的《中醫(yī)病證診斷標(biāo)準(zhǔn)》)。痊愈關(guān)節(jié)疼痛腫脹消失、晨僵消除；好轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)疼痛腫脹消失，偶有痛感，晨起稍有僵硬；無(wú)效關(guān)節(jié)疼痛腫脹、晨僵同治療前。2結(jié)果用口服凸腹真桿菌活菌散劑治療5例中，痊愈2例，好轉(zhuǎn)3例，無(wú)效0例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。用口服兩形真桿菌活菌散劑治療5例中，痊愈1例，好轉(zhuǎn)4例，無(wú)效O例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。用二聯(lián)活菌散劑治療5例中，痊愈4例，好轉(zhuǎn)1例，無(wú)效O例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。3結(jié)論類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎屬于自身免疫性疾病，目前治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物很多，但均存在各種副作用制約臨床的應(yīng)用，有的副作用甚至可以導(dǎo)致死亡，尤其類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者需要長(zhǎng)時(shí)間服藥，病人很難耐受副作用。凸腹真桿菌和兩形真桿菌通過(guò)調(diào)節(jié)免疫和炎癥因子表達(dá)、預(yù)防感染等多個(gè)方面發(fā)揮作用，療效顯著，且沒(méi)有任何毒副作用，病人可以長(zhǎng)時(shí)間服用，并且凸腹真桿菌和兩形真桿菌除可以制成藥品外，還可以制成保健品或飲品應(yīng)用治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。實(shí)施例15、凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療強(qiáng)直性脊柱炎療效觀(guān)察1對(duì)象與方法1.1病例資料經(jīng)臨床明確診斷為強(qiáng)直性脊柱炎的患者，共15例，平均年齡37歲，病史在1年13年。臨床癥狀為腰脊疼痛，遇寒加重，脊柱僵硬，俯仰不利，或有雙髖部痛，雙腿活動(dòng)受限，畏寒肢冷，乏力多汗。隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組，每組5例患者。1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天?？诜尚握鏃U菌活菌散劑，500mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天?？诜?lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，2次/天。以上療程均為1224周。1.3觀(guān)察方法設(shè)自身對(duì)照，觀(guān)察治療前后腰脊疼痛、雙髖部痛等臨床癥狀的改善情況。1.4療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合研究會(huì)風(fēng)濕類(lèi)疾病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)1987年8月討論修訂的療效標(biāo)準(zhǔn)制定。顯著好轉(zhuǎn)經(jīng)治療后受累部位疼痛消失，活動(dòng)功能改善或恢復(fù)正常，血沉恢復(fù)正常，X線(xiàn)示骨質(zhì)病變有改善或無(wú)發(fā)展，恢復(fù)日常勞動(dòng)；好轉(zhuǎn)受累部位疼痛減輕，活動(dòng)范圍增大，血沉降低；無(wú)效經(jīng)治療3個(gè)療程(90天)以上，受累部位癥狀無(wú)改善。2結(jié)果用口服凸腹真桿菌活菌散劑治療5例中，顯著好轉(zhuǎn)3例，好轉(zhuǎn)2例，無(wú)效O例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。用口服兩形真桿菌活菌散劑治療5例中，顯著好轉(zhuǎn)3例，好轉(zhuǎn)2例，無(wú)效O例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。用口服二聯(lián)活菌散劑治療5例中，顯著好轉(zhuǎn)1例，好轉(zhuǎn)4例，無(wú)效0例，總有效率100%，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。3結(jié)論強(qiáng)直性脊柱炎病程長(zhǎng)、病情重，需要長(zhǎng)時(shí)間吃藥，尚無(wú)根治的辦法，目前治療主要緩解癥狀，保持良好姿勢(shì)和減緩病情進(jìn)展。目前治療藥物雖很多，但均存在各種副作用制約臨床的應(yīng)用，有的副作用甚至可以導(dǎo)致死亡，因此目前療效好和沒(méi)有副作用的藥物是臨床最需要的。