專利名稱：一種Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系及其在抗癌小分子藥物篩選中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系及其在抗癌小分子藥物篩選中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
癌癥已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類生命和健康的一大殺手，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年有1000 萬人患上癌癥，其中，有600萬人死于癌癥。在目前的癌癥治療方法中，針對癌細(xì) 胞中過量表達(dá)的基因設(shè)計(jì)小分子藥物是重要的可行性方法之一。AuroraB是關(guān)鍵的 細(xì)胞周期調(diào)控激酶，在許多人類腫瘤細(xì)胞系中均過量表達(dá)，并且伴隨著染色體不穩(wěn) 定的狀況，因此Aurora B是設(shè)計(jì)治療癌癥的小分子藥物的重要靶點(diǎn)之一。
人類Aurora B基因(全稱為Aurora kinase B)是在篩選癌細(xì)胞中過量表達(dá)的激 酶時發(fā)現(xiàn)的。它的編碼基因位于基因組第17號染色體17pl3上，其cDNA序列全 長1032bp，蛋白分子量為39kD。 AuroraB蛋白的C端是個保守的催化結(jié)構(gòu)域，N 端則差異相對較大，但仍含有A-box I、A-box II和A-box III三段保守序列(Fu J, Bian M， Jiang Q, Zhang C (2007) Mol Cancer Res 5:1—10.) 。 Aurora B是染色體乘客蛋白 (chromosome passenger protein)的核心組分，它在有絲分裂前期時與染色體結(jié)合； 中期時集中在中心粒上；后期開始時，AuroraB從中心粒轉(zhuǎn)移到赤道板上，分裂溝 和收縮環(huán)就在這個位置形成(Adams et al., 2001. Curr Biol 2000;10:1075-8.) 。 Aurora B的定位說明其很有可能在有絲分裂前期與染色體活動有關(guān)，而在后期和末期與細(xì) 胞骨架有關(guān)。許多研究發(fā)現(xiàn)，AuroraB在有絲分裂染色體凝集、姐妹染色單體分離 和胞質(zhì)分裂過程中起重要作用。AuroraB作為一個激酶，其磷酸化的底物主要有 H3、 CENP-A、 INCENP和Survivin等。Aurora B蛋白的編碼基因在NCBI中的Gene ID是9212。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的制備方法。
本發(fā)明所提供的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的制備方法，包括以下步驟
1)將AuroraB的編碼基因插入真核表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)，得到重組表達(dá)載
體；
2)將步驟1得到的重組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中，篩選得到穩(wěn)定表達(dá)AuroraB 的細(xì)胞系。
上述真核表達(dá)載體具體可為pEGFP-C2、 pCMV-Tag、 pCMV-Myc等。 為了便于對表達(dá)的AuroraB進(jìn)行細(xì)胞定位，可在真核表達(dá)載體上加入可在宿主 中表達(dá)可產(chǎn)生顏色變化的酶或發(fā)光化合物的基因，如GFP、 RFP。 上述宿主細(xì)胞可為HeLa細(xì)胞、293細(xì)胞、3T3細(xì)胞等。 利用上述方法制備的AuromB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。 將一株GFP-AuroraB穩(wěn)定表達(dá)的HeLa細(xì)胞株于2008年9月2日保藏于中國微 生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京巿朝陽區(qū)大 屯路3號)，保藏號為CGMCCNo.2652。
本發(fā)明的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)可以直接在熒光顯微 鏡下觀察活體重組細(xì)胞中AuroraB的動態(tài)變化(f"wVo)，這與傳統(tǒng)的免疫熒光方 法和用Western blot方法觀察Aurora B的定位相比，更加快速，而且可以真實(shí)的反 應(yīng)AuroraB在細(xì)胞內(nèi)的狀況；(2)本發(fā)明的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系上帶有GFP 標(biāo)簽，并且Aurora B穩(wěn)定、過量表達(dá)，因此可以方便的通過IP、 Pull down等實(shí)驗(yàn) 研究與AuroraB激酶相互作用的蛋白，這對于解析細(xì)胞周期進(jìn)程中許多過程有重要 意義，也為腫瘤的治療提供了很好的理論依據(jù)；(3)本發(fā)明的AuroraB穩(wěn)定表達(dá) 細(xì)胞系可以加速抗癌小分子藥物的篩選進(jìn)程。GFP-AuromB在熒光顯微鏡下可作為 一個直觀的動態(tài)指標(biāo)反映出小分子藥物對重組細(xì)胞的處理效果。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種篩選抗癌小分子藥物的細(xì)胞模型。 本發(fā)明所提供的篩選抗癌小分子藥物的細(xì)胞模型是上述Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì) 胞系。