目前認(rèn)為強(qiáng)直性脊柱炎是遺傳因素和腸道因素相互作用所致，是腸道感染和腸粘膜通透性增加等因素在遺傳因素的基礎(chǔ)上引起免疫異常誘發(fā)強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病和使病情進(jìn)展。凸腹真桿菌和兩形真桿菌一方面，調(diào)節(jié)免疫恢復(fù)正常和下調(diào)炎癥因子表達(dá)，緩解癥狀；另一方面，分泌丁酸修復(fù)腸粘膜，改變腸粘膜通透性，恢復(fù)腸道健康，消除強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病和病情進(jìn)展的誘發(fā)因素。療效顯著，且沒(méi)有任何毒副作用，病人可以長(zhǎng)時(shí)間服用，并且凸腹真桿菌和兩形真桿菌除可以制成藥品外，還可以制成保健品或飲品應(yīng)用治療強(qiáng)直性脊柱炎。實(shí)施例16、凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療與預(yù)防手足口病療效觀(guān)察1對(duì)象與方法1.1病例資料按手足口病診斷標(biāo)準(zhǔn)明確診斷為手足口病的30例患者，男25例，女15例，平均年齡1.6周歲，最大3周歲。病例均發(fā)熱，37.540°C。手足口均有米粒至綠豆大小的圓形、橢圓形的皰疹。隨機(jī)分入口凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組，每組10例患者，觀(guān)察凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)手足口病的治療效果。1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天?？诜尚握鏃U菌活菌散劑，50()mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天。口服二聯(lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天。以上療程均為7天。1.3觀(guān)察方法設(shè)自身對(duì)照，觀(guān)察治療前后體溫、皮疹和飲食情況。1.4治療手足口病療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(劉素琴.更昔洛韋治療嬰幼兒手足口病的療效.實(shí)用兒科臨床雜志，2006，21(24):1731-1732)顯效體溫正常，皮疹基本消退，飲食正常；好轉(zhuǎn)體溫下降，皮疹部分消失，能少量進(jìn)食；無(wú)效體溫、皮疹或飲食無(wú)改善。顯效及好轉(zhuǎn)為有效，同時(shí)觀(guān)察不良反應(yīng)。2結(jié)果2.1治療效果凸腹真桿菌組，顯效6例，好轉(zhuǎn)4例，總有效率100%。兩形真桿菌組，顯效5例，好轉(zhuǎn)5例，總有效率100%。二聯(lián)活菌組，顯效7例，好轉(zhuǎn)3例，總有效率100%。各組間總有效率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P〉0.05)2.2不良反應(yīng)臨床觀(guān)察未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。3結(jié)論由于手足口病多發(fā)生于嬰幼兒，這與嬰幼兒腸粘膜未發(fā)育成熟，通透性高，腸道菌群屏障也不完善和免疫力低等有關(guān)，凸腹真桿菌和兩形真桿菌進(jìn)入腸道能分泌大量丁酸，修復(fù)腸粘膜，促進(jìn)腸粘膜發(fā)育成熟，同時(shí)建立完善的腸道菌群屏障和提高機(jī)體、粘膜免疫，在治療和預(yù)防感染手足口病方面療效顯著，本次選擇病例都是嬰幼兒，但可以預(yù)見(jiàn)到治療3周歲以上的兒童或成人手足口病同樣有效，所需要的劑量是臨床醫(yī)生根據(jù)病情和年齡能很容易掌握的。同時(shí)，根據(jù)凸腹真桿菌和兩形真桿菌的臨床療效和作用機(jī)理，可以很容易預(yù)見(jiàn)到手足口病暴發(fā)流行時(shí)，口服凸腹真桿菌和兩形真桿菌制劑可以預(yù)防感染手足口病，降低手足口病的發(fā)病率。實(shí)施例17、凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療偽膜性腸炎療效觀(guān)察1對(duì)象與方法1.1病例資料按偽膜性腸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)明確診斷為偽膜性腸炎的15例患者，男10例，女5例，平均年齡38周歲。隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組，每組5例患者，觀(guān)察凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)偽膜性腸炎的治療效果。1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天?？诜尚握鏃U菌活菌散劑，500mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天?？诜?lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天。以上療程15天。1.3觀(guān)察方法設(shè)自身對(duì)照，觀(guān)察治療前后腹瀉、腸粘膜修復(fù)、病菌消失情況。2結(jié)果2.1經(jīng)15天治療后，15例患者全部治愈，癥狀消失，便檢艱難梭菌轉(zhuǎn)陰，腸鏡檢查粘膜病灶消失。2.2不良反應(yīng)臨床觀(guān)察未見(jiàn)任何不良反應(yīng)。3結(jié)論偽膜性腸炎是由于大量使用抗菌藥后，引起腸道菌群失調(diào)，合并艱難梭菌感染后導(dǎo)致腸粘膜損傷，引起偽膜。本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌，由于能夠分泌大量丁酸，修復(fù)受損腸粘膜，及抑制有害菌，促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)，快速恢復(fù)腸道菌群平衡，并能提高免疫力，因此對(duì)偽膜性腸炎具有顯著的治療作用。實(shí)施例18、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)鵝口瘡治療作用療效觀(guān)察1對(duì)象與方法l.l病例資料按鵝口瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)明確診斷為鵝口瘡的40例患者，男30例，女10例，平均年齡1.5周歲。隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組和對(duì)照組，每組10例患者，觀(guān)察凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)鵝口瘡的治療效果。1.2給藥方法口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天。口服兩形真桿菌活菌散劑，500mg/袋(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天?？诜?lián)活菌散劑，500mg/袋(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天。對(duì)照組予局部涂抹1020萬(wàn)U/mL制霉菌素魚(yú)肝油混懸液，2次/天。以上療程均為15天。1.3療效判定癥狀消失，口腔白膜消失，粘膜恢復(fù)正常。2結(jié)果各個(gè)治療組與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，見(jiàn)表l。表l鵝口瘡療效比較組別治愈(％)治愈時(shí)間(天)對(duì)照組凸腹真桿菌治療組兩形真桿菌治療組二聯(lián)活菌治療組6(60%)7(70%)6(90%)7(70%)8.60±1.128.53±0.878.97±1.238.48±1.023結(jié)論鵝口瘡是由白色念珠菌所致的口腔粘膜炎癥。白色念珠菌可在健康人消化道寄生，當(dāng)腹瀉、使用廣譜抗生索或激素、營(yíng)養(yǎng)不良和機(jī)體免疫力下降時(shí)可使正常菌群失調(diào)而發(fā)病，本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠提高免疫力、恢復(fù)菌群平衡、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收和抗炎，對(duì)鵝口瘡具有顯著的治療作用。實(shí)施例19、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)濕疹的治療作用療效觀(guān)察1對(duì)象與方法l.l病例資料按濕疹診斷標(biāo)準(zhǔn)明確診斷為濕疹的40例患者，男25例，女15例，平均年齡1.5周歲。隨機(jī)分入口服凸腹真桿菌活菌散劑治療組、口服兩形真桿菌活菌散劑治療組、口服二聯(lián)活菌散劑治療組和對(duì)照組，每組10例患者，觀(guān)察凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)濕疹的治療效果。1.2給藥方法對(duì)照組用尿素軟膏涂患處，每日3次，IO天為一療程。治療組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上，加用口服凸腹真桿菌活菌散劑，500mg/袋，(含凸腹真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天?？诜尚握鏃U菌活菌散劑，500mg/袋，(含兩形真桿菌活菌數(shù)不低于l.OX107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天?？诜?lián)活菌散劑，500mg/袋，(含總活菌數(shù)不低于1.0X107CFU/g)，由青島東海藥業(yè)有限公司提供。