本發(fā)明的Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系可以方便地對細(xì)胞周期信號通路等基礎(chǔ)理 論進(jìn)行相關(guān)的研究，還可以用于抗癌小分子藥物的篩選。AuroraB基因本身作為一 個潛在的致癌基因，在大部分腫瘤細(xì)胞系中均過量表達(dá)。在ZM447439的處理下， AuroraB在細(xì)胞內(nèi)的定位會發(fā)生顯著變化。因此，利用細(xì)胞系中的綠色熒光蛋白作 為標(biāo)簽，在熒光顯微鏡下可直觀地顯示出小分子藥物處理對細(xì)胞的影響，同時可以 動態(tài)地觀察AuroraB在藥物處理下的定位變化，這將在很大程度上加速抗癌小分子 藥物篩選的進(jìn)程。
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系對激酶抑制劑ZM447439敏感， 作用顯著。本發(fā)明的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系為深入探索AuroraB在癌癥發(fā)生中
的作用提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺，可用于篩選抗癌的小分子藥物。


圖1為本發(fā)明的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建總流程圖
圖2為重組表達(dá)載體pEGFP-C2-Aurora B和Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的具體構(gòu) 建流程圖
圖3為Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的生長曲線
圖4為Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的DIC照片和綠色熒光照片
圖5為Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的Western blot檢測結(jié)果
圖6為AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系在不同細(xì)胞周期中AuroraB在細(xì)胞內(nèi)定位的 熒光照片
圖7為Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系對Aurora B激酶特異的抑制劑ZM447439的 敏感性檢測的熒光照片
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
本發(fā)明的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的具體構(gòu)建流程如圖1所示，重組表達(dá)載體 pEGFP-C2-Aurora B和Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的具體構(gòu)建流程如圖2所示。
下述實(shí)施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法，所述百分比濃度皆為質(zhì)量 百分比濃度，所用限制性內(nèi)切酶均由TaKaRa公司提供，所用引物均由北京賽百盛 生物工程公司合成。
實(shí)施例1、重組表達(dá)載體pEGFP-C2-AuroraB的構(gòu)建
根據(jù)人類Aurora B激酶編碼基因的cDNA全長序列(NCBI中GenelD:9212，序
列表中序列1)設(shè)計(jì)引物如下正向引物
5'-TCGAC|GAATTC|ATGGCCCAGAAGGAGAACT-3'(方框內(nèi)堿基為限制性內(nèi)切酶
五CO及I的識別位點(diǎn))和反向引物
5'-TGTAC|CTCGAG[rCAGGCGACAGATTGAAGG-3'(方框內(nèi)為限制性內(nèi)切酶WoI
的識別位點(diǎn))。
取離體人的HeLa細(xì)胞并提取其總RNA，將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以該cDNA為 模板，在上述引物的引導(dǎo)下，使用高保真Pyrobest酶(TaKaRa公司)利用RT-PCR 方法擴(kuò)增出Aurora B基因。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳純化和回收，用
限制性內(nèi)切酶￡co/ I和屈ol對純化回收后的產(chǎn)物進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物再次進(jìn)行瓊 脂糖凝膠電泳純化和回收，得到AuroraB蛋白編碼框的cDNA序列。同時，將真核 表達(dá)載體pEGFP-C2 (購自Clontch公司，Catalog #6083-1)用五co/ I和Sa/I(S"/1是 ^0i的同尾酶)進(jìn)行雙酶切，酶切產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳純化和回收。用DNA連 接酶連接上述擴(kuò)增得到的AuroraB蛋白編碼框的cDNA序列和真核表達(dá)載體 pEGFP-C2酶切后的產(chǎn)物，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細(xì)胞，并涂布于含 有卡那霉素的LB平板上，挑取單克隆進(jìn)行PCR檢測。對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，以 檢測陽性克隆中插入序列的正確。測序結(jié)果表明，插入的1035bp的AuroraB蛋白 編碼框的cDNA序列的脫氧核糖核苷酸序列如序列表中序列1所示，其編碼的氨基 酸序列如序列表中序列2所示。提取重組大腸桿菌的質(zhì)粒，將得到的重組表達(dá)載體 命名為pEGFP-C2-Aurora B 。