3袋/次，3次/天。以上療程均為10天。1.3療效判定顯效用藥10天內(nèi)皮疹治愈；有效用藥10天內(nèi)皮疹大部分消退；無(wú)效用藥10天皮疹未消退或增多。2結(jié)果治療組與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05，有顯著性差異，說(shuō)明本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療濕疹有效，見(jiàn)表l。_表1凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療濕疹療效比較_組別_顯效(例)有效(例)無(wú)效(例)總有效率對(duì)照組43360%凸腹真桿菌治療組72190%兩形真桿菌治療組640100%二聯(lián)活菌治療組_§_1_1_90%3結(jié)論濕疹屬于變態(tài)反應(yīng)性疾病，是腸道菌群失調(diào)引起的免疫紊亂，導(dǎo)致的皮膚損傷。本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌由于能夠分泌丁酸，調(diào)節(jié)免疫平衡，并能恢復(fù)腸道菌群平衡，對(duì)變態(tài)反應(yīng)性疾病具有很好的治療作用，尤其對(duì)變態(tài)反應(yīng)性皮膚病，包括濕疹療效顯著。實(shí)施例20、凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化(AS)大鼠細(xì)胞因子和血脂的調(diào)節(jié)作用研究1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥品和試劑雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，180-220g。凸腹真桿菌菌液(107CFU/mL);兩形真桿菌菌液(107CFU/mL);二聯(lián)活菌菌液(107CFU/mL);雙歧桿菌菌液(107CFU/mL)，由青島東海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。大鼠TNF-a、IL-13、IL-10ELISA試劑盒。1.2大鼠AS模型的建立大鼠在腹腔注射維生素D3(60萬(wàn)單位/Kg)后，給予高脂飼料(3%膽固醇，0.5%膽酸鈉，0.2%丙基硫氧嘧啶，5%的白糖，10%豬油，81.3%基本飼料)喂養(yǎng)8周，可形成典型的AS病變。L3分組及給藥方法將大鼠隨機(jī)分成6組，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、雙歧桿菌治療組、凸腹真桿菌治療組、兩形真桿菌治療組、二聯(lián)活菌治療組，每組6只。除正常對(duì)照組喂飼基礎(chǔ)飼料外，其余各組均在腹腔注射維生素仏后給予高脂飼料，同時(shí)藥物治療組給予菌液灌胃，每次lmL/100g(體重)，1次/天。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予同體積的水。8周后，腹腔注射水合氯醛麻醉，取主動(dòng)脈血進(jìn)行指標(biāo)測(cè)定。1.4指標(biāo)測(cè)定1.4.1TNF-a、IL-10、IL-10測(cè)定按4mL/g組織的比例加入生理鹽水，用玻璃勻漿器勻漿，勻漿液3000r/min離心10min后吸取上清，采用ELISA法測(cè)定，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。1.4.2按常規(guī)方法測(cè)定血清血脂參數(shù)，包括總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。2結(jié)果2.1TNF-a、IL-13、IL-10與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組動(dòng)脈中TNF-a、IL-15、IL-10水平均顯著升高(P<0.01);本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌可顯著降低動(dòng)脈中TNF-a、IL-1P水平，顯著增加IL-10水平(P<0.01)，且效果好于雙歧桿菌(P<0.05)見(jiàn)表l。表1.凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)AS大鼠TNF-a、IL-1P、IL-10的影響(文士s)組別TNF-a(ng/g)IL-1P(ng/g)IL-10(ng/g)正常對(duì)照組4.80±0,210.59±0.180.27±0.05模型對(duì)照組10.58±0.151,49±0.250.36±0.07雙歧桿菌治療組7.28±0.301.05±0.230,39±0.03凸腹真桿菌治療組5.68±0.320.86±0.120.48±0.05兩形真桿菌治療組5.27±0.410.71±0.150.51±0.06二聯(lián)活菌治療組5.35±0.270.75±0.210.52±0.052.2血清血脂參數(shù)模型對(duì)照組TC、TG顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，模型對(duì)照組HDL-C顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05);本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌治療后與模型對(duì)照組相比TC、TG顯著降低(P<0.05)，HDL-C顯著升高(P<0.05)，且效果好于雙歧桿菌(P<0.05)，見(jiàn)表2。