實(shí)施例2、 AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的建立
將上述步驟一得到的重組大腸桿菌利用PEG8000提取質(zhì)粒，得到高純度的重組 表達(dá)載體pEGFP-C2-Aurora B 。將重組表達(dá)載體pEGFP-C2-Aurora B以通用的磷酸 鈣沉淀的方法轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞，繼續(xù)于37°C 5% C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的HeLa 細(xì)胞24小時以上。轉(zhuǎn)染兩天后，將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞轉(zhuǎn)入6cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼 壁后在培養(yǎng)基中加入G418，使其最終濃度為800ug/ml。之后每三天換液一次，培 養(yǎng)兩至三周后，細(xì)胞大量死亡，余下的細(xì)胞克隆即為AuroraB的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。 同時以轉(zhuǎn)入真核表達(dá)載體pEGFP-C2的HeLa細(xì)胞作為對照。
AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的DIC照片和熒光顯微照片如圖4所示。其中，A為 AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的熒光顯微照片；B為該細(xì)胞系的明視場DIC細(xì)胞形態(tài)照 片。將AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系中的細(xì)胞株B4經(jīng)-2(TC預(yù)冷的甲醇固定后，用含有 10mg/ml DAPI的Mowoil封片，然后在Zeiss熒光顯微鏡下觀察，并拍攝熒光照片。 結(jié)果如圖6所示。從圖6中可以看出，AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株B4中不同細(xì)胞周 期時Aurora B在細(xì)胞中的定位。結(jié)果表明，Aurora B在細(xì)胞間期時定位在細(xì)胞核內(nèi)， 中期時定位在中心粒上；后期時則轉(zhuǎn)移到赤道板上，這種周期依賴性定位和內(nèi)源性 AuroraB在普通HeLa細(xì)胞內(nèi)的定位相同，且綠色熒光蛋白標(biāo)簽不影響AuroraB在 細(xì)胞中的正常定位。
實(shí)施例3、 Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的鑒定
一、Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的生長曲線的測定
取上述實(shí)施例2構(gòu)建的生長狀態(tài)良好的Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系，用血球計(jì) 數(shù)板在普通光鏡下統(tǒng)計(jì)細(xì)胞的初始密度為1.45 x 105個細(xì)胞/ml，將細(xì)胞稀釋10倍 (細(xì)胞密度為1.45 x 1(T個細(xì)胞/ml)后培養(yǎng)到30個直徑為5cm的細(xì)胞培養(yǎng)皿中， 每天統(tǒng)計(jì)3個培養(yǎng)皿中的細(xì)胞密度，連續(xù)統(tǒng)計(jì)10天。同時以未轉(zhuǎn)入任何載體的HeLa 細(xì)胞作為對照。在此期間，每兩天為培養(yǎng)皿中的細(xì)胞換一次新鮮培養(yǎng)液，使得細(xì)胞 始終處于良好的生長狀態(tài)。Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的生長曲線如圖3所示。
從圖3的生長曲線可以看出，此Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的生長周期約為每 天一代，和未轉(zhuǎn)入任何載體的HeLa細(xì)胞幾乎沒有區(qū)別，所以，Aurora B穩(wěn)定表達(dá) 細(xì)胞系雖然穩(wěn)定表達(dá)帶有綠色熒光蛋白標(biāo)簽的Aurora B，但對HeLa細(xì)胞的生長周 期幾乎沒有影響。
二、 Western blot對Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系中Aurora B表達(dá)量的檢測 用胸腺嘧啶阻斷法將生長狀態(tài)良好的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系同步化到中期， 具體做法如下用2.5mM的胸腺嘧啶脫氧核苷(購自Sigma公司，Catalog #M1404) 處理上述Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系17h，然后釋放3h，最后用50ng/ml的諾考達(dá)唑 (Nocodazol)(購自Sigma公司，Catalog存T1895)處理12h。將處理好的細(xì)胞裂解后 用western blot檢測Aurora B的表達(dá)量。同時對未轉(zhuǎn)入任何載體的HeLa細(xì)胞進(jìn)行 平行處理，標(biāo)記其內(nèi)源AuroraB作為對照。Western blot檢測結(jié)果如圖5所示。結(jié) 果表明，在上樣量一致的情況下，AuroraB穩(wěn)定表達(dá)系中有兩條帶外源表達(dá)的 Aurora B和內(nèi)源Aurora B。且外源表達(dá)的Aurora B條帶比未轉(zhuǎn)入任何載體的HeLa 細(xì)胞中的內(nèi)源AuroraB條帶要粗，說明AuroraB穩(wěn)定表達(dá)系中AuroraB的表達(dá)量 比未轉(zhuǎn)入任何載體的HeLa細(xì)胞中AuroraB的表達(dá)量要大得多。已將一株 GFP-AuroraB穩(wěn)定表達(dá)的HeLa細(xì)胞株于2008年9月2日保藏于中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區(qū)大屯路3號)， 保藏號為CGMCC No. 2652。
實(shí)施例4、 Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系對Aurora B特異的小分子抑制劑ZM447439 的敏感性實(shí)驗(yàn)
取兩皿生長狀況良好的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的細(xì)胞， 一皿作為對照組不做 任何處理， 一皿加入2,的ZM447439(購自Tocris公司，Catalog # 2458)。將兩 個培養(yǎng)皿分別放在熒光顯微鏡下，尋找處于有絲分裂中期的細(xì)胞，通過觀察不同處 理的細(xì)胞來確定ZM447439對細(xì)胞有絲分裂的影響，觀察結(jié)果如圖7所示。
從圖7可以看出，Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系中Aurora B的表達(dá)受ZM447439 的明顯影響。在52min之內(nèi)，未用ZM447439處理的細(xì)胞已經(jīng)完成胞質(zhì)分裂，進(jìn)入 了下一細(xì)胞周期的間期，而加入ZM447439處理的細(xì)胞在52 min之內(nèi)姐妹染色單體 卻未能分開， 一直持續(xù)到大約9小時后細(xì)胞染色體去凝集，退出有絲分裂期，形成 多倍體細(xì)胞。結(jié)果表明，ZM447439可以使AuroraB在細(xì)胞內(nèi)的定位發(fā)生顯著變化。序列表
<160> 2
〈210> 1
〈211〉 1035
〈212〉 腿 <213〉人工序列
<400> 1
atggcccaga aggagaactc ctacccctgg ccctacggcc ctgagcaccc tgccccagcg agtcctccgg aaagagcctg ctcatgagcc gctccaatgt ccagcccaca gctgcccctg agcagtggga cacccgacat cttaacgcgg cacttcacaa cgtcctctgg gcaaaggcaa gtttggaaac gtgtacttgg ttcatcgtgg cgctcaaggt cctcttcaag tcccagatag cagctgcgca gagagatcga aatccaggcc cacctgcacc tacaactatt tttatgaccg gaggaggatc tacttgattc gagctctaca aggagctgca gaagagctgc eicatttgacg atggaggagt tggcagatgc tctaatgtac tgccatggga ataaagccag aaaatctgct cttagggctc aagggagagc tggtctgtgc atgcgccctc cctgaggagg aagacaatgt cccccagaga tgattgaggg gcgcatgcac aatgagaagg gtgctttgct atgagctgct ggtggggaac ccaccctttg
gacagacggc tccatctggc 60
tcaccccatc tgcacttgtc 120
gccagaaggt gatggagaat 180
ttgatgactt tgagattggg 240
ctcgggagaa gaaaagccat 300
agaaggaggg cgtggagcat 360
atcccaacat cctgcgtctc 420
tagagtatgc cccccgcggg 480
agcagcgaac agccacgatc 540
agaaggtgat tcacagagac 600
tgaagattgc tgacttcggc 660
gtggcaccct ggactacctg 720
tggatctgtg gtgcattgga 780
agagtgcatc acacaacgag 840
acctatcgcc gcatcgtcaa ggtggaccta aagttccccg cttctgtgcc cacgggagcc 900
caggacctca tctccaaact gctcaggcat aacccctcgg aacggctgcc cctggcccag 960
gtctcagccc acccttgggt ccgggccaac tctcggaggg tgctgcctcc ctctgccctt 1020
caatctgtcg cctga 1035
<210〉 2
〈211〉 344
<212〉 PRT <213〉人工序列
<400> 2
Met Ala Gin Lys Glu Asn Ser Tyr Pro Trp Pro Tyr Gly Arg Gin Thr 15 10 15
Ala Pro Ser Gly Leu Ser Thr Leu Pro Gin Arg Val Leu Arg Lys Glu 20 25 30
Pro Val Thr Pro Ser Ala Leu Val Leu Met Ser Arg Ser Asn Val Gin 35 40 45
Pro Thr Ala Ala Pro Gly Gin Lys Val Met Glu Asn Ser Ser Gly Thr 50 55 60
Pro Asp lie Leu Thr Arg His Phe Thr lie Asp Asp Phe Glu lie Gly 65 70 75 80
Arg Pro Leu Gly Lys Gly Lys Phe Gly Asn Val Tyr Leu Ala Arg Glu 85 90 95