表2凸腹真桿菌和兩形真桿菌對(duì)AS大鼠TC、TG、HDL-C的影響(文士s)組別TC(mg/dl)TG(mg/dl)HDL-C(mg/dl)正常對(duì)照組85.79±11.1230.55±9.5726.78±8.32模型對(duì)照組358.85±56.27159.62±53.429.67±1.25雙歧桿菌治療組256.25±35.68125.42±35.4113.89±0.98凸腹真桿菌治療組145.65±31.1292.71土28.1218.31±1.25兩形真桿菌治療組158.65±28.3589.56±25.2719,22±1.23二聯(lián)活菌治療組152.53±22.3190.31±22.5619.76±1.853結(jié)論動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是心腦血管疾病發(fā)病的主要病理基礎(chǔ)，而高血脂癥又是動(dòng)脈粥樣硬化的主要誘因。AS與其他的炎癥性疾病如類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、哮喘和炎癥性腸疾病相似，伴有炎癥免疫反應(yīng)異常，TNF-a、IL-8、IL-15等炎癥性細(xì)胞因子過(guò)度表達(dá)，加速了AS的發(fā)生和發(fā)展，進(jìn)而加速了心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。研究表明高脂血癥、高血壓、腦血栓、腦栓塞、腦缺血、心肌梗塞、冠心病、腦梗死、腦出血、心絞痛、心肌炎等心腦血管疾病患者TNF-a、IL-1P等炎癥性細(xì)胞因子水平均顯著升高。TNF-a作為一個(gè)細(xì)胞凋亡的胞內(nèi)信號(hào)能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血漿內(nèi)皮素(ET-1)的產(chǎn)生而加重血管壁的損傷，并且有促進(jìn)白介素6(IL-6)分泌的作用，還可控制脂溶酶活性，抑制脂蛋白酶(LPL)活性，抑制斑塊局部LPL的產(chǎn)生，從而不利于脂質(zhì)溶解，而易于沉積在血管壁，促進(jìn)動(dòng)脈硬化形成，導(dǎo)致各種心腦血管疾病的發(fā)生。TNF-a能誘發(fā)心肌炎，減低心功能和通過(guò)壞死或凋亡引起心肌細(xì)胞壞死，引起心絞痛和心律失常等。心腦血管疾病患者IL-13的陽(yáng)性檢測(cè)率隨著TNF-a檢測(cè)率的升高也相應(yīng)升高,TNF-a、IL-ie兩種細(xì)胞因子通過(guò)相互誘導(dǎo)、相互作用，共同參與了高脂血癥、高血壓、腦血栓、腦栓塞、腦缺血、心肌梗塞、冠心病、腦梗死、腦出血、心絞痛、心肌炎等心腦血管疾病的病理生理過(guò)程，從而引發(fā)心腦血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。IL-IO是一種具有強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用的抗炎細(xì)胞因子，在心腦血管疾病中發(fā)揮保護(hù)作用。本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌通過(guò)分泌丁酸，能使異常的細(xì)胞因子表達(dá)恢復(fù)正?；虻玫礁纳?，對(duì)阻止炎癥性細(xì)胞因子對(duì)心腦血管及細(xì)胞的損害起到了很好的作用，能有效預(yù)防、治療心腦血管疾病。血脂主要是指血清中的膽固醇和甘油三酯。無(wú)論是膽固醇含量增高，還是甘油三脂的含量增高，或是兩者皆增高，統(tǒng)稱(chēng)為高脂血癥。高脂血癥是發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病及微循環(huán)障礙的重要因素。臨床資料表明，心腦血管疾病的發(fā)生率隨血清膽固醇和甘油三酯的濃度升高而增加。降血脂可以明顯減少冠心病危險(xiǎn)是無(wú)可置疑的事實(shí)，血清膽固醇降低1%，冠心病危險(xiǎn)性降低2%。因此，高脂血癥的及早發(fā)現(xiàn)和積極治療對(duì)心腦血管病的防治有著極為重要的意義。高密度脂蛋白(HDL)的功能之一是運(yùn)輸內(nèi)源性膽固醇至肝臟處理，故有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。在檢查中，通過(guò)檢査HDL-C的含量間接反映HDL的水平。動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)HDL-C降低，表明HDL降低。本發(fā)明所述凸腹真桿菌和兩形真桿菌通過(guò)降低TC、TG和升高HDL達(dá)到降低血脂的作用，并能降低TNF-a、IL-13等炎癥性細(xì)胞因子過(guò)度表達(dá)，從而有效預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化、心腦血管疾病及微循環(huán)障礙。本發(fā)明在實(shí)施過(guò)程中所使用的微生物菌種已分別于2008年04年25日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所郵編100101)保藏，共兩個(gè)下述微生物菌種，但本發(fā)明所述的凸腹真桿菌和兩形真桿菌并不局限于這兩種微生物菌株。(1)分類(lèi)命名凸腹真桿菌五w^"en'wmvew，保存編號(hào)2465。(2)分類(lèi)命名兩形真桿菌五W"c/en'wm/uYb27ze，保存編號(hào)2466。上述兩個(gè)微生物菌種經(jīng)該微生物中心檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為存活。38權(quán)利要求1、一種新型微生態(tài)制劑，其特征在于該微生態(tài)制劑是用凸腹真桿菌和兩形真桿菌組合作為活性成份制成制劑，或用凸腹真桿菌作為活性成份制成制劑，或用兩形真桿菌作為活性成份制成制劑。2、按權(quán)利要求1所述微生態(tài)制劑，其特征在于有效劑量的凸腹真桿菌和兩形真桿菌單獨(dú)或組合作為主要活性成份制成藥品組合物、保健品、飲品、獸藥和飼料添加劑。3、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于凸腹真桿菌和兩形真桿菌指活的生物個(gè)體。4、按權(quán)利要求l所述應(yīng)用，其特征在于凸腹真桿菌優(yōu)選但不限于凸腹真桿菌CGMCC2465株和兩形真桿菌CGMCC2466株。5、按權(quán)利要求1所述微生態(tài)制劑，其特征在于在制備治療消化系統(tǒng)疾病、營(yíng)養(yǎng)吸收障礙性疾病、自身免疫性疾病、心腦血管疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、提高免疫力、抗癌、手足口病組合物中的應(yīng)用。6、按權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于消化系統(tǒng)疾病包括腹瀉、腸易激綜合征、冷涼瀉、喝酒瀉、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、抗生素相關(guān)性腹瀉、偽膜性腸炎、小兒肺炎繼發(fā)性腹瀉、腸癌、腫瘤放化療輔助治療、腹脹和消化不良、便秘、便臭、便臭中毒綜合征、養(yǎng)顏美容、肝膽疾病、病毒性腹瀉、喂養(yǎng)不耐受、壞死性小腸結(jié)腸炎、黃疸、口腔潰瘍、鵝口瘡、促進(jìn)小兒腸道發(fā)育成熟、促進(jìn)消化吸收、營(yíng)養(yǎng)保健和生長(zhǎng)發(fā)育。7、按權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于營(yíng)養(yǎng)吸收障礙性疾病包括佝僂病。8、按權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于自身免疫性疾病包括類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎。9、按權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于心腦血管疾病包括高脂血癥、高血壓、腦血栓、腦栓塞、腦缺血、心肌梗塞、冠心病、腦梗死、腦出血、心絞痛、心肌炎、動(dòng)脈粥樣硬化。10、按權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于變態(tài)反應(yīng)性疾病包括變態(tài)反應(yīng)性皮膚病，進(jìn)一步包括濕疹。11、按權(quán)利要求5所述應(yīng)用，其特征在于提高免疫力包括治療反復(fù)呼吸道感染。全文摘要本發(fā)明涉及凸腹真桿菌和兩形真桿菌制劑及其應(yīng)用，具體涉及凸腹真桿菌和兩形真桿菌單獨(dú)或組合作為主要活性成份制成微生態(tài)制劑，及該微生態(tài)制劑在治療相關(guān)疾病中的應(yīng)用，該微生態(tài)制劑包括藥品組合物、保健品、飲品、獸藥和飼料添加劑。文檔編號(hào)A23L1/30GK101590081SQ200810108889公開(kāi)日2009年12月2日申請(qǐng)日期2008年5月28日優(yōu)先權(quán)日2008年5月28日發(fā)明者崔云龍,李洪福,王發(fā)合申請(qǐng)人:青島東海藥業(yè)有限公司;北京東方百信生物技術(shù)有限公司;北京天施康醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司