Lys Lys Ser His Phe lie Val Ala Leu Lys Val Leu Phe Lys Ser Gin 100 105 110
lie Glu Lys Glu Gly Val Glu His Gin Leu Arg Arg Glu lie Glu lie 115 120 125
Gin Ala His Leu His His Pro Asn lie Leu Arg Leu Tyr Asn Tyr Phe 130 135 140
Tyr Asp Arg Arg Arg lie Tyr Leu lie Leu Glu Tyr Ala Pro Arg Gly 145 150 155 160
Glu Leu Tyr Lys Glu Leu Gin Lys Ser Cys Thr Phe Asp Glu Gin Arg 165 170 175
Thr Ala Thr lie Met Glu Glu Leu Ala Asp Ala Leu Met Tyr Cys His 180 185 190
Gly Lys Lys Val lie His Arg Asp lie Lys Pro Glu Asn Leu Leu Leu 195 200 205
Gly Leu Lys Gly Glu Leu Lys lie Ala Asp Phe Gly Trp Ser Val His 210 215 220
Ala Pro Ser Leu Arg Arg Lys Thr Met Cys Gly Thr Leu Asp Tyr Leu 225 230 235 240
Pro Pro Glu Met lie Glu Gly Arg Met His Asn Glu Lys Val Asp Leu 245 250 255
Trp Cys lie Gly Val Leu Cys Tyr Glu Leu Leu Val Gly Asn Pro Pro 260 265 270
Phe Glu Ser Ala Ser His Asn Glu Thr Tyr Arg Arg lie Val Lys Val 275 280 285
Asp Leu Lys Phe Pro Ala Ser Val Pro Thr Gly Ala Gin Asp Leu lie 290 295 300
Ser Lys Leu Leu Arg His Asn Pro Ser Glu Arg Leu Pro Leu Ala Gin 305 310 315 320
Val Ser Ala His Pro Trp Val Arg Ala Asn Ser Arg Arg Val Leu Pro 325 330 335
Pro Ser Ala Leu Gin Ser Val Ala 340
權(quán)利要求
1、Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的制備方法，包括以下步驟1)將Aurora B的編碼基因插入真核表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)，得到重組表達(dá)載體；2)將步驟1得到的重組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中，篩選得到穩(wěn)定表達(dá)Aurora B的細(xì)胞系。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述真核表達(dá)載體為pEGFP-C2、 pCMV-Tag或pCMV-Myc。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述宿主細(xì)胞為HeLa細(xì)胞、293 細(xì)胞或3T3細(xì)胞。
4、 利用權(quán)利要求1-3中任一所述的方法制備的AuroraB穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系，其特征在于所述Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系為GFP-Aurora B穩(wěn)定表達(dá)的HeLa細(xì)胞系，所述GFP-Aurora B穩(wěn) 定表達(dá)的HeLa細(xì)胞系的保藏號為CGMCCNo. 2652。
6、 權(quán)利要求4或5所述的Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系在篩選抗癌小分子藥物中 的應(yīng)用。
7、 篩選抗癌小分子藥物的細(xì)胞模型，是權(quán)利要求4或5所述的Aurora B穩(wěn)定 表達(dá)細(xì)胞系。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系及其在藥物篩選中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的制備方法，包括以下步驟1)將Aurora B的編碼基因插入真核表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)，得到重組表達(dá)載體；2)將步驟1得到的重組表達(dá)載體導(dǎo)入宿主細(xì)胞中，篩選得到穩(wěn)定表達(dá)Aurora B的細(xì)胞系。本發(fā)明的Aurora B穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系為深入探索Aurora B在癌癥發(fā)生中的作用提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺，可用于篩選抗癌的小分子藥物。
文檔編號C12N15/85GK101343634SQ20081011970
公開日2009年1月14日 申請日期2008年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月5日
發(fā)明者傅靜雁, 張傳茂, 青 蔣, 辛廣偉 申請人:北京大學(xué)